CN110283745B - 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用 - Google Patents

医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110283745B
CN110283745B CN201910566284.3A CN201910566284A CN110283745B CN 110283745 B CN110283745 B CN 110283745B CN 201910566284 A CN201910566284 A CN 201910566284A CN 110283745 B CN110283745 B CN 110283745B
Authority
CN
China
Prior art keywords
acinetobacter
hospital
inorganic salt
culture
culture solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910566284.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110283745A (zh
Inventor
成卓韦
陈东之
冯克
叶杰旭
张士汉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University of Technology ZJUT
Original Assignee
Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University of Technology ZJUT filed Critical Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority to CN201910566284.3A priority Critical patent/CN110283745B/zh
Publication of CN110283745A publication Critical patent/CN110283745A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110283745B publication Critical patent/CN110283745B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D53/00—Separation of gases or vapours; Recovering vapours of volatile solvents from gases; Chemical or biological purification of waste gases, e.g. engine exhaust gases, smoke, fumes, flue gases, aerosols
    • B01D53/34—Chemical or biological purification of waste gases
    • B01D53/38—Removing components of undefined structure
    • B01D53/44—Organic components
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D53/00—Separation of gases or vapours; Recovering vapours of volatile solvents from gases; Chemical or biological purification of waste gases, e.g. engine exhaust gases, smoke, fumes, flue gases, aerosols
    • B01D53/34—Chemical or biological purification of waste gases
    • B01D53/46—Removing components of defined structure
    • B01D53/72—Organic compounds not provided for in groups B01D53/48 - B01D53/70, e.g. hydrocarbons
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D53/00—Separation of gases or vapours; Recovering vapours of volatile solvents from gases; Chemical or biological purification of waste gases, e.g. engine exhaust gases, smoke, fumes, flue gases, aerosols
    • B01D53/34—Chemical or biological purification of waste gases
    • B01D53/74—General processes for purification of waste gases; Apparatus or devices specially adapted therefor
    • B01D53/84—Biological processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D2251/00—Reactants
    • B01D2251/95—Specific microorganisms
