CN110269870A

CN110269870A - 地菍提取物在治疗病毒性肝炎药物中的用途

Info

Publication number: CN110269870A
Application number: CN201810219206.1A
Authority: CN
Inventors: 王金凤
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-03-16
Filing date: 2018-03-16
Publication date: 2019-09-24

Abstract

本发明涉及地菍提取物在治疗病毒性肝炎药物中的用途，本发明发现，地菍可抑制DHBV DNA复制、抑制HBeAg的分泌，降低ALT、AST和TBIL水平，改善肝功能及保肝护肝作用，抑制炎性因子TNF‑α和IL‑6表达。地菍提取物可单独使用或者与其它药物合用，或与适宜的赋形剂结合，按照常规方法制成口服或者非口服剂型应用于各种病毒性肝炎的治疗。本发明所提供的地菍提取物的医药新用途具有以下优点：地菍在临床上具有广泛的用途和良好药效，临床应用较为安全可靠，至今未发现严重的毒副作用。地菍资源丰富，在我国东南、西南各地都有分布，原料的获取非常方便、稳定。

Description

地菍提取物在治疗病毒性肝炎药物中的用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，具体地说，涉及中草药地菍的医药新用途，更具体的说，涉及地菍在治疗病毒性肝炎药物中的用途。

背景技术

肝炎病毒感染是一个严重的公共卫生问题。根据中国卫生统计报告，肝炎病毒居中国传染病第一位，在HBV感染者中，有10%~15%的患者可发展为慢性HBV感染。在医学高速发展的今天，仍有57%和78%的慢性肝炎患者转化为肝硬化和原发性肝癌，给患者及其家庭带来了严重的负担。尽管加大了疫苗免疫和宣教工作，每年乙肝新发感染者仍达10万余人，从而使中国成为世界上为慢性肝炎、肝硬化和肝癌付出治疗成本最多的国家。

随着科学家对乙肝病毒感染宿主致病机制的深入研究，人们逐渐认识到乙肝不仅是病毒复制本身的问题，乙肝更是一个机体免疫紊乱的问题。由于HBV的侵入，使得大量的炎性炎症细胞浸润到肝脏组织之中，从而使免疫系统产生免疫应答与免疫应激反应，而使肝细胞受到损伤或者产生病变，称为免疫性肝损伤。免疫性肝损伤是肝纤维化、肝硬化甚至肝癌等终末病发生发展的重要因素之一。

目前主要通过免疫性调节、抗病毒性治疗、改善肝功能、抗肝纤维化等治疗措施可以防治免疫性肝损伤。乙肝疫苗虽然使感染到乙型肝炎病毒的概率开始变低，但据临床发现，一些患者在接种疫苗后产生了抗体，但不久后仍存在会感染HBV的风险。目前医学研究中较为认可的抗乙肝病毒和抗肝炎的药物大多数是核苷类和干扰素药物，该类药物虽然对抑制病毒具有较好疗效，但长期大量的抗病毒药物的使用也出现了血清转换率低，造成乙肝病毒的持续感染，导致宿主免疫耐受等问题，因自身免疫应答导致的肝损伤依然严重，且可导致病情发展、恶化至肝硬化、HBV相关性肝细胞癌。现代医学在干预肝损伤的治疗方面并无特异性药物，多采用休息加强营养补充维生素和对症治疗等，严重者甚至被迫终止用药。因此，治疗肝炎药物的研发已成为全球医药界的热点、重点和难点之一。

中药资源丰富且具有不可替代的优势且中医药治疗乙肝有着悠久历史，疗效确切。地菍（Melastoma dodecandrum Lour.）为野牡丹科野牡丹属植物，主要分布于长江以南地区。临床上主要用于高热、咽喉肿痛、牙痛、黄疸、水肿痛经、产后腹痛、崩漏带下、痢疾便血、痈肿疔疮、毒蛇咬伤等病症；民间还用于治疗流行性脑脊髓膜炎，肾炎，肾盂炎，肠炎，盆腔炎，急性扁桃体炎，外伤出血，腰腿痛和风湿骨痛等。另外现代药理学研究表明，地菍具有降血糖、止血、镇痛抗炎、降脂、抗氧化等作用。迄今尚未见有关地菍对治疗病毒性肝炎中的治疗用途。

