CN110257402A

CN110257402A - 一种玉米小斑病菌ChCDC10基因及其应用

Info

Publication number: CN110257402A
Application number: CN201910619172.XA
Authority: CN
Inventors: 张祥辉; 于汇琳; 汪蕊; 王璐; 刘金亮; 潘洪玉
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2019-07-10
Filing date: 2019-07-10
Publication date: 2019-09-20
Anticipated expiration: 2039-07-10
Also published as: CN110257402B

Abstract

一种玉米小斑病菌ChCDC10基因及其应用属微生物基因工程技术领域，本发明提供的来自玉米小斑病菌的控制分生孢子形成和子囊孢子形成以及致病力的ChCDC10基因，其DNA序列如SEQ ID No:1所示；提供的ChCDC10基因所编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；ChCDC10基因可在植物抗玉米小斑病基因工程领域中应用；通过对玉米小斑病菌的控制分生孢子和子囊孢子形成以及致病力的蛋白质ChCDC10进行缺失、突变或修饰，而使其分生孢子和子囊孢子形成受限、致病力下降，可作为靶标在设计和筛选抗玉米小斑病药剂中应用，尤其是在植物中不存在该类蛋白质，对植物安全。

Description

一种玉米小斑病菌ChCDC10基因及其应用

技术领域

本发明属微生物基因工程技术领域，具体涉及植物保护领域中控制真菌致病性的新基因的发现及其编码蛋白质的应用。

背景技术

玉米小斑病菌的无性态学名为：Bipolaris maydis，属于半知菌亚门平齐蠕孢属；其有性态学名为Cochliobolus heterostrophus，属于子囊菌亚门异旋孢腔菌。1925年，作为玉米病害的致病菌第一次被发现。玉米小斑病菌属于丝状真菌，当菌丝生长到一定阶段后，在外界环境条件以及自身因素的影响下，在分生孢子梗顶端或者侧方长出分生孢子。分生孢子具有隔膜3-13个，其中大多数具有隔膜7-9个，黑褐色，长椭圆形，两端钝圆，多向一侧弯曲，中间粗，两边细，大小为30-115μm×10-17μm，脐点凹陷于基细胞之内。分生孢子多从两端细胞萌发长出芽管，有时中间细胞也可萌发出芽管。分生孢子形成的温度范围为15～33℃，最适温度范围为23～25℃；分生孢子萌发的温度范围为5～42℃，最适温度范围为26～32℃。分生孢子抵抗干燥的能力比较强，在玉米种子上可存活至少一年。分生孢子在湿润的条件下，即可萌发长出芽管，通过顶端生长形成菌丝。

自然条件下，菌丝生长到一定阶段，在外界环境条件下，也可能进入有性生殖阶段，玉米小斑病菌的有性生殖阶段是异宗配合的，在其基因组上有一个单一的位点与有性生殖有关，被命名为MAT-1，该位点有两种不同的形式，即MAT-1-1和MAT-1-2。玉米小斑病菌的有性生殖阶段不常见，偶尔可在枯死的病组织中发现子囊壳。在实验室条件下可以通过人工诱导产生子囊壳，玉米小斑病菌的子囊壳称作“pseudothecium”。子囊壳从形成到成熟大约需要一个月的时间，成熟的子囊壳遇水后，顶端破裂，释放出子囊和子囊孢子。子囊壳黑色，球形，喙部明显，长埋在寄主病组织中，表面可长出菌丝体和分生孢子梗；内部着生近圆桶状的子囊。子囊顶端钝圆，基部具柄。成熟的子囊内经过减数分裂和有丝分裂形成8个线状的单倍体子囊孢子，子囊孢子在子囊内相互缠绕成螺旋状，萌发时每个细胞均可长出芽管，进而长成菌丝。有研究发现，成熟的子囊中80％具有完整的8个子囊孢子，20％具有4-7个子囊孢子。玉米小斑病菌在田间的侵染与流行主要依靠分生孢子随着气流和雨水的传播，如果能够控制分生孢子的形成，那将大大降低侵染源，降低玉米小斑病的发生，提高玉米产量。

