CN110283235A - PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可以鉴别PCV3 Cap单克隆抗体的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用，包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：PCV3 Cap 47‑62:NVISVGTPQNNKPWHA；PCV3 Cap 136‑149:TSKKKHSRYFTPKP；旨在对PCV3 Cap蛋白抗原表位研究提供可靠依据。本发明采用ELISA的方法，利用PCV3 Cap单克隆抗体筛选PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位，含所述短肽的氨基酸序列。将所述的PCV3 Cap蛋白抗原表位在制备预防和/或治疗PCV3抗体中应用。本发明优点在于筛选出两条PCV3 Cap蛋白新抗原表位的多肽序列，完成了表位的鉴定，为PCV3表位疫苗和相关诊断试剂的研究打下基础，对PCV3检测和鉴别诊断提供有效的检测手段。

Description

PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用
技术领域
本发明属于细胞免疫学技术领域，具体涉及一种可以鉴别PCV3 Cap单克隆抗体的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用。
背景技术
猪圆环病毒(Porcine circoviruses, PCV)是目前对世界养猪业危害最为严重的疾病之一。目前，该病毒包括三种不同的类型：猪圆环病毒1型(Porcine circoviruses 1,PCV1)、猪圆环病毒2型(Porcine circoviruses 2, PCV2)和猪圆环病毒3型(Porcinecircoviruses 3, PCV3)。其中PCV1被证实无致病性；PCV2具有较强的致病性，常引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）；PCV3作为一种新型圆环病毒自2016年在美国首次报道以来，先后在中国、韩国、泰国等亚洲地区及波兰、意大利、德国等欧洲地区多个国家均有报道，该病原已在世界范围内流行，并且常与 PCV2 混合感染，加重了疾病的症状，增加了疫病的防控难度，加大了养猪业的经济损失。
抗原表位（epitope）是病毒结构蛋白的重要元件，其蛋白分子量较小且常被机体的淋巴细胞所识别，因此被称为抗原决定簇，通常由5～17个氨基酸残基组成，在诱导和细胞介导的病毒免疫反应中发挥重要作用。根据其受体不同，表位分为B细胞表位和T细胞表位；其结构不同，表位又分为线性表位和构象表位。抗原表位的研究对于完善病毒蛋白结构及病毒与宿主作用关系的研究意义重大，同时对病毒的检测，表位疫苗的制备提供材料基础应用价值巨大。
由于PCV3属于最近新发现的病毒株，临床上还没有效的防控手段。病毒在进化过程中，其本身为了逃逸机体的免疫监视，势必会进行相关氨基酸位点的突变，或者发生基因片段的重组，从而使得其在宿主内增殖。不论是关键氨基酸位点的突变还是基因片段的重组，其本质是病毒抗原表位的变异，其抗原表位不仅可以制备相应的检测试剂，还可以制备相关的亚单位疫苗，甚至根据其抗原表位制备相应的治疗抗体。
近年的研究表明，根据病毒的表位从而研发相应的诊断试剂，治疗抗体，新型的亚单位疫苗是可行的。然而如何获得合适的疫苗靶抗原及其表位，研制新型PCV3表位疫苗或药物是如今本领域技术人员所努力解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的是提供PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽序列的筛选方法，通过生物信息学技术和免疫学方法预测及鉴定出PCV3 Cap蛋白的抗原表位，同时公开PCV3Cap蛋白抗原表位的用途，以解决对PCV3 Cap蛋白细胞表位研究不足的技术问题。
本发明PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的多肽序列，包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62：NVISVGTPQNNKPWHA；
PCV3 Cap 136-149：TSKKKHSRYFTPKP；
上述氨基酸的核苷酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62： aacgtcattt ccgttggaac ccctcagaat aacaagccct ggcacgcc 48；
PCV3 Cap 136-149： acttctaaaa aaaaacacag ccgttacttc acccccaaac ca 42。
本发明PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的筛选方法，包括如下步骤：
