CN110204600A

CN110204600A - BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用

Info

Publication number: CN110204600A
Application number: CN201910374126.8A
Authority: CN
Inventors: 方玉洁; 陆伟; 王幼平; 耿玉璐; 张盼; 赵璇; 陈巍; 秦语悦
Original assignee: Yangzhou University
Current assignee: Yangzhou University
Priority date: 2019-05-07
Filing date: 2019-05-07
Publication date: 2019-09-06
Anticipated expiration: 2039-05-07
Also published as: CN110204600B

Abstract

本发明涉及BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用，本发明分离和应用一种包含BnSPL14基因的DNA片段，该片段赋予甘蓝型油菜分枝数目增多的能力。其中，所述的含有BnSPL14基因编码区的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，序列长度为3099 bp，它编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其氨基酸数目为1032个。本发明从甘蓝型油菜中分离BnSPL14基因，并鉴定其在甘蓝型油菜株型改良方面的生物学功能，对于培育高产甘蓝型油菜新品种具有十分重要的意义。

Description

BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用

技术领域

本发明涉及甘蓝型油菜基因工程领域。具体涉及分离、克隆和通过功能验证得到一种能够增加分枝数目的甘蓝型油菜BnSPL14基因在甘蓝型油菜株型性状遗传改良中的应用。本发明利用RT-PCR的方法，分离到控制甘蓝型油菜分枝数目的基因BnSPL14，过量表达BnSPL14基因能够加甘蓝型油菜分枝数目，证实了该基因的功能及其应用途径。

背景技术

油菜作为世界范围内重要的油料作物，是食用植物油的主要来源之一，还可作为动物饲料和工业原料。甘蓝型油菜（Brassica napus L.）是我国目前主要的油菜栽培种类。近年来国内菜籽种植面积下降，而人们对食用油的需求量却在不断增加，在食用油供需不平衡的现状下，提高甘蓝型油菜的产量迫在眉睫。角果数对甘蓝型油菜产量的贡献最大，而分枝是角果的承载者，因此，分枝数目也是影响甘蓝型油菜产量的重要性状之一。研究者们发现甘蓝型油菜的有效分枝数目与单株产量呈极显著正相关关系，进行油菜高产育种应该增加油菜有效角果数和有效分枝数目（梅德圣, 李云昌. 中国油菜高产育种研究进展[J].湖北农业科学, 2003(4):35-39）。利用传统的育种手段能够有效获得产量提高的油菜，但是周期较长。利用转基因技术控制甘蓝型油菜内源基因的表达从而获得分枝数目明显增多的甘蓝型油菜目前尚未见报道。

发明内容

本发明提供一种BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用。根据甘蓝型油菜-白芥渐渗系后代多分枝材料基因表达分析的结果，挑选到一个在多分枝材料中高表达的候选基因，申请人将该基因命名为BnSPL14。本发明分离和应用一种包含BnSPL14基因的DNA片段，该片段赋予甘蓝型油菜分枝数目增多的能力。其中，所述的含有BnSPL14基因编码区的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，序列长度为3099 bp，它编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其氨基酸数目为1032个。

为了实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：一种甘蓝型油菜株型调控蛋白，其特征在于，所述的蛋白为如下（a）或（b）：

（a）由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将SEQ ID NO:2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与甘蓝型油菜株型调控相关的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白质。

本发明的另一个目的是提供编码前述蛋白的基因。

所述基因是如下（a1）-（a3）中任何一种的DNA分子；

（a1）SEQ ID NO:1所示的DNA分子；

（a2）在严格条件下与（a1）限定的DNA序列杂交且编码甘蓝型油菜株型调控相关蛋白的DNA分子；

（a3）与（a1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或者至少具有99%同源性且编码甘蓝型油菜株型调控相关蛋白的DNA分子。

本发明的另一个目的是提供含有前述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。

本发明的又一个目的是提供（b1）或（b2）或（b3）或（b4）的应用：

（b1）前述蛋白，或，所述基因，或，含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控甘蓝型油菜株型中的应用；

（b2）所述蛋白，或，所述基因，或，含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在培育甘蓝型油菜新品种中的应用；

（b3）所述蛋白，或，所述基因，或，含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控甘蓝型油菜分枝数目中的应用；

（b4）所述蛋白，或，所述基因，或，含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控植物分枝数目中的应用。

