CN110283138B - 化合物、该化合物的制备方法及该化合物的应用和应用该化合物的产品 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种化合物、该化合物的制备方法及该化合物的应用和应用该化合物的产品，涉及小分子化合物技术领域，本发明提供的化合物的结构式如式(Ⅰ)所示。通过实验证明该化合物具有较强抑制组蛋白去乙酰化酶活性的功能。细胞水平上，YF452B在较低浓度可以显著的抑制乳腺癌细胞的生长和运动。通过体外、体内实验研究也证实其具有抗乳腺癌生长转移及复发的活性。本发明提供的包含该化合物的产品也能够起到治疗癌症的作用，且小分子药物的用量少，特异性强，对机体的副作用小，不易产生耐药性。此外，本发明还提供了上述化合物的制备方法，该方法操作简便，普适性广，制备得到的化合物，纯度高、质量好，能够有效抑制癌细胞的生长和转移。

Description

化合物、该化合物的制备方法及该化合物的应用和应用该化 合物的产品

技术领域

本发明涉及小分子化合物技术领域，尤其是涉及一种化合物、该化合物的制备方法及该化合物的应用和应用该化合物的产品。

背景技术

乳腺癌是由于起源于乳腺上皮细胞的恶性肿瘤细胞侵入并破坏乳腺正常组织而形成的病变肿瘤乳腺癌是一种高度异质性的恶性肿瘤，根据基因型分类主要有：LuminalA、LuminalB、HER2以及TNBC型。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，是异质性非常高的肿瘤。根据世界卫生组织(WHO)统计，2012年大约有167万的女性罹患乳腺癌，其发生率在女性癌症中排名第一(占25％)，致死率排名第二，仅次于肺癌。乳腺癌在全球各地都有发生，但在西欧、北美等发达地区发生率较高，远高于世界平均水平。近年来我国乳腺癌的发病率和致死率呈上升趋势，特别是在京沪津等发达城市。随着医学研究的发展，乳腺癌的发病机制被揭示的越来越多，对乳腺癌发病的认识也越来越全面，针对于乳腺癌治疗的药物也越来越多。但是肿瘤转移和术后复发依然是乳腺癌患者的第一杀手，如何有效抑制乳腺癌的转移，提高转移性乳腺癌患者的生存率也是当前的乳腺癌治疗的第一要务。

临床针对乳腺癌的治疗多采用传统化疗药物，但是化疗药物普遍具有较高的毒副作用，且容易产生耐药，使得乳腺癌的后期治疗效果并不理想。所以在基于现有乳腺癌治疗策略的基础上，针对乳腺癌的相关信号传导通路中与乳腺癌发生、发展密切相关的因子，寻找新的分子靶向药物及耐药性研究是彻底治疗乳腺癌的有力措施。

传统意义上，肿瘤被认为是由于基因的缺失或突变导致原癌基因的激活或者抑癌基因功能丧失而引起的。但是近些年研究发现，表观遗传的改变例如DNA的甲基化，组蛋白的乙酰化等等这些现象也在肿瘤中经常见到。通过临床标本分析可观察到一些与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭以及转移相关的基因也经历表观遗传的改变。由于表观遗传的改变是一种可逆的过程，这也使得由于表观遗传改变而引起的肿瘤的治疗成为一种可能。一般情况下，组蛋白的乙酰化有利于相关基因的转录。在细胞核内，组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化是由组蛋白乙酰化转移酶(histone acetyltransferase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC)共同调控。HAT将Acetyl-CoA(乙酰辅酶A)的乙酰基转移到组蛋白氨基末端特定的赖氨酸残基上，HDAC则相反，可以使组蛋白去乙酰化，导致一些特定基因(如抑癌基因)的转录受到抑制，进而导致肿瘤的产生。最近研究表明，组蛋白乙酰化转移酶和组蛋白去乙酰化酶平衡的失调会使部分基因表达受到抑制，最终导致一些异生细胞(肿瘤)的过度生长。在癌细胞中，HDAC的过度表达导致乙酰化作用的降低，使一些肿瘤的抑癌基因的表达受到抑制。乙酰化能够中和组蛋白的正电荷，与它紧密连接的带负电荷的DNA就能够松散下来，使得核小体处于“OPEN”的状态，有利于转录因子顺利转录。但是在肿瘤中HDAC过度表达或过度活化，会使得核小体处于紧密的状态，从而会引起一些抑癌基因的转录受到抑制。因而HDAC的异常活化被认为是肿瘤形成的主要原因之一。HDAC在肿瘤细胞中担负一个很重要的角色，与它相关的功能也很多诸如细胞凋亡、自噬、细胞周期、血管新生的发生发展。研究发现，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)在体外和体内实验中均能引起组蛋白乙酰化水平的提高，提高一些抑癌基因的表达水平，比如p21，一种细胞周期的抑制蛋白。p21表达水平的提高可以引起细胞周期的阻滞，进而抑制肿瘤细胞的增殖，诱导细胞分化或凋亡。越来越多的证据表明在细胞培养模型和肿瘤异种移植动物模型中，HDAC抑制剂(HDACi)均能诱导肿瘤细胞的分化，凋亡以及抑制生长和转移。已经有几十种HDAC抑制剂已经进入临床阶段的研究，并且已取得了可喜的结果。其中有两个HDACi(vorinosta和depsipeptide)已经被批准治疗皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。

