CN110295253A - 一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法 - Google Patents
一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT‑qPCR检测试剂盒与检测方法，其试剂盒包括2条特异性引物：qSPLV‑lotus‑F和qSPLV‑lotus‑R，M‑MLV反转录酶、M‑MLV酶反应缓冲液、dNTPs、SYBR Green DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液等。本发明还公开了一种在莲藕中检测甘薯潜隐病毒莲藕分离物的方法。本发明方法与常规RT‑PCR相比，提升检测甘薯潜隐病毒莲藕分离物灵敏度100倍，适宜脱毒莲藕种苗的检测。本发明在分子水平上为甘薯潜隐病毒莲藕分离物的检测提供了一种快速、灵敏的方法，也为莲藕脱毒苗的制备提供了有效的检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及植物病毒检测技术领域，具体涉及一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR的检测试剂盒与检测方法。
背景技术
莲藕(Nelumbo nucifera)是睡莲科莲属多年生大型水生草本植物，原产中国和印度，有三千多年的栽培历史，生产上可分为藕莲、籽莲和花莲。莲藕富含淀粉、蛋白质、维生素、矿物质等多种营养成分，是我国南方地区的主要水生蔬菜，其栽培面积近40余万hm2。
甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus，SPLV)属于属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyvirus)，是1979年在中国台湾的甘薯上首次发现的，其介体昆虫为蚜虫，可随薯苗营养繁殖体及薯块传播。甘薯潜隐病毒具有变种和多样性(比如甘薯潜隐病毒莲藕分离物(Sweet potato latent virus-lotus，SPLV-lotus)，是本实验室前期在莲藕中发现的一种甘薯潜隐病毒新型分离物)。江苏省莲藕主产区SPLV-lotus感染越来越普遍，部分地区呈现流行爆发趋势，因此脱毒莲藕种苗的应用迫在眉睫。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明目的在于提供一种用于甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法，具体为脱毒莲藕种苗检测的高灵敏度实时荧光定量检测试剂盒，以及该试剂盒的制备方法及检测方法。
甘薯潜隐病毒莲藕分离物(Sweet potato latent virus-lotus，SPLV-lotus)，是本实验室前期在莲藕中发现的一种甘薯潜隐病毒新型分离物。该分离物与SPLV甘薯分离物具有很大的遗传差异，核苷酸相似性在76.28％-76.60％之间，与最新的国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)制定的马铃薯Y病毒科病毒的分种标准相同，且该分离物与SPLV甘薯分离物有四个蛋白酶水解切隔识别位点存在差异，其编码的PIPO的长度差异较大。SPLV-lotus自然条件下能够侵染莲藕，并且能有效侵染豆科、藜科、葫芦科、茄科植物，但未见明显的症状表现。2016年，我们在江苏省莲藕产区首次发现SPLV-lotus，后续调查发现，SPLV-lotus在江苏省莲藕主产区发生越来越普遍，部分地区呈现流行爆发趋势，因此脱毒莲藕种苗的应用迫在眉睫，但目前已有的SPLV-lotus的RT-PCR检测技术不能满足脱毒莲藕种苗的检测精度。因此，亟需发展SPLV-lotus的精确检测鉴定技术。RT-qPCR检测方法以其灵敏度高、特异性好等特点受到青睐，在植物病毒检测特别是脱毒苗木病毒检测中应用越来越广泛。本发明即是开发一种能够高灵敏度检测SPLV-lotus的RT-qPCR检测方法。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，包括2条针对SPLV-lotus CP基因设计的特异性引物：
qSPLV-lotus-F：5’-TGGAACACTATCTAGCAGCGATTATGG-3’；
qSPLV-lotus-R：5’-GTTGCGGATGGTTGACCTGTCTC-3’。
所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、SYBR Green DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液。
所述试剂盒还包括标准阳性模板。
本发明还提供一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus实时荧光定量的检测方法，其包括以下步骤：(1)采用多糖多酚植物组织的裂解法提取待测样品总RNA；
(2)设计并合成引物；引物包括
qSPLV-lotus-F：5’-TGGAACACTATCTAGCAGCGATTATGG-3’；
qSPLV-lotus-R：5’-GTTGCGGATGGTTGACCTGTCTC-3’；
(3)实时荧光定量PCR。
步骤(3)的PCR反应体系中，qSPLV-lotus-F、qSPLV-lotus-R的浓度分别优选为10μmol/L。优化引物浓度步骤：以SPLV-lotus质粒标准品为模板，控制引物浓度分别为100μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L。
