CN110279620A - 一种北美柳兰提取物制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种皮肤微环境调节物制备方法领域，特别是一种北美柳兰提取物制备方法和应用，包括：花、叶进行超临界萃取：预处理得到北美柳兰花、叶样品中加入乙醇作为夹带剂，再放入超临界二氧化碳萃取仪中进行萃取，压力为12MPa，温度为36至40℃，收集萃取物；茎进行亚临界萃取：预处理得到北美柳兰茎样品加入到亚临界萃取仪中进行丁烷萃取，收集萃取物；浓缩收集：分别将花叶和茎萃取物分别进行离心分离，收集上清液，并进行浓缩，将两种浓缩液混合。有益效果：优化技术步骤，特别是针对柳兰的花、叶、茎等不同部位分别进行超临界萃取和亚临界萃取等不同提取方式来尽量多有效成分；制成人头皮微环境调理液具有抑制5α还原酶和抗炎等特性，可改善头皮环境。

Description

一种北美柳兰提取物制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种皮肤微环境调节物制备方法领域，尤其涉及一种北美柳兰提取物制备方法和应用。

背景技术

人头皮微环境独特，终毛浓密，相对湿度高，汗腺和皮脂腺等腺体丰富，角质细胞分化等过程会产生氨基酸，矿物质和脂质等营养成分，有利于微生物定植。由于环境优越，营养丰富，细菌、真菌、酵母菌、病毒等头皮微生物数量高达10倍以上人体细胞。头皮微生物与宿主之间的共生微生物是作为头皮第一道保护屏障，如果失调就会导致混乱，造成皮脂分泌过多，产生头屑，刺激头皮等。维持头皮微生态平衡在头皮养护过程中发挥着重要作用。

北美柳兰(Epilobium latifoliumL.)又名加拿大柳草，是来自北美洲北部草原的非柳属植物，属多年生粗壮草本植物，全草味苦，无毒，具有清热利胆、止泻、杀虫功效。

中国发明CN201480036896.7采用包含柳兰水相提取物组合物来抑制抑制马拉色(Malasseria)真菌生长，进而达到去头屑的目的；中国发明CN201710864383.0在头皮护理香波组合物中添加一种柳兰提取物，具有抑制5α还原酶和抗炎等特性，可调节头皮皮脂分泌，舒敏后减少红肿，改善头皮环境。

发明内容

本发明目的是提供一种提取北美柳兰有效成分的制备方法和应用，通过优化制备方法并应用于人头皮微环境调理，安全，稳定，有效改善头皮微环境。

一种北美柳兰提取物制备方法，包括如下步骤：

(1)预处理：将北美柳兰的花、叶、茎分开，采用气态二氧化碳进行表面除尘处理；除尘后，进行粉碎处理；粉碎后，进行复合酶解处理；

(2)花、叶进行超临界萃取：预处理得到北美柳兰花、叶样品中加入乙醇作为夹带剂，再放入超临界二氧化碳萃取仪中进行萃取，压力为12MPa，温度为36至40℃，收集萃取物；

(3)茎进行亚临界萃取：预处理得到北美柳兰茎样品加入到亚临界萃取仪中进行丁烷萃取，收集萃取物；

(4)浓缩收集：分别将花叶和茎萃取物分别进行离心分离，收集上清液，并进行浓缩，收集获得两种浓缩液；

(5)将两种浓缩液混合。

优选的，本北美柳兰提取物制备方法中预处理步骤为：对北美柳兰样品进行筛选，清洗并将花、叶、茎裁剪分开；采用二氧化碳气体对花、叶、茎样品进行表面除尘处理；在除尘后样品中加入乙醇，进行超声震荡；乙醇的加入量为样品重量和的3倍；加入复合酶，并在常压、温度为35至55℃、pH3至7的条件下保温酶解12h。

优选的，本北美柳兰提取物制备方法中复合酶重量份数由12至8份纤维素酶、12份至8果胶酶、1至0.8份淀粉酶和1至0.7份蛋白酶组成；所述复合酶的加入量为样品重量的12至9％。

优选的，本北美柳兰提取物制备方法中预处理得到北美柳兰茎样品进行亚临界丁烷萃取时，压力为-0.1MPa，单次浸泡时间为8h至24h。

优选的，上述任一项制备方法得到的北美柳兰提取物在人头发头皮或宠物毛发毛皮护理制品中的应用。

优选的，一种人头皮微环境调理液包含上述任一项制备方法得到的北美柳兰提取物

优选的，上述头皮微环境调理精华液，包括如下质量百分含量的组分：丁二醇3％、卵磷脂0.6％、黄原胶0.1％、EDTA二钠0.05％、生育酚0.05％、北美柳兰提取液1至5％、甲基异噻唑啉酮0.08％、苯氧乙醇0.3％、余量为去离子水。