根据化学结构的不同，可将HDAC抑制剂划分为四大不同家族。即：短链脂肪酸类、异羟肟酸类、苯甲酰胺类以及环肽类。其中短链脂肪酸类的丁酸钠以及羟戊酸类的曲古抑菌素(TSA)较早之前就被证明具有HDAC抑制剂的活性，但这二者在临床治疗过程中均显示出不同的局限性。异羟肟酸类TSA的结构类似物伏立诺他(SAHA)在肿瘤治疗中显示出较好的抗肿瘤活性。它是首个被美国食品及药品管理局(FDA)批准用于临床治疗的HDAC抑制剂(HDACi)。其他家族的HDAC抑制剂包括LBH589，MS-275，FK-228以及丙戊酸等也被应用于临床前和临床试验中。此外多种异羟肟酸类HDAC抑制剂与其他抗肿瘤药物联合使用治疗实体瘤与血液瘤的治疗方案也正应用于临床实验中。

尽管越来越多的HDAC抑制剂作为治疗乳腺癌的抗肿瘤药物，但是多个临床试验表明现有的HDACi对于实体肿瘤的效果不理想，分析其原因主要有两个方面：1)目前已有的HDACi的活性有待提高；2)对于已有HDACi的具体作用机制还没有研究清楚，造成“药不对症”。

因此，研发出新型的HDAC抑制剂用于乳腺癌的治疗，并探究其具体的作用机制寻找其作用靶点，具有重要的临床应用价值。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种化合物，该化合物是一种组蛋白去乙酰化酶小分子抑制剂，能够有效抑制癌细胞的生长和转移。

本发明的第二个目的在于提供上述化合物的制备方法，该方法操作简便，普适性广，且应用本发明提供的制备方法制备得到的化合物，纯度高、质量好，能够有效抑制癌细胞的生长和转移。

本发明的第三个目的在于提供上述化合物在抑制组蛋白去乙酰化酶活性中的应用；本发明的第四个目的在于提供上述化合物在上调乳腺癌细胞组蛋白H3和/或乳腺癌细胞组蛋白H4的乙酰化水平中的应用；本发明的第五个目的在于提供上述化合物在制备治疗由组蛋白乙酰化失调引起的疾病的产品中的应用；本发明的第六个目的在于提供上述化合物在制备治疗癌症的产品中的应用，以缓解现有技术中存在的组蛋白去乙酰化酶抑制剂在实体肿瘤上抑制效果不理想的技术问题。

本发明的第七个目的在于提供一种治疗癌症的药物，以缓解现有技术当中用于治疗癌症的化疗药物普遍具有较高的毒副作用，且容易产生耐药的技术问题。

本发明提供了一种抑制乳腺癌的化合物，所述化合物的结构式如式(Ⅰ)所示：

R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、甲基、三氟甲基、氟、氯或溴。

本发明还提供了上述化合物的制备方法，所述制备方法包括按照如下式(i)所示的反应进行：

其中，R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、甲基、三氟甲基、氟、氯或溴；

优选地，反应完毕后还依次包括淬灭、萃取、洗涤、干燥和去除溶剂的步骤；

优选地，所述萃取的萃取液为乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚。本发明还提供了上述化合物在制备抑制组蛋白去乙酰化酶活性的药物中的应用。

