CN110193037A - 一种治疗风热感冒的中成药的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中成药制备技术领域，尤其涉及一种治疗风热感冒的中成药的制备方法。本发明以连续超声逆流提取的方式对处方量的金银花、连翘、黄岑药材进行提取，经过优化后的工艺参数能够有效的缩短提取时间、提高生产效率、减少溶剂用量、降低提取温度。实验表明，优化工艺后，提取物中绿原酸的转移率可达80％，对炎症因子的抑制作用更显著。

Description

一种治疗风热感冒的中成药的制备方法
技术领域
本发明涉及中成药制备技术领域，尤其涉及一种治疗风热感冒的中成药的制备方法。
背景技术
复方金银花颗粒，是一种中成药，其由金银花、连翘和黄芩制成。具有清热解毒，凉血消肿的功效。用于风热感冒，咽炎、扁桃体炎、目痛，牙痛及痈肿疮疖。现有技术中复方金银花颗粒的制备主要采用水煎法提取，该方法提取率低、热敏性成分稳定性差等缺点。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种治疗风热感冒的中成药的制备方法，该方法提取率高，热敏性成分稳定。
本发明提供了治疗风热感冒中成药的制备方法，包括：
将处方量的金银花、连翘、黄岑药材，粉碎后以40vol％～80vol％的乙醇进行连续超声逆流提取，提取液经过滤、减压浓缩、喷雾干燥后，制成中成药；
所述药材进样速度为50kg/h～100kg/h；
所述40vol％～80vol％的的乙醇的进样速度为100L/h～200L/h；
所述提取的温度为20℃～60℃，时间为20min～80min；超声频率为30～70kHz，超声功率为50～100W。
本发明中，所述药材与40vol％～80vol％的乙醇的料液比为1kg：(2～8)L。一些实施例中，药材与乙醇的质量-体积比为1kg:5L。
本发明中，所述粉碎至粒度为8～20目。作为优选粉碎至粒度为14目。
本发明中，所述提取采用60vol％的乙醇。
本发明中，所述药材进样速度为80kg/h；乙醇的进样速度为160L/h。
本发明中，所述提取的温度为30～40℃、时间为50min；超声频率为50kHz，超声功率为80W。
本发明中，所述减压浓缩的温度不高于50℃。
本发明中，所述喷雾干燥的进风温度为110～120℃，出风温度为90～100℃。
本发明中，所述制成中成药后还包括与辅料混合制颗粒的步骤。
本发明所述制备方法制得的中成药。
本发明以连续超声逆流提取的方式对处方量的金银花、连翘、黄岑药材进行提取，经过优化后的工艺参数能够有效的缩短提取时间、提高生产效率、减少溶剂用量、降低提取温度。实验表明，优化工艺后，提取物中绿原酸提取率可达80％，对炎症因子的抑制作用更显著。
具体实施方式
本发明提供了一种治疗风热感冒的中成药的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
为了优化本发明工艺参数，以提取液中绿原酸总量为考察指标，分别对药材粉碎粒度、提取溶剂浓度、药材与提取溶剂比例为因素设计，即A：粉碎粒度；B：提取溶剂浓度；C：药材与提取溶剂比例；
结合实际情况为每个因素确定了三个水平，设计了正交实验表，见下表
表1考察因素水平表
取处方量金银花、连翘、黄芩药材，粉碎，以80kg/h速度输入连续逆流管式超声提取机中，再以160L/h的速度逆向通入乙醇，80W的超声功率、30～40℃的超声温度，逆流超声提取50min。滤液过滤，以50℃以下减压浓缩，将浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥进风温度为110～120℃，出风温度为90～100℃。将干燥后的粉末加无糖辅料进行制颗粒。
表2正交试验及结果表
表3方差分析表
方差来源 离差方和 自由度 F比 F临界值 显著性
a 165.588 2 23.761 19.000 *
b 368.752 2 52.913 19.000 *
c 146.062 2 20.959 19.000 *
误差 6.97 2
F 0.05(2，2)＝19.00 *P<0.05
以上结果可知A因素、B因素、C因素水平变化对试验结果有显著影响，即药材粉碎粒度、提取溶剂浓度、药材与提取溶剂比例有显著性影响，结合直观分析，挥发油提取条件宜为A2B2C2即：药材粉碎粒度14目、提取溶剂浓度60％、药材与提取溶剂比例为1:5。
2、根据正交实验结果，以提取液中绿原酸转移率为指标，对提取时间进行单因素考察。
表4提取时间对绿原酸的影响
提取时间 绿原酸转移率(％)
20min 72.66
35min 78.03
50min 81.60
65min 81.66
80min 82.05
以上结果可知提取时间在50min以后绿原酸转移率无明显提高，因此确定提取时间为50min