本发明的有益效果在于：相对于已披露的技术方案，本发明优化技术步骤，特别是针对柳兰的花、叶、茎等不同部位，分别进行超临界萃取和亚临界萃取等不同提取方式来尽量多获得可运用于调节人头皮微环境的有效成分；制成人头皮微环境调理液具有抑制5α还原酶和抗炎等特性，可调节头皮皮脂分泌，舒敏后减少红肿，改善头皮环境。

附图说明

图1是调理皮脂产生测试结果

图2是抗炎反应测试结果

图3是对角质层细胞影响测试结果

图4是人类头皮外植块一般形态观察结果

图5是免疫效果评估结果

图6是舒敏功效评估结果

图7是抗头皮屑功效评估结果

具体实施方式

下面结合附图和一些具体实施方式对本发明所述的一种北美柳兰提取物制备方法和应用。具体实施例为进一步详细说明本发明，非限定本发明的保护范围。

实施例一

一种调节头皮微环境组合物，是由下述制备方法制成：

(1)预处理：对北美柳兰样品进行筛选，清洗并将花、叶、茎裁剪分开；采用二氧化碳气体对花、叶、茎样品进行表面除尘处理；在除尘后样品中加入乙醇，进行超声震荡；乙醇的加入量为样品重量和的3倍；加入复合酶，并在常压、温度为35～55℃、pH3～7的条件下保温酶解12小时；复合酶重量份数由12份纤维素酶、8份果胶酶、1份淀粉酶和0.7份蛋白酶组成；所述复合酶的加入量为样品重量的9％。

(2)超临界萃取：将花，叶预处理样品放入超临界二氧化碳萃取仪中进行萃取，超临界二氧化碳萃取仪的压力为12MPa，温度为36至40℃，收集萃取物；

(3)亚临界萃取：将将茎预处理样品放入萃取仪的萃取罐中；抽真空，使萃取罐压力抽至-0.1MPa后，向萃取罐中加入液态丁烷，根据料液比确定进入萃取罐内的液态丁烷的量；加热，使萃取罐内溶剂达到指定温度后开始计时浸泡萃取；浸泡8h后，打开萃取罐底萃取液阀将萃取液放入分离罐内；对分离罐内溶剂进行减压蒸发，同时提高分离罐内温度；待分离罐的压力降低至0.1MPa以下时，抽真空对剩余萃取液脱除溶，直至分离罐压力降至-0.1MPa左右，并继续脱溶60min。根据所需制备需要，可进行反复多次萃取。

(4)分别将花叶和茎萃取物进行离心分离，收集上清液，并进行浓缩，收集浓缩液；

(5)将花叶和茎萃取浓缩液混合。

人头皮微环境调理液组分质的量百分含量为：丁二醇3％、卵磷脂0.6％、黄原胶0.1％、EDTA二钠0.05％、生育酚0.05％、北美柳兰提取液2％、甲基异噻唑啉酮0.08％、苯氧乙醇0.3％、余量为去离子水。

实施例二

为了更好的说明本发明的有益效果，分别对含有实施例一得到的北美柳兰提取物的人头皮微环境调理液的抑制5α还原酶活性、对皮脂产生影响等特性进行验证：

1.抑制5α还原酶活性测试

将正常人体表皮成纤维细胞在0.1％人头皮微环境调理液浓度下培养，通RP-UPLC-ESI-MS计算DHT和睾酮数量来计算抑制程度。结果显示可减少93％的5α-还原酶活性。

2.对皮脂产生影响测试

将原始人体皮脂腺细胞分别在0.0125％、0.05％和0.1％浓度的人头皮微环境调理液中进行培养，同时在不含人头皮微环境调理液条件下培养作为对照组；培养一定时间后，通过荧光法计算油脂合成量。结果显如附图1所示，相对于对照组，0.0125％、0.05％和0.1％浓度的人头皮微环境调理液条件下培养的皮脂腺细胞油脂合成分别减少20％、32％、43％，对原始人体皮脂腺细胞皮脂合成呈现显著抑制。

3.抗炎反应测试

正常人体表皮成纤维细胞分别在0.025％、0.2％浓度的人头皮微环境调理液中进行培养，同时在不含人头皮微环境调理液条件下培养作为对照组；各组在培养过程中加入促炎因子IL-1α诱导炎症反应发生；培养一定时间后，通过ELISA法计算炎症因子IL-8数量。结果如附图2所示，相对于对照组，0.025％、0.2％浓度的人头皮微环境调理液条件下培养的人体表皮成纤维细胞炎症因子IL-8合成分别减少75％、83％，具有抗炎作用。

4.对角质层细胞影响测试

常规角化细胞分别在0.025％、0.05％浓度的人头皮微环境调理液中进行培养作为处理组，同时在不含人头皮微环境调理液条件下培养作为对照组；培养一定时间后，通过图片分析免疫荧光标记的外皮蛋白(分化标记)。结果如附图3所示，对照组、0.025％、0.05％浓度的人头皮微环境调理液条件下培养的外皮蛋白依次增多，即对常规角化细胞促分化作用依次增强。

