CN110241239A - 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒 - Google Patents

一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN110241239A
CN110241239A CN201910550681.1A CN201910550681A CN110241239A CN 110241239 A CN110241239 A CN 110241239A CN 201910550681 A CN201910550681 A CN 201910550681A CN 110241239 A CN110241239 A CN 110241239A
Authority
CN
China
Prior art keywords
enterobacter cloacae
detection
sequence
seq
enterobacter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910550681.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110241239B (zh
Inventor
孙泽玮
陈文静
郑良荣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN201910550681.1A priority Critical patent/CN110241239B/zh
Publication of CN110241239A publication Critical patent/CN110241239A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110241239B publication Critical patent/CN110241239B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒，包含一种特异性靶向阴沟肠杆菌rpoB基因的向导RNA、扩增引物对、水化TwistAmp basic kit反应干燥球、LbCas12a蛋白、单链DNA探针(ssDNA)、Ribonuclease Inhibitor和缓冲液。使用该试剂盒进行阴沟肠杆菌检测，检测的特异性高，可以将阴沟肠杆菌与其他肠杆菌属细菌，包括产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌区分开来。同时，使用本发明所述RNA序列进行检测，耗时在1小时左右，不需要PCR仪，对设备要求低，显著低于传统的细菌培养法或PCR测序法，临床实用价值大。