玉米小斑病是一种主要的玉米叶部真菌病害，主要发生在温暖潮湿的玉米产区。20世纪70年代，由于含有T型雄性不育细胞质(T-cms)的玉米的大量种植，使得玉米小斑病在美国大流行，造成玉米减产165亿千克，占美国玉米总产量的15％，大约损失产值10亿美元，因为所造成的损失超过了发生在1840年欧洲的马铃薯晚疫病大流行而震惊全球。早在20世纪20年代中国的江苏地区就有玉米小斑病的发生，但只是发生在多雨年份，并且大多在玉米生长的后期流行，很少造成严重的经济损失。但是由于在20世纪60年代，玉米感病杂交种的大面积种植，使得小斑病的危害日趋严重，成为重要的玉米叶部病害。到了20世纪60年代中期，由于玉米小斑病的严重发生，造成河北和湖北部分地区严重减产，一般的地块减产达到了20％以上，而严重的地块减产高达80％，甚至绝收。20世纪70年代以后，玉米抗病品种的推广，小斑病的发生得到了基本的控制，但是由于抗病品种的种植大面积单一化以及全球气温变暖，在我国的某些玉米产区，小斑病的发生时有严重发生，造成惨重的损失。对玉米小斑病菌分生孢子与子囊孢子形成进行深入研究，鉴定玉米小斑病菌孢子形成的关键因子，不仅有助于揭示玉米小斑病菌这种死体营养型病原真菌致病的分子机制，还有可能从中发现可以作为杀真菌剂作用靶标的蛋白质，为开发防治玉米小斑病及其它类似病害的高效药剂奠定理论和技术基础。

玉米小斑病菌的无性态学名为：Bipolaris maydis，属于半知菌亚门平齐蠕孢属，其有性态学名为Cochliobolus heterostrophus，属于子囊菌亚门异旋孢腔菌。1925年，作为玉米病害的致病菌第一次被发现。玉米小斑病菌属于丝状真菌，当菌丝生长到一定阶段后，在外界环境条件以及自身因素的影响下，在分生孢子梗顶端或者侧方长出分生孢子。分生孢子具有隔膜3-13个，其中大多数具有隔膜7-9个，黑褐色，长椭圆形，两端钝圆，多向一侧弯曲，中间粗，两边细，大小为30-115μm×10-17μm，脐点凹陷于基细胞之内。分生孢子多从两端细胞萌发长出芽管，有时中间细胞也可萌发出芽管。分生孢子形成的温度范围为15～33℃，最适温度范围为23～25℃；分生孢子萌发的温度范围为5～42℃，最适温度范围为26～32℃。分生孢子抵抗干燥的能力比较强，在玉米种子上可存活至少一年。分生孢子在湿润的条件下，即可萌发长出芽管，通过顶端生长形成菌丝。

玉米小斑病是一种主要的玉米叶部真菌病害，主要发生在温暖潮湿的玉米产区。20世纪70年代，由于含有T型雄性不育细胞质(T-cms)的玉米的大量种植，使得玉米小斑病在美国大流行，造成玉米减产165亿千克，占美国玉米总产量的15％，大约损失产值10亿美元，因为所造成的损失超过了发生在1840年欧洲的马铃薯晚疫病大流行而震惊全球。早在20世纪20年代中国的江苏地区就有玉米小斑病的发生，但只是发生在多雨年份，并且大多在玉米生长的后期流行，很少造成严重的经济损失。但是由于在20世纪60年代，玉米感病杂交种的大面积种植，使得小斑病的危害日趋严重，成为主要的玉米叶部病害。到了20世纪60年代中期，由于玉米小斑病的严重发生，造成河北和湖北部分地区严重减产，一般的地块减产达到了20％以上，而严重的地块减产高达80％，甚至绝收。20世纪70年代以后，玉米抗病品种的推广，小斑病的发生得到了基本的控制，但是由于抗病品种的种植大面积单一化以及全球气温变暖，在我国的某些玉米产区，小斑病的发生时有严重发生，造成惨重的损失。对玉米小斑病菌分生孢子与子囊孢子形成进行深入研究，鉴定玉米小斑病菌孢子形成的关键因子，不仅有助于揭示玉米小斑病菌这种死体营养型病原真菌致病的分子机制，还有可能从中发现可以作为杀真菌剂作用靶标的蛋白质，为开发防治玉米小斑病及其它类似病害的高效药剂奠定理论和技术基础。