3、据正交实验结果及提取时间结果，以提取液中绿原酸转移率为指标，对提取温度进行单因素考察。
表5提取温度对绿原酸的影响
提取温度 绿原酸转移率(％)
20～30℃ 76.80
30～40℃ 81.93
40～50℃ 75.33
50～60℃ 74.58
以上结果可知随着提取温度的升高，提取液中的绿原酸转移率发生先上升后下降的趋势，因此确定提取温度定为30～40℃。
实施例2稳定性验证
取处方量金银花、连翘、黄芩药材，粉碎，以80kg/h速度输入连续逆流管式超声提取机中，再以160L/h的速度逆向通入乙醇，80W的超声功率、30～40℃的超声温度，逆流超声提取50min。滤液过滤，以50℃以下减压浓缩，将浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥进风温度为110～120℃，出风温度为90～100℃。将干燥后的粉末加无糖辅料进行制颗粒，平行进行三次验证。结果见下表。
表6工艺验证实验
结果所得产物中绿原酸的转移率平均为81.99％,RSD为0.395％，说明本工艺稳定可行。
实施例3优化后工艺
取处方量金银花、连翘、黄芩药材，粉碎为14目，以80kg/h速度输入连续逆流管式超声提取机中，再以160L/h的速度逆向通入乙醇，80W的超声功率、30～40℃的超声温度，逆流超声提取50min。滤液过滤，以50℃以下减压浓缩，将浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥进风温度为110～120℃，出风温度为90～100℃。将干燥后的粉末加无糖辅料进行制颗粒。提取物中绿原酸的转移率不少于80％。
功效验证
1.1对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的抗炎作用
方法：取雄性大鼠80只，体重110～130g，按体重随机分空白对照组、模型对照组(灌胃等体积蒸馏水)、阳性对照阿司匹林组(540mg/kg)、复方金银花颗粒复方金银花颗粒原工艺制剂制剂、201610743968.2专利制剂、本发明制剂(来自实施例3)低剂量组、中剂量组、高剂量组，每日灌胃给药1次，灌胃体积10ml/kg，连续7日。给药第6天，用电子数显卡尺测量大鼠右后肢足趾基础厚度，末次给药后30分钟，于大鼠左后肢足趾皮下注射5％角叉菜胶溶液0.1ml/只，随后分别于给药后1、2、3、4和6小时各测一次足趾厚度。用肿胀度表示结果。肿胀度＝肿胀后的组织厚度-足趾基础厚度。
1.2体外抗炎实验
1.2.1细胞分组
将生长良好的RAW264.7细胞随机分为11组，空白组：RAW264.7；模型组：LPS(0.2μg/mL)；本发明制剂(来自实施例3)低浓度+LPS组；本发明制剂中浓度+LPS组；本发明制剂高浓度+LPS组；复方金银花颗粒复方金银花颗粒原工艺制剂制剂低浓度+LPS组；复方金银花颗粒复方金银花颗粒原工艺制剂制剂中浓度+LPS组；复方金银花颗粒复方金银花颗粒原工艺制剂制剂高浓度+LPS组；阿司匹林低浓度+LPS组；阿司匹林中浓度+LPS组；阿司匹林高浓度+LPS组。
1.2.2MTT检测细胞活性
①将对数生长期的细胞浓度调整为5×104个/mL，在96孔板中每孔加入细胞10μL/孔(约5×103个)，置37℃、5％CO2细胞培养箱中培养24h。②培养细胞24h后，加入适当浓度的药物，每个处理设5个平行组，每组设5个复孔。③将96孔板在37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育24h，每孔加10μL 5mg/mL MTT，继续培养4h，吸出上清液，每孔加100μLDMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。④用酶联免疫检测仪在490nm波长处测量各孔的吸光值。⑤结果分析：细胞存活率％＝(测试孔OD值-本底OD值)/(对照组OD值-本底OD值)×100％，本底OD值是在完全培养基加入MTT(无细胞)后，酶联免疫检测仪在490nm波长处测出其吸光值(OD)。
1.2.3ELISA试剂盒检测细胞分泌上清中TNF-α、IL-6的表达情况
根据细胞分组情况，加入相应药物培养24h后，吸取细胞上清液，按试剂盒说明操作，用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)，绘制标准曲线图，计算样品浓度。
1.3对干酵母致大鼠发热模型的解热作用
