CN110308289A - 氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂及应用 - Google Patents

氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂及应用 Download PDF

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Abstract

本发明为一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂的制备及使用方法。将具有相同材料内核及不同发射波长的3种量子点分别与对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素具有高特异性识别能力的适配体进行偶联，通过将该3种偶联物分别与氧化石墨烯构成荧光共振能量转移系统，可制备出对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留进行同时快速荧光检测的试剂。采用本发明检测试剂，可以不依赖于分离分析技术即实现对牛奶样品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留的快速、准确和灵敏检测，为强化食品安全监管提供了强有力的技术保障。

Description

氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂及应用
技术领域
本发明涉及纳米材料制备技术领域和兽药残留检测技术领域，具体涉及一种集适配体高特异性和量子点优异荧光特性于一体，可选择性标记卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的荧光检测试剂，并将其应用于卡那霉素、奈替米星素和妥布霉素多残留的同时快速荧光检测。
背景技术
卡那霉素、奈替米星和妥布霉素是被广泛用于养殖业中的3种氨基糖苷类抗生素，人类长期食用含有其药物残留的动物源性食品后，将会导致氨基糖苷类抗生素共有的耳毒性、肾脏毒性、过敏反应等不良影响。为防止含有其残留的食品进入市场，需要对准入前的食品进行残留量的准确测定，这里既包括定量准确，也包括定性准确。一个高效率获悉食品中残留抗生素信息的方法就是对多种抗生素残留进行同时检测，而在这种多残留检测中，同类抗生素(例如氨基糖苷类抗生素)的多残留检测是难度最大的。
目前能够对包括卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在内的氨基糖苷类抗生素多残留进行准确定性和定量检测的方法主要是基于分离分析原理的高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法。这类方法仪器昂贵，要求操作人员具有较高的专业性，而且需要对样品进行复杂耗时的净化前处理，很难做到市场监管所需要的现场快速检测。荧光检测法灵敏度很高，适合用于检测包括卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在内的抗生素残留，由于卡那霉素、奈替米星和妥布霉素自身无荧光，必须进行荧光标记后才能使用该方法。传统的有机荧光染料对被测物无特异识别能力，与分离分析技术相结合才能实现多残留检测。近年来，在分析化学领域得到广泛的应用的纳米荧光量子点虽有许多优于有机荧光染料的荧光特性，但同样不具备对被标记物的特异识别能力，需和免疫法结合才能识别被标记物。免疫法虽可实现抗生素残留的快速检测，但多为单一残留检测，且抗体的获取需经动物实验或细胞培养，成本高，稳定性易受温度影响，不易保存，难以用于大批量样品的检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种不依赖于分离分析技术即可实现对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留进行同时快速荧光检测试剂的制备和使用方法，并将其应用于动物源性食品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留的检测。
具体步骤如下：
1、一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述试剂采用如下方法进行制备：
(1)对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素具有高特异性和高亲和性的适配体被分别用作卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的信息识别试剂，其中卡那霉素适配体(KAPT)的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CCC GCA ATA AGA TTG GCG TAGTCT CTT ACG CAC TGA TAG TGC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，奈替米星适配体(NAPT)的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CCA TGA CGC ATGTCG AAG CTT GGC GGC AGA CGT CCT TAG CTC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，妥布霉素适配体(TAPT)的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CAT CCTCGC TGA TGG GGG AGT TGC TAC CGG CCA TTC GTA TTC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'；3种可在相同激发波长下发射不同波长荧光的量子点QD1、QD2和QD3被分别用作卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的信息传导试剂。
量取浓度分别为21.11μmol/L、13.09μmol/L和6.01μmol/L的QD1、QD2和QD3各5μL，分别加入浓度为10g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐10μL，用去离子水定容至40μL，分别进行活化；然后分别加入经变性处理的KAPT、NAPT和TAPT，用pH7.4的磷酸盐缓冲液定容至400μL，进行偶联反应；将反应后溶液分别用50kD超滤管过滤，管中留存溶液分别用磷酸盐缓冲液定容至100μL，此KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3偶联物溶液构成卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的复合荧光探针溶液，以QD1、QD2和QD3浓度计的偶联物浓度分别为1055.5nmol/L、654.5nmol/L和300.5nmol/L。
