CN110191896A - 改进的血清白蛋白结合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及能够与血清白蛋白结合的氨基酸序列。特别地，本发明涉及能够与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，且特别是重链免疫球蛋白单可变结构域。本发明还涉及包含至少一个本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。

Description

改进的血清白蛋白结合物
本发明涉及能够与血清白蛋白结合的氨基酸序列。
特别地，本发明涉及能够与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，特别是重链免疫球蛋白单可变结构域。
如本文所述，本发明提供的免疫球蛋白单可变结构域优选是这样的：它们(至少)能够与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)。更优选地，如本文进一步所述，这些免疫球蛋白单可变结构域优选地进一步是这样的：它们在人血清白蛋白和来自至少一种其他哺乳动物物种的血清白蛋白之间是交叉反应的(如本文所述)。
本发明还涉及包含至少一个本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体。
免疫球蛋白单可变结构域通常也通过缩写“ISV”或“ISVD”(其在本文中可互换使用)在本文中提及。
本文所述的与血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域在本文中也称为“本发明的氨基酸序列”或“本发明的血清白蛋白结合物”。如本文进一步所述，本发明的白蛋白结合物特别地可以是纳米抗体(如本文进一步描所述)。
包含至少一种本发明的血清白蛋白结合物的蛋白质、多肽和其他构建体、化合物、分子或化学实体在本文中也称为“本发明的化合物”或“本发明的多肽”。优选地，本发明的化合物是蛋白质或多肽，并且特别地可以是融合蛋白。
基于本文的公开内容，本领域技术人员将清楚本发明的其他方面、实施方案、特征、用途和优点。
在本申请中，免疫球蛋白重链可变结构域中的氨基酸残基/位置将用根据Kabat的编号表示。为方便起见，附图1给出了表格，其列出了本文将具体提及的一些氨基酸位置和它们根据一些备选编号系统(例如Aho和IMGT。注意：对于本说明书和权利要求，Kabat编号是决定性的，除非另有明确说明；其他编号系统仅供参考)的编号。
关于CDR，如本领域众所周知的，存在着多种规则以定义和描述VH或VHH片段的CDR，例如Kabat定义(其基于序列可变性并且是最常用的)和Chothia定义(其基于结构环区域的位置)。例如，参考网站http：//www.bioinf.org.uk/abs/。为了本说明书和权利要求书的目的，虽然也可提及根据Kabat的CDR，但是CDR最优选基于Abm定义(其基于OxfordMolecular的AbM抗体建模软件)而定义，因为这被认为是Kabat和Chothia定义之间的优化折衷。再次参考网站http：//www.bioinf.org.uk/abs/。
因此，在本说明书和权利要求中，所有CDR均根据Abm规则来定义，除非本文另有明确说明。
能够与血清白蛋白结合的ISVD(且特别是纳米抗体)及其用途是本领域公知的，例如WO 2004/041865、WO 2006/122787、WO 2012/175400、WO 2015/173325和PCT/EP2016/077973，其描述了血清白蛋白结合ISVD及其用于延长治疗化合物、结构部分和实体的血清半衰期(如这些申请中所定义)的用途。例如，WO2006/122787公开了作为SEQ ID NO：62的被称为Alb-8的人源化血清白蛋白结合纳米抗体(参见本文SEQ ID NO：1)。WO2012/175400公开了作为SEQ ID NO：6的被称为Alb-23D的人源化血清白蛋白结合纳米抗体(参见本文SEQID NO：2)。Alb-8和Alb-23D的氨基酸序列及其CDR(其对于Alb-8和Alb-23D是相同的)在下表A中分别以SEQ ID NO：1、2和3至8示出。
公开针对血清白蛋白的ISVD的一些其他参考文献包括WO2003/035694、WO 2004/003019、EP 2139918、WO 2011/006915和WO 2014/111550。
附图3A和3B显示了Alb-8(参照)、Alb-23D(参照)、SEQ ID NO：18(本发明)与SEQID NO：19(本发明)的比对。
本发明旨在提供改进的血清白蛋白结合物，特别是与本领域已知的血清白蛋白结合物相比具有改进的性能的血清白蛋白结合物。特别地，本发明旨在提供血清白蛋白结合物，其能够与狗血清白蛋白结合和/或在人血清白蛋白和狗血清白蛋白之间具有改进的交叉反应性(即与现有技术的血清白蛋白结合物如Alb-8和/或Alb-23D相比)。
表A：Alb-8、Alb-23D及其CDR
表B：SEQ ID NO：18和19及其CDR
通常，本发明提供的血清白蛋白结合ISVD是SEQ ID NO：18和19的序列的变体，其中：
-它们具有与SEQ ID NO：18和/或19的序列相同的CDR(或基本上相同的CDR)(条件是，如果CDR根据Kabat定义，则CDR2可以是AISQNSIHTYYANSVKG(SEQ ID NO：10)或AISQNSIHTYYADSVKG(SEQ ID NO：11))；和
-它们与SEQ ID NO：18和/或19的序列具有一定程度的序列同一性(序列同一性程度如本文进一步描述)。
特别地，与SEQ ID NO：18和/或19的序列相比，本发明提供的血清白蛋白结合ISVD通常具有(有限的)数量的“氨基酸差异”(如本文所述)。这些氨基酸差异可存在于CDR中(只要所得的氨基酸序列使它们保留本文所列的本发明氨基酸序列的另外的性质即可)和/或存在于框架区中，且尤其是可存在于框架区中(如根据Kabat和/或根据Abm所定义)。例如但不限于，这些氨基酸差异可以是例如人源化置换，在所需宿主细胞或宿主生物体中改善表达的置换，改善稳定性和/或对降解和/或蛋白酶的抗性的置换，降低预先存在的抗体结合的突变，和/或旨在优化本发明氨基酸序列的序列的其他突变；或这些氨基酸差异的任何适当组合。参考本文的进一步公开内容。
在第一方面，本发明涉及能够与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，其具有：
-CDR1(根据Kabat)，其是氨基酸序列TYVMG(SEQ ID NO：9)或与SEQ ID NO：9的氨基酸序列具有2或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR2(根据Kabat)，其是氨基酸序列AISQNSIHTYYANSVKG(SEQ ID NO：10)或AISQNSIHTYYADSVKG(SEQ ID NO：11)或与SEQ ID NO：10的氨基酸序列和/或SEQ ID NO：11具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR3(根据Kabat)，其是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)或与SEQID NO：14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。
特别地，根据本发明此方面的血清白蛋白结合物可以是(和优选是)如本文进一步描述的。
在更具体的方面，本发明涉及能够与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，且其具有：
-CDR1(根据Kabat)，其是氨基酸序列TYVMG(SEQ ID NO：9)；和-CDR2(根据Kabat)，其是氨基酸序列AISQNSIHTYYANSVKG(SEQ ID NO：10)或AISQNSIHTYYADSVKG(SEQ ID NO：11)；和
-CDR3(根据Kabat)，其是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)。
再次，根据本发明此方面的血清白蛋白结合物可以是(和优选是)如本文进一步描述的。
在另一方面，本发明涉及能够与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，且其具有：
-CDR1(根据Abm)，其是氨基酸序列GGTFSTYVMG(SEQ ID NO：12)或与SEQ ID NO：12的氨基酸序列具有2或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR2(根据Abm)，其是氨基酸序列AISQNSIHTY(SEQ ID NO：13)或与SEQ ID NO：13的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR3(根据Abm)，其是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)或与SEQ IDNO：14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。