Description

一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒
技术领域
本发明属于致病菌检测领域，涉及一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒。利用此试剂盒可以进行阴沟肠杆菌快速检测。
背景技术
阴沟肠杆菌是人体感染的革兰阴性菌中常见菌群，给患者及社会带来巨大负担。传统的检测方法是进行细菌培养或PCR联合测序，但细菌培养需要5-7天的时间，而PCR常由于缺乏特异性引物，无法将阴沟肠杆菌与其他肠杆菌属细菌区分，故而需要联合一代测序才能鉴定，成本高，需要数天时间才能出结果。在这期间临床医师由于没有获得检测结果，只能凭经验用药，常常导致疾病治疗的延误。因而，如何快速检测阴沟肠杆菌显得尤为重要。近期，张峰等人发现，LbCas12a蛋白可用于致病菌的检测，只需要1小时左右即可完成检测，省时省力，灵敏度高。具体的原理为，该系统包含LbCas12a蛋白、致病菌DNA、向导RNA、两端分别带荧光基团和淬灭基团的单链DNA(ssDNA)。其中，致病菌DNA序列需要包含TTTN的PAM结构，同时该序列需要具备特异性，即区别于别的致病菌。而向导RNA序列为致病菌特异性靶向序列中TTTN后的一段序列，长度为20-24个碱基。在向导RNA引导下，LbCas12a蛋白可结合到致病菌特异性DNA序列上，随后，LbCas12a蛋白可表现出Dnase活性，从而切割两端分别带荧光基团和淬灭基团的单链DNA，使得荧光基团和淬灭基团分离，出现荧光，从而指示致病菌的存在。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒，包含一种特异性靶向阴沟肠杆菌rpoB基因的向导RNA、RPA扩增引物对、水化TwistAmp基础试剂盒(basic kit)反应干燥球、LbCas12a蛋白、单链DNA探针(ssDNA)、RNA酶抑制剂(Ribonuclease Inhibitor)和缓冲液。其中特异性靶向阴沟肠杆菌rpoB基因的向导RNA，其核苷酸序列如SEQ No.1所示，能特异性靶向阴沟肠杆菌，而不能靶向产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌，可用于阴沟肠杆菌的检测。RPA扩增引物对RPA-F和RPA-R，序列如SEQ No.2和SEQ No.3所示。单链DNA探针的序列如SEQ No.6所示。
本发明的另一个目的是提供所述试剂盒进行阴沟肠杆菌快速检测的方法，通过以下步骤实现：
具体步骤为：取1ml样品，95-98摄氏度加热5min，取1μl作为检测样品，加入14.75μl水化TwistAmp basic kit反应干燥球(TwistDx公司)，0.9μl 10mM RPA-F(序列为SEQNo.2)和RPA-R(序列为SEQ No.3)，0.375μl Ribonuclease Inhibitor(Takara公司)，3.5μlbuffer2.1(NEB公司)，1000nM向导RNA(序列为SEQ No.1)，250nM Cas12a(NEB公司)，200nM单链DNA探针(上海生工，序列为SEQ No.6)，加水补至25μl。37摄氏度反应25-45min，通过荧光显微镜下直接观察检测体系荧光变化，进行阴沟肠杆菌检测；发黄绿色荧光说明有阴沟肠杆菌污染，不发光说明没有阴沟肠杆菌污染。本方法可以将阴沟肠杆菌与其他肠杆菌属细菌，包括产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌区分开来。
其中：
所述单链DNA探针ssDNA序列(SEQ No.6)为：5’6-FAM-TTATT-3’BHQ1，由上海生工合成。
使用本发明所述检测试剂盒进行阴沟肠杆菌感染检测的优势在于：(1)与传统细菌培养或PCR联合一代测序法比较，传统方法需要数天时间，本方法只需要1小时即可完成检测。同时，本方法采用RPA法扩增，只要恒温水浴锅即可完成反应，不需要PCR仪，对设备要求低。(2)使用本发明所述检测试剂盒进行检测时，只有阴沟肠杆菌呈阳性反应，而其他种类的肠杆菌属细菌，包括常见的产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌均呈阴性反应。故而，本发明所述检测试剂盒具有高特异性。
附图说明
图1为阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌rpoB基因序列比对图。
图2为样品荧光显微镜下检测结果，从1号-4号管样品加入的是各肠杆菌属细菌菌株，分别为阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌。其中1号管有黄绿色荧光，呈阳性反应。2-4号管无黄绿色荧光，呈阴性反应。
图3为使用PCR法扩增不同种属肠杆菌，得到大小相似的条带，无法区分出阴沟肠杆菌。
图4为使用基于本发明所述向导RNA的检测法与传统PCR联合测序法，实验耗时比较图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：肠杆菌属细菌rpoB基因序列比对
如图1所示，在阴沟肠杆菌rpoB基因序列中，本发明所述向导RNA序列(选中部分)的5’端为TTTN的PAM结构。该向导RNA序列在产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌中没有完全一致的序列，均有数个碱基的差异。且在产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌中的同源序列5’端均无TTTN的PAM结构，故而，使用本向导RNA，Cas12a蛋白无法靶向至产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌，因而，在检测时，只有阴沟肠杆菌可呈现阳性反应，其余肠杆菌属细菌呈阴性反应，可用于阴沟肠杆菌的特异性检测。
实施例2：本发明所述向导RNA特异性判定，步骤如下：
(1)准备阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌标准菌株；
(2)取1ml待测样品，98摄氏度加热5min，吸取1μl作为检测样品；
(3)准备反应体系，反应体系为25μl，包括1μl检测样品，14.75μl水化TwistAmpbasickit反应干燥球(TwistDx公司)，0.9μl 10mM RPA-F(序列为SEQ No.2)和RPA-R(序列为SEQ No.3)，0.375μl Ribonuclease Inhibitor(Takara公司)，3.5μl buffer2.1(NEB公司)，1000nM向导RNA(序列为SEQ No.1)，250nM Cas12a(NEB公司)，200nM单链DNA探针(上海生工)，加水补至25μl；
(4)37摄氏度恒温反应30min；
(5)反应结束后，将PCR管置于荧光显微镜下直接观察，有荧光证明样品中存在阴沟肠杆菌，没有荧光则表示无阴沟肠杆菌污染。
检测结果如图2所示，样本1为阴沟肠杆菌，观察到荧光，呈阳性反应。其余样本非阴沟肠杆菌，无荧光，呈阴性反应。
实施例3:基于本发明所述向导RNA的检测法与传统PCR法特异性及实验耗时比较
1.基于本发明所述向导RNA的检测法，步骤如下：
(1)准备阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、杰高维肠杆菌、阪崎肠杆菌标准菌株；
(2)取1ml待测样品，98摄氏度加热5min，吸取1μl作为检测样品；
(3)准备反应体系，反应体系为25μl，包括1μl检测样品，14.75μl水化TwistAmpbasickit反应干燥球(TwistDx公司)，0.9μl 10mM RPA-F(序列为SEQ No.2)和RPA-R(序列为SEQ No.3)，0.375μl Ribonuclease Inhibitor(Takara公司)，3.5μl buffer2.1(NEB公司)，1000nM向导RNA(序列为SEQ No.1)，250nM Cas12a(NEB公司)，200nM单链DNA探针(上海生工)，加水补至25μl；
(4)37摄氏度恒温反应30min；
(5)反应结束后，将PCR管置于荧光显微镜下直接观察，有荧光证明样品中存在阴沟肠杆菌，没有荧光则表示无阴沟肠杆菌污染；
(6)检测结果如图2所示，样本1为阴沟肠杆菌，观察到荧光，呈阳性反应。其余样本非阴沟肠杆菌，无荧光，呈阴性反应。
2.传统PCR法实验步骤如下：
(1)设计引物，PCR引物序列为RPA引物5’端起始的20个碱基，使获得的PCR产物与RPA产物序列相同，引物对序列见SEQ No.4和SEQ No.5；
(2)取1ml待测样品，98摄氏度加热5min，吸取1μl作为检测样品；
(3)配置反应体系，包含12.5μl DNA聚合酶预混液(上海生工)，1μl正向引物，1μl反向引物，1μl待测样品，9.5μl水；
(4)PCR反应；
(5)琼脂糖凝胶电泳；
(6)实验结果如图3所示，所有的样本均扩增出163bp大小片段，无法区别阴沟肠杆菌与其他种类肠杆菌属细菌。
如上所述，PCR法无法区分肠杆菌属细菌种类，故需要进行测序比对，实验成本高，用时长，可能延误病情。
如图4所示，使用基于本发明所述检测试剂盒的检测方法特异性高，耗时短，仅为1小时左右，而使用PCR法，由于不同种肠杆菌序列高度同源，在一段序列中差异常常仅为数个碱基，设计的引物常常所有菌株都能扩增，所得产物大小接近，无法通过琼脂糖凝胶区分，故而需要进行测序，实验耗时在2天左右。本发明所述方法耗时显著低于PCR组。
序列表
<110> 浙江大学
<120> 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒
<130> 1
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 1
guuaucaacg guacugagcg ugu 23
<210> 2
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 2
gaaggcactg ttaaagacat taaagaacaa gaa 33
<210> 3
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 3
gtgttttacc tttatcgctg tcgaagaaga c 31
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 4
gaaggcactg ttaaagacat ta 22
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 5
gtgttttacc tttatcgctg tc 22
<210> 6
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列(Unknown)
<400> 6
ttatt 5