将适量KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3混合后加入氧化石墨烯(GO)，并用磷酸盐缓冲液稀释至其中GO的浓度为250mg/L，以QD1、QD2和QD3浓度计的KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的浓度分别为105.55nmol/L、65.45nmol/L和30.05nmol/L，猝灭反应30min后即构成可用于卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留同时快速荧光检测的试剂KAPT-QD1/GO、NAPT-QD2/GO和TAPT-QD3。
所述高特异性是指KAPT除卡那霉素外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对奈替米星和妥布霉素不具有识别作用，NAPT除奈替米星外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对卡那霉素和妥布霉素不具有识别作用，TAPT除妥布霉素外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对卡那霉素和奈替米星不具有识别作用；所述高亲和性体现为KAPT对卡那霉素的解离常数为40.25±5.97nmol/L，NAPT对奈替米星的解离常数为51.54±10.43nmol/L，TAPT对妥布霉素的解离常数为52.92±19.09nmol/L。所述量子点QD1、QD2和QD3是分别以巯基乙酸和巯基丙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长分别为548、580和668nm。
所述量子点QD1是按如下步骤制备：将0.0760g碲粉与0.05g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入2mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.2200g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入206μL巯基乙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至11.2，加入新制备的NaHTe溶液，于95℃下回流冷凝2h得到巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长548nm。
所述量子点QD2是按如下步骤制备：将0.1276g碲粉与0.0800g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入3mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.4567g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入420μL巯基丙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至10，加入新制备的NaHTe溶液，将其转移至具有聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，于160℃烘箱中加热1h得到巯基丙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长580nm。
所述量子点QD3是按如下步骤制备：将0.1276g碲粉与0.0800g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入3mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.4567g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入420μL巯基乙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至10，加入新制备的NaHTe溶液，将其转移至具有聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，于160℃烘箱中加热55min得到巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长668nm。
所述活化是指在超声振荡下使QD1、QD2和QD3分别与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应3.95-4.05、9.95-10.05和14.95-15.05min，在此时间范围以外都将导致量子点荧光强度降低。所述变性反应是指将KAPT、NAPT和TAPT分别在95℃下加热10min，然后冰浴10min。所述偶联反应是指按照KAPT:QD1摩尔比1:3.8-4.2、NAPT:QD2摩尔比1:4.8-5.2和TAPT:QD3摩尔比1:4.8-5.2的比例使KAPT、NAPT和TAPT分别与活化后的QD1、QD2和QD3避光反应2h，在此比例范围内，QD1、QD2和QD3的表面都能够分别被KAPT、NAPT和TAPT充分偶联。所述3种复合荧光探针KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的激发波长为370nm，发射波长分别为555、583和673nm。
所述猝灭反应是指GO通过π-π堆积相互作用分别与QD1、QD2和QD3构成荧光共振能量转移系统，使QD1、QD2和QD3的荧光猝灭。
2、一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂的使用方法，其特征在于按照下述步骤进行：
(1)量取100μL上述荧光检测试剂，加入1μL卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液或样品溶液，反应35min以上，低于此时间将导致猝灭的量子点荧光不能充分恢复，影响检测准确度。
(2)将反应后的溶液放入酶标仪进行荧光测定。
所述卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为1、1、10，5、5、50，10、10、100，15、15、200，20、20、500μg/L。
所述样品溶液按照下述步骤制备：
(1)量取10mL空白牛奶(没有卡那霉素、奈替米星和妥布霉素残留的牛奶)，加入不同浓度卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液。
(2)加入2mL 15％(V/V)三氯乙酸，超声振荡20min，12000r/min离心10min，收集上清液，用去离子水定容至5mL。
所述在酶标仪中进行的荧光检测按照下述步骤进行：
(1)卡那霉素、奈替米星和妥布霉素检测的激发波长370nm；发射波长555、583和673nm，对应的荧光强度为F555nm、F583nm和F673nm；校正波长607、526和736nm，对应的荧光强度为F607nm、F526nm和F736nm；卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的净分析信号分别为ΔF1＝F555nm-F607nm，ΔF2＝F583nm-F526nm，ΔF3＝F673nm-F736nm。