特别地，根据本发明此方面的血清白蛋白结合物可以是(并且优选是)如本文进一步描述的。
在更具体的方面，本发明涉及能够与人血清白蛋白结合(且特别是特异性结合)的ISVD，其具有：
-CDR1(根据Abm)，其是氨基酸序列GGTFSTYVMG(SEQ ID NO：12)；和
-CDR2(根据Abm)，其是氨基酸序列AISQNSIHTY(SEQ ID NO：13)；和
-CDR3(根据Abm)，其是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)。
此外，根据本发明此方面的血清白蛋白结合物可以是(并且优选是)如本文进一步描述的。
通常，根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物优选是这样的：它们具有：
-与SEQ ID NO：18和/或19的序列(其中用于确定序列同一性程度不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性程度；
和/或这样的：它们具有：
-和/或与SEQ ID NO：18和/或19的序列具有不超过7个，优选不超过5个，例如仅3个、2个或1个“氨基酸差异”(如本文所定义，且不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)。
根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物通常优选是这样的：它们以10-5至10-12摩尔/升或更少，和优选10-7至10-12摩尔/升或更少，和更优选10-8至10-12摩尔/升的解离常数(KD)，和/或具有至少107M-1，优选至少108M-1，更优选至少109M-1，例如至少1012M-1的结合亲和力结合至人血清白蛋白，如使用ProteOn所测定(参考实施例1)。优选地，本发明的血清白蛋白结合物将以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM，例如小于500pM的亲和力与所需抗原结合，再次如使用ProteOn所测定(再次参考实施例1)。
根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物优选还是这样的：它们与SEQ ID NO：18的氨基酸序列竞争结合(人)血清白蛋白和/或它们“交叉阻断”(如本文所定义)SEQ IDNO：18的氨基酸序列与(人)血清白蛋白的结合。
优选地，本发明的白蛋白结合物是这样的：它们结合至与SEQ ID NO：18基本上相同的人血清白蛋白上的氨基酸残基和/或表位，甚至更优选是这样的：它们共享与SEQ IDNO：18基本上相同的氨基酸相互作用。为此目的，根据具体但非限制性的方面，本发明的白蛋白结合物优选地具有与序列SEQ ID NO：18相同的CDR，或者与SEQ ID NO：18的序列相比，优选地在其CDR中仅包含这样的突变(例如保守氨基酸置换)：所述突变仍然允许它们进行与SEQ ID NO：18相同或基本相同的与人血清白蛋白的氨基酸相互作用。
根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物通常优选还是这样的：它们在人血清白蛋白和来自于至少一种、优选至少两种、更优选至少三种以及直至基本上所有下列哺乳动物物种的血清白蛋白之间是交叉反应的：狗、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、猪、绵羊、牛和食蟹猴。特别地，根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物是这样的：它们(至少)在人血清白蛋白和狗血清白蛋白之间是交叉反应的，并且还优选地一方面在人血清白蛋白和/或狗血清白蛋白之间是交叉反应的，和另一方面，在人血清白蛋白和大鼠血清白蛋白、小鼠血清白蛋白和来自于食蟹猴的血清白蛋白中的至少一种、优选至少两种、更优选所有三种之间是交叉反应的。在这方面，与具有和Alb-11和/或Alb-23D(基本上)相同的CDR的血清白蛋白结合物相比，本发明的血清白蛋白结合物可以具有改善的交叉反应性(特别地，在一方面是人血清白蛋白和另一方面是狗血清白蛋白之间)。参考下面实验部分中的数据。
为了参考，图11给出了来自不同哺乳动物物种的血清白蛋白的比对(来源：http：//macromoleculeinsights.com/albumin.php，图11中的氨基酸编号是所述网页上使用的编号)。为方便起见，在人血清白蛋白的序列中，突出显示了被假定为本发明氨基酸序列的推定表位的一部分的氨基酸区段。不受任何特定机制或假设的限制，假定本发明的氨基酸序列(基本上)能够结合存在于与本发明的氨基酸序列是交叉反应的那些哺乳动物血清白蛋白的氨基酸序列内的氨基酸残基的相应区段(内的一个或更多个氨基酸残基)。
通常，当本发明的血清白蛋白结合物能够以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM的亲和力结合人血清白蛋白，并且还能够以小于500nM，优选小于200nM，更优选小于10nM的亲和力结合来自所述物种的血清白蛋白，则可认为本发明的血清白蛋白结合物在人血清白蛋白和来自于这些物种之一的血清白蛋白之间是交叉反应的，再次地二者均如使用ProteOn测定(再次参考实施例1)。
根据本发明的不同方面的血清白蛋白结合物优选还是这样的：
-它们具有超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表示为t1/2β)；例如，约一周、两周和长至人血清白蛋白的半衰期(估计约为19天)；
和/或是这样的：
-当其与治疗结构部分或实体连接时，其赋予本发明所得多肽超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表示为t1/2β)；例如，约一周、两周和长至人血清白蛋白的半衰期(估计约为19天)。
在其他因素中，在除人之外的哺乳动物物种中的半衰期主要取决于本发明白蛋白结合物对来自所述哺乳动物物种的血清白蛋白的结合性能(例如亲和力)以及所述物种中的初始血清白蛋白的半衰期。根据本发明的一个优选实施方案，当本发明的血清白蛋白结合物在人血清白蛋白和来自另外的哺乳动物物种的血清白蛋白之间是交叉反应的(如本文所定义)时，则在所述物种中测定的本发明血清白蛋白结合物(和/或包含所述血清白蛋白结合物的本发明的化合物)的半衰期优选为所述物种中初始血清白蛋白半衰期的至少5％，例如至少10％，更优选至少25％，例如约50％，和可能高达100％。
与SEQ ID NO：18的序列相比，本发明的血清白蛋白结合物优选还含有(至少)：
-一个或更多个人源化置换；
和/或
-降低预先存在的抗体的结合的一个或更多个突变(即氨基酸置换、缺失或添加，且特别是置换)；
并且可任选地含有一个或更多个如本文所述的另外的突变。
对于适当的人源化置换(及其适当的组合)，例如参考WO 09/138519(或在WO 09/138519中引用的现有技术)和WO 08/020079(或在WO 08/020079中引用的现有技术)，以及来自WO 08/020079的表A-3至A-8(其为展示可能的人源化置换的列表)。这种人源化置换的一些优选但非限制性的实例是Q108L和A14P或其适当的组合。此类人源化置换也可以适当地与如本文所述的一个或更多个其他突变(例如与一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变)组合。
对于能够降低预先存在的抗体的结合的适当的突变(以及这些突变的适当的组合)，例如参考WO 2012/175741和WO 2015/173325以及例如参考WO 2013/024059和WO2016/118733。如其中所述，这种突变可包含一个或更多个氨基酸置换、缺失或添加(且特别是置换)(的适当的组合)，这些突变通常位于ISV的所谓C端区域。例如，此类突变可包括在位置11、13、14、15、40、41、42、82、82a、82b、83、84、85、87、88、89、103、108的一个或更多个位置的突变(且特别是置换)，和/或在C端VTVSS序列中一个或更多个位置(即位置109、110、111、112和113)的突变，在位置11、89、110和/或112处的一个或更多个突变是特别优选的。这种突变的一些优选但非限制性的实例是适当的置换(如果需要)，使得在突变后，在指定位置，存在以下氨基酸残基之一：11L、11K、11V、14A、14P、41A、41L、41P、41S、41T、42E、42G、87A、87T、89A、89L、89T、108L、110K、110Q、112K和/或112Q(11L、89A、89L、89T、110K、110Q、112K和112Q是特别优选的)；或这些置换的任何适当组合，例如但不限于：11V与89L或89T组合；11V与110K或110Q组合；或11V与89L和110K或110Q组合。降低预先存在的抗体的结合的此类突变也可以适当地与本文所述的一个或更多个其他突变(例如与一个或更多个人源化置换)组合。
