CN110229801A - 一种控制水稻叶片衰老的基因及其编码的蛋白质 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种控制水稻叶片衰老的基因ltn3，该基因由SEQ ID No：2所示的核苷酸序列组成；本发明还公开了该基因编码的蛋白质，所述蛋白质由SEQ ID No：1所示的氨基酸序列组成。本发明为水稻高产育种提供了一个调控叶片衰老的的功能型基因ltn3，该基因通过调控叶片衰老延迟提高了生物光合作用的合成量；同时该基因还能调控提高水稻叶片中叶绿素的含量，提高了光合效率，从而促进了水稻产量的提高；ltn3基因还影响叶尖枯萎，有助于对水稻叶尖枯萎遗传机制的研究。

Description

一种控制水稻叶片衰老的基因及其编码的蛋白质
技术领域
本发明属于水稻基因工程领域，具体涉及一种控制水稻叶片衰老的基因，还涉及该基因编码的蛋白质。
背景技术
叶片是植物进行光合作用的主要器官，其发育直接关系到产量和品质。叶片的衰老是植物叶片发育过程中一个极其重要的生理过程，这一过程的失控将会导致衰老程序紊乱，从而表现出早衰或者衰老延迟。叶片保绿突变体是指植物成熟期后期叶片衰老速率相对延迟，叶色保持时间较长的一类突变体，能促进产量的提高。
目前已知的水稻叶片保绿基因很少，且以非功能型为主，而只有功能型保绿相关基因对于水稻产量才具有促进作用，因此发掘更多水稻保绿突变体对于选育功能性保绿的高产水稻品种具有重要价值。
发明内容：
本发明人从籼稻品种宜香1B为遗传背景的EMS(甲基磺酸乙酯)诱变库中筛选到一个具有叶色深绿、叶片衰老延迟和叶尖枯萎表型的突变体ltn3。研究发现该突变体受隐性单基因控制。本发明是在上述意外发现的基础上完成的。
本发明目的在于提供一种控制水稻叶片衰老的蛋白，所述的蛋白由如(1)或(2)所示的氨基酸序列组成：
(1)SEQ ID No：1所示的氨基酸序列；
(2)在(1)所限定的氨基酸序列中添加、替换或缺失一个或几个氨基酸形成的且具有调控叶片衰老功能的蛋白质。
本发明还提供了编码上述蛋白的基因，所述的基因由如下(a)或(b)所示的核苷酸序列组成：
(a)SEQ ID No：2所示的核苷酸序列；
(b)在(a)所限定的核苷酸序列中添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的且编码具有调控叶片衰老功能的蛋白质的核苷酸序列。
本发明还提供了含有上述基因的表达载体。
所述的载体为PCAMBIA2300等。
本发明还提供了含有上述基因的转化体。
所述转化体的宿主细胞为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。
本发明还提供了上述基因在调控水稻叶片衰老上的应用。
本发明还提供了上述基因在调控水稻叶尖枯萎上的应用。
本发明还提供了上述基因在调控水稻叶片衰老和叶尖枯萎上的应用。
本发明还提供了一种调控水稻叶片衰老的方法，包括用上述基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。
本发明具有的优点或技术效果：本发明为水稻高产育种提供了一个新的控制叶片衰老延迟的功能型基因ltn3，该基因通过调控叶片衰老的延迟来提高生物光合作用的合成量，从而实现水稻产量的提高；ltn3基因还同时影响水稻叶片中叶绿素的含量，其叶片中叶绿素的高含量能提高光合作用的效率，从而促进水稻产量的提高；ltn3基因还影响叶尖枯萎，有助于对水稻叶尖枯萎机制的研究。综上所述，本发明的ltn3基因不仅对于水稻的增产有重要的意义，而且通过对ltn3基因的功能解读，有助于进一步阐明植物特别是禾本科植物叶片衰老的遗传机制，为创建水稻新种质打下基础。
附图说明
图1为突变体ltn3及其野生型苗期植株对比照片；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图2为突变体ltn3及其野生型分蘖期植株对比照片；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图3为突变体ltn3及其野生型成熟期植株对比照片；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3；ltn302428表示将突变体ltn3与02428杂交后代中表现与突变体相似突变性状的株系。
图4为突变体ltn3及其野生型苗期叶片对比照片；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3；编号1-3分别表示宜香1B植株从上往下不同部位的叶片；编号4-6分别表示ltn3植株从上往下不同部位的叶片。