(2)测量各标准溶液的ΔF1、ΔF2和ΔF3，对这些测得值和各标准溶液中的卡那霉素浓度CK、奈替米星浓度CN以及妥布霉素浓度CT利用origin软件进行回归，可得到卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的标准曲线ΔF1＝A1×CK+B1，ΔF2＝A2×CN+B2，ΔF3＝A3×CT+B3，其中A1、A2、A3和B1、B2、B3分别为回归过程中给出的斜率和截距。
(3)测量样品溶液的ΔF1、ΔF2和ΔF3，代入各自标准曲线方程，计算样品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度。
有益效果
现有卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的荧光标记材料，包括有机荧光染料和纳米荧光量子点，都不能对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素进行选择性标记。适配体虽然可特异性识别其靶物质，但不能传导靶物质的种类和浓度信息，需要与具有信息传导能力的材料或方法结合。本发明将3种在同一激发波长下发射不同波长荧光的CdTe量子点分别与可对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素进行选择性识别的适配体相结合，通过集中两者优势得到了可对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素同时进行荧光标记的复合荧光试剂。该试剂中3种量子点能够实现发射不同波长的荧光，利用的仅仅是其粒径的差异，以相对简单的方法解决了不同靶物质的信息传导问题。该试剂可以对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素进行高选择性识别，不会出现彼此交叉识别或对其它抗生素错误识别导致的假阳性结果，这种优异性能得以实现的关键在于，本试剂所用适配体是从含1013-1015个寡核苷酸的随机文库中经过大量复杂筛选实验得到的高特异性适配体。此外，适配体易于保存，在序列信息已知后可高纯度化学合成，这是抗体所不能比拟的优点。
目前多种抗生素残留检测方法，特别是同类抗生素多残留检测方法，都不能摆脱对分离分析技术的依赖，需要大型分析仪器的支持。本发明检测试剂的使用可以避免这种依赖，随之避免了复杂耗时的样品净化前处理，样品经过简单处理即可利用本发明试剂现场直接进行准确和灵敏的检测，过程简单、快速，对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的检测能力达到了目前其最强检测方法液相色谱-质谱所能达到的水平，却不需要如此昂贵的仪器，为强化食品安全监管提供了强有力的技术保障。
附图说明
图1KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的荧光发射光谱及检测和校正波长的选择。
图2荧光检测试剂在牛奶样品中对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的特异性。
具体实施方式
实施例1
量取浓度分别为21.11、13.09和6.01μmol/L的QD1、QD2和QD3各5μL，分别加入浓度为10g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐10μL，用去离子水定容至40μL，在超声振荡下使QD1、QD2和QD3分别与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应4、10和15min。然后按照KAPT:QD1摩尔比1:4、NAPT:QD2摩尔比1:5和TAPT:QD3摩尔比1:5的比例分别加入经95℃变性处理的KAPT、NAPT和TAPT，用pH7.4的磷酸盐缓冲液定容至400μL，使KAPT、NAPT和TAPT分别与活化后的QD1、QD2和QD3避光反应2h。将反应后溶液分别用50kD超滤管过滤，管中留存溶液分别用磷酸盐缓冲液定容至100μL，此KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3偶联物溶液中以QD1、QD2和QD3浓度计的偶联物浓度分别为1055.5、654.5和300.5nmol/L。
将适量KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3混合后加入GO，并用磷酸盐缓冲液稀释至其中GO的浓度为250mg/L，以QD1、QD2和QD3浓度计的KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的浓度分别为105.55、65.45和30.05nmol/L，反应30min，所得溶液为卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留同时快速荧光检测试剂，其激发波长为370nm，发射波长分别为555、583和673nm。
实施例2
量取10mL空白牛奶，加入卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液，再加入2mL 15％三氯乙酸溶液，然后对该样品超声振荡20min，12000r/min离心10min，收集上清液用去离子水定容至5mL，卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在其中的浓度分别为1、1和10μg/L。将卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为1、1、10，5、5、50，10、10、100，15、15、200，20、20、500μg/L的混合标准溶液系列和加标牛奶样品各吸取1μL，分别加入到100μL本发明的荧光检测试剂中，反应35min。以370nm为激发波长，对各反应后溶液分别测定555和607nm、583和526nm以及673和736nm处的荧光强度F555nm和F607nm、F583nm和F526nm以及F673nm和F736nm。以各混合标准溶液的ΔF1＝F555nm-F607nm、ΔF2＝F583nm-F526nm和ΔF3＝F673nm-F736nm为纵坐标，以卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在其中的浓度CK、CN和CT为横坐标，可回归出卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的标准曲线分别为ΔF1＝12.57CK-5.58(R2＝0.9945)、ΔF2＝7.08CN-1.42(R2＝0.9913)和ΔF3＝0.35CT+10.77(R2＝0.9979)，线性响应范围分别为1-20μg/L、1-20μg/L和10-500μg/L，检出限(S/N＝3)分别为0.13、0.67和5.15μg/L。利用标准曲线可计算出加标牛奶样品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为0.98、1.01和9.86μg/L，加标回收率分别为97.62％、100.57％和98.55％。