为了降低预先存在的抗体的结合，本发明的血清白蛋白结合物(和如本文进一步所述，本发明的化合物)适当时(如本文进一步所述，特别是当本发明的血清白蛋白结合物存在于和/或形成其存在其中的本发明化合物的C端末端时)还可以包含C端延伸(例如C端丙氨酸残基)。如WO2012/175741中所述，这种C端延伸降低预先存在的抗体的结合。合适的C端延伸通常能够在本文中进一步描述，且能够特别地具有式-(X)n，其中X可以是任何天然存在的氨基酸(但优选不是半胱氨酸)，且n能够是1、2、3、4或5。再次参考WO 2012/175741，也可参考例如WO 2015/173325、WO 2013/024059和WO 2016/118733。这样一种C端延伸的存在也可以适当地与本文描述的一个或更多个其他突变(例如与一个或更多个人源化置换和/或一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变)组合。
可存在于本发明血清白蛋白结合物中的其他突变例如但不限于包括提高在所需宿主细胞或宿主生物体中的表达的一个或更多个突变(特别是置换)，提高稳定性和/或对降解和/或蛋白酶的抗性的一个或更多个突变(特别是置换)，和/或旨在优化本发明氨基酸序列的序列的一个或更多个其他突变(例如但不限于，(进一步)降低白蛋白结合物形成二聚体的任何倾向的一个或更多个突变)；或这些突变的任何适当的组合。
这种突变的一些非限制性的实例是适当的置换(如果需要)，使得在突变后，在指定位置，存在以下氨基酸残基之一：16G、49A、61D、74S、75K、76N、82M和83R；或这些置换的任何适当的组合(例如以便在位置74-76形成SKN基序)。此外，在适当的情况下(如本文进一步所述)，本发明的血清白蛋白结合物可以在位置1具有D(即与SEQ ID NO：18和/或19的序列相比的E1D突变)，特别是当本发明的血清白蛋白结合物存在于和/或形成其存在其中的本发明化合物的N端末端时。这种突变也可以再次适当地与本文描述的一个或更多个其他突变(例如与一个或更多个人源化置换和/或一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变)组合。
基于本文公开的内容，技术人员将清楚可存在于本发明氨基酸序列中的其他突变。
单突变(或突变的适当组合)也可能提供多种功能或优点。例如但不限于，人源化Q108L置换也可降低预先存在的抗体的结合。
可存在于本发明的氨基酸序列中(即通过它们自身或以适当的组合)的氨基酸残基的一些优选但非限制性实例(即与SEQ ID NO：18的氨基酸序列相比的突变)包括：11V(即L11V)、14P(即A14P)、16G(即D16G)、49A(即S49A)、61D(即N61D)、74S(即D74S)、82M(即L82M)、83R(即K83R)、89L(即V89L)，89T(即V89T)、110K(如T110K)或110Q(如T110Q)；以及在适当的情况下(如本文进一步描述的)，1D(如E1D)和/或如本文定义的C端延伸(X)n(例如114A)。又参考附图4A和4B中所示的序列和突变。例如，这些氨基酸残基的适当组合的一些优选但非限制性的实例(即与SEQ ID NO：18的氨基酸序列相比的突变)包括：
-L11V、T14P、D16G、N61D、D74S、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、D74S、L82M、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、N61D、D74S、L82M、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、S49A、D74S、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、S49A、N61D、D74S、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、S49A、D74S、L82M、K83R、V89L
-L11V、T14P、D16G、S49A、N61D、D74S、L82M、K83R、V89L
-L11V、T14P、D74S、K83R、V89L；
并且基于本文的公开内容，技术人员将清楚其他适当的组合。
本发明的一些优选但非限制性的氨基酸序列是在下列位置的那些氨基酸序列：其中，(i)位置11是V且位置89是L；(ii)位置89是T；(iii)位置74-76形成SKN基序；(iv)位置11是V，位置89是L且位置74-76形成SKN基序；和(iv)位置89是T且位置74-76形成SKN基序；本发明的氨基酸序列如本文进一步所述(并且因此还能够适当地含有如本文所述的一个或更多个进一步的氨基酸突变)。
本发明的氨基酸序列的一些优选但非限制性的实例在附图2中给出如下：
-SEQ ID NO：18至26，其是不具有C端丙氨酸延伸的本发明氨基酸序列的实例；
-SEQ ID NO：27至35，其是具有C端延伸的本发明氨基酸序列的实例(在每种情况下，通过C端丙氨酸延伸的方法进行示例，该方法通常是优选的C端延伸)；和
-SEQ ID NO：36至44，其是具有N端E1D突变的本发明氨基酸序列的实例)。
基于本文的进一步公开，技术人员将清楚，在实践中：
-具有C端延伸的本发明的白蛋白结合物(例如SEQ ID NO：27至35的那些)通常将被用作/存在于其存在于其中的本发明多肽(如本文所定义)的C端末端；
-具有E1D突变的本发明的白蛋白结合物(例如SEQ ID NO：36至44的那些)通常将被用作/存在于其存在于其中的本发明多肽的N端末端；
-不具有C端延伸且不具有E1D突变的本发明的白蛋白结合物(例如SEQ ID NO：18至26)通常将存在于本发明多肽的“中间”某处。
SEQ ID NO：18至44的每个氨基酸序列以及包含其的蛋白质、多肽和其他化合物和构建体(如本文进一步描述的)形成本发明的进一步的方面。
在进一步的方面，本发明涉及氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID NO：18、SEQID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQID NO：43和/或SEQ ID NO：44的氨基酸序列之一；并且本发明的这些氨基酸序列(以及本发明的多肽-如本文所定义-其包含本发明的这样一种氨基酸序列)各自形成本发明的进一步的方面。
如本文进一步所述，本发明提供的氨基酸序列是能够与人血清白蛋白结合，特别是能够特异性地(如本文所述)结合的蛋白质。因此，它们能够用作结合单元或结合结构域用于结合(人)血清白蛋白，例如以便赋予治疗化合物、结构部分或实体半衰期(如本文所定义)的增加。对于使用血清白蛋白结合结构域来增加治疗化合物、结构部分或实体的半衰期，参考例如WO 2004/041865、WO 2006/122787、EP 2139918、WO 2011/006915、WO 2012/175400和/或WO2014/111550。本发明的血清白蛋白结合物通常可以与这些参考文献中描述的血清白蛋白结合物以相同的方式和以相同的目的使用。
在一些进一步的非限制性方面，本发明还涉及：
-蛋白质、多肽和其他构建体、分子或化学实体，其包含至少一种如本文所述的本发明的血清白蛋白结合物(再次，在本文中也称为“本发明的化合物”或“本发明的多肽”)或基本上由其组成；
-表达/产生本发明的血清白蛋白结合物和/或本发明的化合物的方法；
-宿主细胞，宿主生物体或其他(表达)系统，其能够表达或产生本发明的血清白蛋白结合物和/或本发明的化合物；
-包含本发明的血清白蛋白结合物和/或本发明的化合物的组合物和产品(例如药物组合物和产品)；
-编码本发明的血清白蛋白结合物和/或本发明的化合物的核苷酸序列和核酸，例如(表达)载体；
-本发明的化合物的用途和/或本发明的化合物，例如本发明的化合物增加治疗化合物、结构部分或实体的(血清)半衰期的用途，和本发明的化合物的治疗和/或预防的用途。
根据本文的进一步描述，本发明的这些和进一步的方面、实施方案、优点，应用和用途将变得清楚。
在本说明书中：