图5为突变体ltn3及其野生型分蘖期叶片对比照片；WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3；编号1-3分别表示宜香1B植株从上往下不同部位的叶片；编号4-6分别表示ltn3植株从上往下不同部位的叶片。
图6为突变体ltn3及其野生型成熟期叶片对比照片；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3；ltn302428表示将突变体ltn3与02428杂交后代中表现突变体相似突变性状的株系。其中编号1-3、4-6和7-9分别表示宜香1B、ltn3和ltn302428植株从上往下不同部位的叶片。
图7为突变体ltn3及其野生型株高对比柱形图；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图8为突变体ltn3和及其野生型分蘖数对比柱形图。WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图9为突变体ltn3和及其野生型结实率对比柱形图。WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图10为突变体ltn3和及其野生型单株粒重对比柱形图；其中WT表示野生型宜香1B，ltn3表示突变体ltn3。
图11为本发明基因初步定位示意图；其中Chr.1表示1号染色体；Rec表示交换单株，0，6，8等数字表示交换单株的数量，n表示定位中使用的F2作图群体中选取的隐性单株数量；RM8068等和Indel.1等分别表示分子标记的名称。
图12为用四引物检测突变位点的电泳图谱；其中M为Marker，1为野生型宜香1B，2为突变体ltn3，3为F2群体中的显性单株，4为F2群体中的隐性单株，5和6为F2群体中的显性单株。
图13为突变体位点的共分离分析电泳图谱；其中BC1F2群体中显性和隐性单株进行分析，M为Marker，1和2为BC1F2群体中显性单株，3-10为BC1F2群体中隐性单株。
图14为基因功能互补试验植株表型照片；其中WT为野生型宜香1B，ltn3为突变体ltn3，CP-LTN3为基因功能互补阳性植株。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的解释和说明，但是不对本发明构成任何限制。如无特殊说明，以下实施例中所用方法均为本领域常规方法，或按照所购试剂盒的说明书进行；所用实验药品均为常规药品。
实施例1本发明突变体ltn3的表型鉴定与遗传分析
1、水稻突变体ltn3的获得：
本发明人在以宜香1B为背景构建的EMS(甲基磺酸乙酯)诱变库中筛选到一个表现为叶色深绿、叶片衰老延迟和叶尖枯萎表型的突变体，该材料经过多代自交种植，性状能稳定遗传。将这种同时表现出“叶色深绿、叶片衰老延迟和叶尖枯萎”的突变体材料命名为ltn3(eaf tip necrosis-stay green3)。
(二)突变体ltn3突变性状的观察
(1)在四川农业大学温江校区试验田中将突变体ltn3和宜香1B同时相邻种植，并分别在苗期，分蘖期和成熟期进行观察、拍照。
结果发现(见图1-6)从4叶期开始突变体ltn3的叶片颜色比野生型深，并且表现叶尖枯萎；与野生型相比，成熟后期突变体ltn3叶片衰老的速度明显减缓，即突变体叶片持绿期比野生型的叶片持绿期长。
(2)突变体叶绿素a和b含量测定
参照周宁等的方法测定SPAD值(中国水稻科学，2017,31(5)：524-532)。在抽穗后7天、14天、21天、28天和35天分别取突变体和野生型的剑叶叶片，每个叶片取上、中、下3个不同部位，利用日本产的SPAD－502叶绿素仪对叶绿素进行测定，每个部位测定重复6次，取平均值。
结果(见表1)突变体ltn3在抽穗后35天叶片上、中、下部的SPAD值均明显高于野生型宜香1B，说明突变体的叶绿素含量高于野生型，其次，说明突变体叶片衰老速率延迟。
表1突变体ltn3和野生型抽穗后不同时间叶绿素含量测定SPAD值
(3)突变体株高、分蘖数、结实率和单穗粒重测定
在成熟期，从突变体和野生型小区中随机挑选5株发育正常的单株，各去边行，分别调查株高、分蘖数、结实率和单株粒重。
结果突变体ltn3的株高比野生型矮(见图7)；突变体ltn3的分蘖数明显比野生型多(见图8)；突变体ltn3的结实率明显比野生型高(见图9)；突变体ltn3的单株粒重明显比野生型高(见图10)；上述结果说明突变体ltn3叶片衰老延迟能促进水稻产量的提高。
(三)突变体ltn3突变性状的遗传分析试验
