CN110193096A - 一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法，属于医用材料领域。所述海洋源性仿生型软骨材料是海洋源性软骨材料经特殊工艺脱细胞处理而成，具有天然仿生软骨结构，可用于软骨修复诱导软骨再生；所述海洋源性仿生型软骨材料制备方法包括原料前处理、粗整理、脱细胞、再整理、保存液预处理、成型等工艺步骤制备而成。采用本发明方法制备的海洋源性仿生型软骨材料，天然网络结构完整、力学强度好，是低免疫原性的仿生细胞外基质支架材料，可解决临床软骨修复的难题；且该海洋源性仿生型软骨材料人畜共患病毒携带及传播风险低、资源丰富且成本低廉，可填补软骨修复产品的市场空白且社会意义深远。

Description

一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法
技术领域
本发明涉及医疗技术领域，尤其涉及一种海洋源性仿生型软骨材料及其制备 方法。
背景技术
软骨损伤修复是世界性难题，目前尚未专用的临床产品；目前软骨修复材料 多用胶原蛋白材料(I型胶原蛋白，陆地动物源性)或胶原蛋白复合材料，但效 果不佳：①功能性差：为纤维软骨修复，非透明软骨修复；②相容性不佳：软骨 胶原蛋白为II型，而市售的胶原蛋白产品都为I型，植入后导致慢性炎症反应的 风险高；③力学强度不佳；④病毒传播的生物学风险高。目前没有市售的II型 胶原蛋白类医用材料产品。
发明内容
本发明为避免陆地动物源性生物材料病毒传播风险，提供一种价格低廉而生 物安全性、相容性和力学性能等良好的海洋源性仿生型软骨材料及其制备方法， 实现软骨损伤的原位仿生修复方法。
本发明所采用的海洋源性软骨材料，病毒传播风险低，来源广泛、资源丰富； 且其为脱细胞类仿生基质材料，具有天然仿生微结构和细胞外基质组份，极为接 近软骨的天然结构，可为软骨再生提供仿生微环境；采用本发明方法制备的海洋 源性仿生型软骨材料，中所含的胶原蛋白组份为II型胶原蛋白，可与受体软骨 良好相容而不引起慢性炎症反应。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一个方面是提供一种海洋源性仿生型软骨材料制备方法，包括如 下步骤：
(1)原料预处理：将海洋源性软骨材料去除冗余组织及杂质，并裁切成合适的 尺寸，置于低温下冷冻备用；
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w) 的2％-5％NaCl溶液搅拌1-4h后排除废液，重复2-4次；然后再进行粗整理，清 除残留的部分冗余；
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20去离子水 搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托盘中， 迅速置于-40℃冷冻2-4h，于洁净条件下解冻；如此反复冻融处理2-4次；
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的脱细胞溶液搅拌处理2-18h；经再整理，去除上述处理过程形成的部 分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅 拌0.5-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(8)清洗：4℃下，以料液比1:5-1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步 骤重复1-3次；
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的软骨材料浸泡于料液比1:5-1:20(w/w)的保护液中，缓慢搅拌1-4h，产品成型，制得海洋源性仿生型软骨材料， 装袋、封口；
(10)最终灭菌得成品：将所得包装完好的海洋源性仿生型软骨材料最终灭菌， 即得成品。
进一步地，步骤(1)中，所述原料预处理工艺为：将新鲜的海洋源性软骨 材料去除冗余等组织，采用4℃去离子水多次冲洗干净；并根据不同解剖部位裁 切成合适尺寸，厚度约0.1-0.5cm；然后迅速置于-40℃冷冻备用，使用前取出于 室温下流水解冻。
进一步地，步骤(1)中，所述海洋源性软骨材料为新鲜宰杀取材后立即低 温冻存，来源可追溯且满足动物检疫要求。
进一步优选地，步骤(1)中，所述海洋源性软骨材料来源于海洋动物的软 骨，包括但不限于鮟鱇鱼软骨、鲨鱼软骨、鳐鱼软骨、魟鱼软骨、鲛鱼软骨、鱿 鱼软骨等。
进一步地，步骤(3)和步骤(6)中，所述磷酸盐缓冲液为PBS、Hank’s、 D-Hank’s中的一种。
进一步优选地，步骤(3)和步骤(6)中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为 0.01-0.2M，pH7.0-7.4。
进一步地，步骤(7)中，所述脱细胞溶液为0.5-4％脱氧胆酸钠、0.1-1％十 二烷基硫酸钠、0.02-0.05％EDTA、0.1-1％Triton X-100、0.1-1％烷基糖苷、 0.05-5μg/ml胰蛋白酶或胃蛋白酶或DipaseⅡ的一种或几种。
进一步地，步骤(9)中，所述保护液为生理缓冲液、细胞培养液、组织保 存液、透明质酸溶液、壳聚糖溶液、右旋糖酐溶液、甘油等的一种或几种。
进一步地，步骤(9)中，根据临床需求，所述产品成型为湿态或干态：湿 态为将浸润保护液的海洋源性仿生型软骨材料直接装袋、封口后灭菌；干态则将 浸润保护液的海洋源性仿生型软骨材料先冷冻干燥，再装袋、封口。
本发明的第二个方面是提供一种如上述所述方法制备的海洋源性仿生型软 骨材料。
本发明的第三个方面是提供一种所述海洋源性仿生型软骨材料在软骨修改 及软骨再生中的应用。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