-术语“免疫球蛋白单可变结构域”(也称为“ISV”或“ISVD”)通常用于指能够形成功能性抗原结合位点而不与另一个可变结构域相互作用(例如，不具有在常规4-链单克隆抗体的VH和VL结构域之间所需的VH/VL相互作用)的免疫球蛋白可变结构域(其可以是重链或轻链结构域，包括VH、VHH或VL结构域)。ISVD的实例对于技术人员是清楚的，并且例如包括纳米抗体(包括VHH、人源化的VHH和/或骆驼源化的VH，诸如骆驼源化的人VH)，IgNAR，结构域(其为VH结构域或来源于VH结构域的(单结构域)抗体(例如dAbsTM)，和其为VL结构域或来源于VL结构域的(单结构域)抗体(例如dAbsTM))。除非本文另有明确说明，通常优选基于和/或来源于重链可变结构域(例如VH或VHH结构域)的ISVD。最优选地，除非本文另有明确说明，ISVD将是纳米抗体。
-术语“纳米抗体”通常如在WO 2008/020079或WO 2009/138519中所定义，并且因此在具体方面中通常表示VHH、人源化的VHH或骆驼源化的VH(例如骆驼源化的人VH)或通常表示序列优化的VHH(如例如针对化学稳定性和/或溶解性、与已知人框架区的最大重叠和最大表达优化的)。注意术语纳米抗体(Nanobody)或纳米抗体(Nanobodies)是Ablynx N.V.的注册商标，并且因此也可称为和/或
-通常，除非本文另有说明，本文提及的ISVD、纳米抗体、多肽、蛋白和其他化合物和构建体旨在用于预防或治疗人类(和/或任选地温血动物，特别是哺乳动物)疾病或病症。因此，通常，本文所述的ISVD、纳米抗体、多肽、蛋白和其他化合物和构建体优选是这样的：它们能够用作(生物)药物或其他药学或治疗活性化合物和/或药物产品或组合物，和/或能够适当地作为其一部分。这种药物、化合物或产品优选是这样的：它适合于向人类施用，例如用于需要这种预防或治疗的受试者的预防或治疗或例如作为临床试验的一部分。如本文进一步所述，为此目的，除了本发明提供的ISVD之外，这种药物或化合物可以含有其他结构部分、实体或结合单元(如本文所述，其可以是例如一个或更多个其他进一步的治疗结构部分和/或影响基于ISVD或基于纳米抗体的生物制品的药代动力学或药效学性能(如其半衰期)的一个或更多个其他结构部分)。这些进一步的治疗剂或其他结构部分的适当的实例对于技术人员是清楚的，并且例如一般能够包括任何治疗活性的蛋白、多肽或其他结合结构域或结合单元，以及例如修饰如在WO 2009/138159的第149-152页上所述的那些。基于ISVD的生物制品或基于纳米抗体的生物制品优选是治疗剂或旨在用作治疗剂(其包括预防和诊断)，并且为此目的优选地包含至少一种针对治疗相关靶标(如例如RANK-L、vWF、IgE、RSV、CXCR4、IL-23或其他白细胞介素等)的ISVD。对于这种基于ISVD或基于纳米抗体的生物制品的一些具体但非限制性的实例，参考实施例8至18，并且还例如参考Ablynx N.V.的多个申请(如例如但不限于WO 2004/062551、WO 2006/122825、WO2008/020079和WO 2009/068627)，以及例如(但不限于)申请如WO 2006/038027、WO 2006/059108、WO 2007/063308、WO 2007/063311、WO2007/066016和WO 2007/085814。此外，如本文进一步描述的，另外的结构部分可以是如本文所述的针对(人)血清蛋白例如(人)血清白蛋白的ISVD或纳米抗体，并且这样的ISVD或纳米抗体也可发现治疗用途，特别是在和/或用于延长本文所述TNF结合物的半衰期方面。例如，参考WO 2004/041865、WO 2006/122787和WO 2012/175400，其通常描述血清白蛋白结合纳米抗体用于延长半衰期的用途。此外，在本说明书中，除非本文另有明确说明，本文提及的所有术语具有WO 2009/138519(或WO 2009/138519中引用的现有技术)或WO 2008/020079(或WO 2008/020079中引用的现有技术)中给出的含义。此外，在本文未具体描述方法或技术的情况下，可以如WO 2009/138519(或在WO 2009/138519中引用的现有技术)或WO 2008/020079(或在WO 2008/020079引用的现有技术中所述)所述进行。此外，如本文所述，包含本发明的任何ISVD或化合物的任何药物产品或组合物还可包含一种或更多种本身已知的用于药物产品或组合物的另外组分(即取决于预期的药物形式)和/或例如一种或更多种旨在用于治疗用途的另外化合物或有效成分(即提供组合产品)。
此外，当在本说明书或权利要求书中使用时，以下术语具有与在WO 2009/138519的第62-75页上给出的含义相同的含义，和/或如果适用时能够以在该页上所述的方式进行确定：“激动剂”、“拮抗剂”、“逆激动剂”、“非极性，不带电荷的氨基酸残基”、“极性不带电荷的氨基酸残基”、“极性，带电荷的氨基酸残基”、“序列同一性”、“精确相同”和“氨基酸差异”(当提及两个氨基酸序列的序列比较时)、“(以)基本分离的(形式)”、“结构域”、“结合结构域”、“抗原决定簇”、“表位”、“针对”或“针对”(抗原)、“特异性”和“半衰期”。此外，术语“调节(modulating)”和“以调节(to modulate)”、“相互作用位点”、“特异于”、“交叉阻断(cross-block)”、“交叉阻断的(cross-blocked)”和“交叉阻断(cross-blocking)”和“基本上独立于pH”，如在Ablynx N.V.的WO2010/130832的第74-79页上所定义(和/或能够如在该页上所述确定)。此外，当提及本发明的构建体、化合物、蛋白质或多肽时，术语如“单价”、“二价”(或“多价”)、“双特异性”(或“多特异性”)和“双互补位”(或“多互补位”)可以具有在WO 2009/138519、WO 2010/130832或WO 2008/020079中给出的含义。
如本文所使用，关于本文提及的ISVD、纳米抗体、基于ISVD的生物制品、基于纳米抗体的生物制品或任何其他氨基酸序列、化合物或多肽的术语“半衰期”一般可以如WO2008/020079的第57页上的段落o)中所述定义，并且如其中所提及时，指在体内例如由于通过天然机制降解序列或化合物和/或清除或隔离(sequestration)序列或化合物而使氨基酸序列、化合物或多肽的血清浓度减少50％所需的时间。本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的体内半衰期能够以任何本身已知的方式测定，例如通过药代动力学分析。适当的技术对于本领域技术人员是清楚的，并且可以是例如通常如WO 2008/020079的第57页上的段落o)中所述的。也如在WO 2008/020079的第57页上的段落o)中所提及，能够使用参数如t1/2-α、t1/2-β和曲线下面积(AUC)表示半衰期。在该方面，应该注意术语“半衰期”在本文中使用时特别指t1/2-β或终末半衰期(其中t1/2-α和/或AUC都可不予考虑)。例如，参考下下面的实验部分及标准手册，如Kenneth，A等人：Chemical Stability of Pharmaceuticals：AHandbook for Pharmacists和Peters等人，Pharmacokinetic analysis：A PracticalApproach(1996)。还参考了“Pharmacokinetics”，M Gibaldi和D Perron，由Marcel Dekker出版，第2版(1982)。类似地，术语“半衰期增加”或“增加的半衰期”也如WO 2008/020079的第57页上的段落o)中所定义，并且特别是指t1/2-β的增加，或者具有或不具有t1/2-α和/或AUC或两者的增加。
当术语未在本文中具体定义时，它具有本领域中通常的含义，这对技术人员来说是清楚的。例如，参考标准手册，如Sambrook等人，″Molecular Cloning：A LaboratoryManual″(第2版)，Vols.1-3，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；F.Ausubel等人编辑，″Current protocols in molecular biology″，Green Publishing and WileyInterscience，New York(1987)；Lewin，“Genes II”，John Wiley&Sons，New York，N.Y.，(1985)；Old等人，“Principles of Gene Manipulation：An Introduction to GeneticEngineering”，第2版，University of California Press，Berkeley，CA(1981)；Roitt等人，“Immunology：(第6版)，Mosby/Elsevier，Edinburgh(2001)；Roitt等人，Roitt’sEssential Immunology，第10版Blackwell Publishing，UK(2001)；和Janeway等人，“Immunobiology”(第6版)，Garland Science Publishing/Churchill Livingstone，NewYork(2005)，以及本文引用的一般背景技术。