（1）根据NCBI（Genbank 号：MH107162.1）上边公布的已知PCV3 Cap蛋白的氨基酸序列，比对分析PCV2与PCV3结构蛋白的主要差别，观察其氨基酸的保守性；
（2）通过DNAstar 7.0软件包中Protean模块Gamier-Robson法和Chou-Fasman法及在线网站SOPMA法对PCV3 Cap蛋白二级结构特征进行了预测。同时采用Kyte-Doolitt法、Emini法和Jameson-Wolf法对蛋白质骨架的亲水性区域、表面可及性、柔韧性和高抗原指数区域进行预测；
（3）借助抗原表位预测在线网站http://tools.iedb.org/bcell对 PCV3 Cap 蛋白B细胞线性抗原表位进行预测，同时使用 https://webs.iiitd.edu.in/raghava/abcpred/ABC_submission.html网站对 PCV3 Cap 的抗原表位进行预测；
（4）通过对DNAstar软件预测结果和在线网站预测的表位信息序列综合分析，为了最大限度地覆盖PCV3帽的抗原表位信息，采用随机重叠方式，少许多肽序列相互重叠，最终获得12 个表位多肽信息，交由吉尔生化上海有限公司合成，多肽合成纯度大于 95%并用 BSA偶联；
（5）通过使用PCV3 Cap 单克隆抗体与抗原表位多肽进行结合反应，最终筛选出于单抗特异性结合的短肽，获得两个PCV3 Cap 的B细胞线性抗原表位，所获得的表位为含Alpha、Beta、Turn、coil结构中的至少一种，富含正电荷，亲 水性强，表面可及性强，抗原指数高；
两条多肽的其氨基酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62：NVISVGTPQNNKPWHA；
PCV3 Cap 136-149：TSKKKHSRYFTPKP。
本发明通过ELISA的方法，利用PCV3 Cap单克隆抗体筛选出与抗体特异性结合的短肽，获得两个PCV3 Cap 的B细胞线性抗原表位。筛选出的短肽，可以为将来制备PCV3的表位疫苗、新型诊断试剂及治疗PCV3感染的特异性抗体的研究等提供可靠依据。
本发明的优点在于，筛选出了两条PCV3 Cap B细胞线性抗原表位多肽序列，多肽抗原性良好，抗原表位经PCV3 Cap单克隆抗体鉴定为PCV3 Cap所特有，且序列保守，有助于完善Cap蛋白的抗原表位图谱和蛋白结构的解析。应用该多肽序列可以有效地鉴别诊断动物是否感染PCV3，为以后防治PCV3 提供有效的检测手段，为PCV3表位疫苗的研究打下良好的技术基础，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为实施例PCV3 Cap蛋白二级结构预测图；
图2为实施例PCV3 Cap蛋白亲水性区域、表面可及性、柔韧性和高抗原指数区域预测图；
图3为实施例PCV3 Cap抗原表位的生物信息学预测结果图；
图4为实施例PCV3 Cap单克隆抗体分别与12条抗原表位多肽的间接ELISA结果图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例
PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的多肽序列的筛选方法，包括如下步骤：
（1）根据NCBI上边公布的已知PCV3 Cap蛋白的氨基酸序列，比对分析PCV2与PCV3结构蛋白的主要差别，观察其氨基酸的保守性；
（2）通过DNAstar 7.0软件包中Protean模块Gamier-Robson法和Chou-Fasman法及在线网站SOPMA法对PCV3 Cap蛋白二级结构特征进行了预测（预测结果如图1所示）；
根据Gamier-Robson方法预测，PCV3 Cap有17个β折叠区（59.8%）、19个β转角区（16.8%）和18个不规则卷曲区（20.6%）；根据Chou-Fasman方法预测，PCV3 Cap有3个α-螺旋区（12.1%）、8个β折叠区（41.1%）和14个β转角区（31.8%）；
根据SOPMA方法预测，不规则卷曲区（51.4%）、β折叠（27.57%）和α螺旋区（17.29%）。同时采用Kyte-Doolitt法、Emini法和Jameson-Wolf法对Cap蛋白质骨架的亲水性区域、表面可及性、柔韧性和高抗原指数区域进行预测（预测结果如图2所示）；
对Cap蛋白柔韧性的分析表明，在肽链的aa9-21、25-27、32-37、39-44、52-59、95-102、115-120、122-133、135-142、146-150、153-162、168-172和192-204段中蛋白质骨架的韧性很强，推测该区域容易与抗体结合；
对Cap蛋白的表面暴露概率的分析表明，aa6-25、31-44、53-61、67-72、79-84、96-101、116-146、155-159、167-179和191-196残基是Cap蛋白N末端的主要区域，氨基酸在该区域的可及性大于1，该区域易与抗体结合，形成B细胞表位的概率较高；