正式实验前3d，将100只大鼠，雌雄各半，240-260g，置于实验环境中模拟实验操作(包括捉拿、固定、灌胃、安放温度计)以适应实验室条件，每日测量体温(肛温)2次，单次体温超过38℃或2次体温差值超过0.5℃的剔除不用。筛选出合格大鼠70只，体温为37.5±0.5℃，按照体重随机分为7组，空白组、模型对照组、拜阿司匹林组(90mg·kg-1)、复方金银花颗粒原工艺制剂组(3.24g·kg-1)，201610743968.2专利制剂组(3.24g·kg-1)、本发明制剂(来自实施例3)低、中、高剂量组(1.62、3.24、6.48g·kg-1)，各组10只，于第4d开始正式实验，实验前6h动物禁食不禁水，使排空大便，造模前测量体温2次，间隔10min，取平均值作为基础体温。每只大鼠于背部皮下注射20％干酵母悬液(10ml·kg-1)复制大鼠发热模型，空白对照组注射等量的生理盐水，然后，各组大鼠灌胃给药(10ml·kg-1)，测量给药后1，2，3，4h大鼠肛温，记录体温变化△T℃。
1.4镇痛实验
1.4.1热板实验
在55±0.5℃环境下测定ICR小鼠的痛阈值，每只小鼠测量三次，每次测量间隔30min，三次测量值求平均值即为小鼠的基础痛阈值，选取痛阈值在5s～30s的雌性小鼠72只体重在18g～22g左右。将小鼠按照体重随机分为6组，分别为空白对照组、拜阿司匹林组(400mg·kg-1)，复方金银花颗粒原工艺制剂组(2.34g·kg-1)，201610743968.2专利制剂组(3.24g·kg-1)，本发明制剂(来自实施例3)低、中、高剂量组(1.17、2.34、4.68g·kg-1)，每组各12只。每日灌胃给药1次，灌胃体积10ml·kg-1，连续7d。末次给药后1h测量小鼠痛阈值(舔后足时间，超过60s者按60s计算)。
1.4.2甩尾实验
ICR小鼠，雌雄各半，体重18g～22g。将72只小鼠按照体重随机分为6组，分别为空白对照组、拜阿司匹林组(400mg·kg-1)，复方金银花颗粒原工艺制剂组(2.34g·kg-1)，201610743968.2专利制剂组(3.24g·kg-1)，本发明制剂(来自实施例3)低、中、高剂量组(1.17、2.34、4.68g·kg-1)，每组各12只。灌胃给药，给药体积为10ml·kg-1，连续7d，末次给药后1h、3h进行甩尾实验。将小鼠置于测痛仪固定桶内，鼠尾暴露于外，照射尾尖1/3处，照射功率25W。待动物安静后进行测痛，以鼠尾受热后出现甩尾反应的时间作为疼痛反应潜伏期(以鼠尾受热后出现甩尾反应的时间作为疼痛反应潜伏期)。
2统计分析
因数据分析的需要而采用Excel统计分析方法。
3实验结果
3.1对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀实验结果
与空白组比较，模型组在1、2、3、4、6小时肿胀度明显增大(P<0.001)；与模型组比较，本发明制剂中、高剂量组在2～4h明显抑制肿胀(P<0.05，P<0.01，P<0.001)；且本发明制剂(来自实施例3)与同剂量复方金银花颗粒原工艺制剂、201610743968.2专利制剂抗炎效果比较，优于复方金银花颗粒原工艺制剂组、201610743968.2专利制剂组，与阳性药组效果相当，详见表1。
表7各组大鼠右后足趾肿胀度变化(n＝10)
与空白组比较，###P<0.001；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
3.2体外抗炎实验结果
复方金银花颗粒各工艺及阿司匹林对LPS诱导的RAW264.7细胞活力的影响如表2所示，0.2μg/mL LPS作用细胞24h后，与正常组比较，细胞活力增加到115.63，表明0.2μg/mLLPS作用RAW264.7细胞24h后，能促进细胞的增殖活力。阿司匹林与复方金银花颗粒作用于LPS诱导的细胞后，能够抑制细胞的增殖活性。
表8 0.2μg/ml与各组受试物对RAW264.7细胞存活率的影响
组别 浓度(μg/ml) 细胞存活率(％)
空白组 -- 100.00
模型组 -- 115.63
阳性对照组 100 57.32
复方金银花颗粒原工艺制剂组 100 79.54
本发明制剂低浓度组 50 79.56
本发明制剂中浓度组 100 61.33
本发明制剂高浓度组 200 50.20
本发明制剂各工艺及阿司匹林对LPS诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-6的影响ELISA试剂盒检测结果见表3。正常组RAW264.7细胞上清液中TNF-α、IL-6水平较低，给予0.2μg/mL LPS刺激后，模型组TNF-α、IL-6的含量增加，差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较，各组受试物中、高剂量组均能抑制TNF-α的产生(P<0.05)，但复方金银花颗粒原工艺制剂低剂量组对TNF-α的抑制效果不明显(P>0.05)；各组受试物均能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞产生的IL-6，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。