CDC10是一个在玉米小斑病菌中未知功能的基因。通过分析玉米小斑病菌ChCDC10基因的功能，评价该基因在玉米小斑病菌生长发育过程中的作用，有利于鉴定潜在的防治靶标，用于筛选新型防控玉米小斑病菌的药剂。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种控制真菌分生孢子与子囊孢子形成以及致病力的基因及其编码的蛋白质。

本发明所提供的控制分生孢子与子囊孢子形成以及致病力的基因来源于玉米小斑病菌，名称为ChCDC10，其DNA序列如SEQIDNo:1所示。该DNA序列为ChCDC10基因的开放阅读框，由1197个核苷酸组成，其中包含2个内含子序列。

本发明提供了ChCDC10基因所编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQIDNo:2所示，该序列由341个氨基酸组成。

来自玉米小斑病菌的控制分生孢子与子囊孢子形成以及致病力的基因ChCDC10可应用于植物抗玉米小斑病基因工程领域。

对来自玉米小斑病菌的控制分生孢子与子囊孢子形成以及致病力的基因ChCDC10所编码的蛋白质进行缺失、突变或修饰，而使其分生孢子与子囊孢子形成以及致病力发生缺陷，可作为靶标在设计和筛选抗玉米小斑病药剂中应用，尤其植物中不含有该蛋白质，所以对植物更加安全。我们是首次报道ChCDC10基因与子囊孢子的形成相关。

本发明证明了ChCDC10基因的缺失或突变，导致玉米小斑病菌分生孢子形成显著下降，不能形成正常的子囊孢子，并且致病力明显下降，说明ChCDC10基因是玉米小斑病菌生命周期中所必需的基因。因此，筛选能够阻止该基因表达与其蛋白质的表达、修饰及定位的化合物，可以有效控制玉米小斑病的发生，从而有助于开发新型杀菌剂，即本发明所提供的ChCDC10基因的一个重要用途是：该基因的表达与其编码的蛋白质产物的表达、修饰及定位，可以作为重要候选靶标位点，用于抗玉米小斑病菌药剂的设计和筛选。

附图说明

图1为ChCDC10蛋白质的结构域预测示意图

其中：其中发现一个保守的CDC-Septin功能结构域；

图2为玉米小斑病菌ChCDC10基因的敲除策略(通过同源重组进行基因替换)示意图

其中：C4为玉米小斑病菌野生型菌株，ΔChcdc10为ChCDC10基因的缺失突变体；引物F1/R1与F2/R2分别用于扩增ChCDC10基因的上下游序列，用作敲除的同源臂；引物F/R，U/NLC37，NLC38/D用于验证突变体；

图3为玉米小斑病菌ChCDC10基因缺失突变体的PCR验证电泳图

其中：F/R，U/NLC37，D/NLC38为所用引物，；WT为玉米小斑病菌野生型菌株，8、12和14为ChCDC10基因缺失突变体；(1)为部分ChCDC10基因扩增结果，(2)为ChCDC10基因上游序列加部分潮霉素序列扩增结果，(3)为ChCDC10基因下游序列加部分潮霉素序列扩增结果；