对Cap蛋白的亲水性分析表明，肽链的aa1-31、33-46、53-78、95-104、114-147、155-160、168-181和191-209区域通常位于蛋白质表面，容易形成表位；
分析Cap的抗原指数：以大于0的抗原指数为标准，分析表明抗原高指数区域为aa5-45、52-61、68-74、95-103、109-113、119-151、155-160、168-178和191-208；
（3）借助抗原表位预测在线网站http://tools.iedb.org/bcell对 PCV3 Cap 蛋白B细胞线性抗原表位进行预测（预测结果如图3所示）；
使用软件对某一种蛋白进行预测，由于算法的不同，可能会漏测必要的抗原表位；
同时使用 https://webs.iiitd.edu.in/raghava/abcpred/ABC_submission.html网站对 PCV3 Cap 的抗原表位进行预测（预测结果如表1所示）；该方法不同于其他软件预测方法，使用该软件可以将一段蛋白的序列进行打断，计算每一种多肽的亲水性、可及性等；
表1: https://webs.iiitd.edu.in/raghava/abcpred/ABC_submission.html 网站对PCV3 Cap B细胞抗原表位进行预测
（4）通过对DNAstar软件预测结果和在线网站预测的表位信息序列综合分析，为了最大限度地覆盖PCV3 Cap的抗原表位信息，采用随机重叠方式，少许多肽序列相互重叠，最终获得 12 个表位多肽信息（如表2所示），交由吉尔生化上海有限公司合成，多肽合成纯度大于 95%并用 BSA偶联；
表 2: PCV3 Cap B细胞线性抗原表位信息
（5）PCV3 Cap单克隆抗体的制备
免疫原的准备：PCV3 Cap蛋白的核苷酸序列在Genebank上的登录号为：MH107162.1。构建表达Cap蛋白的pET-32a-Cap重组载体，将重组表达载体pET-32a-Cap转入E .coli BL21（DE3）感受态细胞，按照1%的比例将鉴定为阳性表达菌液加入到 100 mL 含有 100 μg/mL氨苄青霉素 LB 液体培养基，置于 37℃的摇床内，220 rpm，培养 4 h后使用 NanoDrop™3300 分光光度计检测表达菌液浓度，当 OD600 达到 0.6 时，此时加入终浓度为 1 mmol/L 的 IPTG 进行诱导表达 4 h，高速离心收集菌体并进行超声波破碎及His 标签纯化试剂盒纯化；纯化后的PCV3 Cap蛋白经SDS-PAGE电泳检测，于-80℃保存备用。
动物免疫：取 5 只 6周龄 BALB/c 雌性小鼠作为免疫动物，免疫前每只小鼠通过尾静脉采血。 将 50 μg 的 PCV3 Cap 纯化蛋白与弗式完全佐剂乳化后通过腹腔注射的方式免疫小鼠 （一只小鼠的剂量），免疫 2 周后通过尾静脉采血以及进行第 2 次免疫。第 2次免疫与第 1 次免疫使用的蛋白量相同，佐剂换为弗式不完全佐剂进行乳化，同样于免疫2 周后采血。第 3、4 次免疫与第 2 次免疫剂量、所使用佐剂相同。最后一次免疫 2 周后采血进行 ELISA 检测，待抗体效价符合要求后进行细胞融合试验。
细胞融合：最后一次免疫 5 天后，用 75 cm2的细胞培养瓶培养SP2/0 骨髓瘤细胞至贴壁；收集血清效价大于1：10000小鼠的脾脏获取脾细胞。将瘤细胞与脾细胞混合，混匀细胞后，800 rpm 离心 10 min。小心弃去上清液，将离心管底部的细胞轻轻拍散，之后在30 s 内加入 1 mL 的 PEG 溶液，边加边转动离心管，尽量将 PEG 溶液加到细胞处，室温静置 90 s后加入30mL DMEM培养液。融合完成后，800 rpm 离心 5 min 后小心弃去细胞上清液，之后使用 30 mL 的 HAT 培养基吹散细胞，将细胞液加入到铺有饲养层细胞的 96孔板中，每孔加 100 μL 的细胞液，将 96 孔细胞培养板置于 37℃，5%的二氧化碳培养箱中培养。
杂交瘤细胞筛选：以PCV3 Cap蛋白作为包被抗原，采用间接 ELISA 的方法筛选阳性杂交瘤细胞，通过有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行单克隆化，培养 10 天后筛选获得杂交瘤细胞单克隆，最终获得了4株分泌抗Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株（C10B,B2D, A4C,D2C）。
单抗腹水制备：取 6 周龄的 BALB/c 雌性小鼠，每只小鼠通过腹腔注射 0.5 mL的石蜡。将单克隆杂交瘤细胞通过腹腔注射的方式注射到小鼠体内，每天观察小鼠的状态，待小鼠腹部隆起用注射器收集腹水，4℃，800 rpm离心 10 min收集中间腹水层，-80℃保存。
腹水效价检测：将所得腹水按照1:1000, 1:2000, 1:4000, 1;8000; 1:16000,1:32000, 1:64000比列稀释，以Cap蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA法对腹水测OD值，采用过滤纯化腹水获得单克隆抗体。