将突变体ltn3与宜香1B进行正反杂交(ltn3×宜香1B，宜香1B×ltn3)，分别获得F1代，观测F1代表型。结果F1代植株表型和野生型相似，说明该性状受隐性基因控制。将F1代自交得F2代，统计F2代群体的分离比例，并进行卡方检验。
结果(见表2)F2群体中野生型和突变体表型植株数量的分离比为3:1，符合孟德尔单隐性基因的分离比，说明突变体ltn3的突变性状受单隐性基因控制。
表2突变体ltn3的遗传分析结果
实施例2本发明突变体ltn3基因的初步定位
(1)、首先组建一个定位群体，将突变体ltn3与粳稻02428杂交构建F2代群体，用于初步定位。
(2)、近等基因池构建
将突变体ltn3与粳稻02428杂交得到的F2群体，采用BAS法进行基因定位。首先，随机选取10份突变体ltn3单株叶片和10份02428单株叶片，分别等量混合提取DNA建池，得到2个亲本DNA池，用于筛选亲本间多态性分子标记。在突变体ltn3与02428杂交得到的F2群体中选10份具有突变体表型的单株叶片和10份具有野生型单株的叶片，分别等量混合提取DNA建池，得到1个显性混池和1个隐性混池，用于突变性状与水稻染色体的连锁分析。最后，在突变体ltn3与02428杂交得到的F2群体中选择168个具有突变体表型的单株叶片，采用改进CTAB法分单株提取DNA，用于进行基因定位。
(3)、定位引物合成和基因定位
先用平均分布于水稻12条染色体上的512对SSR引物(具体序列详见http://www.gramene.org/bd/markers)、分别以2个亲本池的DNA为底物进行PCR扩增，结果在突变体ltn3与02428基因组之间筛选出具有多态性的引物211对；随后用筛选出的211对引物检测显性混池和隐性混池，以及突变体ltn3与02428构建的F2群体中的隐性单株，进行基因初步定位；在已初定位的区间内，依据(http://www.gramene.org)网站公布的9311和日本晴DNA序列之间的差异序列，设计Indel引物I403-3和I403-2d等(见表3)，继续检测近等基因池和突变体ltn3与02428构建的F2群体中的168个隐性单株，进行定位。
其中PCR反应体系(20uL)：Taq酶(5U/uL)0.2uL，Primer(10mmol/L)2uL，dNTP(2.5mmol/L)0.3uL，DNA模板(20-100ng/μL)2uL，10×Buffer(25mM)2uL，ddH2O 13.5uL。PCR反应程序：95℃5min；95℃30s，56℃30s，72℃1min，30个循环；72℃10min，12℃1min。将PCR扩增产物在3.0％的琼脂糖凝胶、恒压150-180V条件下电泳1.0-2.0h左右，用凝胶成像系统成像并保存记录。
表3本试验所使用的PCR引物
利用作图群体F2中的显性单株和隐性单株构建的显性和隐性DNA混池对1号染色体的分子标记进行筛选，首先发现分子标记RM8068和RM1196存在连锁关系。由于这两个标记物理距离很远，所以就从这个两个标记往中间选择标记对F2群体的隐性单株进行连锁关系分析，结果发现越靠近中部的分子标记交换率逐步减少。用同样的方法进行分析，发现分子标记Indel.1,Indel.2,Indel.3,Indel.4,Indel.5,Indel.6,Indel.7,Indel.8,Indel.9和RM8004的交换单株只有15个，12个,0个，1个，1个，1个，1个，3个，5个，6个，6个，说明候选基因与Indel.3共分离，突变基因被定位在标记Indel.2和Indel.4之间。
通过用MAPMARKER3.0软件对F2分离群体中分子标记和突变性状的分离数据进行连锁分析，再将重组值转化为遗传图距(cM)。
结果(见图11)第1号染色体的短臂端两个Indel标记Indel.2和Indel.4均与候选基因有连锁关系，遗传距离分别为0.2cM和0.4cM。
(4)、候选基因精细定位和基因预测
将突变体ltn3与宜香1B之间构建的BC1F2代群体用于MutMap测序进行基因精细定位。在BC1F2群体中收集20个突变体表型的单株叶片等量混合，和宜香1B一起送交北京诺禾致源科技有限责任公司分别进行全基因组重测序(测序深度20×)。结果在第1号染色体定位区间内共分离标记Indel.2附近发现一个SNP指数为1的SNP，位于基因LOC_Os01g19170的外显子区域。对ltn3与宜香1B材料中的候选基因进行测序，以LOC_Os01g19170为参考序列，利用DNAMAN软件进行比对发现ltn3在LOC_Os01g19170基因(基因全长为1512bp，其编码503个氨基酸)的第649位碱基C(CAG)突变为T(TAG)(其基因序列见SEQ ID No：2，其编码的蛋白的氨基酸序列见SEQ ID No：1)，导致终止密码提前。