图4为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C的培养特征对比照片；

其中：所用培养基为CMX，24℃培养，接种后7天观察拍照；WT为玉米小斑病菌野生型菌株，其它菌株编号含义如上所述。

图5为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C分生孢子生长的微观对比图片

其中：所用孢子为相应菌株接种于CMX培养基上培养7-9d所产孢子，制备孢子悬浮液，滴加与载玻片上，在显微镜下观察拍照。

图6为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C分生孢子相对产量；

其中：所用孢子为相应菌株接种于CMX培养基上培养9d所产孢子，制备孢子悬浮液，利用血球板计数器计算孢子浓度。

图7为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C分生孢子萌发率。

其中：所用孢子为相应菌株接种于CMX培养基上培养9d所产孢子，制备孢子悬浮液滴加在载玻片上，24℃保湿培养6h，测定孢子萌发率。

图8为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C子囊壳产生数量。

其中：将ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C与玉米小斑病菌菌株CB7进行杂交，于25℃下载Sach培养基上培养21d后测定子囊壳的数量。

图9为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C子囊孢子显微观察图片。

其中：将ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C与玉米小斑病菌菌株CB7进行杂交，于25℃下载Sach培养基上培养21d后获取子囊孢子并在显微镜下观察拍照。

图10为玉米小斑病菌ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C致病力分析图片。

其中：将ChCDC10基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株ΔChCDC10-C分生孢子悬浮液喷雾接种于3-4叶期玉米叶片上，接种3d后观察发病情况并拍照。

具体实施方式

为了更好地描述本发明，下面通过具体的实施例予以进一步说明，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

本发明所用的玉米小斑病菌株(Cochliobolusheterostrophus)是从田间发病玉米上采集得到的。

实施例1玉米小斑病菌ChCDC10基因的相关性分析

玉米小斑病菌ChCDC10基因是本团队利用酵母菌中的CDC基因在玉米小斑病菌中比对获得。玉米小斑病菌ChCDC10基因的开放阅读框由1197个核苷酸组成，包含2个内含子。编码的蛋白质产物由341个氨基酸组成，结构域分析发现，ChCDC10蛋白质包含一个保守的CDC-Septin功能域(见图1)。

实施例2玉米小斑病菌ChCDC10基因的敲除

1)玉米小斑病菌ChCDC10基因上下游以及潮霉素基因的扩增

采用引物F1(5'-GCCATTCCTACGTCAAAACC-3')与R1(5'-TCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTGGCAGACGGACAAGGTAAAA-3')，以玉米小斑病菌野生型菌株C4的基因组DNA为模板扩增ChCDC10基因上游888p片段，采用F2(5'-GTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTCGCGTCGATAGCAATACAG-3')与R2(5'-GACACGGCAAACACTGAAGA-3')扩增玉米小斑病菌ChCDC10基因下游884bp片段，采用引物M13F(5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3')和M13R(5'-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3')，以载体pUCATPH为模板扩增2549bp潮霉素基因。反应体系为：10mmol/LdNTPMixture，1μL；5×PCRbuffer，10μL；上下游引物各2.5μL(10μmol/mL)；模板DNA，2μL；Phusionpolymerase，0.5μL(5U)；ddH₂O，31.5μL；扩增程序为：98℃预变性2分钟，然后(1)98℃，变性20秒；(2)65℃，退火30秒；(3)72℃，延伸30秒；(4)循环30次；(5)72℃延伸10分钟。将上述3个片段共同转入玉米小斑病菌野生型菌株C4中。

2)玉米小斑病菌转化

a.玉米小斑病菌的产孢培养

从-80℃冰箱取少量玉米小斑病菌C4菌株分生孢子，滴加于CMX培养基【每升CMX培养基包含：0.1g/mL四水合硝酸钙溶液10mL，10mL溶液B，0.5mL微量元素溶液，1g酵母提取物，0.5g酶解干酪素，0.5g酸解干酪素，10g木糖，20g琼脂粉。(每升溶液B包括：20g磷酸二氢钾，25g七水合硫酸镁，15g氯化钠)(每升微量元素溶液包括：57.2mg硼酸，393mg五水合硫酸铜，13.1mg碘化钾，60.4mg一水合硫酸锰，36.8mg四水合钼酸铵，5.49g一水合硫酸锌，948.2mg六水合氯化铁)】上，置24℃培养1周，用CM液体培养基【每升CMX培养基包含：0.1g/mL四水合硝酸钙溶液10mL，10mL溶液B，0.5mL微量元素溶液，1g酵母提取物，0.5g酶解干酪素，0.5g酸解干酪素，10g葡萄糖，20g琼脂粉。(每升溶液B包括：20g磷酸二氢钾，25g七水合硫酸镁，15g氯化钠)(每升微量元素溶液包括：57.2mg硼酸，393mg五水合硫酸铜，13.1mg碘化钾，60.4mg一水合硫酸锰，36.8mg四水合钼酸铵，5.49g一水合硫酸锌，948.2mg六水合氯化铁)】刮取、收集孢子，显微镜观察，利用血球计数器调节孢子浓度为1×10⁶/mL。