实施例3
量取10mL空白牛奶，加入卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液，再加入2mL 15％三氯乙酸溶液，然后对该样品超声振荡20min，12000r/min离心10min，收集上清液用去离子水定容至5mL，卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在其中的浓度分别为10、10和100μg/L。将卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为1、1、10，5、5、50，10、10、100，15、15、200，20、20、500μg/L的混合标准溶液系列和加标牛奶样品各吸取1μL，分别加入到100μL本发明的荧光检测试剂中，反应35min。以370nm为激发波长，对各反应后溶液分别测定555和607nm、583和526nm以及673和736nm处的荧光强度F555nm和F607nm、F583nm和F526nm以及F673nm和F736nm。以各混合标准溶液的ΔF1＝F555nm-F607nm、ΔF2＝F583nm-F526nm和ΔF3＝F673nm-F736nm为纵坐标，以卡那霉素、奈替米星和妥布霉素在其中的浓度CK、CN和CT为横坐标，可回归出卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的标准曲线分别为ΔF1＝12.57CK-5.58(R2＝0.9945)、ΔF2＝7.08CN-1.42(R2＝0.9913)和ΔF3＝0.35CT+10.77(R2＝0.9979)，线性响应范围分别为1-20μg/L、1-20μg/L和10-500μg/L，检出限(S/N＝3)分别为0.13、0.67和5.15μg/L。利用标准曲线可计算出加标牛奶样品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为10.59、9.83和98.00μg/L，加标回收率分别为105.92％、98.32％和98.00％。

Claims (11)

1.氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述试剂采用如下方法进行制备：将对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素分别具有高特异性和高亲和性的适配体作为其信息识别试剂，分别与作为其信息传导试剂的3种具有相同内核材料及不同发射波长的量子点QD1、QD2和QD3偶联，通过将该3种偶联物分别与氧化石墨烯GO构成荧光共振能量转移系统，制备出对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留进行同时快速荧光检测的试剂；所述量子点QD1、QD2和QD3分别是以巯基乙酸、巯基丙酸和巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长分别为548、580和668nm；对卡那霉素具有高特异性和高亲和性的适配体KAPT的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CCC GCAATA AGA TTG GCG TAG TCT CTT ACG CAC TGA TAG TGC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，对奈替米星具有高特异性和高亲和性的适配体NAPT的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAGGGA ATT CGT CGA CGG ATC CCA TGA CGC ATG TCG AAG CTT GGC GGC AGA CGT CCT TAGCTC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，对妥布霉素具有高特异性和高亲和性的适配体TAPT的核酸序列为5'-NH2-(CH2)6-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CAT CCT CGC TGA TGGGGG AGT TGC TAC CGG CCA TTC GTA TTC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'。
2.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述试剂制备方法的具体步骤如下：
量取浓度分别为21.11μmol/L、13.09μmol/L和6.01μmol/L的QD1、QD2和QD3各5μL，分别加入浓度为10g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐10μL，用去离子水定容至40μL，分别进行活化；然后分别加入经变性处理的KAPT、NAPT和TAPT，用pH7.4的磷酸盐缓冲液定容至400μL，进行偶联反应；将反应后溶液分别用50kD超滤管过滤，管中留存溶液分别用磷酸盐缓冲液定容至100μL，此KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3偶联物溶液构成卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的复合荧光探针溶液，以QD1、QD2和QD3浓度计的偶联物浓度分别为1055.5、654.5和300.5nmol/L；
将适量KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3混合后加入氧化石墨烯(GO)，并用磷酸盐缓冲液稀释至其中GO的浓度为250mg/L，以QD1、QD2和QD3浓度计的KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的浓度分别为105.55nmol/L、65.45nmol/L和30.05nmol/L，猝灭反应30min后即构成可用于卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留同时快速荧光检测的试剂KAPT-QD1/GO、NAPT-QD2/GO和TAPT-QD3。
3.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述高特异性是指KAPT除卡那霉素外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对奈替米星和妥布霉素不具有识别作用，NAPT除奈替米星外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对卡那霉素和妥布霉素不具有识别作用，TAPT除妥布霉素外，对其它类别抗生素和氨基糖苷类抗生素，特别是对卡那霉素和奈替米星不具有识别作用；所述高亲和性体现为KAPT对卡那霉素的解离常数为40.25±5.97nmol/L，NAPT对奈替米星的解离常数为51.54±10.43nmol/L，TAPT对妥布霉素的解离常数为52.92±19.09nmol/L。