步骤(3)的PCR反应条件中，退火温度优选为60.1℃。
其中，步骤(3)具体为：逆转录和PCR
①反转录合成cDNA
以莲藕总RNA为模板，以qSPLV-lotus-R引物，通过反转录酶合成cDNA；
②PCR扩增
以cDNA为模板，以qSPLV-lotus-R和qSPLV-lotus-F为引物，进行PCR反应。
本发明还提供甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒在莲藕脱毒苗检测中的应用。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：本发明方法与常规RT-PCR相比，提升检测甘薯潜隐病毒莲藕分离物灵敏度100倍，适合脱毒莲藕种苗的检测。本发明在分子水平上为甘薯潜隐病毒莲藕分离物的检测提供了一种快速、灵敏的试剂盒和检测方法，也为莲藕脱毒苗的制备提供了有效的检测方法。
附图说明
图1不同SPLV-lotus质粒浓度的常规PCR电泳图，1-9：7×109-7×101拷贝·μL-1；
图2不同SPLV-lotus质粒浓度的real-time PCR扩增曲线，1-9：7×109-7×101拷贝·μL-1。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
(1)引物设计与合成
根据SPLV-lotus基因组序列(SEQ ID NO.3)，设计并合成荧光定量检测引物qSPLV-lotus-F(5’-TGGAACACATCTAGCAGCGATTATGG-3’)和qSPLV-lotus-R(5’-GTTGCGGATGGTTGACCTGTCTC-3’)。
以上序列分别为SEQ ID No.1和2。
(2)总RNA提取
采用多糖多酚植物组织裂解法进行待测样品(莲藕脱毒苗)的总RNA提取。
(3)优化引物浓度
以SPLV-lotus质粒标准品(带有SPLV-lotus基因组序列的质粒)为模板，控制引物浓度(指单个引物的浓度，qSPLV-lotus-F、qSPLV-lotus-R)分别为100μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L。
(4)实时荧光定量RT-PCR
①反转录合成cDNA
以莲藕总RNA为模板，以qSPLV-lotus-R引物，通过反转录酶为MLV，合成cDNA，反转录体系为表1所示：
表1反转录体系
轻弹管壁混匀，稍离心后，42℃保温60min，然后置冰上待用；
②PCR扩增
PCR反应体系如下表2：
表2PCR反应体系
两步法PCR扩增标准程序(表3)：
表3PCR反应程序
结果发现各引物浓度在10μmol/L时荧光强度最高，Ct值最小，因此确定10μmol/L为该体系引物终浓度。
(5)退火温度优化
在优化的引物浓度下观察退火温度在54～64℃下对荧光信号的影响。退火温度在60.1℃时荧光值最高，Ct值最小，且熔解曲线为单一峰，因此确定该体系的退火温度为60.1℃。
(6)灵敏度检验
分别以10倍稀释的7×101-7×109拷贝·μL-1的SPLV-lotus质粒标准品为模板，平行进行实时荧光定量RT-PCR和普通RT-PCR。试验结果显示，实时荧光定量PCR能够检测到7×101拷贝·μL-1质粒浓度，而普通PCR只能检测到7×103拷贝·μL-1的质粒浓度，说明实时荧光定量PCR的灵敏度是普通PCR的100倍(图1、图2)。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，本领域技术人员对之可作一些修改或改进。但是，在不偏离本发明内涵的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法
<130> xhx2019062601
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cgcgtaatca cttggtgatt ggaaatgcag gagatcctaa atatgttgat ttaccaacag 2460
aagtgagtga aaaactatat attgcaaagg agggtttctg ctacataaac atcttcctgg 2520
ccatgttagt aaatgtgaga gagtcagagg ctaaggattt cacgaaaaga gtgcgagata 2580
tagtagtcca aaaattagga aaatggccaa caatgataga tgtagctaca gcatgttgtt 2640
tgctcgctgt atttcatcca gaagtgcaag atgctgaatt gccacgaatc ctaattgatc 2700
acaccaccaa gacaatgcat gtgattgatt cttatggttc aaagaacact gggtatcaca 2760
ttctgaaggc taatacagtt agtcagctaa tgcaatttgc cagcgattca cttgattctg 2820
agatgaaatt ctatgttgtg ggtggacatg cgcacacttc atcctttgag agaacttcaa 2880
tcacaaccat aattaagggt gtatataaac cagctgtcat gcgagagatc cttgatacgg 2940
atccgtattt gctactgatg gctatcttgt ctccgactgt gctcagagca ctacacacta 3000
gtggatcact tgagcgagct cttgaatatt ggataagtag tgaccaagat gtggtaacaa 3060