b.玉米小斑病菌转化

吸取1mL孢子悬浮液于100mLCM液体培养基中，24℃振荡培养(150rpm)12-18h，离心收集菌丝于80mL酶解液(3.27g氯化钠，0.8g崩溃酶)中酶解2h，收集原生质体。将原生质体用10mLSTC溶液洗涤3次，并最终溶解于500μLSTC溶液(每100mLSTC溶液包括：21.86g山梨醇，1Mtris-HCL1mL，0.735g二水合氯化钙)中。将25mL准备好的PCR片段与100μL原生质体溶液充分混匀，加入1mLPEG溶液(每50mLPEG溶液中包括：聚乙二醇30g，1Mtris-HCL0.5mL，0.37g二水合氯化钙)。最后用1mLSTC溶液稀释，并与再生培养基混合，30℃过夜培养，每个培养皿中加入含有150μg/mL潮霉素的水琼脂10mL，30℃培养3d后挑取扩展的菌落到含有同样抗生素的CMX培养基上。

3)缺失突变体的验证

选用三对引物通过PCR扩增对转化子进行筛选。扩增结果符合如下结果的，确定为ChCDC10基因缺失突变体：上游同源臂之外基因组上的引物U(5'-ATCGACGCCGTCACTAAGTT-3')与潮霉素抗性基因的引物NLC37(5'-GGATGCCTCCGCTCGAAGTA-3')配对可以扩增到预期大小(2.6kb)的重组片段；下游同源臂之外基因组上的引物D(5'-GGGCAGAATCTTCTTTGGTG-3')与潮霉素抗性基因的引物NLC38(5'-CGTTGCAAGACCTGCCTGAA-3')配对可以扩增到预期大小(3.3kb)的重组片段；而编码区引物F(5'-ATTGTTGACAACCGCATTCA-3')与R(5'-CTCCATCTTCTGGAGCTTGG-3')无扩增条带(野生型菌株可扩增到0.6kb片段)(见图3)。结果，从转化子中筛选到2株ChCDC10基因缺失突变体，用于后续功能分析。

实施例3玉米小斑病菌ChCDC10基因缺失突变体的遗传互补

采用引物C-F1(5'-GCTCTAGATGAGCTGACCGAAGATGTTG-3')与C-R1(5'-CACTGGAACAACTGGCATGTTTGAGAAGTTTGCCGCTCT-3')，扩增玉米小斑病菌ChCDC3基因全长3112bp(包含上下游序列)，采用引物C-F2(5'-CAGGTACACTTGTTTAGAGGT CGTGTTGTTTCTCCAAGCTG-3')与C-R2(5'-GGGCAGAATCTTCTTTGGTG-3')，扩增玉米小斑病菌ChCDC3基因下游的下游序列419bp。然后以载体pⅡ99为模板，以DW69(5'-CATGCCAGTTGTTCCAGTG-3')和DW70(5'-ACCTCTAAACAAGTGTACCTG-3')为引物扩增nptⅡ基因。将三个互补片段转入ChCDC10基因缺失突变体基因组中，以遗传霉素为筛选标记，筛选遗传互补菌株ΔChCDC10-C。选用引物F/R进行PCR验证。