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D2256/00—Main component in the product gas stream after treatment
    • B01D2256/22—Carbon dioxide
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D2257/00—Components to be removed
    • B01D2257/70—Organic compounds not provided for in groups B01D2257/00 - B01D2257/602
    • B01D2257/702—Hydrocarbons
    • B01D2257/7027—Aromatic hydrocarbons
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D2257/00—Components to be removed
    • B01D2257/70—Organic compounds not provided for in groups B01D2257/00 - B01D2257/602
    • B01D2257/704—Solvents not covered by groups B01D2257/702 - B01D2257/7027
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/32—Hydrocarbons, e.g. oil
    • C02F2101/322—Volatile compounds, e.g. benzene
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/34—Organic compounds containing oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/20—Air quality improvement or preservation, e.g. vehicle emission control or emission reduction by using catalytic converters
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/59—Biological synthesis; Biological purification

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种医院不动杆菌FK2及其在降解有机污染物中的应用，本发明所述的医院不定杆菌能将乙酸异戊酯完全降解为无机物(CO2、H2O)和细胞生物质，实现完全矿化，且对于1000mg/L内的乙酸异戊酯等有机污染物的去除率高达100％。因此，该医院不动杆菌对于工业常见污染物(如乙酸异戊酯、乙酸丁酯等)具有高效的降解能力，且能承受较高浓度的污染物。

Description

医院不动杆菌FK2及其在降解有机污染物中的应用
(一)技术领域
本发明涉及一种医院不动杆菌(Acinelobacter nosocomialis)FK2及其在降解乙酸异戊酯等污染物中的应用。
(二)背景技术
酯是酸(羧酸或无机含氧酸)与醇起反应生成的一类有机化合物。低级的酯是有香气的挥发性液体，高级的酯是蜡状固体或很稠的液体。几种高级的酯是脂肪的主要成分。酯难溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，其中低分子量的酯类是无色、易挥发的气体。低分子量的酯可用作溶剂，分子量较大的酯是良好的增塑剂。如甲基丙烯酸甲酯是制造有机玻璃(聚甲基丙烯酸甲酯)的单体；聚酯树脂主要用于纤维和油漆工业，也可制成压塑粉；许多带有支链的醇形成的酯是优良的润滑油。酯还用于香料、香精、化妆品、肥皂和药品等工业。小分子酯类经排放挥发进入大气环境后，对眼及呼吸道产生刺激作用，高浓度则会产生急性中毒。
乙酸异戊酯是优良的有机溶剂，广泛用于调味、制革、人造丝、胶片和纺织品等加工工业。可用于香皂、合成洗涤剂等日化香精配方中，但主要用于食用香精配方中，可调配香蕉、苹果、草莓等多种果香型香精。但是其蒸气对眼及上呼吸道粘膜有刺激性。其有麻醉作用，接触后出现咳嗽、胸闷、疲乏、限烧灼感。高浓度时，则有头晕、发烧感受。脉速、心悸、头痛、耳鸣、震颤、恶心、食欲丧失。可引起皮肤干燥、皮炎、湿疹。
因此研究环境中乙酸异戊酯的高效降解对人类健康很有必要，通过文献检索，未发现有关不动杆菌以乙酸异戊酯为唯一碳源来实现乙酸异戊酯高效降解的报道。本发明的医院不动杆菌(Acinelobacter nosocomialis)FK2对乙酸异戊酯的平均降解速度高达(89.45mg/(L·h)-1)，并且生长环境温和，易扩大培养，目前，暂无有降解乙酸异戊酯降解菌的报道。该降解菌的发现对于工业废水废气中酯类污染物的高效净化具有重要意义。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种高效、去除能力强、具有乙酸异戊酯降解能力的医院不动杆菌及其应用。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种新的乙酸异戊酯降解菌——医院不动杆菌(Acinelobacternosocomialis)FK2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年03月01日，保藏编号：CCTCC NO:M2019117，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
本发明医院医院不动杆菌FK2的基本特征为：菌落浅黄色，边缘整齐，不透光，光滑湿润，易挑取。透射电镜下观察该菌体的形态为球杆菌，无鞭毛，革兰氏染色阴性。