本发明还提供了上述化合物在制备上调乳腺癌细胞组蛋白H3和/或乳腺癌细胞组蛋白H4的乙酰化水平的药物中的应用。

本发明还提供了上述化合物在制备治疗与组蛋白乙酰化失调相关的疾病的产品中的应用。

进一步地，所述与组蛋白乙酰化失调相关的疾病包括癌症。

进一步地，所述癌症为乳腺癌；

优选地，所述癌症为三阴性乳腺癌。

另外，本发明还提供了一种治疗癌症的药物，包括上述的化合物。

进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体；

优选地，所述药学上可接受的载体包括壳聚糖、胆固醇、脂质体、环糊精、微球或微囊中的一种或多种。

进一步地，所述药物的给药方式包括口服给药或注射给药；

优选地，所述注射给药包括自静脉注射、肌肉注射或乳腺脂肪垫注射中的一种或多种。

本发明提供了一种化合物，该化合物的结构式如式(Ⅰ)所示，并命名为YF452B。通过实验证明该化合物具有较强抑制组蛋白去乙酰化酶活性的功能，对组蛋白去乙酰化酶的抑制能力远远强于母核SAHA。并且，该化合物还能够上调乳腺癌细胞组蛋白H3和乳腺癌细胞组蛋白H4的乙酰化水平。细胞水平上，YF452B在较低浓度可以显著的抑制乳腺癌细胞的生长和运动。通过体外、体内实验研究也证实其具有抗乳腺癌生长转移及复发的活性。因此，本发明提供的包含该化合物的产品，也能够起到有效治疗癌症的作用，同时，小分子药物的用量一般为纳摩尔级别，用量少，特异性强，对机体的副作用小，不易产生耐药性。此外，本发明还提供了上述化合物的制备方法，该方法操作简便，普适性广，应用本发明提供的制备方法制备得到的化合物，纯度高、质量好，能够有效抑制癌细胞的生长和转移。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明提供的化合物的制备过程示意图；

图2A为本发明实施例2提供的通过酶活检测试剂盒探究HeLa细胞中YF452B对HDAC酶活性的抑制效果图；

图2B为本发明实施例2提供的通过酶活检测试剂盒探究MDA-MD231细胞中YF452B对HDAC酶活性的抑制效果图；

图3A为本发明实施例3提供的运用蛋白质免疫印迹法检测4化合物处理对乳腺癌细胞组蛋白H3/H4乙酰化的诱导情况的结果图；

图3B为本发明实施例3提供的运用细胞免疫荧光技术检测了YF452B对细胞内组蛋白H3乙酰化的影响的结果图；

图4A为本发明实施例4提供的采用MTT细胞增殖检测法检测YF452B对乳腺癌细胞增殖影响的结果图；

图4B为本发明实施例4提供的采用Annexinⅴ染色和流式细胞分析法检测了YF452B对乳腺癌细胞凋亡的影响的结果图；

图4C为本发明实施例4提供的采用Annexinⅴ染色和流式细胞分析法检测了YF452B对乳腺癌细胞凋亡的影响结果的柱状示意图；

图5A为本发明实施例5提供的通过细胞划痕实验检测YF452B对乳腺癌细胞迁移的抑制作用的结果图；

图5B为本发明实施例5提供的通过transwell迁移实验检测YF452B对乳腺癌细胞迁移的抑制作用的结果图；

图5C为本发明实施例5提供的通过transwell迁移实验检测梯度浓度的YF452B对乳腺癌细胞迁移的抑制作用结果的柱状示意图；

图6A为本发明实施例6提供的通过克隆形成实验检测YF452B对肿瘤细胞生长的抑制情况的结果图；

图6B为本发明实施例6提供的通过克隆形成实验检测YF452B对肿瘤细胞生长的抑制情况结果的柱状示意图；

图7A为本发明实施例7提供的原位肿瘤体积曲线结果图；

图7B为本发明实施例7提供的第35天，原位肿瘤被剥离，肿瘤重量统计图；

图8为本发明实施例8提供的对照组和YF452B/SAHA给药组小鼠(雌性BALB/c小鼠)各组织器官的形态结构图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种化合物，其结构式如下：