实施例4玉米小斑病菌ChCDC10基因在玉米小斑病菌菌丝生长过程中的作用

采用平板培养法，评价ChCDC10突变体的菌丝生长等相关表型的变异情况。取10μL待测菌株CMX孢子悬浮液(1×10⁶mL^-1)接种在固体CMX培养基的中心，24℃培养，16h光照，8h黑暗。七天后观察发现，突变体的菌落形态与野生型、互补菌株有明显差别，突变体菌落四周隆起，并且菌体边缘颜色变浅，表明ChCDC10是玉米小斑病菌菌丝正常发育所必需的基因(见图4)。

实施例5玉米小斑病菌ChCDC10基因在玉米小斑病菌分生孢子产生方面的作用

将玉米小斑病菌野生型菌株C4、ChCDC10基因缺失突变体和互补菌株分别接种于固体CMX培养基上，生长九天后，用5mL无菌水冲洗分生孢子，收集孢子悬浮液，利用血球计数板对孢子进行计数，并在显微镜下观察孢子形态。通过与野生型菌株比较，ChCDC10基因缺失突变体菌株的产孢量仅为野生型菌株的12％，分生孢子产生量明显下降(见图6)。通过显微观察发现，野生型菌株与互补菌株的分生孢子通常含有5-7个隔膜，而ChCDC10基因缺失突变体菌株的分生孢子不能形成隔膜(见图5)。将野生型菌株、ChCDC10基因缺失突变体和互补菌株的分生孢子悬浮液分别滴加于载玻片上，25℃保湿培养6h，在显微镜下观察分生孢子萌发率。结果显示，ChCDC10基因缺失突变体的分生孢子萌发率仅为野生型菌株的20％(见图7)。这些结果表明，玉米小斑病菌ChCDC10基因对于玉米小斑病菌分生孢子形成、形态以及萌发率方面有重要作用。

实施例6玉米小斑病菌ChCDC10基因在玉米小斑病菌子囊孢子产生方面的作用

将玉米小斑病菌野生型菌株C4、ChCDC10基因缺失突变体和互补菌株分别与玉米小斑病菌CB7进行对峙培养(菌株C4含有MAT1-1交配型基因，CB7含有MAT1-2交配型基因)。25℃培养21d后，观察子囊壳与子囊孢子的产生情况。通过观察发现，ChCDC10基因缺失突变体子囊壳数量仅为野生型菌株和互补菌株的50％左右，子囊壳产生量明显下降(见图8)。另外，野生型菌株产生的子囊里通常含有7-8条丝状子囊孢子，而ChCDC3基因缺失突变体不能形成正常的子囊孢子，子囊孢子呈气泡状，容易破碎(见图9)。由此可见，玉米小斑病菌ChCDC10基因对子囊壳和子囊孢子的产生有重要作用。

实施例7玉米小斑病菌ChCDC10基因在玉米小斑病菌致病力方面的作用

将玉米小斑病菌野生型菌株C4、ChCDC10基因缺失突变体和互补菌株分别接种于固体CMX培养基上，生长9d后，用吐温水冲洗分生孢子，制成浓度为5×10⁴个/mL的孢子悬浮液，接种于培养两周的玉米叶片上，每个叶片接种2mL孢子悬浮液。三天后观察发病情况。实验结果显示，与野生型菌株和互补菌株相比，ChCDC10基因缺失突变体引起的病斑面积明显变小，致病力显著下降(图10)。