本发明还提供一种所述医院不动杆菌FK2在降解有机污染物中的应用，具体所述的应用是将医院不动杆菌FK2经扩大培养获得的静息细胞加入pH＝6-8(优选7)、含有机污染物的无机盐培养液中，在25-35℃(优选30℃)、160rpm条件下进行培养，实现有机污染物的降解。
进一步，所述有机污染物包括乙酸异戊酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯或邻二甲苯中的一种或多种，优选乙酸异戊酯。
进一步，所述无机盐培养液中，静息细胞加入量以菌体干重计为30mg/L。
进一步，所述无机盐培养液中有机污染物的初始浓度为100-1500mg/L，优选100-1000mg/L。
进一步，所述无机盐培养液组成为：KH2PO4 1g/L、ZnSO4·7H2O 0.1mg/L、Na2HPO44.5g/L、(NH4)2SO40.5 g/L、FeSO4·7H2O 1mg/L、MgSO4 0.1g/L、CaCl2 0.02g/L、FeSO4·7H2O1mg/L、CuSO4·5H2O 0.02mg/L、CoCl2·6H2O 0.02mg/L、MnSO4·4H2O 0.1mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.02mg/L、H3BO3 0.02mg/L、pH 6-8，溶剂为去离子水。
进一步，所述医院不动杆菌FK2静息细胞按如下步骤制备：
(1)斜面培养：将医院不动杆菌FK2接种至LB液体培养基中，在30℃，160rpm下培养2d，使保藏的细菌活化复苏，再将活化的细菌画线于LB平板，30℃培养箱培养，取单菌落继续平板画线以检测细菌的纯度，得到可常规保持(4℃)的细菌斜面，该细菌斜面需要每三个月转接一次，以保证菌种的活性；LB固体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，15-20g/L琼脂，pH自然，溶剂为去离子水；LB液体培养基是去除LB固体培养基中的琼脂；
(2)扩大培养：将步骤(1)斜面菌体接种至LB液体培养基中，在30℃，160rpm下培养12h，获得扩大培养液，离心，收集湿菌体，无机盐培养液洗涤，获得医院不动杆菌静息细胞；LB液体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，pH自然，溶剂为去离子水。
与现有技术相比，本发明有益效果体现在：
本发明提供的医院不动杆菌FK2取自污水厂污泥，对于酯类，尤其是乙酸异戊酯具有较好地降解效果，可以较为完全地把污染物转化为CO2、H2O等无害物质；同时，该菌株也能不同程度地降解其他工业乙酸丁酯、乙酸乙酯、甲苯、乙苯、邻二甲苯等工业常见污染物，因而在工业废气废水的生物净化中具有广阔的应用前景。
本发明所述的医院不定杆菌能将乙酸异戊酯完全降解为无机物(CO2、H2O)和细胞生物质，实现完全矿化，且对于1000mg/L以内的乙酸异戊酯等有机污染物的去除率高达100％。因此，该医院不动杆菌对于工业常见污染物(如乙酸异戊酯、乙酸丁酯等)具有高效的降解能力，且能承受较高浓度的污染物。
(四)附图说明
图1为Acinelobacter nosocomialisFK2在LB培养基上菌落形态照片。
图2为Acinelobacter nosocomialisFK2的透射电子显微镜照片(×15000)。
图3为Acinelobacter nosocomialisFK2的系统发育树图。
图4 Acinelobacter nosocomialisFK2在6h(A)和12h(B)内对不同浓度乙酸异戊酯的降解率。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
所述无机盐培养液组成为：KH2PO4 1g/L、ZnSO4·7H2O 0.1mg/L、Na2HPO4 4.5g/L、(NH4)2SO40.5 g/L、FeSO4·7H2O 1mg/L、MgSO4 0.1g/L、CaCl2 0.02g/L、FeSO4·7H2O 1mg/L、CuSO4·5H2O 0.02mg/L、CoCl2·6H2O 0.02mg/L、MnSO4·4H2O 0.1mg/L、Na2MoO4·2H2O0.02mg/L、H3BO3 0.02mg/L、pH 6-8，溶剂为去离子水。
LB固体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，15-20g/L琼脂，pH自然，溶剂为去离子水。
LB液体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，pH自然，溶剂为去离子水。
实施例1：Acinelobacter nosocomialis FK2的分离、纯化及其鉴定。
1、Acinelobacter nosocomialis FK2的分离及纯化
Acinelobacter nosocomialis FK2是从某城市污水处理厂曝气池中活性污泥里驯化、分离得到的一株革兰氏阴性菌。活性污泥中混合液悬浮固体浓度MLSS 2300mg/L,混合液挥发性悬浮固体浓度MLVSS 1820mg/L。筛选的具体步骤如下：
在300mL摇瓶中加入50mL无机盐培养液，并加入10mL活性污泥和终浓度500mg/L的乙酸异戊酯进行富集培养，待乙酸异戊酯浓度为初始的50％时从中取出5mL富集液于50mL新鲜无机盐培养液中，加入相同量的乙酸异戊酯，重复上述富集过程5次后，将最后一次富集液梯度稀释涂布LB固体培养基，选择单菌落，画线LB平板纯化(图1)。将得到的单菌落接种至无机盐培养基，并加入终浓度500mg/L的乙酸异戊酯作为唯一的碳源及能源进行验证(设置空白对照，一个只加乙酸异戊酯作为碳源及能源，一个不加乙酸异戊酯，进行对照。加有乙酸异戊酯的培养基上，微生物长势良好，不加有机物的，无微生物生长)，筛选得到菌株FK2，通过透射电子显微镜确定其形态(图2)。
2、菌株FK2的鉴定
(1)菌株FK2特征：菌落浅黄色，边缘整齐，不透光，光滑湿润，易挑取。透射电镜下观察该菌体的形态为球杆菌，无鞭毛，大小为966×1383nm，革兰氏染色阴性。
(2)菌株对梅里埃GN卡上48种碳源的利用能力。