Claims (4)

1.一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒，其特征在于，由特异性靶向阴沟肠杆菌rpoB基因的向导RNA、扩增引物对、水化TwistAmp基础试剂盒反应干燥球、LbCas12a蛋白、单链DNA探针、RNA酶抑制剂和缓冲液组成。
2.根据权利要求1所述的一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒，其特征在于，其中特异性靶向阴沟肠杆菌rpoB基因的向导RNA的核苷酸序列如SEQ No.1所示，RPA扩增引物对的序列如SEQ No.2和SEQ No.3所示，单链DNA探针的序列如SEQ No.6所示。
3.根据权利要求1所述的阴沟肠杆菌检测的试剂盒进行阴沟肠杆菌快速检测的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：取1ml样品，95-98摄氏度加热5min，取1μl作为检测样品，加入14.75μl水化TwistAmp基础试剂盒反应干燥球，0.9μl10mM RPA-F和RPA-R，0.375μlRNA酶抑制剂，3.5μlbuffer2.1，1000nM向导RNA，250nM LbCas12a，200nM单链DNA探针，加水补至25μl，37摄氏度反应25-45min，通过荧光显微镜下直接观察检测体系荧光变化，进行阴沟肠杆菌检测，发黄绿色荧光说明有阴沟肠杆菌污染，不发光说明没有阴沟肠杆菌污染。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中RPA-F的序列如SEQ No.2所示，RPA-R序列如SEQ No.3所示，向导RNA序列如SEQ No.1所示。
CN201910550681.1A 2019-06-24 2019-06-24 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒 Expired - Fee Related CN110241239B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910550681.1A CN110241239B (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910550681.1A CN110241239B (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110241239A true CN110241239A (zh) 2019-09-17
CN110241239B CN110241239B (zh) 2020-04-10