序列表

发明名称：一种玉米小斑病菌ChCDC10基因及其应用

SEQ ID No:1的序列

　　　（i）序列特征：（A）长度：1197 bp；（B）类型：核苷酸；（C）链性：单链

　　　（ii）分子类型：DNA

　　　（iii）序列描述：SEQ ID No:1

1 ATGGCTGCCG CGTACCAGAA CCAGTCGCAG CCCATCTTCC CTGACAGCTA TGTCGGTTTC 61GACAGCATCA CCAAGCAGAT TGAGCGCAAG TCAATCAAGC GGGGCTTCCA GTTCAATGTC 121ATCTGTGTTG GTAAGGACTG CTATTTGAAC TGACTGTCTT GTGTACACGC CCACTAATAG 181GTGCAACCAG GCCAGACGGG TCTGGGCAAG TCAACCCTTA TCAACACGCT CTTCGCCTCG 241CACCTTATGG ACAGCAAGGG CCGCTTCCAG CCCGACGAGG AGGTCCGCAG CACTACCACC 301ATCCACCCGG TCTCACACAT CATCGAGGAA AACGGCGTGC GTCTACGCCT CAACATCGTC 361GACACCCCCG GCTACGGCGA CCTGATCAAC AACGAACGCT GCTGGGACCC CATTGTCAAG 421TACATCAAGG ACCAGCACAG TGCCTACCTC CGCAAGGAGC TCACCGCTCA ACGTGAGAGG 481TACCTCCAGG ACACGCGTAT CCACTGCTGC TTGTTCTTCA TCCAGCCATC TGGCCACGCC 541CTGAAGCCCA TTGACATTGT TGTCCTTAAG AAGCTGAGCG AGTTTGTCAA CGTTGTTCCC 601GTCATTGCCA AGAGTGACAG CTTGACGCTG GAGGAGCGTG CTGAGTTCAA GCACCGGATA 661AAGGAGGAGT TCCAGTTCCA CAACCTGCGC ATGTACCCCT ACGACAACGA GGAGGATGAC 721AGCGAGGAAG TCCAGGCAAA GCAGGCCATC AAGGTATGCT GGAAGTGCGC TAGTATTTGA 781GACGGGCAAA CAGCTAACAT GTAGCAGGAG CTCTTGCCCT TTGCCGTTGT CGGTTCCGAG 841AGGACTGTTG TTGTTAATGG CAAGAACGTC CGTGGTCGTC AGAACAAGTG GGGTATTATC 901AATGGTGAGT AACAGCGTAC CTGTCTTTTT TTTCTCGCGC AAATGGACTG ACGCGTCGTA 961GTCGAGGACG AGAACCACTG CGAATTCGTA TATCTCCGCA ACTTCCTTAC CCGCACTCAC 1021TTGCAAGACC TGATCGAGAC GACCGCACAA ATCCACTACG AATCGTTCCG TGCTAAGCAG 1081CTGCTTGCGC TCAAGGAGAG CAGTGCCCAC GGAGGTCACT CCTCGCGCCC CATTTCACCT 1141GCCGCTGATC GCGAGCTTAG CAGGAGCAGC CAGCGCATGA CCATGAACGG GTACTAG

SEQ ID No:2的序列

　　　（i）序列特征：（A）长度：341个氨基酸；（B）类型：氨基酸；（C）链性：单链

　　　（ii）分子类型：多肽

　　　（iii）序列描述：SEQ ID No:2

1 MAAAYQNQSQ PIFPDSYVGF DSITKQIERK SIKRGFQFNV ICVGQTGLGK STLINTLFAS 61HLMDSKGRFQ PDEEVRSTTT IHPVSHIIEE NGVRLRLNIV DTPGYGDLIN NERCWDPIVK 121YIKDQHSAYL RKELTAQRER YLQDTRIHCC LFFIQPSGHA LKPIDIVVLK KLSEFVNVVP 181VIAKSDSLTL EERAEFKHRI KEEFQFHNLR MYPYDNEEDD SEEVQAKQAI KELLPFAVVG 241SERTVVVNGK NVRGRQNKWG IINVEDENHC EFVYLRNFLT RTHLQDLIET TAQIHYESFR 301AKQLLALKES SAHGGHSSRP ISPAADRELS RSSQRMTMNG Y

Claims

1.一种玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)ChCDC10基因，其特征在于：其DNA序列如SEQ ID No:1所示。

2.一种玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)ChCDC10基因编码的蛋白质，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

3.一种权利要求1所述玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)ChCDC10基因在调控玉米小斑病菌分生孢子与子囊孢子形成以及致病力中的应用。

4.一种权利要求1所述玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)ChCDC10基因作为靶标在设计和筛选抗玉米小斑病药剂中应用。

5.一种权利要求2所述ChCDC10基因编码的蛋白质在玉米小斑病菌分生孢子与子囊孢子形成与致病力发生缺陷中的应用。