（6）通过使用PCV3 Cap 单克隆抗体与抗原表位多肽进行结合反应，最终筛选出与单抗特异性结合的短肽，获得两个PCV3 Cap 的B细胞线性抗原表位，
鉴别PCV3 Cap 单克隆抗体的间接ELISA方法如下：
包被：将12条多肽使用包被缓冲液稀释成 5 μg/mL作为抗原备用，按照每孔 50 µL 体积加入到 ELISA 板中，放置 4℃冰箱孵育过夜；
封闭：次日取出 ELISA 板，将洗板机的程序设置为每孔 200 µL 洗涤液，洗涤 6 遍，洗涤完后拍干，然后每孔添加 200 µL 的 5%脱脂奶粉封闭液（5 g 脱脂奶粉，100 mLPBST），置于 37℃温箱封闭 2 h；
一抗孵育：封闭结束后，使用洗板机洗涤 3 遍，用 PBST 按照 1:1000 的比例分别稀释PCV3 Cap 单克隆抗体： C10B、 B2D、A4C、D2C腹水，每孔添加 100 µL 的稀释好的腹水，设SPF 级小鼠阴性血清为阴性对照，37℃温箱孵育 2 h。
二抗孵育：一抗孵育结束后，使用洗板机洗涤 6 遍，用 PBST 按照 1:8000 的比例稀释 HRP 标记羊抗鼠抗体作为二抗，每孔添加 100 µL 的二抗，37℃温箱孵育 0.5 h。
显色液显色：二抗孵育结束后使用洗板机洗涤 6 遍，按照 TMB 显色试剂盒的说明配置显色液，每孔添加 100 µL 的 TMB 显色液，37℃避光显色 15 min。
读数：显色完成后，每孔添加 50 µL 2mol/L 浓硫酸终止液（1.11mL浓硫酸加至10mL PBST），使用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度（OD 值）。
ELISA反应结果如图4所示，结果显示4个单克隆抗体中的2个可以特异性识别出12个多肽中的2个，单克隆抗体C10B可以与由氨基酸残基Cap 47-62组成的抗原表位多肽反应，其OD450读数为2.68；单克隆抗体B2D可以与由氨基酸残基Cap 136-149组成的抗原表位多肽反应，其OD450读数为2.91。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用
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<210> 13
<211> 16
<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 13
Gly Gln Ser Leu Phe Phe Phe Ser Arg Pro Thr Pro Trp Leu Asn Thr
1 5 10 15
<210> 14
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 14
Leu Asn Thr Tyr Asp Pro Thr Val Gln Trp Gly Ala Leu Leu Trp Ser
1 5 10 15
<210> 15
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 15
Ala Leu Leu Trp Ser Ile Tyr Val Pro Glu Lys Thr Gly Met Thr Asp
1 5 10 15
<210> 16
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Gly Met Thr Asp Phe Tyr Gly Thr Lys Glu Val Trp Ile Arg Tyr Lys
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<212> PRT
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Asn Asn Lys Pro Trp His Ala Asn His Phe Ile Thr Arg Leu Asn Glu
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Thr Trp Leu Gln Asp Asp Pro Tyr Ala Glu Ser Ser Thr Arg Lys Val
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Thr Phe Glu Tyr Tyr Lys Ile Leu Lys Met Lys Val Thr Leu Ser Pro
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 20
Ser Arg Pro Thr Pro Trp Leu Asn Thr Tyr Asp Pro Thr Val Gln Trp