此外，如本文已经指出的，纳米抗体的氨基酸残基根据Kabat等人给出的用于VH的一般编号进行编号(“Sequence of proteins of immunological interest”，US PublicHealth Services，NIH Bethesda，MD，Publication No.91)，如在Riechmann和Muyldermans，J.Immunol.Methods 2000 Jun 23；240(1-2)：185-195的文章中应用于来自骆驼科动物的VHH结构域；或在本文提及的。根据该编号，纳米抗体的FR1包含在位置1-30的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包含在位置31-35的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包含在位置36-49的氨基酸，纳米抗体的CDR2包含在位置50-65的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包含在位置66-94的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包含在位置95-102的氨基酸残基，并且纳米抗体的FR4包含在位置103-113的氨基酸残基。[在这方面中，应该注意-如本领域所熟知的，对于VH结构域和对于VHH结构域-每个CDR中的氨基酸残基总数可以变化，并且可以不对应于由Kabat编号表示的氨基酸残基的总数(即，根据Kabat编号的一个或更多个位置可以不由实际序列占满，或者实际序列可能包含多于Kabat编号所允许数目的氨基酸残基)。这一般意为，根据Kabat编号可以对应于或可以不对应于实际序列中氨基酸残基的实际编号。然而，一般来说，根据Kabat的编号并且不考虑CDR中氨基酸残基的数目，根据Kabat编号的位置1对应于FR1的起点并且反之亦然，根据Kabat编号的位置36对应于FR2的起点并且反之亦然，根据Kabat编号的位置66对应于FR3的起点并且反之亦然，根据Kabat编号的位置103对应于FR4的起点并且反之亦然]。
用于对VH结构域的氨基酸残基进行编号的备选方法是Chothia等人(Nature 342，877-883(1989))描述的方法，该方法也能够以类似方式应用于来自骆驼科动物的VHH结构域和纳米抗体，被称为“AbM定义”和被称为“接触定义”。然而，在本说明书、方面和附图中，除非另有说明，将遵循如由Rabchmann和Muyldermans应用于VHH结构域的根据Kabat的编号。
还应当注意提供附图、任何序列表和实验部分/实施例仅用于进一步举例说明本发明，不应以任何方式被理解或解释为限制本发明和/或所附权利要求的范围，除非本文另有明确说明。
如本文进一步所述，本发明的血清白蛋白结合物能够有利地用作结构部分、结合单元或融合配体以增加治疗化合物、结构部分或实体例如多肽、蛋白质、化合物(包括但不限于小分子)或其他治疗实体的半衰期。
因此，在另一方面，本发明提供了多肽、蛋白质、构建体、化合物或其他化学实体，其包含本发明的血清白蛋白结合物和一个或更多个其他氨基酸序列、(结合)结构域、结合单元或其他结构部分或化学实体，或基本上由其组成。
特别地，本发明提供多肽、蛋白质、构建体、化合物或其他化学实体，其包含适当地彼此直接连接或通过一个或更多个合适的接头或间隔物连接的本发明血清白蛋白结合物和一个或更多个(例如一个或两个)治疗结构部分(其可以是相同或不同的，并且可以是例如针对相同的靶标或针对不同的靶标，并且当它们针对相同的靶标时，可以针对所述靶标的相同或不同的表位、部分、结构域或亚基)。此类多肽、蛋白质或构建体可以是例如但不限于融合蛋白，如本文进一步描述的。
本发明进一步涉及此类多肽、蛋白质、构建体或化合物的治疗用途，并涉及包含此类多肽、蛋白质，构建体或化合物的药物组合物。
在一个方面，至少一个治疗结构部分包含治疗蛋白质、多肽、化合物、因子或其他实体或基本上由其组成。在一个优选的实施方案中，治疗结构部分针对所需的抗原或靶标，能够结合所需的抗原(特别是能够特异性结合所需的抗原)，和/或能够与所需的靶标相互作用。在另一个实施方案中，至少一个治疗结构部分包含治疗蛋白或多肽或基本上由其组成。在进一步的实施方案中，所述至少一个治疗结构部分包含结合结构域或结合单元(例如免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白的片段)，例如抗体或抗体片段(包括但不限于ScFv片段))或基本上由其组成，或由另一适当的蛋白质支架组成，例如蛋白A结构域(例如AffibodiesTM)、淀粉酶抑肽、纤连蛋白、脂质运载蛋白、CTLA-4、T细胞受体、经设计的锚蛋白重复，高亲和性多聚体(avimers)和PDZ结构域(Binz等，Nat.Biotech 2005，Vol 23：1257)，和基于DNA或RNA的结合结构部分(其包括但不限于DNA或RNA适配体)(Ulrich等，Comb Chem High Throughput Screen 2006 9(8)：619-32)。
在又一方面，所述至少一个治疗结构部分包含抗体可变结构域(例如重链可变结构域或轻链可变结构域)或基本上由其组成。
在一个优选的方面，所述至少一个治疗结构部分包含至少一个免疫球蛋白单可变结构域(例如结构域抗体、单结构域抗体、“dAb”或纳米抗体(例如VHH、人源化的VHH或骆驼源化的VH)或IgNAR结构域)或基本上由其组成。
在一个具体的实施方案中，所述至少一个治疗结构部分包含至少一个单价纳米抗体或二价、多价、双特异性或多特异性纳米抗体构建体或基本上由其组成。
包含本发明的血清白蛋白结合物和一个或更多个治疗结构部分的多肽、(融合)蛋白、构建体或化合物通常可以如上文引用的现有技术中所述(制备和使用)(例如WO 04/041865、WO 06/122787、WO 2012/175400和WO 2015/173325；还可参考例如WO 2004/003019、EP 2 139 918、WO 2011/006915和WO 2014/111550)，用本发明的血清白蛋白结合物代替所述描述的半衰期延长的结构部分。
与治疗结构部分或结构部分本身相比，包含本发明的血清白蛋白结合物和一个或更多个治疗结构部分的多肽、(融合)蛋白、构建体或化合物通常并且优选具有增加的半衰期(如本文描述的，并且优选表示为t1/2-β)。
通常，本文所述的化合物、多肽、构建体或融合蛋白优选具有这样的半衰期(再次，如本文所述，并且优选表示为t1/2-β)：所述半衰期是相应的治疗结构部分本身的半衰期的至少1.5倍，优选至少2倍，例如至少5倍，例如至少10倍或大于20倍大(在人或适当的动物中测量，例如小鼠或食蟹猴)。
此外，优选地，任何这种化合物、多肽、融合蛋白或构建体在人体中具有与相应治疗结构部分本身的半衰期相比增加多于1小时，优选多于2小时，更优选多于6小时，例如多于12小时的半衰期(再次，如本文所述，并且优选表示为t1/2-β)。
此外，优选地，本发明的化合物或多肽在人体中具有超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，例如超过12小时，和例如约一天、两天、一周、两周，长至人体中血清白蛋白半衰期(估计约为19天)的半衰期(再次，如本文所述，并且优选表示为t1/2-β)。
如上所述，在一个方面，本发明的血清白蛋白结合物用于增加(一个或更多个)诸如结构域抗体、单结构域抗体、“dAb”、VHH或纳米抗体(例如VHH、人源化的VHH或骆驼源化VH，诸如骆驼源化的人VH)的免疫球蛋白单可变结构域的半衰期。
因此，本发明的一个实施方案涉及多肽、构建体或融合蛋白，其包含本发明的血清白蛋白结合物和一个或更多个(例如一个或两个)免疫球蛋白单可变结构域序列，它们适当地彼此直接地或任选地通过一个或更多个适当的接头或间隔物连接。如本文所述，存在于这种多肽、构建体或融合蛋白中的每个这样的免疫球蛋白单可变结构域可以独立地是结构域抗体、单结构域抗体，“dAb”或纳米抗体(例如VHH，人源化VHH或诸如骆驼源化人VH的骆驼源化VH)；根据一个具体但非限制性的方面，这些免疫球蛋白单可变结构域中的至少一个(和多至全部)包含两个或三个二硫桥。优选地，存在于本发明的这种化合物中的所有ISVD都是纳米抗体。
当本发明化合物在其C端具有一个ISVD(例如本发明的血清白蛋白结合物或针对治疗靶标的ISVD)时，则所述C端ISVD(并且因此，通过延伸，本发明的整个化合物)优选在其C端末端具有C端延伸。该C端延伸将直接与ISVD的最终C端氨基酸残基相连，其通常是根据Kabat在位置113的氨基酸残基(除非ISVD含有一个或更多个氨基酸缺失，使得ISVD的序列在位置113之前结束)。因此，通常，C端延伸将直接与C端ISV的C端VTVSS序列(SEQ ID NO：15)(并且因此，通过延伸，本发明化合物的C端TVTSS序列)或对应于C端ISVD序列的C端ISVD的C端序列(例如，其中，与常规的VTVSS序列相比，所述C端ISVD的C端序列含有一个或更多个置换或缺失，如T110K、T110Q、S112K或S112K)连接。