5.免疫调节测试

人类头皮外植体(47岁高加索女性)用马拉色菌混合液(球形马拉色菌：限制马拉色菌：糠秕马拉色菌＝1:1:1)预处理24h，然后在含有1.5％人头皮微环境调理液的水溶液中培养作为处理组，同时设置对照组(不进行预处理及培养时未加入人头皮微环境调理液的负对照组、只进行预处理但培养时未加入人头皮微环境调理液的正对照组)；培养至5天后，观察一般细胞形态，及进行钟样受体(TLR2)和B-防御素(hBD2、hBD-3)免疫组化检测。结果如附图4所示，正对照组相对于负对照组，外植块一般细胞形态发生明显形态学改变，特别在基底层显现了很多固缩核细胞；相对于正对照组，处理组外植块一般细胞形态较少出现形态学改变，且基底层固缩核减少；钟样受体(TLR2)和B-防御素(hBD2、hBD-3)免疫组化检测结果如附图5显示，同种因子的免疫荧光反应比较中，正对照组都显著强于负对照组，处理组与负对照组相近。

6.舒敏和抗头屑功效临床测试

对278名志愿者(女性，18至60岁)的头皮涂抹15％乳酸4小时，用于引发头皮红肿和刺激；278名志愿者分为三组，采用3％的人头皮微环境调理液均匀涂抹头皮作为处理组，采用1％的氢化可的松乳液均匀涂抹头皮作为对正对照组，未采用试剂进行涂抹作为负对照组，并于30min，1h，24h时测量红肿情况。舒敏功效如附图4所示，相对于负对照组，处理组和正对照组于30min，1h，24h时头皮红肿情况分别减少24％、23％、27％和14％、14％、24％。抗头屑功效结果是：有96％志愿者后反馈，第一次使用人头皮微环境调理液可以减少非粘附和粘附头皮屑；在志愿者使用人头皮微环境调理液0d、3d、30d时，分别对人头皮同一局部进行显微摄影比对，结果如附图7所示，相对于刚使用人头皮微环境调理液(0d)，使用3d的头皮屑有明显减少，使用30d后已图片中已基本看不到头皮屑。

由技术常识可知，本技术方案可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。

Claims (8)

1.一种北美柳兰提取物制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)预处理：将北美柳兰的花、叶、茎分开，采用气态二氧化碳进行表面除尘处理；除尘后，进行粉碎处理；粉碎后，进行复合酶解处理；

(2)花、叶进行超临界萃取：预处理得到北美柳兰花、叶样品中加入乙醇作为夹带剂，再放入超临界二氧化碳萃取仪中进行萃取，压力为12MPa，温度为36至40℃，收集萃取物；

(3)茎进行亚临界萃取：预处理得到北美柳兰茎样品加入到亚临界萃取仪中进行丁烷萃取，收集萃取物；

(4)浓缩收集：分别将花叶和茎萃取物分别进行离心分离，收集上清液，并进行浓缩，收集获得两种浓缩液；

(5)将两种浓缩液混合。

2.根据权利要求1所述的北美柳兰提取物制备方法，其特征在于所述预处理步骤具体为：对北美柳兰样品进行筛选，清洗并将花、叶、茎裁剪分开；采用二氧化碳气体对花、叶、茎样品进行表面除尘处理；在除尘后样品中加入乙醇，进行超声震荡；乙醇的加入量为样品重量和的3倍；加入复合酶，并在常压、温度为35至55℃、pH3至7的条件下保温酶解12h。

3.根据权利要求1所述的北美柳兰提取物制备方法，其特征在于：所述复合酶重量份数由12至8份纤维素酶、12份至8果胶酶、1至0.8份淀粉酶和1至0.7份蛋白酶组成；所述复合酶的加入量为样品重量的12至9％。

4.根据权利要求1所述的北美柳兰提取物制备方法，其特征在于：所述预处理得到北美柳兰茎样品进行亚临界丁烷萃取时，压力为-0.1MPa，单次浸泡时间为8h至24h。

5.根据权利要求1至4任一项所述的制备方法得到的北美柳兰提取物。

6.根据权利要求5所述的北美柳兰提取物在人头发头皮或宠物毛发毛皮护理制品中的应用。

7.一种人头皮微环境调理液，其特征在于，包含权利要求5所述的北美柳兰提取物。

8.根据权利要求7所述的人头皮微环境调理液，其特征在于，包括如下质量百分含量的组分：丁二醇3％、卵磷脂0.6％、黄原胶0.1％、EDTA二钠0.05％、生育酚0.05％、北美柳兰提取液1至5％、甲基异噻唑啉酮0.08％、苯氧乙醇0.3％、余量为去离子水。