4.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述量子点QD1是按如下步骤制备：将0.0760g碲粉与0.05g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入2mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.2200g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入206μL巯基乙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至11.2，加入新制备的NaHTe溶液，于95℃下回流冷凝2h得到巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长548nm。
5.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述量子点QD2是按如下步骤制备：将0.1276g碲粉与0.0800g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入3mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.4567g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入420μL巯基丙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至10，加入新制备的NaHTe溶液，将其转移至具有聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，于160℃烘箱中加热1h得到巯基丙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长580nm。
6.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述量子点QD3是按如下步骤制备：将0.1276g碲粉与0.0800g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入3mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.4567g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入420μL巯基乙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至10，加入新制备的NaHTe溶液，将其转移至具有聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，于160℃烘箱中加热55min得到巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长668nm。
7.如权利要求2所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述活化是指在超声振荡下使QD1、QD2和QD3分别与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应3.95-4.05、9.95-10.05和14.95-15.05min，在此时间范围以外都将导致量子点荧光强度降低；所述变性反应是指将KAPT、NAPT和TAPT分别在95℃下加热10min，然后冰浴10min；所述偶联反应是指按照KAPT:QD1摩尔比1:3.8-4.2、NAPT:QD2摩尔比1:4.8-5.2和TAPT:QD3摩尔比1:4.8-5.2的比例使KAPT、NAPT和TAPT分别与活化后的QD1、QD2和QD3避光反应2h，在此比例范围内，QD1、QD2和QD3的表面都能够分别被KAPT、NAPT和TAPT充分偶联；所述3种复合荧光探针KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的激发波长为370nm，发射波长分别为555、583和673nm；所述猝灭反应是指GO通过π-π堆积相互作用分别与QD1、QD2和QD3构成荧光共振能量转移系统，使QD1、QD2和QD3的荧光猝灭。
8.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂的使用方法，其特征在于按照下述步骤进行：
(1)量取100μL上述荧光检测试剂，加入1μL卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液或样品溶液，反应35min以上，低于此时间将导致猝灭的量子点荧光不能充分恢复，影响检测准确度；
(2)将反应后的溶液放入酶标仪进行荧光测定。
9.如权利要求8所述的使用方法，其特征在于：所述卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度分别为1μg/L、1μg/L、10μg/L，5μg/L、5μg/L、50μg/L，10μg/L、10μg/L、100μg/L，15μg/L、15μg/L、200μg/L，20μg/L、20μg/L、500μg/L。
10.如权利要求8所述的使用方法，其特征在于：所述样品溶液按照下述步骤制备：
(1)量取10mL空白牛奶，即没有卡那霉素、奈替米星和妥布霉素残留的牛奶，加入不同浓度卡那霉素、奈替米星和妥布霉素混合标准溶液；
(2)加入2mL 15％(V/V)三氯乙酸，超声振荡20min，12000r/min离心10min，收集上清液，用去离子水定容至5mL。
11.如权利要求8所述的使用方法，其特征在于：所述在酶标仪中进行的荧光检测按照下述步骤进行：
(1)卡那霉素、奈替米星和妥布霉素检测的激发波长370nm；发射波长555、583和673nm，对应的荧光强度为F555nm、F583nm和F673nm；校正波长607、526和736nm，对应的荧光强度为F607nm、F526nm和F736nm；卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的净分析信号分别为ΔF1＝F555nm-F607nm，ΔF2＝F583nm-F526nm，ΔF3＝F673nm-F736nm；
(2)测量各标准溶液的ΔF1、ΔF2和ΔF3，对这些测得值和各标准溶液中的卡那霉素浓度CK、奈替米星浓度CN以及妥布霉素浓度CT利用origin软件进行回归，可得到卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的标准曲线ΔF1＝A1×CK+B1，ΔF2＝A2×CN+B2，ΔF3＝A3×CT+B3，其中A1、A2、A3和B1、B2、B3分别为回归过程中给出的斜率和截距；
(3)测量样品溶液的ΔF1、ΔF2和ΔF3，代入各自标准曲线方程，计算样品中卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的浓度。
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