技术人员还会清楚，在本发明化合物在其C端末端具有本发明的血清白蛋白结合物的情况下，则本发明的所述血清白蛋白结合物将携带所述C端延伸。
通常，本文中所用的任何C端延伸(即在本发明化合物的C端末端和/或本发明的血清白蛋白结合物的C端末端)通常可以是如WO 2012/174741或WO 2015/173325中所述(还可参考例如WO 2103/024059和WO2016/118733)。特别地，C端延伸可具有式(X)n，其中n为1至10，优选1至5，例如1、2、3、4或5(并且优选1或2，例如1)；每个X是(优选天然存在的)氨基酸残基，其独立地选自天然存在的氨基酸残基(尽管根据优选的一个方面，它不包含任何半胱氨酸残基)，并且优选独立地选自由丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)或异亮氨酸(I)组成的组。
根据这种C端延伸X(n)的一些优选但非限制性的方面，X和n可以是如下：
(a)n＝1且X＝Ala；
(b)n＝2且每个X＝Ala；
(c)n＝3且每个X＝Ala；
(d)n＝2且至少一个X＝Ala(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(e)n＝3且至少一个X＝Ala(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(f)n＝3且至少两个X＝Ala(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(g)n＝1且X＝Gly；
(h)n＝2且每个X＝Gly；
(i)n＝3且每个X＝Gly；
(j)n＝2且至少一个X＝Gly(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(k)n＝3且至少一个X＝Gly(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(l)n＝3且至少两个X＝Gly(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
(m)n＝2且每个X＝Ala或Gly；
(n)n＝3且每个X＝Ala或Gly；
(o)n＝3且至少一个X＝Ala或Gly(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；或者
(p)n＝3且至少两个X＝Ala或Gly(剩余的氨基酸残基X为独立地选自任何天然存在的氨基酸，但优选独立地选自Val、Leu和/或Ile)；
方面(a)、(b)、(c)、(g)、(h)、(i)、(m)和(n)是特别优选的，其中n＝1或2是优选的方面，且其中n＝1是特别优选的方面。
还应注意，优选地，存在于本发明的血清白蛋白结合物中的任何C端延伸不包含(游离的)半胱氨酸残基(除非所述半胱氨酸残基用于或旨在用于进一步官能化，例如用于聚乙二醇化)。
有用的C端延伸的一些具体但非限制性的实例是以下氨基酸序列：A、AA、AAA、G、GG、GGG、AG、GA、AAG、AGG、AGA、GGA、GAA或GAG。
还优选地，当本发明的化合物在其C端末端具有ISVD(例如本发明的血清白蛋白结合物或针对治疗靶标的ISVD)时，则(至少)所述C端ISVD优选地，甚至更优选地，除了如本文所述的C端延伸之外，含有一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变(即如本文所述的本发明的血清白蛋白结合物，并且更一般地如WO 2012/175741和WO 2015/173325以及又例如在WO 2013/024059和WO 2016/118733中所述)。在这方面，技术人员会清楚，在本发明的化合物在其C端末端具有本发明的血清白蛋白结合物的情况下，则(至少)本发明的所述血清白蛋白结合物优选将包含这样的突变(即优选地除了C端延伸之外)。
更一般地，根据本发明的一个具体方面，当本发明的化合物含有两个或更多个ISVD(例如本发明的血清白蛋白结合物和一个或更多个针对治疗靶标的ISVD)时，则优选所有这些ISVD包含降低与预先存在的抗体结合的突变(再次，如果本发明的化合物在其C端末端具有ISVD，则优选地除了与C端ISVD连接的C端延伸之外)。
当本发明化合物在其N端末端具有ISVD(例如本发明的血清白蛋白结合物或针对治疗靶标的ISVD)时，则所述N端ISVD(并且因此，通过延伸，本发明的整个化合物)优选在位置1含有D。在这方面，技术人员会再次清楚，在本发明化合物在其N端末端具有本发明的血清白蛋白结合物的情况下，则本发明的所述血清白蛋白结合物在位置1处优选具有D(例如，与例如SEQ ID NO：18和/或19的序列相比的E1D突变，如在SEQ ID NO：36至44的本发明的氨基酸序列之中)。
在一些另外的方面，本发明涉及蛋白质、多肽或其他化合物或构建体，其包含至少一个(并且优选仅一个)本发明的血清白蛋白结合物和至少一个(例如一个、两个或三个)治疗结构部分或实体(其中所述血清白蛋白结合物和一个或更多个治疗结构部分或实体任选地通过一个或更多个适当的接头适当地连接)或基本上由其组成，该蛋白质、多肽、化合物、构建体是这样的：
-当其在C端末端具有ISVD时，则所述蛋白质、多肽、化合物、构建体(的C端ISVD)在其C端末端具有C端延伸(X)n(如本文进一步描述的)；和/或
-当其在C端末端具有ISVD时，则至少所述C端ISVD含有一个或更多个降低预先存在的抗体结合的突变(如本文进一步描述的)；
-当其在N端末端具有ISVD时，则所述蛋白质、多肽、化合物、构建体(的N端ISVD)优选在位置1含有D；和/或
-其中所述ISVD，其蛋白质、多肽或其他化合物在其N端末端可也具有ISVD，在这种情况下，所述N端ISVD末端优选在位置1具有D或E1D；
-优选地，存在于所述蛋白质、多肽、化合物、构建体中的基本上所有的ISVD含有一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变(如本文进一步描述的)。
根据本发明的一个具体方面，存在于本发明化合物中的所有治疗结构部分是ISVD(即针对治疗靶标的ISVD)，特别是重链ISVD，更特别是纳米抗体(即针对治疗靶标的纳米抗体)。
例如但不限于，本发明的这种化合物可包含：
-本发明的血清白蛋白结合物的一个拷贝和一个针对治疗靶标的ISVD(并且优选纳米抗体)；或者
-本发明的血清白蛋白结合物的一个拷贝和两个针对治疗靶标的ISVD(并且优选两个纳米抗体)(该ISVD可以相同或不同，并且当不同时可针对相同靶标，针对相同靶标上的不同表位或针对不同治疗靶标)；或
-本发明的血清白蛋白结合物的一个拷贝和三个针对治疗靶标的ISVD(并且优选三个纳米抗体)(该ISVD可以相同或不同，并且当不同时可针对相同靶标，针对相同靶标上的不同表位或针对不同治疗靶标)。
本发明的构建体、融合蛋白或多肽的一些非限制性实例能够示意性地表示如下，其中“[Alb]”代表本发明的血清白蛋白结合物，“[治疗结构部分1]”和“[治疗结构部分2]”代表治疗结构部分(如提到的，其可各自独立地为免疫球蛋白单可变结构域)，“-”代表适当的接头(其是任选的；适当的实例是9GS和35GS接头)并且N端位于左手侧，C端位于右手侧：
[Alb]-[治疗结构部分1]
[治疗结构部分1]-[Alb]-X(n)
[Alb]-[治疗结构部分1]-[治疗结构部分1]
[治疗结构部分1]-[治疗结构部分1]-[Alb]-X(n)
[治疗结构部分1]-[Alb]-[治疗结构部分1]
[Alb]-[治疗结构部分1]-[治疗结构部分2]
[治疗结构部分1]-[治疗结构部分2]-[Alb]-X(n)
[治疗结构部分1]-[Alb]-[治疗结构部分2]
当治疗结构部分是针对治疗靶标的ISVD(并且优选纳米抗体)时，本发明的优选但非限制性的构建体、融合蛋白或多肽能够示意性地表示如下，其中“[Alb]”代表本发明的血清白蛋白结合物，“[治疗ISVD 1]”和“[治疗ISVD 2]”代表针对治疗靶标的ISVD(该ISVD可以是相同的或不同的，并且当不同时可针对相同靶标，针对相同靶标上的不同表位或针对不同治疗靶标)，“-”代表适当的接头(其是任选的)，X(n)代表如本文所述的C端延伸，并且N端位于左手侧，C端位于右手侧：
[Alb]-[治疗ISVD 1]-X(n)
[治疗ISVD 1]-[Alb]-X(n)
[Alb]-[治疗ISVD 1]-[治疗ISVD 1]-X(n)
[治疗ISVD 1]-[治疗ISVD 1]-[Alb]-X(n)
[治疗ISVD 1]-[Alb]-[治疗ISVD 1]-X(n)
[Alb]-[治疗ISVD 1]-[治疗ISVD 2]-X(n)
[治疗ISVD 1]-[治疗ISVD 2]-[Alb]-X(n)
[治疗ISVD 1]-[Alb]-[治疗ISVD 2]-X(n)