(1)该海洋源性仿生型软骨材料人畜共患病毒携带及传播风险低、资源丰 富且成本低廉，可填补软骨修复产品的市场空白且社会意义深远；
(2)该海洋源性仿生型软骨材料为脱细胞类仿生基质材料，具有天然仿生 微结构和细胞外基质组份，极为接近软骨的天然结构，可为软骨再生提供仿生微 环境；
(3)该海洋源性仿生型软骨材料中所含的胶原蛋白组份为II型胶原蛋白， 可与受体软骨良好相容而不引起慢性炎症反应；
(4)该海洋源性仿生型软骨材料天然网络结构完整、力学强度好，是低免 疫原性的仿生细胞外基质支架材料，可解决临床软骨修复的难题。
附图说明
图1为本发明一种海洋源性仿生型软骨材料制备方法的工艺流程图；
图2为本发明一种海洋源性仿生型软骨材料的电镜图片；
图3为本发明一种海洋源性仿生型软骨材料HE染色的电镜图片。
具体实施方式
本发明所采用的海洋源性软骨材料，病毒传播风险低，来源广泛、资源丰富； 且其为脱细胞类仿生基质材料，具有天然仿生微结构和细胞外基质组份，极为接 近软骨的天然结构，可为软骨再生提供仿生微环境；采用本发明方法制备的海洋 源性仿生型软骨材料，中所含的胶原蛋白组份为II型胶原蛋白，可与受体软骨 良好相容而不引起慢性炎症反应。
参阅图1所示，本发明提供一种海洋源性仿生型软骨材料制备方法，包括步 骤：
(1)原料预处理：将海洋源性软骨材料去除冗余组织及杂质，并裁切成合适的 尺寸，置于低温下冷冻备用；
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w) 的2％-5％NaCl溶液搅拌1-4h后排除废液，重复2-4次；然后再进行粗整理，清 除残留的部分冗余；
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20去离子水 搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托盘中， 迅速置于-40℃冷冻2-4h，于洁净条件下解冻；如此反复冻融处理2-4次；
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20 (w/w)的脱细胞溶液搅拌处理2-18h；经再整理，去除上述处理过程形成的部 分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅 拌0.5-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(8)清洗：4℃下，以料液比1:5-1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步 骤重复1-3次；
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的软骨材料浸泡于料液比1:5-1:20(w/w)的保护液中，缓慢搅拌1-4h，产品成型，制得海洋源性仿生型软骨材料， 装袋、封口；
(10)最终灭菌得成品：将所得包装完好的海洋源性仿生型软骨材料最终灭菌， 即得成品。
作为一个优选技术方案，步骤(1)中，所述原料预处理工艺为：将新鲜的 海洋源性软骨材料去除冗余等组织，采用4℃去离子水多次冲洗干净；并根据不 同解剖部位裁切成合适尺寸，厚度约0.1-0.5cm；然后迅速置于-40℃冷冻备用， 使用前取出于室温下流水解冻。且所采用的所述海洋源性软骨材料为新鲜宰杀取 材后立即低温冻存，来源可追溯且满足动物检疫要求。优选地，所述海洋源性软 骨材料来源于海洋动物的软骨，包括但不限于鮟鱇鱼软骨、鲨鱼软骨、鳐鱼软骨、 魟鱼软骨、鲛鱼软骨、鱿鱼软骨等。
作为一个优选技术方案，步骤(3)和/或步骤(6)中，所述磷酸盐缓冲液 为PBS、Hank’s、D-Hank’s中的一种。优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为 0.01-0.2M，pH7.0-7.4；更优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.15M， pH7.0-7.4；更为优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.08-0.12M，pH7.2-7.4。
作为一个优选技术方案，步骤(7)中，所述脱细胞溶液为0.5-4％脱氧胆酸 钠、0.1-1％十二烷基硫酸钠、0.02-0.05％EDTA、0.1-1％Triton X-100、0.1-1％烷 基糖苷、0.05-5μg/ml胰蛋白酶或胃蛋白酶或DipaseⅡ的一种或几种。
作为一个优选技术方案，步骤(9)中，所述保护液为生理缓冲液、细胞培 养液、组织保存液、透明质酸溶液、壳聚糖溶液、右旋糖酐溶液、甘油等的一种 或几种。具体地，根据临床需求，所述产品成型为湿态或干态：湿态为将浸润保 护液的海洋源性仿生型软骨材料直接装袋、封口后灭菌；干态则将浸润保护液的 海洋源性仿生型软骨材料先冷冻干燥，再装袋、封口。
采用上述方法制备的海洋源性仿生型软骨材料，人畜共患病毒携带及传播风 险低、资源丰富且成本低廉，可填补软骨修复产品的市场空白且社会意义深远。、
参阅图2所示，为本发明海洋源性仿生型软骨材料的电镜图片，具有天然仿 生多孔结构，与软骨组织结构相似，采用本发明方法制备的海洋源性仿生型软骨 材料，具有天然仿生微结构和细胞外基质组份，极为接近软骨的天然结构，可为 软骨再生提供仿生微环境。
参阅图3所示，为本发明海洋源性仿生型软骨材料的HE染色的电镜图片， 证实脱细胞处理彻底，无细胞残留。该海洋源性仿生型软骨材料中所含的胶原蛋 白组份为II型胶原蛋白，可与受体软骨良好相容而不引起慢性炎症反应；此外， 该海洋源性仿生型软骨材料天然网络结构完整、力学强度好，是低免疫原性的仿 生细胞外基质支架材料，可解决临床软骨修复和软骨再生的难题。