利用梅里埃全自动鉴定仪考察菌株对48中不同碳源的代谢情况(委托给浙江天科高新技术发展有限公司(原浙江省微生物研究所))。鉴定结果如表1所示。经梅里埃全自动鉴定仪VITEK生化反应，菌株FK2可较强利用11种碳源，对其他37种碳源不能利用。
表1菌株FK2梅里埃全自动鉴定仪VITEK生化反应结果(GN卡)
Figure BDA0002109626180000041
Figure BDA0002109626180000051
表注：+，阳性反应；-：阴性反应
(3)通过16S rRNA序列分析和生理生化实验鉴定，确定该菌株为Acinelobacternosocomialis。具体步骤如下：
采用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取和纯化菌株FK2的DNA，4℃保存。用细菌的通用引物对纯化的DNA进行PCR扩增，引物分别为7F(CAGAGTTTGATCCTGGCT)和1540R(AGGAGGTGATCCAGCCGCA)，PCR反应程序设定为94℃预变性4min，然后94℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，循环30个周期，最后72℃修复延伸10min。将PCR产物纯化回收后进行测序(上海美吉生物医药科技有限公司)，16S rRNA(SEQ ID NO.1所示)测序结果上传至NCBI，获得登录号MK346044，同时将该序列同NCBI数据库中的基因序列进行Blast对比。发现其属于Acinetobacter属，与Acinetobacter nosocomialis strain RUH 2376、Acinetobacter nosocomialis strain2012C01-137和Acinetobacter nosocomialisstrain 2014N23-120具有99％的同源性。从结果中选取9株Acinetobacter具有代表性的菌株，以16S rRNA基因序列同源性为基础，采用MEGA6.0软件构建系统发育树，如图3。通过遗传距离及16S rRNA序列对比，鉴定为菌株FK2为Acinelobacter nosocomialis，命名为医院不动杆菌(Acinelobacter nosocomialis)FK2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年03月01日，保藏编号：CCTCC NO:M2019117，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
实施例2医院不动杆菌FK2静息细胞的获得
(1)斜面培养：
将医院不动杆菌FK2接种至LB液体培养基中，在30℃，160rpm下培养2d，再将活化的细菌画线于固体LB平板30℃培养箱培养，取单菌落继续平板画线以检测细菌的纯度，进行LB试管斜面常规(4℃)保存。
(2)扩大培养
将步骤(1)斜面菌体接种至LB液体培养基中，在30℃，160rpm下培养12h，获得扩大培养液，离心，收集湿菌体，无机盐培养液洗涤，获得医院不动杆菌FK2静息细胞。
实施例3：医院不动杆菌FK2对不同浓度乙酸异戊酯的降解性能检测
将无机盐培养液分装于体积均为330mL的摇瓶中，每瓶50mL，110℃灭菌40min。灭菌结束后室温放置2d，确定无杂菌生长。加入终浓度达到30mg/L(以细胞干重记)实施例2方法获得的医院不动杆菌FK2静息细胞，然后加入乙酸异戊酯作为唯一碳源使其终浓度分别为100、200、400、600、800、1000、1200、1400mg/L，摇瓶用聚四氟乙烯瓶塞密封后，30℃，160rpm摇床培养，并做不加细菌的空白对照。定时测定摇瓶中残留的乙酸异戊酯浓度，绘制菌株6h和12h对于不同初始浓度乙酸异戊酯的去除率曲线，结果见图4所示。结果表明，当乙酸异戊酯浓度低于1000mg/L时，菌株FK2可以快速的降解所添加的底物。
实施例4：医院不动杆菌FK2降解底物的广谱性
在实际应用中，不仅仅存在乙酸异戊酯这一种有机污染物，工业废气中一般包含多种挥发性有机废气(如乙酸丁酯、乙酸乙酯、苯系物等)。因此，研究医院不动杆菌FK2对其他底物的降解效果很有必要。
接种终浓度达到30mg/L(以细胞干重计)实施例2方法获得的医院不动杆菌FK2静息细胞至无机盐培养液中，加入终浓度均为100mg/L的乙酸丁酯、乙酸乙酯、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯，在pH值为7.0，温度30℃，160rpm的条件下培养，医院不动杆菌FK2不同底物的降解效果如表2所示。
表2医院不动杆菌FK2对不同碳源的降解效果
Figure BDA0002109626180000061
Figure BDA0002109626180000071
如表2所示：菌株FK2只能少部分降解苯、甲苯、乙苯、对二甲苯等苯系物；乙酸丁酯、乙酸乙酯和异丙醇溶于水，溶解度相对较大，所以其去除率要高很多。进一步表明，细菌FK2能不同程度的降解苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯及异丙醇等类的碳氢化合物。
虽然本发明已以实施例公开如上，但其并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更改与润饰，均应属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 浙江工业大学
<120> 医院不动杆菌FK2及其在降解有机污染物中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 1138
<212> DNA
<213> 医院不动杆菌(Acinetobacter nosocomialis)
<400> 2
cagcgggcag cacacagcaa gcgagcggag agaaggagcg cacgaaccag cggcggacgg 60
ggagaagcag gaacgccaag gggggacaac accgaaaggg agcaaaccgc aacgccacgg 120
