CN110199874A - 一种观赏型大蒜组培的繁殖方法 - Google Patents

一种观赏型大蒜组培的繁殖方法 Download PDF

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张�杰
高婷
丁玉梅
韩曙
谢俊俊
孟金贵
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Abstract

本发明属于突变或遗传工程技术领域，公开了一种观赏型大蒜组培的繁殖方法；选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体；选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，消毒；将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导分化芽的培养基中；将外植体接种至诱导分化培养基；将分化出的单芽切下接种至生根培养基中；在培养箱中慢慢拧松瓶盖，培养瓶中加入0.5‑1cm厚的蒸馏水，移栽至无菌基质中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。本发明以观赏型大蒜为材料，建立周期短，且繁殖系数高的组培快繁体系。

Description

一种观赏型大蒜组培的繁殖方法
技术领域
本发明属于突变或遗传工程技术领域，尤其涉及一种观赏型大蒜组培的繁殖方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：大蒜，百合科葱属大蒜种，因其具有独特的风味和良好的药用价值而成为全球性食用并种植的蔬菜。目前培育出一种观赏型大蒜新品系，其花薹高大、质硬、花型极大，花序开放后犹如繁星点点，极具观赏价值，亦可作为盆花或鲜切花，同时也像普通大蒜一样具有食用价值。
首先，普通大蒜主要作为蔬菜食用，大蒜能开花的类型很少，作为花卉观赏更少见；其次，生产上大蒜主要的繁殖方式是采用种瓣进行无性繁殖，一亩地的用种量高达250-300千克，成本高且运输成本也较大。而采用组织培养，可以克服以上难题；第三，大蒜常期采用无性繁殖，易积累病毒病导致种性退化、造成产量和品质下降，对大蒜生产构成严重威胁。通过组培的方式可以获得脱毒苗，解决病毒积累问题。最后，查询文献表明，大蒜组培使用的外植体包括茎尖、花序轴、叶片、茎盘等，但是茎尖仅需0.5mm的大小，取材困难且技术要求高，而花序轴的取材时间有局限性，采用叶片繁殖系数低。大蒜再生途径主要有2条：一是通过愈伤组织分化形成，由于增加了愈伤组织分化成芽过程，这一过程需要1-2个月时间，所以造成了繁殖周期过长，增加了时间成本，且愈伤组织过程易导致大蒜变异，造成后期种性不一致的问题。二是通过接种大蒜茎尖直接分化不定芽；所以，现有技术存在的问题是：(1)采用茎尖繁殖，取材困难，技术要求高；(2)通过愈伤组织分化而来的组培苗不稳定，周期长且容易变异。
解决上述技术问题的难度：
培养基激素种类及配比是解决上述问题的关键之处，而本研究使用的材料是具有观赏性的大蒜开花新品种，目前暂无相关研究，因此在对最适培养基的探讨上需要一定的时间和精力。
解决上述技术问题的意义：获得一个高效的快繁体系，不仅能解决繁殖系数低的问题，还能在提高其品质的同时，充分利用其观赏型价值，在生产上获得更大的经济效益。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种观赏型大蒜组培的繁殖方法。
本发明是这样实现的，一种观赏型大蒜组培的繁殖方法，所述观赏型大蒜组培的繁殖方法包括：
第一步，选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体，解决茎尖作为外植体取材难度大的问题；
第二步，选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，刷洗茎盘的位置，加入洗洁精搅拌3次，一次10min，无菌水冲洗5-6次；再用70％酒精浸泡30-45s，无菌水冲洗2-3次，0.1％HgCl浸泡6-8min，期间不断搅拌，无菌水冲洗5-6次即可达到消除外植体上病菌的目的。将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导芽分化的培养基中，进行不定芽的诱导；
第三步，将外植体接种至诱导芽分化培养基，在光照为4000lx，温度22℃， 12h/d和0lx，温度16℃，12/d的条件下培养1-1.5个月，鳞芽基部开始分化嫩芽，一个芽能分化出2-5个新芽，其芽增殖系数达3.6；