ttataacact ggtgaagact ttagcacaaa aagtatcagt tgcaagaacc ttaaccacgc 3120
aaatgcaagt cgtgcaggat tatgctacgg agctaacggg ctacgttcac caaacaaagc 3180
gagtatcgat agcagcagtt gtggcattcc gtacgcttca gcatctgagt aataagcgca 3240
gcgctgatgg aatattgaca caacaagggt ttcaaaacac agtggagcgc gagactcttg 3300
aagcccttga gaaaaaatat gcgtgggagc taaagcagca gtggaacgct ttaagcttgt 3360
gtcaaaaatg ttactacaca ctacagtata tgaagcaatg caggcgatca cacgagtctg 3420
tagccagcgt gcgcaccaca gagcgcgtag aggcctttat cgcatatcca tctcagtgtt 3480
tggggagtgc aattgcaatc gcaaggcagt ctaaggagcg aattcaaagt gcattcgtgg 3540
aaggcaaact caaaataaag ctctttttgt ttgataaagc actaactgtt atgcgatttg 3600
gaataccaga tgtggtaagg ttggctaata tccttattgt gattactata ctgtatggag 3660
tctcatccag attgcggcgt ctattgcaag atcacctcaa ataccgtgcg ttatacatgc 3720
aagagactga tgataaggat tttgccaggt tgcaggatat atatgtggag tgtattggta 3780
cggatggaac tctaccaaca gttggggagt ttttaaaagc tgtcaatatt aaagcaccag 3840
aattaaatga gtatgcgttg gaaacaactg catttgctag tgataatgtt gtgcatcagg 3900
cgaagagccc aaccgaggca aaatatgaga ggatcatagc aatggttgct ttgtttatga 3960
tggcctttga tacagagagg agtgattgtg tgtataagat tctgaacaag ctgagaacac 4020
tcacgaacat tgcgcaacaa gatgtgcatc atcaaagttt ggatgatatc aaagatgagt 4080
ttagtgaaaa acagatgact attgattttg aacttgattc agatacacaa agtccaagtt 4140
ctttaacgga tgtgacattt gccaaatggt ggtcaaacca actggcaatg aacaatgtta 4200
ttccacacta caggactgag ggtcatttta tggagttcac acgagcaaat gcctctgcag 4260
tagctcatga gatcgccata ggacagcata atgacatttt aattagaggt gcagttggat 4320
ctggaaagtc gacgggtttg ccatttaatt tgatgcgcaa gggagcagta ttgttaatag 4380
aacccacaag gccactagca gagaatgtgt gcaaacagct gagaggagat ccttttaatt 4440
tgagtccaac acttaaaatg cggggattat cagtatttgg ttccagccca atcacaataa 4500
tgacaagtgg gtatgcatta cattaccttg cgaataatgt acattgtata gccaattatc 4560
aatttattat ctttgacgag tgtcatgtaa atgacgcagc agctatggct tttagatgct 4620
tgctacatgg acatgcattc gctggaaaga ttctcaaagt gtcagcaaca ccaccaggtc 4680
gagaggttga attcaccaca cagcatccag tgaaagtttt agttgaggaa tcaatttcat 4740
ttaatgactt tgttgctgca caaggaacag gacaaaatgc tgatgtgatt gtgaggggtg 4800
acaatatatt ggtgtatgta gctagttata atgaagttga tattctaagt aagctcttac 4860
tggaacgtgg ttacagagtt accaaggtgg acggtcgaac aatgaaagtt ggtagtgtag 4920
agatagcgac ctatggaacg agcaaacaaa aacacttcat agtcgcaaca aacataattg 4980
agaatggagt aactcttgac attgatgttg tggtcgattt tggcagaaaa gtctccccgt 5040
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gcatacagag attaggacgc gtgggcagag tgaaacctgg atgtgcgctt agaatcggat 5160