发明内容

本发明的目的就是为了克服现有治疗病毒性肝炎药物缺陷，所提出的一种地菍在治疗病毒性肝炎药物中的用途，进一步的还包括：

地菍提取物在抑制乙肝病毒HBV DNA复制药物中的用途，

地菍提取物在抑制乙肝病毒HBeAg分泌药物中的用途。

地菍提取物在抑制TNF-α和IL-6表达药物中的用途。

地菍提取物在降低ALT、AST和TBIL水平药物中的用途

本发明的地菍提取物由地菍的地菍地上部分、地菍的根或全草由本领域已知的方法制备获得。

进一步的，所述地菍提取物均可通过以下方法制备：以地菍地上部分、地菍的根或全草为原料，采用溶剂提取法或溶剂萃取法制备而成的地菍提取物；更进一步的，所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙酮以及乙酸乙酯中的一种或者其中任意几种的混合溶剂；显然，本领域技术人员也应当知晓，上述溶剂的选择仅为常用或者优选的选择，但并不限于上述溶剂。

进一步的，所述药物均包括地菍提取物单独使用或者与其它药物合用而制备的剂型；更进一步的，所述药物的剂型包括地菍提取物与赋形剂制成的散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆剂、口服液、乳剂、混悬剂或者注射剂，显然，本领域技术人员也应当知晓，上述剂型的选择仅为常用或者优选的选择，但并不限于上述剂型，按照常规方法制成口服或者非口服剂型均可应用于各种病毒性肝炎的治疗。

本发明经研究发现，地菍提取物可抑制DHBV DNA复制；抑制HBeAg分泌；显著降低ALT，AST和TBIL水平；可明显改善肝脏组织病理学变化及肝脏组织病理学分级；抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达。结果显示，地菍该药用植物具有治疗病毒性肝炎的崭新用途。

本发明将地菍提取物进行体内抗乙肝病毒实验，结果显示，其对DHBV DNA呈现显著剂量依赖性抑制活性，结果显示，地菍该药用植物具有抑制乙肝病毒复制的崭新用途。

本发明将地菍提取物进行体外抗乙肝病毒实验，3次实验结果的平均值显示，其对HBeAg呈现显著剂量依赖性抑制活性。结果显示，地菍该药用植物具有抑制HBeAg分泌的崭新用途。

本发明将地菍提取物进行免疫性肝损伤实验，结果显示，其可明显减轻肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性、肝细胞坏死及炎性细胞浸润，明显改善肝脏组织病理学变化及肝脏组织病理学分级等多种作用，可显著降低ALT，AST和TBIL水平，抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达。结果显示，地菍该药用植物具有保肝护肝、抗炎、降酶的崭新用途。

此外本发明所提供的地菍提取物的医药新用途还具有以下优点：地菍在临床上具有广泛的用途和良好药效，临床应用较为安全可靠，至今未发现严重的毒副作用。地菍资源丰富，在我国东南、西南各地都有分布，原料的获取非常方便、稳定。

附图说明

图1是实施例2中地菍对HBeAg分泌抑制示意图。

图2是实施例3中地菍对AST作用示意图。

图3是实施例3中地菍对ALT作用示意图。

图4是实施例3中地菍对TBIL作用示意图。

图5是实施例3中地菍对TNF-α水平影响示意图。

图6是实施例3中地菍对IL-6水平影响示意图。

图7是实施例3中地菍对IFN-γ水平影响示意图。

图8是实施例3中地菍改善肝脏组织病理学变化及肝脏组织病理学分级示意图。

图9是实施例3中肝脏病理切片图。

具体实施方式

实施例1

地菍提取物的制备：取地菍全草，粉碎，经8-10倍水加热回流提取2-3次，每次2h，抽滤，合并两次提取液，减压浓缩至干，得到地菍提取物。本实施例中采用水作为溶剂，基于实际情况，也可以采用其他有机溶剂或者无机溶剂替换（比如前文所述的甲醇、乙醇、丙酮以及乙酸乙酯等），溶剂的加入量、提取时间以及次数也均可以做出相应调整；此外药用部位的选择也可以替换为地菍地上部分或者地菍的根；实验验证，上述一系列的替换以及调整后得到的地菍提取物均具有同样的技术效果，因此在此就不对制备方法一一举例。