因此，另一方面，本发明涉及多特异性(而且特别是双特异性)纳米抗体构建体，其包含本发明的血清白蛋白结合物和至少一个其他纳米抗体(例如一个或两个其他的纳米抗体，其可以是相同的或不同的)，其中所述至少一个其他纳米抗体优选针对所需的靶标(其优选为治疗靶标)和/或另一个有用或适合于治疗、预防和/或诊断目的的纳米抗体。再次，本发明的血清白蛋白结合物和其他纳米抗体可以适当的彼此直接连接或任选地通过一个或更多个适当的接头或间隔物连接。
对于含有一个或更多个纳米抗体的多价和多特异性多肽及其制剂的一般描述，还参考Conrath等，J.Biol.Chem.，Vol.276，10.7346-7350，2001；Muyldermans，Reviews inMolecular Biotechnology 74(2001)，277-302；以及例如WO 96/34103、WO 99/23221、WO04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO 2009/068627。
通过举例说明，本发明化合物的一些实例在SEQ ID NO：46至52中给出，使用SEQID NO：45的抗HER2-纳米抗体作为抗靶标纳米抗体的代表性实例，并且构成纳米抗体在本发明的化合物中处于不同位置。SEQ ID NO：46至49的化合物是说明本发明的二价双特异性化合物的实例，并且SEQ ID NO：50至52的化合物是说明本发明的三价双特异性化合物的实例。在每种情况下，化合物含有E1D突变和C端丙氨酸残基，并含有使用适当的接头(即SEQID NO：47和48中的15GS接头和SEQ ID NO：46和49至52中的35GS接头)的代表性但非限制性的实例。
本发明的一些具体的多特异性和/或多价多肽的一些其他实例能够在本文提及的Ablynx N.V.的申请中找到。特别地，对于包含至少一个用于增加半衰期的针对血清蛋白的纳米抗体的多价和多特异性构建体、编码其的核酸、包含其的组合物、上述的制剂和上述的应用的一般描述，参考上述国际申请WO 04/041865和WO 06/122787(本文所述的本发明的血清白蛋白结合物通常能够类似地用于本文描述的半衰期延长的纳米抗体，例如Alb-8)，以及参考在例如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO2009/068627中给出的此种构建体的一般描述和具体实例。
本发明还涉及编码本发明的白蛋白结合物、化合物或多肽的核苷酸序列或核酸。本发明进一步包括遗传构建体，其包括前述核苷酸序列或核酸和用于本身已知的遗传构建体的一个或更多个要素。遗传构建体可以是质粒或载体的形式。同样，此类构建体通常能够如Ablynx N.V.的已公开专利申请中所述，例如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO 2009/068627。
本发明还涉及含有此类核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)本发明的白蛋白结合物、化合物或多肽的宿主或宿主细胞。同样，此类宿主细胞通常能够如AblynxN.V.的已公开专利申请，例如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO 2009/068627中所述。
本发明还涉及制备本发明的白蛋白结合物、化合物或多肽的方法，该方法包括在使得宿主细胞产生或表达本发明的白蛋白结合物、化合物或多肽的条件下培养或维持如本文所述的宿主细胞，并且任选地进一步包括分离如此产生的本发明的白蛋白结合物，化合物或多肽。同样，能够如AblynxN.V.的已公开专利申请例如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO 2009/068627中一般描述的，实行这种方法。
本发明还涉及药物组合物，其包含至少一种本发明的化合物或多肽，和任选地至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。此类制剂、载体、赋形剂和稀释剂通常可如AblynX N.V.的已公开专利申请例如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO2008/142164或WO 2009/068627中所述。
然而，由于本发明的化合物或多肽具有增加的半衰期，所以优选将它们施用于循环。因此，它们可以以允许本发明化合物或多肽进入循环的任何适当的方式施用，例如静脉内，通过注射或输液，或以任何其它适当的方式(包括口服施用、皮下施用、肌肉内施用、通过皮肤施用、鼻内施用、通过肺部施用等)。适当的施用方法和途径对于技术人员而言会是清楚的，再次例如也可以从Ablynx N.V.的已公开专利申请如WO 04/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164或WO 2009/068627的教导中获知。
因此，在另一方面，本发明涉及用于至少一种疾病或病症的预防和/或治疗的方法，其中所述疾病或病症能够通过使用本发明化合物或多肽而被预防或治疗，该方法包括向有需要的受试者施用药学活性量的本发明的化合物或多肽，和/或包含其的药物组合物。能够通过使用本文所述的本发明化合物或多肽而被预防或治疗的疾病和病症通常会与能够通过使用存在于本发明的化合物或多肽中的治疗结构部分或多个治疗结构部分而被预防或治疗的疾病和病症相同。
在本发明的上下文中，术语“预防和/或治疗”不仅包括预防和/或治疗疾病，还通常包括预防疾病的发作，减缓或逆转疾病的进展，预防或减缓与疾病相关的一种或更多种症状的发作，降低和/或减轻与疾病相关的一种或更多种症状，降低疾病和/或与其相关的任何症状的严重性和/或持续时间，和/或预防疾病和/或与其相关的任何症状的严重程度的进一步增加，预防、降低或逆转由疾病引起的任何生理损害，以及通常对正在受治疗的患者有益的任何药理作用。
待治疗的受试者可以是任何温血动物，但特别是哺乳动物，更特别是人。如技术人员会清楚的，待治疗的受试者会特别是患有本文所述的疾病和病症或处于其风险中的人。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于免疫治疗的方法，特别是用于被动免疫治疗，该方法包括向患有本文所述疾病和病症或具有患该病风险的受试者施用药学活性量的本发明的化合物或多肽，和/或包含其的药物组合物。
根据适于预防和/或治疗待预防或治疗的疾病或病症的治疗方案，施用本发明的化合物或多肽和/或包含其的组合物。临床医生通常能够确定合适的治疗方案，根据诸如待预防或治疗的疾病或病症，待治疗疾病的严重程度和/或其症状的严重程度，待使用的本发明的具体多肽，待使用的具体施用途径和药物制剂或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、一般状况和临床医生熟知的类似因素的因素。
通常，该治疗方案将包括将一种或更多种本发明化合物或多肽，或一种或更多种包含其的组合物，以一种或更多种药学有效量或剂量施用。临床医生能够同样基于上述因素确定待施用的具体量或剂量。
通常，为了预防和/或治疗本文所述的疾病和病症，并且取决于待治疗的具体疾病或病症、待使用的本发明化合物或多肽的效力和/或半衰期、具体的施用途径和所用的具体药物制剂或组合物，本发明的化合物或多肽通常以每千克体重每日1克和0.01微克之间的量施用，优选每千克体重每日0.1克和0.1微克之间施用，例如每千克体重每日约1、10、100或1000微克，作为单日剂量连续地(例如通过输液)，或日间作为多个分剂量。临床医生将通常能够根据本文所述的因素确定适当的日剂量。还将清楚的是，在具体情况下，临床医生可选择偏离这些量，例如基于上面引用的因素和他的专家判断。通常，从对于通过基本上相同的途径施用的针对相同靶标的相当的常规抗体或抗体片段的通常施用的量，可以获得关于待施用量的一些指导，然而同时考虑亲和力/亲合力、功效、生物分布、半衰期和技术人员熟知的类似因素的差异。
而且，由于本发明化合物含有半衰期增加的本发明血清白蛋白结合物，它们不需要基本上连续施用(例如通过输液)，但它们可以以适当的间隔施用(由技术人员决定)。例如，它们可以每两天施用一次(以适当的剂量)、每四天施用一次、每周施用一次、每两周施用一次、和在一些情况下每四周施用一次或甚至更长时间施用一次，例如通过注射或输液施用。
本发明的一个方面涉及包含至少一种本发明化合物或多肽的药物组合物，其中所述组合物旨在以每周一次至每四周一次的间隔给药，特别是每7天一次至每21天一次的间隔，如每7天一次或每14天一次。
通常，在上述方法中，将使用本发明的单一多肽。然而，组合使用两种或更多种本发明的多肽也在本发明的范围内。
本发明的多肽还可以与一种或更多种进一步的药学活性化合物或成分组合使用，即作为组合治疗方案，其可以产生或不产生协同效应。再次，临床医生将能够基于上面引用的因素和他的专家判断选择这些进一步的化合物或成分，以及适当的组合治疗方案。