ggacggaaaa agggcttgtt gatatacctg cgttagtagc cactgaagct gcgttgttgt 5220
gtttcactta tggtttgcca gttatgacac acaacgtatc caccgctctt cttagtggtt 5280
gtacagtgag acaagcaaga acgatgcaac actttgaact ctcaccatat ttcacagtag 5340
accttgtgcg tcatgatggc acaatgcacc caatgataca tggattactg aagaagtata 5400
aactcaggga ctcagaaata agtcttaaca agatggcgct accagtggga caatcaacaa 5460
ggtggatgac agtccgagag tacaacagat gcacacgtgc tatgagtctt gatgaagata 5520
taagaatacc cttcctaatg aacggaatac cagaaacact atatagtgaa ctctgggcga 5580
ctattcagaa gtataggggt gatgttggct ttggacgact cacaagcagt agtgcgggaa 5640
aaatagcata cacactcaaa actgactttg cagctcttcc acggacagtt aagataattg 5700
aagagttaat agaaggtgag atggcaaagc aagagtattt caggagtgtt tctgcaaatg 5760
cttgctcatc atctaatatt tctctcgcta gtgcactgaa tgcgataaaa gcacggtatg 5820
caaaggatca tactgctgag aacatagccg tactacaggc tgcaaaggcc caaatcattg 5880
agcttagaaa tcttgatctt gatggatctt ttatgtcgat gggtaatcga gcagttgagt 5940
cttatgtcaa ggaatatagt gcatccagtt gtgtagaaca ccaaagtaaa gagggcgtta 6000
tcaaacacct caaattgaaa gacatttgga ataaaagtct aatcacgcaa gatattgtgg 6060
tgatgggtgg cgtctttctt ggaggtttgt atctgatcca tgagtctttt aaagatggaa 6120
tgagcactaa ggtcacgcac cagggctata acaagaggca aaggcagaag cttaaatttc 6180
gagatacttg tgatcagaag cttggtagag aagtgtatgg tgatgacgga acaatagagc 6240
attattttgg aacagcatac actaagaagg gaaagactaa aggcactaag agagggatgg 6300
gagcaaagaa tagacgtttt acgaatatgt atggatatga tccatcagat tattcctttg 6360
tgcgattcgt agatcctctt actggccaca cactagatga aaacatatat gctgatattg 6420
aattggtgca ggagcacttt ggggaagtga gacgtgcgta tatggcggag gacaagttgg 6480
aaccacaaaa gatcatgagc atgcctggta ttcaagcata ttatatgagc aacgctgcag 6540
acaaggcact gagagttgac atgacacctc acaacccgtt taaggtgtgt gatgcaacta 6600
ataccattgc aggattccca gaacaggagg ctattttaag acaaactggt aagcccgaga 6660
tgataaagag ctctgaagta cctacaatta atgaatacac tcaagacaca gtcattcatg 6720
agagcaaatc attgtttaga ggcttgaggg actacaatcc aatcgctagt accatttgcc 6780
aaatcacgaa tgactctgac ggccatagta gttctactta tggtatcgga tatgggtgta 6840
taatcattgc aaaccagcat ttattcaaac gtaataatgg cacactaatg atcaaatcaa 6900
gagctggtga gtttcgaatt caaaactcta caactttaaa gatgaagcca tgtgtaggga 6960
gagatgtgat tctgttgcag atgccgaaag attttccacc attcccacgg agactgaagt 7020
ttaggcaacc tgctaaaggt gagaggatat gtatggtagg ttcgaacttt caggagaaga 7080
gtatatctag tgttatatca gaaagcagtg ttatacaccc tgtggatggc actcattttt 7140
ggaagcactg gatagataca aaggacgggc aatgtggttt accaatagtt agcacgaagg 7200
acggttccat actgggcata catagtctag caggctcttc aaatactacc aacttcttta 7260