表9受试物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α、IL-6的影响
与空白组比较，###P<0.001；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
3.3解热实验
给药1h后，各组体温均无明显升高，给药2h后，模型组体温明显升高，拜阿司匹林组、复方金银花颗粒原工艺制剂组、201610743968.2专利制剂组及本发明制剂(来自实施例3)低、中、高剂量组可明显抑制大鼠体温升高，与模型对照组比较有显著差异(p<0.05，p<0.01)，给药3h后，仅拜阿司匹林组、中剂量组及高剂量组可明显抑制体温升高(p<0.05)，给药4h后，各给药组均无明显抑制大鼠体温升高作用，结果见表4。
表10对大鼠体温变化的影响(n＝10)
与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01。
3.4镇痛实验
3.4.1热板实验
拜阿司匹林组可延长小鼠痛阈值，但无统计学差异(p>0.05)，复方金银花颗粒原工艺制剂组、201610743968.2专利制剂组及本发明制剂(来自实施例3)中、高剂量组均可明显延长小鼠痛阈值，对小鼠有明显的镇痛作用，与空白对照组比较有显著差异(p<0.05)，结果见表5。
表11对各组小鼠痛阈值的影响(n＝12)
与空白组比较*p<0.05。
3.4.2甩尾实验
给药1h后，拜阿司匹林组、复方金银花颗粒原工艺制剂组、201610743968.2专利制剂组及本发明制剂(来自实施例3)中、本发明制剂高剂量组可明显延长小鼠痛阈值，有较好的镇痛作用，与空白对照组比较有差异(p<0.05)；给药3h后，拜阿司匹林组可延长小鼠痛阈值，但与空白对照组比较无统计学差异(p>0.05)，而高剂量组仍可明显延长小鼠痛阈值，有较持久的镇痛作用，与空白对照组比较有差异(p<0.05)，结果见表6。
表12对各组小鼠甩尾时间的影响(n＝12)
与空白对照组比较*p<0.05。
本发明制剂具有明显抗炎、解热、镇痛效果，与阳性对照组比较，作用相当，且同剂量条件下优于复方金银花颗粒原工艺制剂及201610743968.2专利制剂组。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种治疗风热感冒中成药的制备方法，包括：
将处方量的金银花、连翘、黄岑药材，粉碎后以40vol％～80vol％的乙醇进行连续超声逆流提取，提取液经过滤、减压浓缩、喷雾干燥后，制成中成药；
所述药材进样速度为50kg/h～100kg/h；
所述40vol％～80vol％的的乙醇的进样速度为100L/h～200L/h；
所述提取的温度为20℃～60℃，时间为20min～80min；超声频率为30～70kHz，超声功率为50～100W。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述药材与40vol％～80vol％的乙醇的料液比为1kg：(2～8)L。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述粉碎至粒度为8～20目。
4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述提取采用60vol％的乙醇。
5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述药材进样速度为80kg/h；乙醇的进样速度为160L/h。
6.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述提取的温度为30～40℃、时间为50min；超声频率为50kHz，超声功率为80W。
7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述减压浓缩的温度不高于50℃。
8.根据权利要求1～7任一项所述的制备方法，其特征在于，所述喷雾干燥的进风温度为110～120℃，出风温度为90～100℃。
9.根据权利要求1～8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制成中成药后还包括与辅料混合制颗粒的步骤。
10.权利要求1～9任一项所述制备方法制得的中成药。
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