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发 明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1：
(1)原料预处理：将新鲜鮟鱇鱼软骨去除冗余等组织，4℃去离子水多次冲 洗干净；然后根据不同解剖部位裁切成合适尺寸，厚度约0.3cm；再迅速置于-40℃ 冷冻，使用前取出于室温下流水解冻。
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:20(w/w) 的5％NaCl溶液搅拌3h后排除废液，重复2次；再进行粗整理，清除残留的部 分冗余。
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.2M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:20去离子水 搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复2次。
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托 盘中，迅速置于-40℃冷冻2h，于洁净条件下解冻。如此反复冻融处理2次。
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.1M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的0.02％EDTA—0.05μg/ml胰蛋白酶复合脱细胞液搅拌处理4h；经再整 理，去除上述处理过程形成的部分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:20 (w/w)的5％NaCl溶液搅拌2h后排除废液；以上步骤重复1次。
(8)清洗：4℃下，以料液比1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步 骤重复2次。
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的海洋源性仿生型软骨材料 浸泡于料液比1:10(w/w)的DMEM细胞培养液中，缓慢搅拌4h；冷冻干燥， 再装袋、封口。
(10)最终灭菌得成品：辐照灭菌，可得成品。
实施例2：
(1)原料预处理：将新鲜鮟鱇鱼软骨去除冗余等组织，4℃去离子水多次冲 洗干净；然后根据不同解剖部位裁切成合适尺寸，厚度约0.3cm；再迅速置于-40℃ 冷冻，使用前取出于室温下流水解冻。
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:20(w/w) 的6％NaCl溶液搅拌3h后排除废液，重复2次；再进行粗整理，清除残留的部 分冗余。
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.2M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:20去离子水 搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复2次。
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托 盘中，迅速置于-40℃冷冻2h，于洁净条件下解冻。如此反复冻融处理2次。
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.1M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的0.02％EDTA—0.05μg/ml胰蛋白酶复合脱细胞液搅拌处理4h；经再整 理，去除上述处理过程形成的部分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:20 (w/w)的5％NaCl溶液搅拌2h后排除废液；以上步骤重复1次。
(8)清洗：4℃下，以料液比1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步 骤重复2次。
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的海洋源性仿生型软骨材料 浸泡于料液比1:10(w/w)的DMEM细胞培养液中，缓慢搅拌4h；冷冻干燥， 再装袋、封口。
(10)最终灭菌得成品：辐照灭菌，可得成品。
实施例3：
(1)原料预处理：将新鲜鮟鱇鱼软骨去除冗余等组织，4℃去离子水多次冲 洗干净；然后根据不同解剖部位裁切成合适尺寸，厚度约0.3cm；再迅速置于-40℃ 冷冻，使用前取出于室温下流水解冻。
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:20(w/w) 的8％NaCl溶液搅拌3h后排除废液，重复2次；再进行粗整理，清除残留的部 分冗余。
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.2M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:20去离子水 搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复2次。
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托 盘中，迅速置于-40℃冷冻2h，于洁净条件下解冻。如此反复冻融处理2次。
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的磷酸盐缓冲液(0.1M，pH7.2)搅拌2h后排除废液；以上步骤重复2 次。