第四步，将分化出的约2-5cm高的单芽切下接种至生根培养基中，于在光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d的条件下培养1个月左右，开始诱导根的产生，平均每株苗能分化出4-5条根；
第五步，待根系生长健壮，在培养箱中慢慢拧松瓶盖，培养瓶中加入0.5-1cm 厚的蒸馏水，移栽至无菌基质中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。
进一步，所述第三步的诱导分化培养基为：MS+0.4mg/L NAA+4.0mg/L 6-BA+2.0mg/L AgNO3+1.5mg/L PVA。
进一步，所述第四步的生根培养基为1/2MS+0.5％活性炭+0.3IBA+ 1.5mg/L PVA。
进一步，所述第五步的在培养箱中拧松瓶盖，放置1-2d，转移至室外放置 2d，慢慢打开瓶盖室外放置2-3d，期间往培养瓶中慢慢加入0.5-1cm厚的蒸馏水。
进一步，所述第五步的无菌基质(体积比)为草炭：珍珠岩＝3:1。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：不经过脱分化的过程，建立了一个繁殖系数达3.6的高效再生体系，实现了观赏型大蒜的组织培养，为大蒜作为观赏花卉开发奠定了技术基础，所获得的组织培养体系完整，保证了大蒜稳定性的同时，也达到了生产实用的目的。
本发明以观赏型大蒜新品种为材料，以带茎盘的鳞芽为外植体，通过直接分化芽的途径，解决了取材困难和繁殖周期长的问题，最高增殖系数可达4.08，可满足生产上的需求，具备相应实用性。
附图说明
图1是本发明实施例提供的观赏型大蒜组培的繁殖方法流程图。
图2是本发明实施例提供的观赏型大蒜的芽分化示意图1。
图3是本发明实施例提供的观赏型大蒜的芽分化示意图2。
图4是本发明实施例提供的观赏大蒜组培苗的移栽成活的示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对目前大蒜的种瓣繁殖用种量大，栽培成本高，同时，大蒜感染病毒病通过种蒜积累和传播，导致种性退化、产量和品质下降，对大蒜生产构成严重威胁和目前大蒜的组织培养繁殖方式再生植株周期较长，而经外植体直接诱导分化幼苗则繁殖系数较低的问题。本发明采用外植体的选择，外植体的消毒，诱导芽分化培养，生根培养以及驯化炼苗方法快速繁殖观赏型大蒜组培。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的观赏型大蒜组培的繁殖方法包括以下步骤：
S101：选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体；
S102：选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，刷洗茎盘的位置，加入洗洁精搅拌3次，一次10min，无菌水冲洗5-6次；再用70％酒精浸泡30-45s，无菌水冲洗2-3次，0.1％Hgcl浸泡6-8min，期间不断搅拌，无菌水冲洗5-6次即可；将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导分化芽的培养基中；
S103：将外植体接种至诱导分化培养基：MS+0.4mg/L NAA+4.0mg/L 6-BA +2.0mg/L AgNO3+1.5mg/L PVA，在光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d的条件下培养1-1.5个月左右(期间每周继代一次)，鳞芽基部开始分化嫩芽，一个芽能分化出2-5个新芽，其芽增殖系数达3.6左右；
S104：将分化出的单芽切下接种至1/2MS+0.5％活性炭+0.3IBA+ 1.5mg/L PVA的生根培养基中；
S105：在培养箱中慢慢拧松瓶盖，放置1-2d，转移至室外放置2d，慢慢打开瓶盖室外放置2-3d，期间往培养瓶中慢慢加入0.5-1cm厚的蒸馏水，移栽至无菌基质(草炭：珍珠岩＝3:1)中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。
本发明实施例提供的观赏型大蒜组培的繁殖方法今天包括以下步骤：
第一步，外植体的选择：选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体。
第二部，外植体的消毒：(1)选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，刷洗茎盘的位置，加入洗洁精搅拌3次，一次10min，无菌水冲洗 5-6次；(2)再用70％酒精浸泡30-45s，无菌水冲洗2-3次，0.1％Hgcl浸泡6-8min，期间不断搅拌，无菌水冲洗5-6次即可；(3)将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导分化芽的培养基中。