为了验证突变位点与ltn3突变性状是否存在共分离关系，在突变位点前后200bp的序列范围内设计四引物。以ltn3与02428构建的F2群体中收集的50个突变表型和50个正常单株的DNA为底物，以四引物为引物进行PCR扩增，然后进行电泳分析。所述的四引物序列分别是：
F1(C allele):CTCATCGACGGCAAGGTCC；
R1(T allele):GCAGGGAAGATCCCACCATTTATA；
F2:CGGTCGCTCGTTCCTGATC；
R2:ACCACTGGGCTGTCACATGG。
本实验设计的四引物将扩增出3种条带，产物长度分别是377bp，220bp(突变位点是T，突变型)，200bp(突变位点是C，野生型)。四引物PCR产物电泳结果(见图12)表明野生型与突变体，显性和隐性有20bp的差异，说明该四引物可以进行共分离分析。随后利用四引物对BC1F2群体中显性和隐性单株进行分析，结果(见图13)观察到显性单株表现为200bp或220bp带型，以200bp为主，220bp带型的存在是因为该显性单株处于杂合状态；而隐性单株均为220带型，说明突变位点与突变性状共分离。
综合上述基因定位、突变位点测序、共分离分析，初步认为LOC_Os01g19170就是候选基因，将该基因命名为ltn3。
实施例3本发明突变体候选基因的基因功能互补试验
(一)试验材料
本试验所用大肠杆菌DH5α和农杆菌EHA105菌株购自于全式金生物技术有限公司。
(二)试验方法
1、基因功能互补载体PCAMBIA2300-LTN3载体的构建。
(1)候选基因的扩增。
以野生型宜香1B中候选基因(LOC_Os01g19170)的cDNA、DNA为模板，分别扩增出该基因5端上游2000bp、CDS区、3端下游1000bp三个目的片段，琼脂糖凝胶电泳胶回收纯化。
按照高保真DNA扩增试剂盒(南京诺唯赞生物科技有限公司)提供的方法进行PCR反应。
(2)PCAMBIA2300载体质粒制备与重组链接
将本实验室储存PCAMBIA2300载体质粒分别用KpnI、EcoR1酶进行双酶切。将所得酶切片段进行3％琼脂糖凝胶电泳，并选用OMEGA胶回收试剂盒进行回收纯化获得线性化的载体片段备用。
利用快速重组连接试剂盒(南京诺唯赞生物科技有限公司)提供的反应体系分别加入纯化后的目的基因片段和线性化载体，按照方法说明进行载体链接反应。
(3)反应体系转化
取上述反应产物20μl加入到200μl已经解冻的DH5α感受态细胞中，轻轻用枪轻轻吸打混匀，冰浴30min，并在42℃上热激90秒，冰浴2min，冰加入900μl的LB液体培养基中，37℃摇菌4h至菌液OD值为0.6～0.8左右为宜。取100μl的菌液加入含有卡纳抗生素的固体培养基中，置于培养箱中倒置37℃过夜培养。
(4)单克隆鉴定和质粒提取
同时进行菌落PCR和双酶切验证方法。用无菌牙签挑取单克隆菌落至LB液体培养基中混匀，并取1μl为模板，以基因特异性引物进行扩增，并送往擎科生物有限技术公司进行片段测序，将剩余的阳性菌液转入包含卡纳抗生素的LB液体培养基中扩大培养，并提取质粒。选用全式金质粒快速提取试剂盒对菌液进行质粒提取，得到PCAMBIA2300-LTN3质粒。
2、农杆菌转化
(1)农杆菌化学转化法
按照一个质粒：50ul感受态细胞从-80℃拿出来时快速放手心化冻；将构建好的PCAMBIA2300-LTN3质粒0.4～1ug加入到50ul感受态细胞中，冰上放置30min；液氮中冷冻2min；37℃水浴2min,溶化细胞；立即加入5倍体积的无抗生素LB液体培养基，在28℃、170rpm下摇床培养2～3hr；7000rpm离心2分钟，在100ul LB液体培养基中悬浮细胞；涂在利福平加卡那抗性板，吹干，28℃培养2-3天；用潮霉素分子标记Pltn3-1引物进行菌液PCR检测，将能扩增出目的条带的阳性农杆菌单克隆，加入甘油作为保护剂，置于-80℃保存备用。
(2)农杆菌浸染法转化水稻
(a)愈伤组织的诱导：先用75％酒精将突变体ltn3种子消毒1分钟，用无菌水漂洗3次，然后用40％的次氯酸钠漂洗30min，再用无菌水冲洗5次，放置于带滤纸的培养皿中滤干，用镊子接种于NMB培养基上，于28℃、光照条件下培养7天。每7天继代一次。继代2～3次后，挑取从种子上生长出的良好愈伤组织，把它们继代于NMB培养基上，于28℃、黑暗条件下培养4天。
(b)农杆菌菌株的活化：将(1)中-80℃保存的30ul农杆菌加入3mL含有利福平和卡那霉素的YEP液体培养基中，于28℃下振荡培养14h；再取其中1mL于含有利福平和卡那霉素的50mLYEP液体培养基中，28℃再振荡培养4h，得活化的农杆菌菌液。