gagaaagcag gggaccggac cgcgcaaaga gagccaagcg gaagcagggg gggaaaggcc 180
accaaggcga cgacgagcgg gcgagaggag accgccacac gggacgagac acggcccaga 240
cccacgggag gcagcagggg gaaaggacaa gggcgcaagc cgaccagcca gccgcgggga 300
agaaggccag ggaaagcaca agcgaggagg aggcacagaa aaccagagaa gggacgaccg 360
cagaaaagca ccggcaaccg gccagcagcc gcggaaacag aggggcaagc gaacggaacg 420
ggcgaaagcg cgcgaggcgg caaaagcaaa ggaaaccccg agcaacggga agcacgaacg 480
gagcagaggg ggagaggagg agaaccaggg agcgggaaag cgagagacgg aggaaaccga 540
ggcgaaggca gccacggcca acacgacgcg agggcgaaag caggggagca aacaggaaga 600
acccggagcc agccgaaacg agcacagccg ggggccgagg cagggcgcag caacgcgaaa 660
gagaccgccg gggagacggc gcaagacaaa accaaagaag acgggggccc gcacaagcgg 720
ggagcaggga acgagcaacg cgaagaacca ccggccgaca agaagaaccc agagaggagg 780
gcccgggaac acaacagggc gcaggcgcgc agccggcgga gaggggaagc ccgcaacgag 840
cgcaaccccc agccagcgag aagcgggaac aaggaacgcc aggacaaacg gaggaaggcg 900
gggacgacgc aagcacaggc ccacggccag ggcacacacg gcacaaggcg gacaaagggg 960
cacacagcga ggagcaacca aaaagccgac gagccggagg agcgcaaccg acccagaagc 1020
ggaacgcaga acgcggacag aagccgcggg aaacgcccgg gccgacacac cgcccgcaca 1080
ccagggaggg caccagaaga gcagccaacg caaagagggc ggaccacggg gccgagcg 1138

Claims (7)

1.医院不动杆菌(Acinelobacter nosocomialis)FK2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年03月01日，保藏编号：CCTCC NO:M2019117，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
2.一种权利要求1所述医院不动杆菌FK2在降解有机污染物中的应用，其特征在于所述有机污染物为乙酸丁酯、乙酸乙酯、异丙醇、苯、甲苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯或邻二甲苯。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用是：将医院不动杆菌FK2经扩大培养获得的静息细胞加入pH＝6-8、含有机污染物的无机盐培养液中，在25-35℃、160rpm条件下进行培养，实现有机污染物的降解。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述无机盐培养液中，静息细胞加入量以菌体干重计为30mg/L。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述无机盐培养液中有机污染物的初始浓度为100-1500mg/L。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述无机盐培养液组成为：KH2PO4 1g/L、ZnSO4·7H2O 0.1mg/L、Na2HPO4 4.5g/L、(NH4)2SO40.5 g/L、FeSO4·7H2O 1mg/L、MgSO40.1g/L、CaCl2 0.02g/L、FeSO4·7H2O 1mg/L、CuSO4·5H2O 0.02mg/L、CoCl2·6H2O 0.02mg/L、MnSO4·4H2O 0.1mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.02mg/L、H3BO3 0.02mg/L、pH 6-8，溶剂为去离子水。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述医院不动杆菌FK2静息细胞按如下步骤制备：
(1)斜面培养：将医院不动杆菌FK2接种至LB平板，30℃培养，获得斜面菌体；LB固体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，15-20g/L琼脂，pH自然，溶剂为去离子水；
(2)扩大培养：将步骤(1)斜面菌体接种至LB液体培养基中，在30℃，160rpm下培养12h，获得扩大培养液，离心，收集湿菌体，无机盐培养液洗涤，获得医院不动杆菌静息细胞；LB液体培养基组成：5g/L酵母膏，10g/L NaCl，10g/L蛋白胨，pH自然，溶剂为去离子水。