第三步，诱导分化培养：将上述外植体接种至诱导分化培养基：MS+ 0.4mg/L NAA+4.0mg/L 6-BA+2.0mg/L AgNO3+1.5mg/L PVA，在光照为 4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d的条件下培养1-1.5个月左右(期间每周继代一次)，鳞芽基部开始分化嫩芽，一个芽能分化出2-5个新芽，其芽增殖系数达3.6左右。
第四步，生根培养：将分化出的单芽切下接种至1/2MS+0.5％活性炭+0.3 IBA+1.5mg/L PVA的生根培养基中，1个月左右，平均每株能分化出4-5条根；
第五步，驯化炼苗：在培养箱中慢慢拧松瓶盖，放置1-2d，转移至室外放置2d，慢慢打开瓶盖室外放置2-3d，期间往培养瓶中慢慢加入0.5-1cm厚的蒸馏水，移栽至无菌基质(按照体积比草炭：珍珠岩＝3:1)中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。
以下资料为本实例中所采用的不同芽诱导培养基配方(表1)，该配方与发表的相关激素配比不同，增加了AgNO3作为芽诱导剂，目前未见到相关报道。表2为本实例所采用的生根培养基，通过采用该配方，可以实现大蒜的组培苗的生根，生根率可达57.14％。试验数据：
表1不同芽诱导培养基配方
表2不同生根培养基配方
表3不同培养基上的芽分化情况
表4不同培养基上的生根情况
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述观赏型大蒜组培的繁殖方法包括：选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体；选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，消毒；将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导分化芽的培养基中；将外植体接种至诱导分化培养基；将分化出的单芽切下接种至生根培养基中；在培养箱中慢慢拧松瓶盖，培养瓶中加入0.5-1cm厚的蒸馏水，移栽至无菌基质中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。
2.如权利要求1所述的观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述观赏型大蒜组培的繁殖方法具体包括：
第一步，选择观赏型大蒜带茎盘的鳞芽作为外植体；
第二步，选择大小一致，无病虫害的观赏型大蒜蒜瓣，将蒜瓣剥皮，刷洗茎盘的位置，加入洗洁精搅拌3次，一次10min，无菌水冲洗5-6次；再用70％酒精浸泡30-45s，无菌水冲洗2-3次，0.1％HgCl浸泡6-8min，期间不断搅拌，无菌水冲洗5-6次即可；将消毒后的蒜瓣，沿芽的中间切成大小均匀的4个带茎盘的茎尖，接种至诱导分化芽的培养基中；
第三步，将外植体接种至诱导分化培养基，在光照为4000lx，温度22℃，12h/d和光照为0lx，温度16℃，12/d的条件下培养1-1.5个月，鳞芽基部开始分化嫩芽，一个芽能分化出2-5个新芽，其芽增殖系数达3.6；
第四步，将分化出的单芽切下接种至生根培养基中；
第五步，在培养箱中慢慢拧松瓶盖，培养瓶中加入0.5-1cm厚的蒸馏水，移栽至无菌基质中，置于光照为4000lx，温度22℃，12h/d和0lx，温度16℃，12/d条件下培养至生长健壮。
3.如权利要求2所述的观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述第三步的诱导分化培养基为：MS+0.4mg/L NAA+4.0mg/L 6-BA+2.0mg/L AgNO3+1.5mg/L PVA。
4.如权利要求2所述的观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述第四步的生根培养基为1/2MS+0.5％活性炭+0.3IBA+1.5mg/L PVA。
5.如权利要求2所述的观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述第五步的在培养箱中拧松瓶盖，放置1-2d，转移至室外放置2d，慢慢打开瓶盖室外放置2-3d，期间往培养瓶中加入0.5-1cm厚的蒸馏水。
6.如权利要求2所述的观赏型大蒜组培的繁殖方法，其特征在于，所述第五步的无菌基质按照体积比为草炭：珍珠岩＝3:1。
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