cagactttcc agagggcttt gtggaagagt ttttagagaa tgcacataat ctggactgga 7320
caaaagcttg gaaatacaat cctgttggag ttttgtgggg ttcacttaaa ttaacagaca 7380
gtcaacctga gccaattttc aaagctcaaa agctcatatc cgacctcaat tcgatgcaag 7440
tctacgcaca atcttatgat ggaaagtggc tattctcagc attgaacgga aatctgaaag 7500
ctgttggtga gagtccatca caattggtca cgaagcatgt ggttaaagga aaatgcccta 7560
tgtttgaatt atatctccaa actgatgagg tagcccggga gtattttcaa ccattgatgg 7620
gtgcttacca gaaaagcatg ttaaataaag aagcatataa aaaggatctc ttcaaatatg 7680
ctgaagtgac ggatgtcgga cttgttaatt gccaaatttt tgagagggca cttggatctg 7740
tcattaatct ccttgagcgg aaccagtttg gaacttgtgt gtacatcact gatgaaaacg 7800
aaattattga ttcattaaat atgaaagcgg ctgttggtgc tttgtacaca gggaagaaga 7860
aagagtattt taatgagatg agccaagagg agcgtgaaaa tatattgcgt gctagttgtt 7920
tgaggctgta tacaggaaag cttggtgttt ggaatggttc actcaaggca gaattgcggc 7980
ctttggagaa agtgcaagcg aataaaacgc gaacattcac tgccgcgcca ttagatacgc 8040
tactcgctgg gaaagtttgt gtggatgcat ttaacaacag attctatgac ttgcacattc 8100
aatgcccatg gagtgttggg atgaccaagt tttatggggg gtggaatgag ctactgacag 8160
cattgcccga tggttggaga tactgtgatg ctgatggatc tcaatttgat agttctcttt 8220
caccatattt aataaacgca gttttacaac tgcgtttgca tttcatggag gattgggata 8280
taggtgaaca aatgctgaaa aatttatata cggagattgt ctacactccg atcttgacac 8340
ctcatggtac aattgtcaaa aagcacaaag gaaacaacag cggacaacct tctactgtcg 8400
tggataatac attgatggtt atactggcta tgtattattc attgcatgca gaaggctact 8460
cagctgaata tgctgaaagt gtttgtaagt tctttgtgaa tggagatgat ttactaatcg 8520
cagtacaccc gcaacatgag tctatcttgg ataaactgca gacacacttc aagtgcttgg 8580
gattgaagta cacatttgat aatagacatg atgataaaac atctctctgg tttatgtcgc 8640
accaaggaat caaaagggat ggaattttta ttcctaaact ggaaaaggaa cgaattgtat 8700
caatccttga gtgggacaga tcaagagaac caatccatcg aatggaggca atatgtgctg 8760
caatggtcga ggcatggggc tatgatgact tggtgtatga gatcagaaaa ttctataagt 8820
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atcaagctgc tgacgatgaa ctagatgctg gtaagatgaa tgtaaagaaa caacaaggaa 9060
ctggcgaggc aggtcaacca tccgcaacac caccacagtc aaatgctaag gacaaaggca 9120
aagaggttgt atcagcacaa gggagtggga tcatcaataa accagagctg gaccgagata 9180
taaatactgg tacaattgga acatttcagg tacctcggtt gcgtgcgata cccacaaaga 9240
tccgactacc aataattaag tccggagcag cacttaatct cgatcatttg ttagtttata 9300
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caacatttcg acaaatcatg aaacatttta gtgatgtcgc agaggcctac atacagatgc 9600
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gttgtgaggg tgtccctcga gtgaaacatt tagtgtgatc ctttccgtta tatttcaaga 10020