CN201910566284.3A 2019-06-27 2019-06-27 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用 Active CN110283745B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910566284.3A CN110283745B (zh) 2019-06-27 2019-06-27 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910566284.3A CN110283745B (zh) 2019-06-27 2019-06-27 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110283745A CN110283745A (zh) 2019-09-27
CN110283745B true CN110283745B (zh) 2021-05-11

Family

ID=68007753

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910566284.3A Active CN110283745B (zh) 2019-06-27 2019-06-27 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110283745B (zh)

Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101035902A (zh) * 2004-08-06 2007-09-12 考格尼斯知识产权管理有限责任公司 脂肪醇作为可塑剂在用于改善phb及其共聚物的物理－机械性质和加工性中的用途
CN101360814A (zh) * 2005-12-30 2009-02-04 阿彻-丹尼尔斯-米德兰公司 含乳酸异戊酯的环境友好溶剂
CN102477403A (zh) * 2010-11-23 2012-05-30 中国科学院生态环境研究中心 一株邻苯二甲酸酯类化合物降解菌及其菌剂的生产方法
WO2014138823A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Griffith University Compounds and uses thereof in the treatment/prevention of gram-negative bacterial infections
WO2014157176A1 (ja) * 2013-03-25 2014-10-02 国立大学法人名古屋大学 アシネトバクター属菌の遺伝型タイピング法及びこれに用いるプライマーセット
CN104450942A (zh) * 2014-12-29 2015-03-25 中国人民解放军疾病预防控制所 用于检测鲍曼不动杆菌的lamp试剂盒及其专用引物
CA2926984A1 (en) * 2013-10-11 2015-04-16 Servicio Galego de Saude (Sergas) Live attenuated vaccines
CN104630112A (zh) * 2015-02-10 2015-05-20 绍兴柯桥江滨水处理有限公司 一株不动杆菌及其制备方法、应用
EP2944696A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-18 Evonik Degussa GmbH Method of producing organic compounds
CN105950712A (zh) * 2016-04-26 2016-09-21 北京燕京啤酒股份有限公司 鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程微生物的系统及其应用
CN106867935A (zh) * 2017-03-03 2017-06-20 浙江省农业科学院 白萝卜鲜酿酵素及其制备和发酵菌株
WO2017132627A2 (en) * 2016-01-29 2017-08-03 Achaogen, Inc. Screening methods for identifying antibodies that bind cell surface epitopes
EP3212801A1 (fr) * 2014-10-27 2017-09-06 Fondation Méditerranée Infection Procédé d'identification d'un microbe dans un prélèvement clinique et banque de spectres de masse réalisés par spectrométrie de masse de type maldi-tof
CN107177532A (zh) * 2017-06-15 2017-09-19 江苏南资环保股份有限公司 一种有机氮类污染物降解菌剂及其应用
WO2017223349A1 (en) * 2016-06-23 2017-12-28 Achaogen, Inc. Antibacterial agents
CN107998149A (zh) * 2017-12-11 2018-05-08 浙江大学 NK细胞外泌体及相关miRNA在抗菌和抗肿瘤中的应用
CN108034626A (zh) * 2018-02-06 2018-05-15 北京大学 一种含油污泥中石油烃类的降解菌株jn1及其应用
WO2018140827A1 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 Achaogen, Inc. Reporter microorganisms and uses thereof
CN108410756A (zh) * 2018-02-11 2018-08-17 浙江工业大学 嗜吡啶红球菌及其在降解有机污染物中的应用
WO2019051278A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University NUCLEASE SYSTEMS FOR GENETIC ENGINEERING