实施例2-3中的用药均使用实施例1制备的地菍提取物。

实施例2

地菍对HBeAg的抑制作用：将HepG 2.2.15细胞按10⁴个/ ml接种于96孔培养板中，0.2ml/孔，培养2d后用培养液将待测药物及地菍提取物分别配成40 ug/ml，20 ug/ml，10 ug/ml，5ug/ml不同浓度加入细胞孔，每种浓度重复3孔，0.15 ml/孔，并设无药细胞对照。加药后培养，分别在3天、7天、10天、13天后观察不同药物的不同浓度对细胞生长的抑制情况。收集的细胞上清-20℃保存供HBeAg检测用。地菍对HBeAg分泌抑制活性见图1。实验结果表明，地菍可明显抑制HBeAg分泌，并且随着干预药物浓度的升高，抑制率逐渐升高，抑制率与药物浓度成剂量依赖性。

实施例3

地菍对免疫性肝损伤的保护作用：地菍提取物制备成高中低三个浓度组，分别为600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg。将Balb/c 小鼠60只随机分为六组，分为空白对照组、模型组、地菍高剂量组、地菍中剂量组、地菍低剂量组和水飞蓟宾对照组（20mg/kg），适应性饲养7d后，各药物组给予药物干预（0.2ml/20g），对照组与模型组以生理盐水给药，每天1次，共10天。对照组和Con-A模型组以等体积生理盐水灌胃，连续给药10d，末次给药1h后，各组按照尾静脉注射Con A制备免疫性肝损伤模型（除空白对照组小鼠），禁食禁水。8h后，通过眼球取血，分离血清（3000r/min离心l0min），供ALT、AST、TBIL、TNF-α、IL-6和IFN-γ检测用（结果见图2-7）。外周血采集完毕后，暴露肝脏，快速取肝组织，取肝脏同一部位，10%中性福尔马林固定，苏木精-伊红染色，采用显微镜进行病理切片观察拍照（结果见图9），并进行病理评分（结果见图8）。同时模型组ALT、AST和TBIL明显高于空白对照组，模型组炎症因子IL-6、TNF-α、IFN-γ明显高于空白对照组，其差异有显著性意义，说明造模成功。模型组肝脏病理组织学可以见小叶中性肝细胞退行性病变和大量细胞肿胀坏死，主要病变为肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、肝细胞水样变性和细胞坏死等。与模型组小鼠相比，地菍均可显著降低ALT、AST和TBIL水平，降低炎症因子IL-6、TNF-α水平。通过图9可见地菍任何剂量组的任何一个剂量组与模型对照组之间，气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性或肝细胞坏死等肝细胞病变中，肝细胞坏死程度减轻，差异有显著性，效果优于阳性对照组水飞蓟宾。

以上实施例只是本发明几个典型实施例，但是本发明并不限于上述的实施方式，在本领域技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化，变化后的内容仍属于本发明的保护范围。

Claims

1.地菍提取物在治疗病毒性肝炎药物中的用途。

2.地菍提取物在抑制乙肝病毒HBV DNA复制药物中的用途。

3.地菍提取物在抑制乙肝病毒HBeAg分泌药物中的用途。

4.地菍提取物在抑制TNF-α和IL-6表达药物中的用途。

5.地菍提取物在降低ALT、AST和TBIL水平药物中的用途。

6.根据权利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，所述地菍提取物均通过以下方法制备：以地菍地上部分、地菍的根或全草为原料，采用溶剂提取法或溶剂萃取法制备而成的地菍提取物。

7.根据权利要求2所述的地菍提取物在治疗病毒性肝炎药物中的用途，其特征在于，所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙酮以及乙酸乙酯中的一种或者其中任意几种的混合溶剂。

8.根据权利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，所述药物均包括地菍提取物单独使用或者与其它药物合用而制备的剂型。

9.按照权利要求1-5任一所述的用途，其特征在于，所述药物的剂型包括地菍提取物与赋形剂制成的散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆剂、口服液、乳剂、混悬剂或者注射剂。