(c)共培养转化：将(b)活化好的菌液在5000rpm下离心收集菌体，用含有100μM/L乙酰丁香酮的AAM液体培养基30mL重悬菌体，将(a)中预先挑好的愈伤组织浸于菌液中20min，吸去多余的菌液，平铺于共培养固体培养基上，28℃暗培养2d。
(d)愈伤脱菌培养与愈伤抗性筛选：将共培养2d后的愈伤组织用无菌水冲洗至水澄清，然后用含头孢霉素(500mg/L)的无菌水振荡30min杀菌，将愈伤组织用无菌滤纸或吸水纸彻底吸干，然后接种于选择培养基上培养3周左右。
(e)转基因植株的分化与生根：将(d)中新长出的抗性愈伤组织接种到分化培养基上，光照培养1～2个月，然后将长出的3cm左右高的幼苗转到生根培养基上进行生根培养，当苗长至约10cm时，取叶片提取DNA，利用扩增靶序列的GP5814引物进行鉴定阳性植株苗，最终获得3株转基因阳性植株。将3个转基因阳性植株分别命名为：CAS9-1、CAS9-2、CAS9-3。
(f)将阳性转基因植株室内炼苗2-3天后，移栽于大田。
6、转基因水稻的检测
(1)转基因植株的检测采用基于PCR扩增遗传霉素(G418)编码基因的方法进行。对需要检测的转基因水稻植株，利用CATB法分别提取基因组DNA，然后利用G418编码基因特异的引物进行PCR扩增及电泳检测，潮霉素引物序列为(5'->3')：
G418-F：AGACTGGTGATTTCAGCGTG
G418-R：ACATGGTGGAGCACGACAC
PCR反应采用赛默飞世尔科技公司生产的普通PCR试剂盒，参照其方法进行实验。
(2)PCR产物的测序
PCR扩增所得的DNA片段，取2μL胶回收产物置于1％琼脂糖凝胶中进行电泳检测，剩余的反应液检测后送成都擎科科技股份有限公司测序。
结果(见图14)发现1个独立转基因阳性株系叶片表型与野生型宜香1B相似，叶尖枯萎和叶色等表型得到回复。遗传互补实验说明ltn3基因是控制突变体ltn3叶色深绿、叶片衰老延迟和叶尖枯萎的基因。
实施例4本发明基因编码的蛋白及其酶活测定
(1)首先在网站http://archive.gramene.org/查询该基因编码的氨基酸序列，结果表明ltn3编码一个多聚半乳糖醛酸酶。
(2)水稻多聚半乳糖醛酸酶活性测定
在抽穗后7天，分别取突变体ltn3及其野生型宜香1B剑叶中部的新鲜叶片0.5g，参照酶联免疫试剂盒(购自武汉永辉生物有限公司)所述方法对突变体ltn3及其野生型宜香1B叶片中的多聚半乳糖醛酸酶活性进行测定。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
结果野生型的酶活是75活力单位每升，突变体ltn3的酶活是61活力单位每升，突变体ltn3叶片中多聚半乳糖醛酸酶的活性显著低于野生型，说明基因突变导致其编码的酶活显著下降，进而影响该基因的功能。
序列表
<110> 四川农业大学
<120> 一种控制水稻叶片衰老的基因及其编码的蛋白质
<130> 2019S1564IHCY
<141> 2019-07-01
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 216
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 1
Met Glu Leu Ala Ala Ala Gly Arg Thr Ala Ala Ile Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Leu Ala Phe Ala Ser Ser Phe Ile Ser Ala Ala Asp Gly Ala Arg
20 25 30
Ser Ala Arg His His His Ala Lys His Ala Lys Arg Asn Ala Ala His
35 40 45
Pro Pro Ser Gln Ala Pro Gly Pro Ala Ala Arg His Ala Pro Gly Pro
50 55 60
Ala Arg His His Gly Ala Pro Ala Pro His Pro Gly Arg Arg Ser Pro
65 70 75 80
Pro Ala Pro Ala Pro Ala Asn Pro Pro Ser Ser Asp Pro Met Pro Gly
85 90 95
Gly Ala Pro Ser Ala Ala Pro Ala Ala Gly Ala Ala Thr Val Tyr Asp
100 105 110
Ile Val Lys Asp Phe Gly Ala Ala Gly Asp Gly Val Thr Asp Asp Thr
115 120 125