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040199941A1 (en) * 2003-03-24 2004-10-07 Rice University Increased bacterial CoA and acetyl-CoA pools
US7569380B2 (en) * 2004-12-22 2009-08-04 Rice University Simultaneous anaerobic production of isoamyl acetate and succinic acid
EP2942389A1 (en) * 2014-05-05 2015-11-11 Servicio Andaluz De Salud Vaccine against Acinetobacter baumannii based on lipopolysaccharide-deficient cellular components
KR101790296B1 (ko) * 2015-03-26 2017-10-26 한국생명공학연구원 네트롭신을 유효성분으로 포함하는 그람음성 세균에 대한 폴리믹신의 항균 활성을 증가시키는 조성물

Patent Citations (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101035902A (zh) * 2004-08-06 2007-09-12 考格尼斯知识产权管理有限责任公司 脂肪醇作为可塑剂在用于改善phb及其共聚物的物理－机械性质和加工性中的用途
CN101360814A (zh) * 2005-12-30 2009-02-04 阿彻-丹尼尔斯-米德兰公司 含乳酸异戊酯的环境友好溶剂
CN102477403A (zh) * 2010-11-23 2012-05-30 中国科学院生态环境研究中心 一株邻苯二甲酸酯类化合物降解菌及其菌剂的生产方法
WO2014138823A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Griffith University Compounds and uses thereof in the treatment/prevention of gram-negative bacterial infections
WO2014157176A1 (ja) * 2013-03-25 2014-10-02 国立大学法人名古屋大学 アシネトバクター属菌の遺伝型タイピング法及びこれに用いるプライマーセット
JP2014207895A (ja) * 2013-03-25 2014-11-06 愛知県 アシネトバクター属菌の遺伝型タイピング法及びこれに用いるプライマーセット
CN105899228A (zh) * 2013-10-11 2016-08-24 加利西亚健康服务(Sergas) 减毒活疫苗
CA2926984A1 (en) * 2013-10-11 2015-04-16 Servicio Galego de Saude (Sergas) Live attenuated vaccines
EP2944696A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-18 Evonik Degussa GmbH Method of producing organic compounds
EP3212801A1 (fr) * 2014-10-27 2017-09-06 Fondation Méditerranée Infection Procédé d'identification d'un microbe dans un prélèvement clinique et banque de spectres de masse réalisés par spectrométrie de masse de type maldi-tof
CN104450942A (zh) * 2014-12-29 2015-03-25 中国人民解放军疾病预防控制所 用于检测鲍曼不动杆菌的lamp试剂盒及其专用引物
CN104630112A (zh) * 2015-02-10 2015-05-20 绍兴柯桥江滨水处理有限公司 一株不动杆菌及其制备方法、应用
CN108884152A (zh) * 2016-01-29 2018-11-23 尔察祯有限公司 鉴定结合细胞表面表位的抗体的筛选方法
WO2017132627A2 (en) * 2016-01-29 2017-08-03 Achaogen, Inc. Screening methods for identifying antibodies that bind cell surface epitopes
CN105950712A (zh) * 2016-04-26 2016-09-21 北京燕京啤酒股份有限公司 鉴定或辅助鉴定啤酒生产过程微生物的系统及其应用
WO2017223349A1 (en) * 2016-06-23 2017-12-28 Achaogen, Inc. Antibacterial agents
WO2018140827A1 (en) * 2017-01-27 2018-08-02 Achaogen, Inc. Reporter microorganisms and uses thereof
CN106867935A (zh) * 2017-03-03 2017-06-20 浙江省农业科学院 白萝卜鲜酿酵素及其制备和发酵菌株
CN107177532A (zh) * 2017-06-15 2017-09-19 江苏南资环保股份有限公司 一种有机氮类污染物降解菌剂及其应用
WO2019051278A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University NUCLEASE SYSTEMS FOR GENETIC ENGINEERING