本发明还提供一种培育增加植物分枝数目的转基因植物的方法，为提高目的植物中所述蛋白的含量或活性，得到转基因植物；所述转基因植物的植物分枝数目高于所述目的植物。

一种培育增加植物分枝数目的转基因植物的方法，采用前述方法培育得到转基因植物；所述的转基因植物表达甘蓝型油菜株型调控蛋白，或者含有前述基因。

携带有本发明BnSPL14基因的表达载体可通过使用Ti质粒、植物病毒载体，直接DNA转化、微注射、电击转化等常规生物技术方法导入植物细胞（Weissbach, 1998, Methodfor Plant Molecular Biology VIII, Academy Press, New York, pp.411-463;Geiserson and Corey, 1998, Plant Molecular Biology (2nd Edition)）。

可使用包括本发明的BnSPL14基因的表达载体转化宿主（包括甘蓝型油菜在内的多种植物），培育株型改良的植物品种。植物宿主还可以为水稻、烟草、大豆、番茄、小麦等。

利用DNA回收试剂盒回收包含BnSPL14基因编码区的DNA片段，利用酶切连接的方法将此片段连入pMDC83骨架载体，构建该基因的过量表达载体，命名为pMDC83-BnSPL14。

利用电击转化法将pMDC83-BnSPL14载体导入GV3101农杆菌。借助农杆菌侵染介导的遗传转化方法将pMDC83-BnSPL14转化甘蓝型油菜受体材料J9712，成功获得了BnSPL14基因表达量相对于对照显著提高的转基因植株，观察发现，与对照植株相比，过表达BnSPL14的转基因甘蓝型油菜分枝数目增多，说明BnSPL14能够调控植物株型。

综上所述，本发明以甘蓝型油菜为研究材料，通过分析甘蓝型油菜和白芥渐渗系材料中基因表达的结果，发现了一个在多分枝材料中表达水平较高的候选基因，该基因可能在分枝的形成过程中起重要作用，将该基因命名为BnSPL14。

甘蓝型油菜是食用油的主要来源之一，提高甘蓝型油菜产量是人们一直以来努力的重要目标。本发明中，过表达BnSPL14基因能够增加甘蓝型油菜的分枝数目，说明BnSPL14基因参与了甘蓝型油菜的株型调控。因此，从甘蓝型油菜中分离BnSPL14基因，并鉴定其在甘蓝型油菜株型改良方面的生物学功能，对于培育高产甘蓝型油菜新品种具有十分重要的意义，同时也对植物分枝机理的研究具有推动作用。

附图说明

序列表SEQ ID NO:1是本发明分离克隆的包含有BnSPL14基因编码区的核苷酸序列，序列长度为3099 bp，第1-3099位是其编码区，编码1032个氨基酸；

序列表SEQ ID NO:2是BnSPL14基因编码蛋白质的氨基酸序列；

图1 BnSPL14基因在甘蓝型油菜-白芥渐渗系后代多分枝材料中的表达情况；

图2 BnSPL14过量表达载体构建示意图；

图3 BnSPL14过量表达植株中BnSPL14基因的表达情况，CK1和CK2为转基因阴性植株；其余编号的植株为pMDC83-BnSPL14转基因阳性甘蓝型油菜；

图4 BnSPL14过量表达转基因甘蓝型油菜的株型表现和分枝数目，图4A：BnSPL14过量表达转基因甘蓝型油菜的株型表现：其中CK为对照植株；OE-BnSPL14为过表达BnSPL14的转基因甘蓝型油菜；图4B：BnSPL14过量表达转基因甘蓝型油菜的分枝数目，其中CK1为对照植株，BnSPL14-2、BnSPL14-20、BnSPL14-23、BnSPL14-24为过量表达BnSPL14的转基因甘蓝型油菜。

具体实施方式

以下实施例定义了本发明，并描述了本发明在克隆包含有BnSPL14基因完整编码区段的DNA片段，以及验证BnSPL14基因功能的方法。根据以下描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用于不同的用途和条件。

实施例1：qPCR分析甘蓝型油菜内源BnSPL14基因在甘蓝型油菜-白芥渐渗系后代多分枝材料中的表达情况

借助电融合技术将甘蓝型油菜“扬油6号”（Y6）与白芥的体细胞融合获得杂交后代，再将杂交后代与亲本Y6连续回交多代，将回交获得的材料进行自交得到甘蓝型油菜-白芥渐渗系后代材料，经过多代回交，渐渗系后代材料的遗传背景已与亲本Y6非常相近，且渐渗系后代材料的表型能够稳定遗传，其中W5和W15材料与轮回亲本Y6相比，分枝数目显著增多。取Y6、W5和W15的样品，迅速置于液氮中，并采用大连TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂盒提取总RNA，以Bnubi（BnaA10g06670D）作为内参基因，采用qPCR技术分析BnSPL14在Y6、W5和W15中的相对表达量，如图1所示，可见与对照相比，W5和W15中BnSPL14的表达量显著升高。

实施例2：甘蓝型油菜BnSPL14基因的分子克隆

取甘蓝型油菜“Darmor-bzh”三叶一心期幼苗，液氮速冻，放置-70℃冰箱中保存以备提取总RNA。利用大连TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂盒提取总RNA。甘蓝型油菜cDNA的合成按照南京诺唯赞生物科技有限公司的HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit说明书操作进行第一链合成。

以上述试剂盒合成的cDNA第一链为扩增模板，以设计的SPL14 F：5'-GGACGGAGACGAACAAGG-3'（SEQ ID NO:3）和SPL14 R：5'-GTCGCAGACTCACAGTAAAGC-3'（SEQID NO:4）为引物，利用RT-PCR 进行cDNA扩增，扩增条件为：94℃ 3 min，94℃ 15 s，59℃15 s，72℃ 3 min，共35个循环；72℃ 10 min。PCR结束后进行电泳分析，采用康为世纪生物科技有限公司的DNA回收试剂盒回收目的扩增片段。将扩增片段连接北京全式金生物技术有限公司的pEASY-Blunt T载体，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取白色菌落进行菌落PCR鉴定阳性克隆，将阳性克隆送到南京擎科生物科技有限公司测序，经测序验证无误的质粒命名为BnSPL14-T。

实施例3：BnSPL14基因过量表达载体的构建

为了更好地分析BnSPL14基因的功能，申请人将其在甘蓝型油菜中过量表达，通过观察转基因植株的表型来研究该基因的功能。

过量表达载体构建方法如下：以上述经测序验证无误的BnSPL14基因克隆载体质粒BnSPL14-T为模板，使用引物SPL14GF：5'-ggACTAGTccGGACGGAGACGAACAAGG-3'（SEQ IDNO:5），序列特异引物外加接头SpeI位点）和SPL14 GR：5'-aGGCGCGCCtGTCGCAGACTCACAGTAAAGC-3'（SEQ ID NO:6），序列特异引物外加接头AscI位点）利用RT-PCR进行cDNA扩增，扩增条件为：94℃ 3 min，94℃ 15 s，58℃ 15 s，72℃ 3 min，共35个循环；72℃ 10 min。PCR结束后进行电泳分析，采用康为世纪生物科技有限公司的DNA回收试剂盒回收目的扩增片段。将扩增片段连接到北京全式金生物技术有限公司的pEASY-Blunt T载体中，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取白色菌落进行菌落PCR以鉴定阳性克隆，将阳性克隆送到南京擎科生物科技有限公司测序。

包含BnSPL14基因片段的克隆载体质粒经SpeI＋AscI双酶切后，利用DNA回收试剂盒回收目的DNA片段，将此片段与相应酶切的pMDC83骨架载体相连构建成BnSPL14基因的过量表达载体，命名为pMDC83-BnSPL14（图2）。

实施例4：pMDC83-BnSPL14过量表达载体的甘蓝型油菜遗传转化

利用电击转化法将pMDC83-BnSPL14质粒转入农杆菌GV3101菌株感受态细胞中。挑取单菌落接种于25 mL YEB培养基（含50 mg/L 利福平）中培养过夜，取5 mL菌液转接到100 mLYEB培养基（含50 mg/L 利福平）中，培养至OD₆₀₀= 0.7-0.8，将菌液静置于冰上10 min后，5000 rpm 4℃离心10 min收集菌体，加入100 mL无菌双蒸水清洗菌体两次。加入4 mL 10%甘油悬浮菌体，并将菌液转移到50 mL离心管中。5500 rpm 4℃离心10 min收集菌体，加入500 µL 10%甘油重悬菌体，转移到1.5 mL离心管中。

取50 µL感受态细胞，置于冰上融化后，加入5 µL pMDC83-BnSPL14重组质粒，用枪头混匀后转移到0.1 cm规格的电转化杯中。电转化参数为：200 Ω，1.7 KV，2.5 F，电击后立即加入500 µL LB培养液重悬菌液。将菌液置于37℃摇床220 rpm培养1 h后，取100 µL菌液涂布含有卡那霉素Kanamycin抗性的LA培养基平板筛选转化子，28℃培养16 h。

转化甘蓝型油菜的遗传转化方法为借鉴华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室的转化方法改进之后的方法，以甘蓝型油菜无菌幼苗的下胚轴作为外植体，利用农杆菌介导法实现外源片段在甘蓝型油菜中的遗传转化。

所用培养基配方如下：

M₀接种培养基：MURASHIGE & SKOOG MEDIUM（Duchefa Biochemie公司）+30.0 g/L 蔗糖Sucrose+8 g/L 琼脂Agar（pH 5.8-pH 6.0）。

M₁共培养培养基：M₀+ 18.0 g/L甘露醇Mannitol+ 1.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D+0.3 mg/L激动素Kinetin+100 μM 乙酰丁香酮AS（pH 5.8）。

愈伤分化培养基（M₂）：M₁+300.0 mg/L 特美汀Timentin+25 mg/L 潮霉素Hygromycin B。

M₃生苗培养基：MURASHIGE & SKOOG MEDIUM（Duchefa Biochemie公司）+10.0 g/L葡萄糖Glucose+0.25 g/L木糖Xylose+0.6 g/L 吗啉乙磺酸MES+2.0 mg/L 玉米素Zeatin+0.1 mg/L 吲哚乙酸IAA+300.0 mg/L 特美汀Timentin+25 mg/L 潮霉素Hygromycin B。

M₄壮苗生根培养基：M₀+300.0 mg/L 特美汀Timentin。

MURASHIGE & SKOOG MEDIUM简称为MS培养基。

具体操作步骤如下：

（1）灭菌：

a. 用75%酒精浸泡甘蓝型油菜种子1 min，时间不能过长；

b. 用2%的次氯酸钠消毒甘蓝型油菜种子20 min；

c. 用无菌水冲洗甘蓝型油菜种子4-5遍，将其彻底清洗干净。

（2）播种：

a. 用无菌镊子将灭过菌的甘蓝型油菜种子接种到M₀培养基上，每皿30粒；

b. 将接种的培养罐放置到培养箱中，24℃下暗培养6-7 d；

（3）农杆菌培养：待播种5-6 d后，将农杆菌接种于含有LB液体培养基的无菌三角瓶或离心管中，置于28℃摇床180-220 rpm进行培养。

（4）制备外植体并且侵染：

a. 用无菌镊子和解剖刀切取接种后培养6-7 d的幼苗，将其下胚轴切成长度为0.8-1.0 cm的外植体段。切苗时将其下胚轴置于M₁液体培养基中切取，这样切取效果更佳。切的时候要快、准，不拖拉；

b. 测量农杆菌的OD₆₀₀值（LB培养基中OD₆₀₀=0.3左右较好），将预先培养好的菌液以6000 rpm离心10 min，弃上清，用与菌液等体积的含有100 μM乙酰丁香酮AS的MS液体培养基将菌重悬，之后再重复一次。最终取2 mL菌液，用20 mL含有100 μM乙酰丁香酮AS的MS液体培养基稀释；

c. 将切好的外植体置于已经调整好浓度的菌液重悬液中，浸染10 min，注意侵染时间不要过长，否则会导致外植体死亡。每20 mL的菌液中浸染150-200个外植体较合适；

（5）将侵染好的外植体转移至M₁培养基上，以每皿20-25个外植体为宜，置于24℃暗光下培养36-48 h；

（6）将外植体从M₁转到M₂培养基上，并转移至光照培养箱中培养（24℃ 光16 h/暗8 h）3周；

（7）将外植体转移到M₃培养基上，每2-3周继代一次，直至出现绿芽；

（8）最后将外植体转移到M₄培养基中生根，生根时间需2-4周。

实施例5：转基因甘蓝型油菜阳性植株的鉴定

采用快速法提取甘蓝型油菜基因组DNA，其步骤如下：

（1）取两片幼嫩叶片（约0.2 g），剪碎装入2 mL的离心管中，加入250 µL DNA buffer和两个钢珠（直径6.7 mm），打样机50 Hz，180 s打碎叶片样品；

（2）将打碎的样品置于95℃孵育10 min；

（3）将样品取出冷却至室温，12000 rpm离心5 min；

（4）吸取50 µL上清转移至新的1.5 mL离心管中，稀释5倍后备用。

DNA buffer配方如下：

Tris-HCl (pH=7.5) 500mM

NaCl 300mM

蔗糖Sucrose 300 mM

取1 µL DNA作为模板，以引物35S（5'-TCAGGGTAACGGGAGAAGC-3'）（SEQ ID NO:7）和SPL14 GR（5'-aGGCGCGCCtGTCGCAGACTCACAGTAAAGC-3'）（SEQ ID NO:6）、SPL14 GF（5'-ggACTAGTccGGACGGAGACGAACAAGG-3'）（SEQ ID NO:5）和GFP（5'-TCCCACTATCCTTCGCAAG-3'）（SEQ ID NO:8）进行PCR扩增，扩增条件为：94℃ 5 min；94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 3min，共30个循环；72℃ 10 min。以转基因甘蓝型油菜DNA样品作为PCR模板，能扩增出特异性目的片段，证明目的载体pMDC83-BnSPL14已经整合到甘蓝型油菜基因组中。

实施例6：过表达BnSPL14基因使转基因甘蓝型油菜分枝数目增多

本发明采用荧光检测实时定量的方法对部分转基因甘蓝型油菜植株中BnSPL14基因的表达进行检测，RNA的提取和反转录见实施例2。在ABI公司的7500定量PCR仪上进行荧光定量PCR，以设计的qSPL14 F：5'-ACGCATTGCCTTTGCCTATG-3'（SEQ ID NO:9）和qSPL14 R：5'-AATCCCCGTTCACATCGTTTT-3'（SEQ ID NO:10）为引物进行荧光定量PCR，反应条件为：95℃ 1min，95℃ 15 s，60℃ 20 s，72℃ 31 s，采集荧光信号，共40个循环；60℃ to 95℃，每1℃采集一次荧光信号，持续1 s。反应结束后，用ABI7500自带的软件（7500 Software v2.0.1）进行分析及绘图。结果显示，成功获得了BnSPL14基因的表达量相对于对照植株中BnSPL14基因表达量显著提高的转基因植株（图3）。与对照植株相比，转基因阳性植株中BnSPL14的表达量均有不同程度提高，其中BnSPL14-1、-2、-14、-17、-18、-20、-23、-24中BnSPL14的表达量上升倍数接近5倍或超过5倍。

对过表达BnSPL14的转基因植株进行表型分析，发现与对照植株相比，过表达BnSPL14的转基因植株（BnSPL14-2、BnSPL14-20、BnSPL14-23、BnSPL14-24）分枝数目增多（图4）。

本发明分离得到与株型相关的甘蓝型油菜基因，对于研究植物分枝机理和分离植物株型相关基因具有一定的理论指导意义。本发明分离得到的株型相关基因来自于植物本身，对环境影响较小。利用分离的基因进行油菜株型改良分子育种，对于培育株型得到改良的甘蓝型油菜新品种、提高甘蓝型油菜的产量具有非常重要的意义。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

序列表

<110> 扬州大学

<120> BnSPL14基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用

<130> xhx2019050703

<141> 2019-05-07

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3099

<212> DNA

<213> Brassica napus L.

<400> 1

atggaagaag taggcgctca ggtggctgct cctttattca tacaccaatc gctttctcct 60

atggggagaa aacgcaacct ctatcaccac cagatgccga accgtctcgt tccaccatct 120

cagcctagag atgagtggaa ctctaacctg tgggattggg atagccggag attcgaagct 180

aagccggttg acgctgagcc tcttcgcctt gggagccaga gccagagcca gagccagagc 240

cagacacagt ttgatttgac ttcaaggaag gtgggagaag aaagggggct tgatttgaat 300

cttggaagct gtctaaacgc cgctgaggca gctagaccga gcaagaaggg ccggtctgga 360

tctcctggaa ccggtgggaa ctatccggtt tgtcaggtgg ataactgttg tcaagatttg 420

tctcatggta aggattatca cagaaggcat aaagtctgtg aagttcacag caaagctact 480

aaggctctcg ttgggaaaca gatgcagagg ttctgccaac agtgcagcag gtttcatctt 540

ctttctgagt ttgatgaggg gaaaagaagt tgtaggcgta ggttggctgg ccacaaccga 600

cgtaggagga aaacaactca gccggaggag gttgcttctg gtgttgtggc tccggggaac 660

cgtgatagta cctctaacgc taatatggat cttatggctt tgttaaccgc cttagcttgt 720

gcacaaggta agaatgaggt caggccaatg gggtctccag ctgtgcctca aagagagcag 780

cttcttcaga tactcaacaa gataaacgca ttgcctttgc ctatggatct cgtctctaag 840

ctcaacagta ttgggagttt agccaggaaa aatactgatc acccggtggc gaaccctcaa 900

aacgatgtga acggggattc tccttccacc atggatctgc ttgctgttct ctccgaaacg 960

ttaggctcat cttcacctga tacgctagcc atattgtctc aaggtgggtt tggtaccaaa 1020

gaaaatgaca aggctaagtt atcttcttac gaccacgttg ctacaaccaa cgtggagaag 1080

agaacagttg gtggggagag aagcagtagc agtaaccagt ctccttctca ggattcagat 1140

tcacatgctc aagacactag gtctagcttg tctctacaac tgttcacctc ctcacccgag 1200

gatgagagtc gacgaccagc cgtggcgtcc tcgagaaaat attattcgtc tgccagcagt 1260

aaccctgtgg aggatagatc tccatcttca tctcctgtga tgcaagagtt attcccactg 1320

cagaggtccc ctgaaaccat gaggtctaag aatcacaata acacaagccc cgtgaggact 1380

gcgggctgct tgcctcttga cctctttggt acatcaaata gaggagctgc aaatcctaac 1440

tttaaaggat tcgggcaaca gtgtggttat gcgtcttctg gttctgacta ctctcctcct 1500

agcttaaact ctgatgctca ggaccgcacg ggaaagatag tcttcaagct acttgataaa 1560

gatccaagtc agctccctgg aacattacga actgagatct ataactggct gtcaagcatt 1620

ccatcagaaa tggagagtta tataaggcca ggctgtgttg ttctatctgt ctacgtagct 1680

atgtcacctg cggcctggga acaactcgag caaaacttgc agcaacgggt tgctgttatg 1740

ttacaagatt ctcattcagg tttttggaga gactcgaggt ttatagttaa cacaggcaga 1800

cagctcgctt cacacaaaaa tggtcgtatt cgctgtagca aatcatggag aacttggaat 1860

tcaccagagc tcatctcagt gtcacctgta gctgtggtag ctggtgaaga aacaagttta 1920

gtagtaagag gtagaagctt gactaatgat ggcatcagta tacgttgcac acaaatgggt 1980

agctacgtgt caatggaagc atcaggggca gcgtgtaaac gagccatctt tgacgagttg 2040

aatgtaaaat gtttcagagt caacaataca caacctggtt ttcttggacg ctgtttcatt 2100

gaggtggaga atgggtttag gggtgacagt ttcccgttga taattgccaa tgcatccatc 2160

tgcaaagagt taaatcgcct tgaagaggag tttcacccca aaagtcaaga acaagcgcag 2220

acctcagatc accgtcccac atcaagagaa gagactttat gcttcttgaa cgagcttggt 2280

tggcttttcc agaagaacca aaccaccgag cctctggaac aatccgagtt ttccctttcc 2340

cgcttcaagt tcttgctcgt ctgttcagtt gaaagagact actgcgctgt catcagaaca 2400

ctcctcgaca tgttggtaga gagaaatgtg gtgaatgatg agccgaacag agaagcattg 2460

gatatgctcg cagagattca gttgttgaat cgtgctgtta agaggaaaag cacaaagatg 2520

gtggaactac tcattcatta ctctgttaat ctcggttcct ctaaaaagtt ggtcttctta 2580

cccaatataa ccggtcctgg cggtatcaca cctttacatt tagctgcttg tacatctgat 2640

tcagatgata tggttgatct tctcaccaat gatccacaag agatcggatt atcgagctgg 2700

aattctctct gcgatgcaac cggccaaact ccttaccgct acgctgcaat gaggaacaac 2760

catacatata actccttggt ggctcgtaaa cttgcagaca aaagaaacaa gcaagtctcg 2820

ctaaacatcg agagcgagat tgtcgttgac cagttgggtc tgagcaggag gtcaagtaca 2880

gagatgaaca agtcttcatg tgcctcgtgt gctaccgtgg ctctaaagta tcggaggaga 2940

gcctcaggct cgcaccgttt gttcccaact cctatcattc actcaatgct tgcggttgcg 3000

actgtctgcg tttgcgtctg cgttttcatg catgctttcc cgatcgtccg acaaggatct 3060

cacttcagtt ggggaggttt ggattatggc tccatctag 3099

<210> 2

<211> 1032

<212> PRT

<213> Brassica napus L.

<400> 2

Met Glu Glu Val Gly Ala Gln Val Ala Ala Pro Leu Phe Ile His Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Pro Met Gly Arg Lys Arg Asn Leu Tyr His His Gln Met

20 25 30

Pro Asn Arg Leu Val Pro Pro Ser Gln Pro Arg Asp Glu Trp Asn Ser

35 40 45

Asn Leu Trp Asp Trp Asp Ser Arg Arg Phe Glu Ala Lys Pro Val Asp

50 55 60

Ala Glu Pro Leu Arg Leu Gly Ser Gln Ser Gln Ser Gln Ser Gln Ser

65 70 75 80

Gln Thr Gln Phe Asp Leu Thr Ser Arg Lys Val Gly Glu Glu Arg Gly

85 90 95

Leu Asp Leu Asn Leu Gly Ser Cys Leu Asn Ala Ala Glu Ala Ala Arg

100 105 110

Pro Ser Lys Lys Gly Arg Ser Gly Ser Pro Gly Thr Gly Gly Asn Tyr

115 120 125

Pro Val Cys Gln Val Asp Asn Cys Cys Gln Asp Leu Ser His Gly Lys

130 135 140

Asp Tyr His Arg Arg His Lys Val Cys Glu Val His Ser Lys Ala Thr

145 150 155 160

Lys Ala Leu Val Gly Lys Gln Met Gln Arg Phe Cys Gln Gln Cys Ser

165 170 175

Arg Phe His Leu Leu Ser Glu Phe Asp Glu Gly Lys Arg Ser Cys Arg

180 185 190

Arg Arg Leu Ala Gly His Asn Arg Arg Arg Arg Lys Thr Thr Gln Pro

195 200 205

Glu Glu Val Ala Ser Gly Val Val Ala Pro Gly Asn Arg Asp Ser Thr

210 215 220

Ser Asn Ala Asn Met Asp Leu Met Ala Leu Leu Thr Ala Leu Ala Cys

225 230 235 240

Ala Gln Gly Lys Asn Glu Val Arg Pro Met Gly Ser Pro Ala Val Pro

245 250 255

Gln Arg Glu Gln Leu Leu Gln Ile Leu Asn Lys Ile Asn Ala Leu Pro

260 265 270

Leu Pro Met Asp Leu Val Ser Lys Leu Asn Ser Ile Gly Ser Leu Ala

275 280 285

Arg Lys Asn Thr Asp His Pro Val Ala Asn Pro Gln Asn Asp Val Asn

290 295 300

Gly Asp Ser Pro Ser Thr Met Asp Leu Leu Ala Val Leu Ser Glu Thr

305 310 315 320

Leu Gly Ser Ser Ser Pro Asp Thr Leu Ala Ile Leu Ser Gln Gly Gly

325 330 335

Phe Gly Thr Lys Glu Asn Asp Lys Ala Lys Leu Ser Ser Tyr Asp His

340 345 350

Val Ala Thr Thr Asn Val Glu Lys Arg Thr Val Gly Gly Glu Arg Ser

355 360 365

Ser Ser Ser Asn Gln Ser Pro Ser Gln Asp Ser Asp Ser His Ala Gln

370 375 380

Asp Thr Arg Ser Ser Leu Ser Leu Gln Leu Phe Thr Ser Ser Pro Glu

385 390 395 400

Asp Glu Ser Arg Arg Pro Ala Val Ala Ser Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser

405 410 415

Ser Ala Ser Ser Asn Pro Val Glu Asp Arg Ser Pro Ser Ser Ser Pro

420 425 430

Val Met Gln Glu Leu Phe Pro Leu Gln Arg Ser Pro Glu Thr Met Arg

435 440 445

Ser Lys Asn His Asn Asn Thr Ser Pro Val Arg Thr Ala Gly Cys Leu

450 455 460

Pro Leu Asp Leu Phe Gly Thr Ser Asn Arg Gly Ala Ala Asn Pro Asn

465 470 475 480

Phe Lys Gly Phe Gly Gln Gln Cys Gly Tyr Ala Ser Ser Gly Ser Asp

485 490 495

Tyr Ser Pro Pro Ser Leu Asn Ser Asp Ala Gln Asp Arg Thr Gly Lys

500 505 510

Ile Val Phe Lys Leu Leu Asp Lys Asp Pro Ser Gln Leu Pro Gly Thr

515 520 525

Leu Arg Thr Glu Ile Tyr Asn Trp Leu Ser Ser Ile Pro Ser Glu Met

530 535 540

Glu Ser Tyr Ile Arg Pro Gly Cys Val Val Leu Ser Val Tyr Val Ala

545 550 555 560

Met Ser Pro Ala Ala Trp Glu Gln Leu Glu Gln Asn Leu Gln Gln Arg

565 570 575

Val Ala Val Met Leu Gln Asp Ser His Ser Gly Phe Trp Arg Asp Ser

580 585 590

Arg Phe Ile Val Asn Thr Gly Arg Gln Leu Ala Ser His Lys Asn Gly

595 600 605

Arg Ile Arg Cys Ser Lys Ser Trp Arg Thr Trp Asn Ser Pro Glu Leu

610 615 620

Ile Ser Val Ser Pro Val Ala Val Val Ala Gly Glu Glu Thr Ser Leu

625 630 635 640

Val Val Arg Gly Arg Ser Leu Thr Asn Asp Gly Ile Ser Ile Arg Cys

645 650 655

Thr Gln Met Gly Ser Tyr Val Ser Met Glu Ala Ser Gly Ala Ala Cys

660 665 670

Lys Arg Ala Ile Phe Asp Glu Leu Asn Val Lys Cys Phe Arg Val Asn

675 680 685

Asn Thr Gln Pro Gly Phe Leu Gly Arg Cys Phe Ile Glu Val Glu Asn

690 695 700

Gly Phe Arg Gly Asp Ser Phe Pro Leu Ile Ile Ala Asn Ala Ser Ile

705 710 715 720

Cys Lys Glu Leu Asn Arg Leu Glu Glu Glu Phe His Pro Lys Ser Gln

725 730 735

Glu Gln Ala Gln Thr Ser Asp His Arg Pro Thr Ser Arg Glu Glu Thr

740 745 750

Leu Cys Phe Leu Asn Glu Leu Gly Trp Leu Phe Gln Lys Asn Gln Thr

755 760 765

Thr Glu Pro Leu Glu Gln Ser Glu Phe Ser Leu Ser Arg Phe Lys Phe

770 775 780

Leu Leu Val Cys Ser Val Glu Arg Asp Tyr Cys Ala Val Ile Arg Thr

785 790 795 800

Leu Leu Asp Met Leu Val Glu Arg Asn Val Val Asn Asp Glu Pro Asn

805 810 815

Arg Glu Ala Leu Asp Met Leu Ala Glu Ile Gln Leu Leu Asn Arg Ala

820 825 830

Val Lys Arg Lys Ser Thr Lys Met Val Glu Leu Leu Ile His Tyr Ser

835 840 845

Val Asn Leu Gly Ser Ser Lys Lys Leu Val Phe Leu Pro Asn Ile Thr

850 855 860

Gly Pro Gly Gly Ile Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Cys Thr Ser Asp

865 870 875 880

Ser Asp Asp Met Val Asp Leu Leu Thr Asn Asp Pro Gln Glu Ile Gly

885 890 895

Leu Ser Ser Trp Asn Ser Leu Cys Asp Ala Thr Gly Gln Thr Pro Tyr

900 905 910

Arg Tyr Ala Ala Met Arg Asn Asn His Thr Tyr Asn Ser Leu Val Ala

915 920 925

Arg Lys Leu Ala Asp Lys Arg Asn Lys Gln Val Ser Leu Asn Ile Glu

930 935 940

Ser Glu Ile Val Val Asp Gln Leu Gly Leu Ser Arg Arg Ser Ser Thr

945 950 955 960

Glu Met Asn Lys Ser Ser Cys Ala Ser Cys Ala Thr Val Ala Leu Lys

965 970 975

Tyr Arg Arg Arg Ala Ser Gly Ser His Arg Leu Phe Pro Thr Pro Ile

980 985 990

Ile His Ser Met Leu Ala Val Ala Thr Val Cys Val Cys Val Cys Val

995 1000 1005

Phe Met His Ala Phe Pro Ile Val Arg Gln Gly Ser His Phe Ser Trp

1010 1015 1020

Gly Gly Leu Asp Tyr Gly Ser Ile

1025 1030

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggacggagac gaacaagg 18

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gtcgcagact cacagtaaag c 21

<210> 5

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggactagtcc ggacggagac gaacaagg 28

<210> 6

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aggcgcgcct gtcgcagact cacagtaaag c 31

<210> 7

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tcagggtaac gggagaagc 19

<210> 8

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tcccactatc cttcgcaag 19

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acgcattgcc tttgcctatg 20

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

aatccccgtt cacatcgttt t 21

Claims

1.一种甘蓝型油菜株型调控蛋白，其特征在于，所述的蛋白为如下（a）或（b）：

（a）由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2.编码权利要求1所述蛋白的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下（a1）-（a3）中任何一种的DNA分子；

（a1）SEQ ID NO:1所示的DNA分子；

4.含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。

5.（b1）或（b2）或（b3）或（b4）的应用：

（b1）权利要求1所述蛋白，或，权利要求2或3所述基因，或，含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控甘蓝型油菜株型中的应用；

（b2）权利要求1所述蛋白，或，权利要求2或3所述基因，或，含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在培育甘蓝型油菜新品种中的应用；

（b3）权利要求1所述蛋白，或，权利要求2或3所述基因，或，含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控甘蓝型油菜分枝数目中的应用；

（b4）权利要求1所述蛋白，或，权利要求2或3所述基因，或，含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在调控植物分枝数目中的应用；所述的植物为甘蓝型油菜、水稻、烟草、大豆、番茄或小麦。

6.一种培育增加植物分枝数目的转基因植物的方法，其特征在于，为提高目的植物中权利要求1所述蛋白的含量或活性，得到转基因植物；所述转基因植物的植物分枝数目高于所述目的植物。

7.一种培育增加植物分枝数目的转基因植物的方法，其特征在于，采用权利要求6所述方法培育得到转基因植物；所述的转基因植物表达权利要求1所述的甘蓝型油菜株型调控蛋白，或者含有权利要求2或3所述的基因。