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:20 (w/w)的0.02％EDTA—0.05μg/ml胰蛋白酶复合脱细胞液搅拌处理4h；经再整 理，去除上述处理过程形成的部分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:20 (w/w)的5％NaCl溶液搅拌2h后排除废液；以上步骤重复1次。
(8)清洗：4℃下，以料液比1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步 骤重复2次。
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的海洋源性仿生型软骨材料 浸泡于料液比1:10(w/w)的DMEM细胞培养液中，缓慢搅拌4h；冷冻干燥， 再装袋、封口。
(10)最终灭菌得成品：辐照灭菌，可得成品。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并 不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行 的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范 围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)原料预处理：将海洋源性软骨材料去除冗余组织及杂质，并裁切成合适的尺寸，置于低温下冷冻备用；
(2)预处理：4℃下，将步骤(1)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅拌1-4h后排除废液，重复2-4次；然后再进行粗整理，清除残留的部分冗余；
(3)微结构保护：4℃下，将步骤(2)预处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(4)清洗：4℃下，将步骤(3)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(5)初次脱细胞处理：将步骤(4)处理后的软骨材料置于经干烤灭菌的托盘中，迅速置于-40℃冷冻2-4h，于洁净条件下解冻；如此反复冻融处理2-4次；
(6)微结构再保护：4℃下，将步骤(5)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w)的磷酸盐缓冲液搅拌2-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(7)二次脱细胞处理：4℃下，将步骤(6)处理后的软骨材料以料液比1:5-1:20(w/w)的脱细胞溶液搅拌处理2-18h；经再整理，去除上述处理过程形成的部分冗余组织；然后再于4℃下，以料液比1:5-1:20(w/w)的2％-5％NaCl溶液搅拌0.5-4h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(8)清洗：4℃下，以料液比1:5-1:20去离子水搅拌，2h后排除废液；以上步骤重复1-3次；
(9)保护液预处理及加工成型：4℃下，将制备的软骨材料浸泡于料液比1:5-1:20(w/w)的保护液中，缓慢搅拌1-4h，产品成型，制得海洋源性仿生型软骨材料，装袋、封口；
(10)最终灭菌得成品：将所得包装完好的海洋源性仿生型软骨材料最终灭菌，即得成品。
2.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述海洋源性软骨材料为新鲜宰杀取材后立即低温冻存，来源可追溯且满足动物检疫要求。
3.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述海洋源性软骨材料来源于海洋动物的软骨，包括但不限于鮟鱇鱼软骨、鲨鱼软骨、鳐鱼软骨、魟鱼软骨、鲛鱼软骨、鱿鱼软骨等。
4.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述原料预处理工艺为：将新鲜的海洋源性软骨材料去除冗余等组织，采用4℃去离子水多次冲洗干净；并根据不同解剖部位裁切成合适尺寸，厚度约0.1-0.5cm；然后迅速置于-40℃冷冻备用，使用前取出于室温下流水解冻。
5.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(6)中，所述磷酸盐缓冲液为PBS、Hank’s、D-Hank’s中的一种。
6.根据权利要求5所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(6)中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.2M，pH7.0-7.4。
7.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述脱细胞溶液为0.5-4％脱氧胆酸钠、0.1-1％十二烷基硫酸钠、0.02-0.05％EDTA、0.1-1％Triton X-100、0.1-1％烷基糖苷、0.05-5μg/ml胰蛋白酶或胃蛋白酶或DipaseⅡ的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(9)中，所述保护液为生理缓冲液、细胞培养液、组织保存液、透明质酸溶液、壳聚糖溶液、右旋糖酐溶液、甘油等的一种或几种。
9.根据权利要求1所述的海洋源性仿生型软骨材料制备方法，其特征在于，步骤(9)中，根据临床需求，所述产品成型为湿态或干态：湿态为将浸润保护液的海洋源性仿生型软骨材料直接装袋、封口后灭菌；干态则将浸润保护液的海洋源性仿生型软骨材料先冷冻干燥，再装袋、封口。
10.一种如权利要求1-9任一项所述方法制备的海洋源性仿生型软骨材料。
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