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Leu Asn Thr Tyr Asp Pro Thr Val Gln Trp Gly Ala Leu Leu Trp Ser
1 5 10 15
<210> 22
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Gly Gln Ser Leu Phe Phe Phe Ser Arg Pro Thr Pro Trp Leu Asn Thr
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Ala Gly Thr Tyr Tyr Thr Lys Lys Tyr Ser Thr Met Asn Val Ile Ser
1 5 10 15
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Tyr Val Pro Glu Lys Thr Gly Met Thr Asp Phe Tyr Gly Thr Lys Glu
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Ala Leu Leu Trp Ser Ile Tyr Val Pro Glu Lys Thr Gly Met Thr Asp
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 26
Arg Leu Phe Ile Arg Arg Pro Thr Ala Gly Thr Tyr Tyr Thr Lys Lys
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 27
Tyr Ala Glu Ser Ser Thr Arg Lys Val Met Thr Ser Lys Lys Lys His
1 5 10 15
<210> 28
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 28
His Ser Arg Tyr Phe Thr Pro Lys Pro Leu Leu Ala Gly Thr Thr Ser
1 5 10 15
<210> 29
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 29
Leu Asn Glu Trp Glu Thr Ala Ile Thr Phe Glu Tyr Tyr Lys Ile Leu
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Ala Ile Asp Leu Asp Gly Ala Trp Thr Thr Asn Thr Trp Leu Gln Asp
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Thr Met Phe Gly His Thr Ala Ile Asp Leu Asp Gly Ala Trp Thr Thr
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 32
Ser Pro Ala Gln Gln Thr Lys Thr Met Phe Gly His Thr Ala Ile Asp
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 33
Arg Arg Arg Pro Arg Pro Arg Arg Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Tyr
1 5 10 15
<210> 34
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 34
Asn Val Ile Ser Val Gly Thr Pro Gln Asn Asn Lys Pro Trp His Ala
1 5 10 15
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<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Arg His Arg Ala Ile Phe Arg Arg Arg Pro Arg Pro Arg Arg Arg Arg
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<400> 36
His Arg Arg Arg Tyr Ala Arg Arg Arg Leu Phe Ile Arg Arg Pro Thr
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Gly Met Thr Asp Phe Tyr Gly Thr Lys Glu Val Trp Ile Arg Tyr Lys