本发明提供了一种化合物，该化合物的结构式如式(Ⅰ)所示，并命名为YF452B。通过实验证明该化合物具有较强抑制组蛋白去乙酰化酶活性的功能，对组蛋白去乙酰化酶的抑制能力远远强于母核SAHA。细胞水平上，YF452B在较低浓度可以显著的抑制乳腺癌细胞的生长和运动；体外、体内实验研究证实其具有抗乳腺癌生长转移及复发的活性。具体地，本发明人通过组蛋白去乙酰化酶活性测试法，从以异羟肟酸类SAHA为母核，设计并合成的一系列的杂环取代异羟肟酸类芳香酰胺化合物中筛选出一个对组蛋白去乙酰化酶活性抑制率最高的小分子化合物YF452B。随后选取一种已知的组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA作为阳性对照进一步探究YF452B对组蛋白去乙酰化酶活性的抑制效果。实验结果表明，YF452B与SAHA类似，都能浓度梯度依赖地抑制HDAC酶活。并且，在相同浓度下，YF452B对组蛋白去乙酰化酶活性的抑制效果明显优于SAHA。

本发明还提供了上述化合物的制备方法，包括按照如下式(i)所示的反应进行：

其中，R1独立选自下列基团中的一个或多个：氢、甲基、三氟甲基、氟、氯或溴；

优选地，反应完毕后还依次包括淬灭、萃取、洗涤、干燥和去除溶剂的步骤；

优选地，所述萃取的萃取液为乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚。

具体地，由化合物1和溴乙腈生成化合物2，化合物2与酸酐反应然后酯化生成化合物3，化合物3与盐酸羟胺在溶剂A中，反应得化合物4，化合物4和不同取代的苯甲酰氯反应生成化合物5，化合物5在溶剂B中与盐酸羟胺反应生成目标化合物(式(Ⅰ)所示的化合物)，反应完毕后一般用冰水淬灭，用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚等萃取，依次用水、饱和食盐水洗涤，干燥，低温减压除去溶剂，经柱层析得最终产物。

所述溶剂A为二甲基甲酰胺、二氧六环、甲苯、苯或四氢呋喃；

所述溶剂B为二氯甲烷、甲醇、乙醇、二甲基亚砜或甲苯。

如图1所示，该方法操作简便，普适性广，应用本发明提供的制备方法制备得到的化合物，纯度高、质量好，能够有效抑制癌细胞的生长和转移。

本发明还提供了上述化合物在抑制组蛋白去乙酰化酶活性中的应用。

本发明还提供了上述化合物在上调乳腺癌细胞组蛋白H3和/或乳腺癌细胞组蛋白H4的乙酰化水平中的应用。

本发明还提供了上述化合物在制备治疗由组蛋白乙酰化失调引起的疾病的产品中的应用。

本发明还提供了上述化合物在制备治疗癌症的产品中的应用。

其中，癌症例如可以为，但不限于乳腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌或白血病。

在一个优选的实施方式中，癌症为乳腺癌。

优选地，癌症为三阴性乳腺癌。

另外，本发明还提供了一种治疗癌症的药物，包括上述的化合物。

本发明提供的包含该化合物的产品，具有与该化合物相同的有益效果，能够起到有效治疗癌症的作用，同时，小分子药物的用量一般为纳摩尔级别，用量少，特异性强，对机体的副作用小，不易产生耐药性。

在一个优选的实施方式中，药物还包括药学上可接受的载体。

优选地，药学上可接受的载体包括壳聚糖、胆固醇、脂质体、环糊精、微球或微囊中的一种或多种。

在一个优选的实施方式中，药物的给药方式包括口服给药或注射给药。

其中，通过口服给药方式简便，不会直接损伤皮肤或黏膜。通过注射给药，药物吸收快、血药浓度升高迅速且进入体内的药量准确。两种给药方式均能够使本发明提供的药物在患者体内起到治疗癌症的作用。