aatttatgat attagtgagg cactgcctcc attcataaac tttttgcttt ataccagaga 10080
c 10081
Claims (8)
1.一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，包括2条针对SPLV-lotus CP基因设计的特异性引物：
qSPLV-lotus-F：5’-TGGAACACTATCTAGCAGCGATTATGG-3’；
qSPLV-lotus-R：5’-GTTGCGGATGGTTGACCTGTCTC-3’。
2. 根据权利要求1所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、SYBR Green DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
4.一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus实时荧光定量的检测方法，其包括以下步骤：
（1）采用多糖多酚植物组织的裂解法提取待测样品总RNA；
（2）设计并合成引物；引物包括
qSPLV-lotus-F：5’-TGGAACACTATCTAGCAGCGATTATGG-3’；
qSPLV-lotus-R：5’-GTTGCGGATGGTTGACCTGTCTC-3’；
（3）实时荧光定量PCR。
5. 根据权利要求4所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus实时荧光定量的检测方法，其特征在于，步骤（3）的PCR反应体系中，qSPLV-lotus-F、qSPLV-lotus-R的浓度分别为10 μmol/L。
6.根据权利要求4所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus实时荧光定量的检测方法，其特征在于，步骤（3）的PCR反应条件中，退火温度为60.1℃。
7.根据权利要求4所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus实时荧光定量的检测方法，其特征在于，步骤（3）包括：①反转录合成cDNA：以莲藕总RNA为模板，以qSPLV-lotus-R引物，通过反转录酶合成cDNA；②PCR扩增：以cDNA为模板，以qSPLV-lotus-R和qSPLV-lotus-F为引物，进行PCR反应。
8.权利要求1-3任意一项所述的甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒在莲藕脱毒苗检测中的应用。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN201910565436.8A CN110295253A (zh) | 2019-06-27 | 2019-06-27 | 一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910565436.8A CN110295253A (zh) | 2019-06-27 | 2019-06-27 | 一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110295253A true CN110295253A (zh) | 2019-10-01 |
Family
ID=68028922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910565436.8A Pending CN110295253A (zh) | 2019-06-27 | 2019-06-27 | 一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物RT-qPCR检测试剂盒与检测方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110295253A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107385108A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-11-24 | 扬州大学 | 莲藕中一种新马铃薯y病毒科病毒的检测试剂盒及其检测方法 |
-
2019
- 2019-06-27 CN CN201910565436.8A patent/CN110295253A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107385108A (zh) * | 2017-07-27 | 2017-11-24 | 扬州大学 | 莲藕中一种新马铃薯y病毒科病毒的检测试剂盒及其检测方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HUIYUAN WANG等: "Genomic and biological characterization of a novel strain of sweet potato latent virus isolated from lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.)", 《JOURNAL OF PLANT PATHOLOGY》 * |
| 刘娴: "莲藕中一种马铃薯Y病毒属病毒的鉴定与全序列分析", 《万方学位论文数据库》 * |
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