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<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
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Arg Lys Val Met Thr Ser Lys Lys Lys His Ser Arg Tyr Phe Thr Pro
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<211> 16
<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 39
Asn His Phe Ile Thr Arg Leu Asn Glu Trp Glu Thr Ala Ile Thr Phe
1 5 10 15
<210> 40
<211> 16
<212> PRT
<213> 猪圆环病毒(Porcine circovirus)
<400> 40
Met Lys Val Thr Leu Ser Pro Val Ile Ser Pro Ala Gln Gln Thr Lys
1 5 10 15

Claims (8)

1.PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的多肽序列，其特征在于：包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62：NVISVGTPQNNKPWHA；
PCV3 Cap 136-149：TSKKKHSRYFTPKP；
上述氨基酸的核苷酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62： aacgtcattt ccgttggaac ccctcagaat aacaagccct ggcacgcc 48；
PCV3 Cap 136-149： acttctaaaa aaaaacacag ccgttacttc acccccaaac ca 42。
2.PCV3 Cap 蛋白B细胞线性抗原表位，其特征在于：具有权利要求1所述多肽的氨基酸序列。
3. 根据权利要求2所述的PCV3 Cap 蛋白B细胞线性抗原表位，其特征在于：所述表位为含Alpha、Beta、Turn、coil结构中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的多肽序列的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）根据NCBI上边公布的已知PCV3 Cap蛋白的氨基酸序列，比对分析PCV2与PCV3结构蛋白的主要差别，观察其氨基酸的保守性；
（2）通过DNAstar 7.0软件包中Protean模块Gamier-Robson法和Chou-Fasman法及在线网站SOPMA法对PCV3 Cap蛋白二级结构特征进行了预测；同时采用Kyte-Doolitt法、Emini法和Jameson-Wolf法对蛋白质骨架的亲水性区域、表面可及性、柔韧性和高抗原指数区域进行预测；
（3）借助抗原表位预测在线网站http://tools.iedb.org/bcel对 PCV3 Cap 蛋白B细胞线性抗原表位进行预测，同时使用 https://webs.iiitd.edu.in/raghava/abcpred/ABC_submission.html网站对 PCV3 Cap 的抗原表位进行预测；
（4）通过对DNAstar软件预测结果和在线网站预测的表位信息序列综合分析，为了最大限度地覆盖PCV3 Cap的抗原表位信息，采用随机重叠方式，少许多肽序列相互重叠，最终获得 12 个表位多肽信息，交由吉尔生化上海有限公司合成，多肽合成纯度大于 95%并用BSA偶联；
（5）使用PCV3 Cap 单克隆抗体与抗原表位多肽进行结合反应，筛选出于单抗特异性结合的短肽，获得两个PCV3 Cap 的B细胞线性抗原表位，所获得的表位为含Alpha、Beta、Turn、coil结构中的至少一种，富含正电荷，亲水性强，表面可及性强，抗原指数高；
两条多肽的氨基酸序列分别为：
PCV3 Cap 47-62：NVISVGTPQNNKPWHA；
PCV3 Cap 136-149：TSKKKHSRYFTPKP。
5.根据权利要求2所述的多肽序列的筛选方法，其特征在于：步骤（4）所述的获得 12个表位多肽信息为：
。
6.权利要求1所述的多肽序列在制备PCV2与PCV3型鉴别诊断试剂盒中的应用。
7.权利要求1所述的多肽序列在制备PCV3亚单位疫苗中的应用。
8.权利要求1所述的多肽序列在制备治疗PCV3抗体中的应用。
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湛洋: "猪圆环病毒３型检测及其Cap结构序列和抗原性预测分析", 《畜牧兽医学报》 *
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