CN107998149A (zh) * 2017-12-11 2018-05-08 浙江大学 NK细胞外泌体及相关miRNA在抗菌和抗肿瘤中的应用
CN108034626A (zh) * 2018-02-06 2018-05-15 北京大学 一种含油污泥中石油烃类的降解菌株jn1及其应用
CN108410756A (zh) * 2018-02-11 2018-08-17 浙江工业大学 嗜吡啶红球菌及其在降解有机污染物中的应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
2014 － 2016 年耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌实时监测分析;熊自超 等;《中国消毒学杂志》;20180515;第35卷(第5期);第351-354页 *
Characterization of Oxacillinase and Metallo-β-Lactamas Genes and Molecular Typing of Clinical Isolates of Acinetobacter baumannii in Ahvaz, South-West of Iran;Saeed Shoja 等;《Jundishapur J Microbiol》;20160213;第9卷(第5期);e32388 *
Clinical Outcomes of Hospital-Acquired Infection with Acinetobacter nosocomialis and Acinetobacter pittii;Sarunyou Chusri 等;《Antimicrobial Agents and Chemotherapy》;20140512;第58卷(第7期);第4172-4179页 *
Comparison between bacteremia caused by Acinetobacter pittii and Acinetobacter nosocomialis;Yuag-Meng Liu 等;《Journal of Microbiology, Immunology and Infection》;20150130;第62-67页 *
Nosocomial bloodstream infections due to Acinetobacter baumannii, Acinetobacter pittii and Acinetobacter nosocomialis in the United States;Hilmar Wisplinghoff 等;《Journal of Infection》;20111220;第282-290页 *
两株耐辐射戈壁奇异球菌的比较研究;哀梦龙 等;《2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集》;20081107;第371页 *
催化合成乙酸异戊酯反应时间的实验探讨;刘小忠 等;《化工职业技术教育》;20120915;第63-65页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110283745A (zh) 2019-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108410756B (zh) 嗜吡啶红球菌及其在降解有机污染物中的应用
CN108130288B (zh) 赤红球菌及其降解有机污染物的应用
CN109913387B (zh) 降解n-甲基吡咯烷酮的肠杆菌及在废水处理中的应用
CN112410272B (zh) 降解n,n-二甲基甲酰胺的副球菌及在废水处理中的应用
CN108753662B (zh) 一株低温邻苯二甲酸二甲酯高效降解菌及其发酵方法
CN112574916B (zh) N-甲基吡咯烷酮降解菌及在废水处理中的应用
CN115786179A (zh) 降解邻二氯苯的菌株及其应用
Wu et al. Isolation of an aerobic denitrifying bacterial strain from a biofilter for removal of nitrogen oxide
CN109486725B (zh) 一株可降解苯系物和石油烃的菌株及其应用
CN110283745B (zh) 医院不动杆菌fk2及其在降解有机污染物中的应用
CN110591972B (zh) 一种硝化短芽孢杆菌Brevibacillus nitrificans菌株YJ1及其应用
CN114196589B (zh) 食醚红球菌zhc及其在降解丙烯酸甲酯中的应用
Kataoka et al. Enrichment culture and isolation of slow-growing bacteria
CN113801821B (zh) 新奥尔良分枝杆菌wcj及其在降解有机污染物中的应用
CN105316267B (zh) 一种全食副球菌菌株及其应用
CN106591181B (zh) 一种迈索尔节杆菌及其在净化海水养殖含氮废水中的应用
JP2002301494A (ja) 活性汚泥及び排水処理方法
CN107586751A (zh) 一株二恶烷降解菌d2及其应用
CN110982728B (zh) 一种降解氯苯类挥发性有机物的菌株及其培养方法和应用
CN113604408B (zh) 莫德斯托斯不动杆菌hyy-1及其在降解有机污染物中的应用
CN113699074B (zh) 海藻微杆菌hyy-2及其降解有机污染物的应用
CN114940957B (zh) 一株具有兼性反硝化同步脱氮除磷性能的泛养副球菌
CN103849589A (zh) 一株二氯喹啉酸高效降解菌及其用途和使用方法
CN105039201B (zh) 一种降解菲的Terrimonas菌及其应用
CN110964660B (zh) 一种用于降解氯苯类污染物的节杆菌及其培养方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant