CN109535236B

CN109535236B - 一个血红素结合蛋白基因TaHBP1及其重组干扰载体和应用

Info

Publication number: CN109535236B
Application number: CN201811372201.9A
Authority: CN
Inventors: 邢莉萍; 曹爱忠; 黄振朴; 刘佳倩; 杨文武; 徐杰飞; 张瑞奇; 王秀娥; 张守忠
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2018-11-16
Filing date: 2018-11-16
Publication date: 2022-04-01
Anticipated expiration: 2038-11-16
Also published as: CN109535236A

Abstract

本发明属于基因工程领域，公开了一个具血红素结合(Heme‑binding)结构域的基因TaHBP1及其重组干扰载体和应用。具Heme‑binding结构域基因TaHBP1的cDNA序列为SEQ ID NO.1及其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。该基因来自普通小麦(Triticum asetivum L.)扬麦158。TaHBP1在感白粉病小麦品种扬麦158中受白粉菌诱导表达增强，且表达水平远高于在抗病小麦品种南农9918中的表达水平。将TaHBP1正向序列插入到pWMB006的BamHI和KpnI酶切位点间、同时反向序列插入到pWMB006的SpeI和SacI之间获得干扰表达载体，并转化感白粉病小麦品种扬麦158，阳性转化植株的抗白粉病鉴定结果表明TaHBP1的降低表达可以提高感白粉病小麦品种对白粉病的抗性。

Description

一个血红素结合蛋白基因TaHBP1及其重组干扰载体和应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，公开了一个具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1及其重组干扰载体和应用。

背景技术

小麦是我国乃至世界最重要的粮食作物之一，其生长发育却受多种非生物和生物胁迫。由专性寄生真菌小麦白粉病菌(Blurmeria graminis f.sp.tritici,Bgt)侵染引起的小麦白粉病是世界性真菌病害，主要侵害小麦植株地上部分，包括叶片和叶鞘，也可侵害茎秆和麦穗。小麦白粉病多发于小麦苗期和成株期，白粉菌侵染小麦后，不仅掠夺植株养分，其菌丝层还覆盖小麦植株表面造成植株光合作用效能降低，碳水化合物累积和输送减少，进而减少分蘖数、穗数、穗粒数和千粒重，使小麦严重减产(董金皋.农业植物病理学.北京:中国农业出版社,2001)。一般情况下，小麦白粉病能够引起小麦减产5-19％，严重情况下能够使小麦减产30％以上。从九十年代以后，全国每年小麦白粉病的发病面积在600万公顷以上，严重危害小麦生产安全，因此小麦白粉病的防治越来越受到人们的关注，选育抗白粉病小麦品种是最有效的方法。

植物和病原菌在长期的进化过程中形成了复杂的互作系统，一方面植物进化出了一系列抗病基因和复杂的抗病机制去抵抗病原菌的侵染达到抗病目的，所以在植物中导入抗病基因可以提高小麦对病原菌的抗性；另一方面病原菌也进化出了一系列致病效应因子和复杂的致病机制去侵染植物达到致病目的，病原菌致病性的发挥不仅需要病原菌自身致病效应因子的参与，还需要激活或利用植物的感病基因去达到成功侵染的目的，所以在植物中降低感病基因的表达可以干扰白粉菌的侵染，同样可以达到提高植物对病原菌抗性的目的。活体营养型病原菌是植物与病原菌长期斗争和进化的高级形式(Panstruga R,Schulze-Lefert P.Corruption of host seven-transmembrane proteins bypathogenic microbes:a common theme in animals and plants？[J].Microbes andInfection,2003,5(5):429-437)，基因组学研究表明活体营养型真菌基因数目要远少于其他真菌，其自身缺少某些物质合成的功能途径(Kemen E,Gardiner A,et al.Gene gainand loss during evolution of obligate parasitism in the white rust pathogenof Arabidopsis thaliana[J].Plos Biology,2011,9(7):e1001094)，只有借助部分寄主基因的功能，才能够从寄主体内获取营养物质以维持生长繁殖，因此它们只能在活体寄主组织或细胞上正常生存(Kemen E,Jones J.Obligate biotroph parasitism:can we linkgenomes to lifestyles？Trends in Plant Science,2012,17(8):448-457)。小麦白粉菌是一种活体营养型病原菌，对小麦侵染成功侵染需要激活小麦部分基因的表达(PanstrugaR,Schulze-Lefert P.Corruption of host seven-transmembrane proteins bypathogenic microbes:a common theme in animals and plants？[J].Microbes andInfection,2003,5(5):429-437)，突变或者干扰这部分基因表达可达到抑制小麦白粉病菌侵染的目的，然而目前可供基因工程利用的小麦感白粉病基因相对缺乏。

南农9918是南京农业大学细胞遗传所运用现代生物技术与常规育种技术相结合，以扬麦158/92R137//扬麦158杂交选育而成的抗病、高产、优质小麦新品种，SM-1是南农9918的EMS感病突变体，广谱高抗小麦白粉病Stpk-V转基因株系是南京农业大学细胞遗传所将Stpk-V基因转入受体扬麦158中获得，其感病受体扬麦158是江苏里下河地区农科所培育的大面积推广的小麦品种。南农9918和SM-1是一对近等基因系，Stpk-V转基因株系与扬麦158是一对近等基因系。利用转录谱技术获得抗病南农9918、Stpk-V转基因株系和感病SM-1、扬麦158受白粉菌诱导前后的基因转录谱，通过比较抗感材料之间转录谱的差异，获得了一个在感病SM-1和扬麦158中受白粉菌诱导特异上调表达的基因TaHBP1，该基因可能在白粉菌侵染过程中起到协助病原菌入侵和发育的作用，从而导致扬麦158和SM-1感病。所以在感病材料中降低TaHBP1的表达，可以干扰病原菌的生产，起到提高感病材料抗白粉病的能力。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1的重组干扰载体和应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1来自普通小麦(Triticumasetivum L.)扬麦158，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

该具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因的蛋白质为TaHBP1，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

含有所述的具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1的重组干扰载体。

所述的重组干扰载体pWMB006:TaHBPas优选以pWMB006为出发载体，将TaHBP1基因的正向序列插入到pWMB006的BamHI和KpnI酶切位点间、同时反向序列插入到pWMB006的SpeI和SacI之间所得。

所述的基因TaHBP1在构建抗白粉病小麦品种中的应用；优选抑制易感白粉病小麦品种中所述的基因TaHBP1的表达，能够提高易感白粉病小麦品种的对白粉病的抗性。

所述的含具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1的表达载体在构建抗白粉病小麦品种中的应用；优选将所述的重组干扰表达载体导入易感白粉病小麦品种中，可以提高易感白粉病小麦品种对白粉病的抗性。

有益效果

本发明从小麦中克隆得到了一个具血红素结合(Heme-binding)结构域的基因TaHBP1，该基因在含有感白粉病的小麦扬麦158中受白粉菌诱导表达，而抗白粉病的小麦南农9918中不受白粉菌诱导表达。将其插入表达载体pWMB006，得到的该基因的重组干扰表达载体pWMB006:TaHBP1_RNAi导入感病小麦品种中，可以提高感白粉病小麦品种对白粉病的抗性。TaHBP1用于基因工程育种，将其导入易感白粉病小麦品种中，能够提高小麦的白粉病抗性。

附图说明

图1利用Q-PCR分析TaHBP1在抗白粉病石麦14、内麦8号、兰天7号中的表达

0小时：TaHBP1在未诱导样品中的相对表达量；24小时：TaHBP1在白粉菌诱导样品中的相对表达量

图2 TaHBP1 RNAi载体pWMB006:TaHBP1_RNAi的构建

A：pWMB006；B：pWMB006:TaHBP1中间载体；C：pWMB006:TaHBP1_RNAi干扰载体；

图3 pBi220:TaHBP1转基因植株T0代PCR分子鉴定

Marker：DL2000DNA标准分子量；质粒(P)：pWMB006:TaHBP1_RNAi阳性对照；扬麦158(Y)：阴性对照；T0-4，T0-7，T0-15，T0-68，T0-266：阳性转基因植株。

图4 TaHBP1转化扬麦158的阳性T0-42和T0-177衍生的T₁代植株的白粉病抗性鉴定

A：T0-42衍生T1代转基因植株的抗白粉病鉴定；B：T0-266衍生T1代转基因植株的抗白粉病鉴定

具体实施方式

实施例1扬麦158中受白粉菌诱导表达的具血红素结合(Heme-binding)结构域基因TaHBP1的克隆

南农9918是南京农业大学细胞遗传所运用现代生物技术与常规育种技术相结合，以扬麦158/92R137//扬麦158杂交选育而成的抗病、高产、优质小麦新品种(陈佩度，张守忠，王秀娥，王苏玲，周波，冯祎高，刘大钧.抗白粉病高产小麦新品种南农9918.南京农业大学学报,2002,25(4):1438-1444)，SM-1是南农9918的EMS感病突变体(Xing L,Hu P,Liu J,Witek K,Zhou S,Xu J,Zhou W,Gao L,Huang Z,Zhang R,Wang X,Chen P,Wang H,JonesJDG,KarafiátováM,Vrána J,

J,

J,Tian Y,Wu Y,Cao Pm21from Haynaldiavillosa Encodes a CC-NBS-LRR protein conferring powdery mildew resistance inwheat.Molecular Plant,2018 11(4):874-878)，广谱高抗小麦白粉病Stpk-V转基因株系是南京农业大学细胞遗传所将Stpk-V基因转入受体扬麦158中获得(Aizhong Cao,LipingXing,Xiaoyun Wang,Xueming Yang,Wei Wang,Yulei Sun,Chen Qian,Jinlong Ni,YapingChen,Dajun Liu,Xiue Wang,and Peidu Chen.Serine/threonine kinase gene Stpk-V,akey member of powdery mildew resistance gene Pm21,confers powdery mildewresistance in wheat.Proceedings of the National Academy of Sciences,USA,2011,108(19):7727-7732)，其感病受体扬麦158是江苏里下河地区农科所培育的大面积推广的小麦品种。

为了筛选感白粉病SM-1和扬麦158在感白粉病过程中哪些基因受白粉菌诱导表达，本实验室在前期研究中，采用高通量测序的方法获得抗白粉病南农9918、Stpk-V转基因植株与感白粉病小麦SM-1和扬麦158中在白粉菌诱导前后的转录谱，并通过比较获得感白粉病扬麦158和SM-1中受白粉菌诱导特异上调表达的基因。具体流程如下：将抗白粉病小麦南农9918、Stpk-V转基因植株的种子和感白粉病小麦SM-1和扬麦158的种子播于培养皿中发芽，露白后移栽到盆钵，一叶期把从感白粉病小麦材料上搜集的白粉菌孢子接种到苗上进行诱导，并于接种前和接种24小时取样，分别提取RNA(用Invitrogen公司的Trizol试剂提取)，形成八个样品NN9918-0(南农9918诱导0小时的样品)、NN9918-24(南农9918诱导24小时的样品)、Stpk-0(Stpk-V转基因植株诱导0小时的样品)、Stpk-24(Stpk-V转基因植株诱导24小时的样品)和SM-0(SM-1诱导0小时的样品)、SM-24(SM-1诱导24小时的样品)、Y0(扬麦158诱导0小时的样品)、Y24(扬麦158诱导24小时的样品)，并送交华大公司进行转录谱测序。将NN9918-24与NN9918-0的转录谱进行比较，筛选在南农9918中受白粉菌诱导上调表达的基因形成数据库南农9918-data；将Stpk-24与Stpk-0的转录谱进行比较，筛选在Stpk-V转基因植株中受白粉菌诱导上调表达的基因形成数据库Stpk-V-data；同时将Y24与Y0的转录谱进行比较，筛选在扬麦158中受白粉菌诱导上调表达的基因形成数据库Y-data；将SM-24与SM-0的转录谱进行比较，筛选在SM-1中受白粉菌诱导上调表达的基因形成数据库SM-data。进一步将南农9918-data与SM-data进行比较，筛选只出现在SM-data中的基因，这类基因即为只在感病SM-1中受白粉菌诱导上调表达、而在南农9918中受白粉菌诱导不改变甚至下调表达的基因；同时将Stpk-V-data与Y-data进行比较，筛选只出现在Y-data中的基因，这类基因即为只在感病SM-1中受白粉菌诱导上调表达、而在Stpk-V转基因植株中受白粉菌诱导不改变甚至下调表达的基因。仅在扬麦158和SM-1受白粉菌诱导表达的基因中，有一个基因Ta#S52541791具有血红素结合(Heme-binding)结构域，初步判断该基因与扬麦158的感病性具有相关性。

以扬麦158经白粉菌诱导24小时的叶片提取出的RNA反转录成cDNA为模板、以根据芯片探针Ta#S52541791设计的引物P1(GACTGATCAAATGGCGTTCC,SEQ ID NO.3)和P2(TCAGGAGGCTCTATCCAGTCG,SEQ ID NO.4)为引物进行RT-PCR，获得了TaHBP1的全长基因，其ORF包含885个核苷酸(SEQ ID NO.1)，编码的蛋白序列包含294个氨基酸(SEQ ID NO.2)。

实施例2 TaHBP1在抗病南农9918和感病扬麦158中的表达分析

为了研究TaHBP1在其他抗病材料中是否也受白粉菌诱导下调表达，利用含有抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种石麦14(公知公用，冀审麦2004005)、内麦8号(公知公用，川审麦2003003)、兰天17(公知公用，甘审麦2005011)经白粉菌诱导0、24小时的RNA反转录cDNA为模板，利用P3(TGAAGCGTGAGGAGGAGTAC，SEQ ID NO.5)和P4(AGAGATTTCCGCAACCTGGA，SEQ ID NO.6)为引物进行实时荧光定量PCR(Q-PCR)分析。PCR程序为：PCR反应在实时荧光定量PCR仪(MyIQ，Bio-Rad公司，美国)上扩增并检测荧光。20uL PCR反应体系中含2×SYBRGreen PCR Master Mix 10uL，0.5μM引物P3和P4，反转录cDNA模板2uL。扩增参数为：95℃10分钟，然后95℃15秒、60℃30秒，72℃1分钟，共40个循环。反应结束后，进行熔解曲线的测定。检测基因表达水平用MyiQ系统软件进行分析。结果表明，在石麦14、内麦8号、兰天17中，TaHBP1受白粉菌诱导均下调表达(图1)，进一步说明TaHBP1在抗病材料中受白粉菌诱导下调表达，推测TaHBP1在白粉病抗病途径中起负向调控作用。

实施例3 TaHBP1干扰载体pWMB006:TaHBP_RNAi的构建

干扰TaHBP1基因表达的RNAi载体pWMB006:TaHBP1_RNAi出发载体是pWMB006(Tingting Chen,Jin Xiao,Jun Xu,Wentao Wan,Bi Qin,Aizhong Cao,Wei Chen,LipingXing,Chen Du,Xiquan Gao,Shouzhong Zhang,Ruiqi Zhang,Wenbiao Shen,Haiyan Wangand Xiue Wang.Two members of TaRLK family confer powdery mildew resistance incommon wheat.BMC Plant Biology 201616:27DOI:10.1186/s12870-016-0713-8)。构建流程如下：1、以已经克隆的TaHBP1的基因序列为模板，设计引物P5(TTGGATCCTGAAGCGTGAGGAGGAGTAC，SEQ ID NO.7)和P6(TTGGTACCAGAGATTTCCGCAACCTGGA，SEQ ID NO.8)，且P5带有BamHI的酶切位点，P6带有KpnI的酶切位点。2、以含有TaHBP1基因的质粒为模板，使用引物对P5和P6进行PCR扩增，回收扩增片段。3、用BamHI和KpnI对扩增产物进行双酶切，将酶切产物插入到BamHI和KpnI双酶切后的载体pWMB006中，将TaHBP1正向置于35S启动子后面的多克隆位点处。由此将目标基因TaHBP1克隆到强启动子35S的下游，获得表达载体pWMB006:TaHBP1。4、以已经克隆的TaHBP1的基因序列为模板，设计引物P7(TTGAGCTC TGAAGCGTGAGGAGGAGTAC，SEQ ID NO.9)和P8(TTACTAGTAGAGATTTCCGCAACCTGGA，SEQ ID NO.10)，且P7带有SacI的酶切位点，P8带有SpeI的酶切位点。5、以含有TaHBP1基因的质粒pWMB006:TaHBP1为模板，使用引物对P7和P8进行PCR扩增，回收扩增片段。6、用SacI和SpeI对扩增产物进行双酶切，将酶切产物插入到SacI和SpeI双酶切后的载体pWMB006:TaHBP1中，将TaHBP1反向置于35S启动子后面的多克隆位点处。由此将目标基因TaHBP1的发卡结构克隆到强启动子35S的下游，获得如图2所示的干扰表达载体pWMB006:TaHBP1_RNAi。

实施例4 pWMB006:TaHBP RNAi转化普通小麦扬麦158及阳性植株的分子鉴定

利用基因枪转化方法将pWMB006:TaHBP1_RNAi转入感白粉病受体扬麦158的转化方法如下：1、挑取预培养7天约2000块扬麦158幼胚愈伤组织，在高渗培养基(MS+ABA0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L+2，4-D2mg/L+葡萄糖30g/L+0.4mol/L甘露醇，pH5.8)上预处理4–5小时；2、将携有目的基因TaFBK1的过量表达载体pBI220:TaFBK1通过基因枪轰击法转化到扬麦158愈伤组织，轰击后在高渗培养基上继续培养16小时。3、将愈伤组织转移至恢复培养基(1/2MS+水解酪蛋白500mg/L+2,4-D2mg/L+蔗糖30g/L，pH5.8)上暗培养2周；4、将愈伤组织转移至含有除草剂的筛选培养基上(1/2MS+ABA0.5mg/L+水解酪蛋白500mg/L+2,4-D1mg/L+蔗糖30g/L+4mg/L Bialaphos，pH5.8)筛选培养2周；5、将具有除草剂抗性的愈伤组织转移到分化培养基中(1/2MS+L-谷氨酞胺l mmol/L+水解酪蛋白200mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂0.8％，pH5.8)进行分化，待分化芽长至2–4cm时将其转移至生根培养基(1/2MS+KT 1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂0.8％，pH5.8)中。6、至再生苗长约8cm、根系较健壮时，即可开管炼苗1–2天，最后洗去根系携带的培养基残渣便可移栽入盆钵。获得再生植株共135棵。

提取所有再生植株基因组DNA，对转化植株利用启动子内部引物P9(TCCAGGTTGCGGAAATCTCT，SEQ ID NO.11)和基因内部引物P10(ACTGCCGTGGAACTGTCATA，SEQID NO.12)进行PCR扩增，以鉴定阳性植株。PCR程序：10-50ng基因组DNA模板，10μM的P9和P10各0.5μl；2.5μl 10×buffer；2.5μl 2.5mM的dNTP；1.5μl 25mM的Mg²⁺；0.25μl(5U/μl)Taq polymerase(TaKaRa)，加水至25μl。PCR反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃45秒，55℃45秒，72℃2分钟，33个循环；72℃延伸10分钟。PCR产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测。其中4株可以扩增出目的条带，鉴定为阳性植株。图3所示为阳性植株的筛选，包括T0-4、T0-7、T0-15、T0-68，T0-266。

实施例5 pWMB006:TaHBPas转扬麦158阳性植株的白粉病抗性鉴定

TaHBP1转基因T₀代阳性植株分单株收获后，将阳性单株的T₁代种子种于盆钵，以感病受体扬麦158为对照，进行离体叶片的白粉病抗性鉴定。结果表明：T₁-4，T₁-7，T₁-15、T₁-68和T₁-266株系均出现抗感分离现象。感病对照植株扬麦158对白粉菌表现高感，无过敏性坏死斑，叶片上布满白粉菌孢子堆；转基因T₁代阳性植株中的抗病单株与未转化扬麦158相比，白粉病抗性水平得到显著提高，叶片上只有少量孢子(图4)。以上鉴定结果表明：TaHBP1在感病材料中的表达量降低后，可提高感病材料的白粉病抗性，该基因可用于利用基因工程手段培育抗白粉病小麦。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一个血红素结合蛋白基因 TaHBP1及其重组干扰载体和应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 885

<212> DNA

<213> 普通小麦扬麦158(Triticum asetivum L.)

<400> 1

atggcgttcc cctgcttgcc cgccgtgcgg ccaccgctgc gcgccgtccg agcccggggc 60

gagcgtcccc gcggccggcg gcccgcgctg acggtcgtgg ccgccggaac ccgcaccagc 120

agcggcgccg aggcccgagg gtcgctggtg ctggcgctcg tctcgcaggc cctcgccgcc 180

tcgcagcgcc gcgccgtcga cctcgtcacc gaggccgcca agtacgccct cccttccggc 240

cgcttcgagc cacggaccct cgaggaggcc ctcatgtccg ttcccgacct cgagaccgtc 300

ccattccgca tcctgaagcg tgaggacgag tacgagatca gacaagtgga gtcatactat 360

gtcgctgaga cgacgatgcc tggaagaact gggtttgatt tcagcggatc gtctcaatcg 420

ttcaacgtgc tggcatctta cttattcggt aagaacacga ggtccgaaca aatggaaatg 480

acaacccctg tttttacccg gaaggaggaa gttcgcggtg aaacgatgga catgaccacc 540

ccagttataa caaagaagtc agctgatgga aacaagtgga agatgtcttt tgtgatgcca 600

tcaaaatatg gtccagactt gcctcaggca aaagacccgt ctgtgactat caaggaggtg 660

cccagcaaaa ttgtagcagt tgcggccttt ccaggtttgg ttacaaatga tgacataagc 720

cagagggaat ccagattgcg gaaagctctt cagaaagata cacagtatcg ggtgaaagag 780

gattcagtgg tggaaattgc acagtataat ccccctttca cacttccgtt cgcaaggcgc 840

aatgaagtag cactagaggt tgagggggtt gatagagcct cctga 885

<210> 2

<211> 294

<212> PRT

<213> 普通小麦扬麦158(Triticum asetivum L.)

<400> 2

Met Ala Phe Pro Cys Leu Pro Ala Val Arg Pro Pro Leu Arg Ala Val

1 5 10 15

Arg Ala Arg Gly Glu Arg Pro Arg Gly Arg Arg Pro Ala Leu Thr Val

20 25 30

Val Ala Ala Gly Thr Arg Thr Ser Ser Gly Ala Glu Ala Arg Gly Ser

35 40 45

Leu Val Leu Ala Leu Val Ser Gln Ala Leu Ala Ala Ser Gln Arg Arg

50 55 60

Ala Val Asp Leu Val Thr Glu Ala Ala Lys Tyr Ala Leu Pro Ser Gly

65 70 75 80

Arg Phe Glu Pro Arg Thr Leu Glu Glu Ala Leu Met Ser Val Pro Asp

85 90 95

Leu Glu Thr Val Pro Phe Arg Ile Leu Lys Arg Glu Asp Glu Tyr Glu

100 105 110

Ile Arg Gln Val Glu Ser Tyr Tyr Val Ala Glu Thr Thr Met Pro Gly

115 120 125

Arg Thr Gly Phe Asp Phe Ser Gly Ser Ser Gln Ser Phe Asn Val Leu

130 135 140

Ala Ser Tyr Leu Phe Gly Lys Asn Thr Arg Ser Glu Gln Met Glu Met

145 150 155 160

Thr Thr Pro Val Phe Thr Arg Lys Glu Glu Val Arg Gly Glu Thr Met

165 170 175

Asp Met Thr Thr Pro Val Ile Thr Lys Lys Ser Ala Asp Gly Asn Lys

180 185 190

Trp Lys Met Ser Phe Val Met Pro Ser Lys Tyr Gly Pro Asp Leu Pro

195 200 205

Gln Ala Lys Asp Pro Ser Val Thr Ile Lys Glu Val Pro Ser Lys Ile

210 215 220

Val Ala Val Ala Ala Phe Pro Gly Leu Val Thr Asn Asp Asp Ile Ser

225 230 235 240

Gln Arg Glu Ser Arg Leu Arg Lys Ala Leu Gln Lys Asp Thr Gln Tyr

245 250 255

Arg Val Lys Glu Asp Ser Val Val Glu Ile Ala Gln Tyr Asn Pro Pro

260 265 270

Phe Thr Leu Pro Phe Ala Arg Arg Asn Glu Val Ala Leu Glu Val Glu

275 280 285

Gly Val Asp Arg Ala Ser

290

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gactgatcaa atggcgttcc 20

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcaggaggct ctatccagtc g 21

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tgaagcgtga ggaggagtac 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

agagatttcc gcaacctgga 20

<210> 7

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ttggatcctg aagcgtgagg aggagtac 28

<210> 8

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ttggtaccag agatttccgc aacctgga 28

<210> 9

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ttgagctctg aagcgtgagg aggagtac 28

<210> 10

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ttactagtag agatttccgc aacctgga 28

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

tccaggttgc ggaaatctct 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

actgccgtgg aactgtcata 20

Claims

1.SEQ ID NO.1所示的基因 TaHBP1在构建抗白粉病小麦品种中的应用，其特征在于抑制易感白粉病小麦品种中所述的基因 TaHBP1的表达，能够提高易感白粉病小麦品种对白粉病的抗性。

2.含有SEQ ID NO.1所示的基因 TaHBP1的重组干扰载体在构建抗白粉病小麦品种中的应用，其特征在于所述的重组干扰载体以pWMB006为出发载体，将SEQ ID NO.1所示的基因 TaHBP1正向序列插入到 pWMB006的BamHI和KpnI酶切位点间、同时反向序列插入到pWMB006的SpeI和SacI之间所得。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于将权利要求2中所述的重组干扰表达载体导入易感白粉病小麦品种中，可以提高易感白粉病小麦品种对白粉病的抗性。