CN110192530B - 一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法，以纹瓣兰类原球茎为材料，于无外源激素的固体培养基中全黑暗培养20～30天形成根状茎；取不含顶芽的纹瓣兰根状茎接种于无外源激素固体培养中，培养7～12天，根状茎逆转化为类原球茎。本发明在无外源激素存在的条件下，实现了纹瓣兰两种中间繁殖体类原球茎和根状茎的相互转换相互转换，可作为简单高效的兰花中间繁殖体形态转换研究体系。

Description

一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法
技术领域
本发明属于植物组织培养，具体地涉及一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法。
背景技术
兰花是兰科(Orchidaceae)植物，依其所属生长习性可分为附生兰和地生兰两大类。中国传统意义上的兰花是指是指兰科兰属(Cymbidium)植物中的一部分地生种，包括春兰、墨兰、蕙兰、建兰、寒兰、春剑、莲瓣兰、豆瓣兰、送春等，国人称之为国兰。国兰叶姿优美，四季常青，花朵素雅，花香馥郁，素以香气取胜，自古以来深受人们喜爱，是珍贵的观赏花卉，具有重要的经济价值和文化价值。
兰花的离体再生主要是通过类原球茎或根状茎中间繁殖体实现的，附生兰的中间繁殖体以类原球茎为主，易分化，分化效率高，而地生兰中间繁殖体是以根状茎为主，难分化，分化效率低，无法满足兰花种苗工厂化繁殖的要求。迄今尚未能从根本上解决兰花根状茎分化难的问题，究其根本原因就是缺乏一种高效的兰花根状茎苗分化研究体系。
一般认为，地生兰由气生兰进化而来(Yukawa et al.,2002)，其根状茎中间繁殖体也是由原球茎或类原球茎伸长发育而来的(陈进勇等,1998)。在外源激素诱导的条件下，地生兰根状茎也可转化类原球茎为从而实现苗分化(Paek et al.,1989；Shimasaki andUemoto,1990；Wang,1990；Paek and Yeung,1991；Yuki et al.,2007)。然而在无外源激素条件下，兰花中间繁殖体类原球茎和根状茎相互转换的研究未见有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法。该方法能在无外源激素存在的条件下，实现了纹瓣兰类原球茎和根状茎的相互高效转换，可作为一种高效的兰花中间繁殖体形态转换研究体系，可用于弄清兰花根状茎分化难的问题。
一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法，包括以下步骤：
S1.类原球茎转变为根状茎：将纹瓣兰类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，并于25～28℃中全黑暗培养20～30天，即可形成根状茎；
S2.根状茎逆转化为类原球茎：取不含顶芽的纹瓣兰根状茎接种于无外源激素固体培养中，培养7～12天，根状茎逆转化为类原球茎，其中，培养条件为：培养温度为25～28℃，光照强度为2000～2500lx，光照时间为12～14小时/天。
进一步地，步骤S1和S2中所述的无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.4～5.8。
更进一步地，步骤S1需在严格的黑暗条件下进行培养，即步骤S1培养过程中光照强度为0lx。
与现有技术相比，本发明具有以下的优点：
本发明提供的方法能够在无外源激素条件下，高效地实现纹瓣兰中间繁殖体类原球茎和根状茎的相互转换，可作为兰花中间繁殖体形态转换研究体系，用于弄清兰花根状茎分化难的问题。
附图说明
图1是纹瓣兰类原球茎在无外源激素条件下培养形成为根状茎；
a.纹瓣兰类原球茎；b.纹瓣兰类原球茎在不含外源激素MS培养基中黑暗培养25天后形成的根茎状。
图2是纹瓣兰根状茎在无外源激素条件下培养形成为类原球茎；
a.纹瓣兰不含顶端的根状茎；b.纹瓣兰根状茎在不含外源激素MS培养基中光照培养11天后形成的类原球茎。
图3是纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法示意图；
其中，PLB:Protocorm-like body，类原球茎；DAC：day after culture，培养n天后)。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
一、纹瓣兰在无外源激素条件下类原球茎器官转化为根状茎
实施例1
将类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，于25℃中全黑暗培养25天，形成根状茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.8。
实施例2
将类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，于26℃中全黑暗培养20天，形成根状茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.8。
实施例3
将类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，于28℃中全黑暗培养25天，形成根状茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.8。
实施例4
将类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，于28℃中全黑暗培养25天，形成根状茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.8。
二、纹瓣兰在无外源激素条件下根状茎转化为类原球茎
实施例6
将纹瓣兰根状茎切成含有1～2个茎节的、且不含顶芽的根状茎并接种于无激素固体培养中，在一定培养条件下进行培养11天即可形成为类原球茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.4。培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为2500lx，光照时间为14小时/天。
实施例7
将纹瓣兰根状茎切成含有1～2个茎节的、且不含顶芽的根状茎并接种于无激素固体培养中，在一定培养条件下进行培养12天即可形成为类原球茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.5。培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为2000lx，光照时间为14小时/天。
实施例8
将纹瓣兰根状茎切成含有1～2个茎节的、且不含顶芽的根状茎并接种于无激素固体培养中，在一定培养条件下进行培养7天即可形成为类原球茎。无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.5。培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为2300lx，光照时间为12小时/天。
上述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种高效的纹瓣兰中间繁殖体相互转换方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 类原球茎转变为根状茎：将纹瓣兰类原球茎接种于无外源激素的固体培养基中，并于25-28℃中全黑暗培养20-30天，即可形成根状茎；
S2. 根状茎逆转化为类原球茎：取不含顶芽且具有1-2个茎节的纹瓣兰根状茎接种于无外源激素固体培养中，培养7-12天，根状茎逆转化为类原球茎，其中，培养条件为：培养温度为25-28℃，光照强度为2000-2500 lx，光照时间为12-14 小时/天；
所述步骤S1和S2的无外源激素的固体培养基为：MS培养基+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉胶，pH为5.4-5.8。
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CN101861833A (zh) * 2010-06-03 2010-10-20 中国农业大学 凤尾兰花药组织培养的方法及专用培养基
CN104429964A (zh) * 2014-12-12 2015-03-25 东莞市生物技术研究所 一种紫香兰组培快繁方法

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