Asp Ala Leu Lys Thr Ala Trp Asp Thr Ala Cys Ala Asp Asp Gly Ala
130 135 140
Gly Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Arg Ser Phe Leu Ile His Thr Thr
145 150 155 160
Val Phe Thr Gly Pro Cys Gln Gly Ser Val Thr Leu Gln Val Asp Gly
165 170 175
Thr Ile Val Ala Pro Ser Glu Pro Ala Thr Trp Pro Ala Asn Asn Lys
180 185 190
Arg Asn Trp Leu Val Phe Tyr Arg Ala Asp Gly Val Ser Leu Val Gly
195 200 205
Ala Gly Leu Ile Asp Gly Lys Gly
210 215
<210> 2
<211> 648
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 2
atggagctcg ccgcagccgg taggaccgcc gccattgcgc tgcttctcgc gcttgccttc 60
gcgtcgagct tcattagcgc cgccgatggc gcgaggagtg cccgccacca ccacgccaag 120
cacgccaagc gcaacgccgc gcacccgccg tcgcaggcgc cgggccccgc ggcgaggcac 180
gccccgggac cggcgaggca ccacggcgcg ccggctcctc acccggggcg gcgctctccc 240
ccggccccgg cgccggccaa cccgccgtcg tccgacccaa tgcctggcgg ggcgccgagc 300
gccgcccccg cggccggcgc ggccaccgtg tacgacatcg tcaaggactt cggcgcggcc 360
ggggacggcg tgacggacga caccgacgcg ctcaagacgg cgtgggacac cgcgtgcgcg 420
gacgacggcg cgggcgtcgt gctggccgcc gccggtcgct cgttcctgat ccacaccacc 480
gtcttcaccg ggccctgcca gggcagcgtc acgctgcagg tcgacgggac gatcgtcgcg 540
ccgagcgagc cggcgacgtg gccggcgaac aacaagcgca actggctcgt cttctaccgc 600
gccgacggcg tgtcgctcgt cggcgccggc ctcatcgacg gcaagggc 648

Claims (10)

1.一种控制水稻叶片衰老的蛋白，其特征在于所述的蛋白由如(1)或(2)所示的氨基酸序列组成：
(1)SEQ ID No：1所示的氨基酸序列；
(2)在(1)所限定的氨基酸序列中添加、替换或缺失一个或几个氨基酸形成的且具有调控叶片衰老功能的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因，其特征在于所述的基因由如下(a)或(b)所示的核苷酸序列组成：
(a)SEQ ID No：2所示的核苷酸序列；
(b)在(a)所限定的核苷酸序列中添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的且编码具有调控叶片衰老功能的蛋白质的核苷酸序列。
3.含有权利要求2所述基因的表达载体。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于所述的载体为PCAMBIA2300等。
5.含有权利要求2所述基因的转化体。
6.根据权利要求5所述的转化体，其特征在于所述转化体的宿主细胞为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。
7.权利要求2所述基因在调控水稻叶片衰老上的应用。
8.权利要求2所述基因在调控水稻叶尖枯萎上的应用。
9.权利要求2所述基因在调控水稻叶片衰老和叶尖枯萎上的应用。
10.一种调控水稻叶片衰老的方法，包括用权利要求2所述基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。
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