优选地，注射给药包括自静脉注射、肌肉注射或乳腺脂肪垫注射中的一种或多种。

其中，乳腺脂肪垫注射针对乳腺癌患者给药给直接，药物直达病灶，治疗效果更好，且避免了不必要的代谢和浪费。

为了有助于更好的理解本发明，现通过具体的实施例详细介绍如下。

实施例1 YF452B的制备

由化合物1和溴乙腈生成化合物2，化合物2与酸酐反应然后酯化生成化合物3，化合物3与盐酸羟胺在溶剂A中，反应得化合物4，化合物4和不同取代的苯甲酰氯反应生成化合物5，化合物5在溶剂B中与盐酸羟胺反应生成化合物6，化合物6与甲氧基反应生成目标化合物YF452B，反应完毕后一般用冰水淬灭，用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚等萃取，依次用水、饱和食盐水洗涤，干燥，低温减压除去溶剂，经柱层析得最终产物，产率从30％－70％不等。

所述溶剂A为二甲基甲酰胺、二氧六环、甲苯、苯或四氢呋喃；

所述溶剂B为二氯甲烷、甲醇、乙醇、二甲基亚砜或甲苯；

所述萃取的萃取液为乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚。

实施例2组蛋白去乙酰化酶抑制剂酶活实验

本实施例利用组蛋白去乙酰化酶酶活筛选试剂盒。实验时将待鉴定的化合物与具组蛋白去乙酰化酶活性的(HeLa细胞或MDA-MB231细胞裂解液)及组蛋白去乙酰化酶比色底物(含一个乙酰化的赖氨酸侧链)一起孵育。底物若脱乙酰化则被激活，随后在lysine显色剂的作用下产生发光基团。最终的发光基团用酶标仪进行读取分析。

结果如图2A和图2B所示，实验结果表明，YF452B与SAHA类似，都能浓度梯度依赖地抑制组蛋白去乙酰化酶酶活，并且在相同浓度下，YF452B对组蛋白去乙酰化酶酶活性的抑制效果明显优于SAHA。

实施例3 Western blot和免疫荧光实验

本实施例利用常规Western blot和免疫荧光实验步骤结合组蛋白乙酰化抗体(H3/H4)，检测YF452B对组蛋白乙酰化水平的影响。

结果如图3A和图3B所示。其中，图3A为运用蛋白质免疫印迹法检测初步筛选了4个活性较好化合物，这几个化合物处理对乳腺癌细胞组蛋白H3/H4乙酰化的诱导情况，其中YF452B具有最高的活性；图3B为用细胞免疫荧光技术检测了YF452B对细胞内组蛋白H3乙酰化的影响，发现YF452B能够明显上调H3的乙酰化水平。

实施例4细胞增殖和细胞凋亡实验

本实施例中细胞增殖实验操作如下：取对数期生长的乳腺癌细胞，接种在96孔板中，每孔5×10³个乳腺癌细胞。在37℃细胞培养箱中培养24小时后，加入含不同浓度的YF452B。继续培养48小时后，加入20μL的Aqueous One Solution，在培养中孵育1小时左右，然后用酶标仪测出490nm下的吸光值。

结果如图4A所示，从图4A中可以看出，YF452B处理两种不同乳腺癌细胞MDA-MB231和4T1 48小时后，两种乳腺癌细胞的增殖具浓度梯度依赖性的受到抑制，说明YF452B能够有效抑制癌细胞的生长。

本实施例中的细胞凋亡实验操作如下：

(a)用不同浓度的YF452B或SAHA处理MDA-MB231，4T1和T47D细胞48小时；48小时后，消化细胞。800rpm离心5分钟，倒去培养基。

(b)用PBS清洗细胞2次，并用0.1mL的1×binding buffer(BDBioscience)重悬细胞，加入PI和AnnexinⅤ避光孵育30分钟。

(c)每管补加约0.4mL的1×binding buffer，400目滤网过滤后用流式细胞仪分析细胞凋亡情况。

结果如图4B和图4C所示，从图4B和图4C中可以看出，YF452B处理三种不同乳腺癌细胞MDA-MB231，4T1和T47D 48小时后，三种乳腺癌细胞的增殖具浓度梯度依赖性的受到抑制，说明YF452B能够有效抑制癌细胞的生长。