Family

ID=67889124

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910550681.1A Expired - Fee Related CN110241239B (zh) 2019-06-24 2019-06-24 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110241239B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111411162A (zh) * 2020-04-15 2020-07-14 深圳市人民医院 一种对神户肠杆菌种水平的快速检测方法
CN113481310A (zh) * 2021-07-27 2021-10-08 河北农业大学 一种检测生姜腐烂病病原的lamp引物组、lamp试剂盒及其应用
CN113957164A (zh) * 2021-10-29 2022-01-21 上海市质量监督检验技术研究院 一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法及其试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101407837A (zh) * 2007-10-12 2009-04-15 天津生物芯片技术有限责任公司 用于血液致病菌检测的基因芯片和检测用试剂盒
CN109251963A (zh) * 2018-11-12 2019-01-22 复旦大学 恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒
CN109680081A (zh) * 2018-12-29 2019-04-26 深圳市刚竹医疗科技有限公司 检测多种病原体的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101407837A (zh) * 2007-10-12 2009-04-15 天津生物芯片技术有限责任公司 用于血液致病菌检测的基因芯片和检测用试剂盒
CN109251963A (zh) * 2018-11-12 2019-01-22 复旦大学 恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒
CN109680081A (zh) * 2018-12-29 2019-04-26 深圳市刚竹医疗科技有限公司 检测多种病原体的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTOPHE MOLLET等: "《rpoB sequence analysis as a novel basis for bacterial identification》", 《MOLECULAR MICROBIOLOGY》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111411162A (zh) * 2020-04-15 2020-07-14 深圳市人民医院 一种对神户肠杆菌种水平的快速检测方法
CN113481310A (zh) * 2021-07-27 2021-10-08 河北农业大学 一种检测生姜腐烂病病原的lamp引物组、lamp试剂盒及其应用
CN113957164A (zh) * 2021-10-29 2022-01-21 上海市质量监督检验技术研究院 一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法及其试剂盒
CN113957164B (zh) * 2021-10-29 2023-05-23 上海市质量监督检验技术研究院 一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法及其试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN110241239B (zh) 2020-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110079586A (zh) 一种用于金黄色葡萄球菌检测的试剂盒
CN110241239A (zh) 一种用于阴沟肠杆菌检测的试剂盒
Kumar et al. Rapid multiplex PCR assay for the simultaneous detection of the Brucella Genus, B. abortus, B. melitensis, and B. suis
CN107686863A (zh) 环介导等温扩增技术检测三种泌尿生殖道支原体的方法
CN110157821B (zh) 一种用于人葡萄球菌检测的试剂盒
CN110241237A (zh) 一种用于产气肠杆菌检测的试剂盒
CN104830988A (zh) 鼠伤寒沙门氏菌特异性lamp引物组及lamp检测方法
ITVT20110002A1 (it) Metodo di determinazione dell&#39;origine di fluidi o tracce biologiche e kit di reagenti per la loro identificazione in un campione.
CN110408727A (zh) 一种检测j亚群禽白血病病毒的cpa引物组、cpa核酸试纸条试剂盒及其应用
CN110129462A (zh) 一种用于溶血葡萄球菌检测的试剂盒
CN110317890A (zh) 一种用于粪肠球菌检测的试剂盒
CN110241238A (zh) 一种用于化脓链球菌检测的试剂盒
CN110157822A (zh) 一种用于表皮葡萄球菌检测的试剂盒
CN110144416B (zh) 一种用于沃氏葡萄球菌检测的试剂盒
CN110129463B (zh) 一种用于头状葡萄球菌检测的试剂盒
CN107723375B (zh) 一种检测立氏立克次体的rpa方法、其专用引物和探针及用途
CN110358848A (zh) 一种用于屎肠球菌检测的试剂盒
CN111088377B (zh) 金黄色葡萄球菌的快速恒温检测方法、引物组及应用
CN110331219A (zh) 一种用于铜绿假单胞菌检测的试剂盒
CN107385084A (zh) 黄芪多糖在环介导等温扩增中的应用及其试剂盒和检测方法
JP2006333785A (ja) ＬＡＭＰ法を用いたクロストリディウム・ディフィシルｔｏｘｉｎＢ遺伝子検出方法およびこの方法に用いるプライマーセット
CN112063734A (zh) 一种采用实时荧光定量pcr技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法
CN108384833A (zh) 一种检测2型猪链球菌的rpa方法、其专用引物和探针及用途
CN107723376B (zh) 一种检测普氏立克次体的rpa方法、其专用引物和探针及用途
JP2018126089A (ja) ウレアプラズマ属細菌検出用プライマーセット及びその使用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20200410

Termination date: 20210624