实施例5细胞划痕检测细胞迁移实验

本实施例中细胞伤口愈合实验操作如下：取对数期的肿瘤细胞接种在六孔板中，待细胞长至95％的密度时，用100μL的枪头在长满细胞的六孔板中划一个“十”划痕。然后PBS洗两遍，加入1.5mL含不同浓度YF452B的培养基。待对照组的细胞迁满后，终止实验。用4％的多聚甲醛固定，在倒置显微镜下拍照，用鼠标计数器计数迁移的细胞数。

结果如图5A所示，从图中可以看出YF452B对乳腺癌细胞迁移具有抑制作用。

本实施例利用一种可以放在24孔板中的孔径8微米的transwell小室，该小室分为上室和下室。具体试验方法如下：取对数期生长的细胞，消化，记数后配成含不同浓度YF452B的细胞悬液，分别取100μL加入上室中，下室中加入600μL的含与上室中对应的药物浓度的YF452B。在37℃的细胞培养箱中孵育10小时左右，取出小室，用棉签擦除上室没有迁移的肿瘤细胞，用多聚甲醛在室温固定15分钟。PBS洗两遍，用0.1％的结晶紫染色。在倒置显微镜下进行拍照，计数。

结果如图5B和图5C所示，从图中可以看出YF452B浓度梯度处理乳腺癌细胞能够明显抑制其细胞迁移的能力。

实施例6细胞克隆形成实验

具体操作如下：

(a)将肿瘤细胞(约10³)接种于6孔板中。

(b)培养24小时后，更换新鲜培养基，并在相应的孔中加入不同浓度的YF452B或SAHA。

(c)培养8天后，用4％的PFA固定形成的克隆，然后以0.1％结晶紫对克隆进行染色。

结果如图6A和图6B所示，通过克隆形成实验检测YF452B对肿瘤细胞生长的抑制情况，结果表明，YF452B(5μM)能显著抑制乳腺癌细胞克隆形成的能力。

实施例7 4T1乳腺癌小鼠模型

具体操作如下：取对数期生长的1×10⁵个4T1细胞注射到雌性的BALB/c小鼠的第四对乳腺脂肪垫上。在第七天，把小鼠随机分成四组即对照组(DMSO)、YF452B低剂量组(10mg/kg/day)、高剂量组(30mg/kg/day)以及SAHA(30mg/kg/day)，每组8只小鼠。待小鼠乳腺上的肿瘤可见时，用游标卡尺测量肿瘤的长(L)和宽(W)。用公式V＝L×W²×0.52计算出肿瘤体积。为了检测药物的毒性，小鼠的体重每三天测一次。在第30天，所有的小鼠均被处死。将原位瘤剥离，时对原位肿瘤测重，统计分析。

结果如图7A和图7B所示，通过4T1乳腺癌小鼠模型实验表明YF452B在动物体内同样具有较好的抗肿瘤效果。YF452B(30mg/kg/day)治疗组的小鼠的肿瘤大小显著低于对照组，同时还明显低于阳性对照SAHA(30mg/kg)组。其中图7A为原位肿瘤体积曲线；图7B为第35天，原位肿瘤被剥离，肿瘤重量统计图。

实施例8药物毒性检测

具体操作如下：取6-8周的雌性BALB/c小鼠，随机分成3组(每组小鼠5只)，将DMSO、YF452B(30mg/kg)、SAHA(30mg/kg)对小鼠进行腹腔注射，每周检测小鼠体重，30天以后，处死后取各个器官，用HE染色方式进行免疫组化实验检测小鼠各器官结构是否正常。

结果如图8所示，从图中可以看出对照组和YF452B/SAHA给药组小鼠(雌性BALB/c小鼠)各组织器官的形态结构正常，说明该药物对小鼠没有毒副作用。

以上实验结果显示，在细胞水平和动物体内，YF452B低浓度处理能够明显乳腺癌的生长和转移，并且没有毒副作用。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (1)

1.一种化合物在制备抑制乳腺癌细胞MDA-MB231，4T1或T47D产品中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如式(Ⅰ)所示：

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