特别地，本发明的多肽可用于与用于或能够用于预防和/或治疗疾病和病症的另外的药学活性化合物或成分组合使用，其中所述疾病和病症能够通过本发明的融合蛋白或构建体而预防或治疗，结果是，可以获得或不获得协同效应。
根据本发明使用的治疗方案的有效性可以由针对所涉及的疾病或病症的本身已知的任何方式确定和/或遵循，如临床医生会清楚的。临床医生会能够在适当的情况下，或根据具体情况，改变或修改特定的治疗方案，以达到所需的治疗效果，以避免、限制或减少不想要的副作用，和/或以在一方面实现所需的治疗效果和另一方面避免、限制或减少不需要的副作用之间实现适当的平衡。
通常，会遵循治疗方案直至达到期望的治疗效果和/或只要要保持期望的治疗效果。再次，这可以由临床医生确定。
根据本文的进一步描述，本发明的其他方面、实施方案、优点和应用将变得清楚。
现在将通过以下非限制性优选方面、实施例和附图进一步描述本发明，其中：
-图1是列出了本文将具体提及的一些氨基酸位置及其根据一些备选编号系统(例如Aho和IMGT)编号的表格；
-图2列出了本文提及的氨基酸序列；
-图3A和3B展示了SEQ ID NO：18和19(本发明)的序列与SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2的现有技术序列的比对；
-图4显示了SEQ ID NO：18至44的比对；
-图5给出了来自不同哺乳动物物种的血清白蛋白的比对；
-图6是显示了在存在SEQ ID NO：19的血清白蛋白结合物的情况下，SEQ ID NO：1(参照)-cMycHis6与包被的HSA的结合的图。将1.5nM SEQ ID NO：1-cMycHis6和一系列浓度的His6Flag3-SEQ ID NO：1(参照)、Flag3His6-SEQ ID NO：19(本发明)或cAblys3-Flag3His6(参照)在包被的HSA上温育。用山羊抗cMyc和HR标记的兔抗山羊抗体检测结合的SEQ ID NO：1-cMycHis6。
-图7是显示了在存在SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物的情况下，HAS与FcRn的结合的图。将人FcRn-人β2微球蛋白异二聚体固定在CM5芯片上。在50mM NaPO 4+150mM NaCl+0.05％Tween-20pH 6.0中在不存在或存在2μM纳米抗体的情况下，在BiacoreT100仪器上监测1μM HSA的结合；
在编辑本申请中引用的所有参考文献(包括参考文献、授权专利、公开的专利申请和待定的专利申请)的全部内容通过引用明确地并入本文，特别是用于上文引用的教导。
实验部分
实施例1：血清白蛋白的亲和力
在ProteOn XPR36(BioRad)仪器上，通过表面等离子体共振(SPR)测量SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物对人(Sigma-Aldrich A3782)、食蟹猴(内部产生)、小鼠(Albumin Bioscience 2601)、大鼠(Sigma-Aldrich A4538)、兔(Sigma-Aldrich A0764)、豚鼠(Gentaur GPSA62)、猪(Sigma-Aldrich A4414)、绵羊(Sigma-Aldrich A3264)、狗(Abcam 119814)和牛(Sigma-Aldrich A3059)血清白蛋白(SA)的亲和力。使用ProteOn胺偶联试剂盒(BioRad)通过胺偶联将血清白蛋白固定在GLC ProteOn芯片上。将不同浓度(300nM、100nM、33.3nM、11.1nM、3.7nM和1.23nM)的SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物以45μL/min注射到HBS-P+pH 7.4缓冲液(GE Healthcare)中持续120秒，然后解离900s。在兔、绵羊和牛SA上，对于SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物没有观察到结合或观察到非常低的结合。与SEQ ID NO：1的血清白蛋白结合物的各自亲和力相比，SEQ IDNO：19(本发明)血清白蛋白结合物对人、食蟹猴、大鼠、小鼠和豚鼠SA的亲和力较高。结果在下表1中给出，并显示SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物与狗和猪SA是交叉反应的。
表1：SEQ ID NO：19(本发明)在来自不同物种的SA上的结合的动力学参数。
白蛋白在血液中的长半衰期主要由两个特征驱动：(i)白蛋白的大尺寸(65kDa)限制其肾小球过滤和(ii)白蛋白在低pH(pH 6)下与FcRn结合，其通过从早期内含体再循环至细胞外环境，保护白蛋白在内皮细胞和上皮细胞中被动内吞作用后免于在溶酶体中的降解。对于通过白蛋白结合和随后的再循环导致长血清半衰期的白蛋白结合纳米抗体，它们应在5.0至7.4的pH范围内保持与白蛋白结合。如上所述在ProteOn仪器上测量在pH 5、pH 6和pH 7.4下SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物从HSA的解离速率，包括SEQ IDNO：1(参照)作为参照。在HBS-P+pH 7.4缓冲液中，分别以500nM和300nM注射SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物和SEQ ID NO：1(参照)。解离缓冲液分别为50mM NaOAc/HOAc+150mM NaCl+0.05％Tween-20pH 5.0，50mM NaOAc/HOAc+150mM NaCl+0.05％Tween-20pH6.0和HBS-P+pH 7.4。将解离进行分析2700秒。SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物的解离速率在5.0至7.4的pH范围内没有显著差异。结果如表2所示。
表2：在不同pH下SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物从HSA的解离速率。
实施例2：表位
在竞争ELISA中分析表位结合(binning)。将人血清白蛋白以125ng/ml包被在PBS中于4℃过夜。在用PBS+1％酪蛋白封闭后，加入1.5nM SEQ ID NO：1(参照)-cMycHis6和一系列浓度的竞争剂(His6Flag3-SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物，His6Flag3-SEQ ID NO：1(参照)作为阳性对照或鸡蛋溶菌酶结合单结构域抗体cAblys3-Flag3His6作为阴性对照)。用山羊抗cMyc(Abcam ab19234)和HRP标记的兔抗山羊(Genway 18-511-244226)抗体检测结合的SEQ ID NO：1(参照)-cMycHis6。SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物和SEQ ID NO：1(参照)不结合HSA上的相同表位(图6)。
实施例3：干扰SA和FcRn之间的相互作用
对于通过白蛋白结合和随后的再循环导致长的半衰期的SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物，其不应干扰白蛋白与FcRn的结合。这在Biacore T100(GEHealthcare)仪器上以SPR进行分析。通过标准胺偶联(Biacore胺偶联试剂盒)将人FcRn-人β2微球蛋白异二聚体(Sino Biological CT009-H08H)固定在CM5芯片上。将在50mM NaPO4+150mM NaCl+0.05％Tween-20pH 6.0中的1μM HSA和2μM纳米抗体(His6Flag3-SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物、His6Flag3-SEQ ID NO：1(参照)或cAblys3-Flag3His6)的混合物以10μl/min注射120s，然后解离600s。将结合曲线与不存在纳米抗体的1μM HSA的结合曲线进行定性比较。SEQ ID NO：19(本发明)的血清白蛋白结合物不干扰HSA与FcRn的结合(图7)。
实施例4：在狗中的PK特征
单次i.v.后，研究三价纳米抗体构建体(SEQ ID NO：53)在狗中的药代动力学。三价构建体在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中产生，并且包含两个针对呼吸道合胞病毒(RSV)的纳米抗体，并在C端末端具有SEQ ID NO：21的白蛋白结合纳米抗体(其中三个纳米抗体使用(Gly4Ser)7接头彼此连接)。
在12只禁食的健康雄性Beagle犬(通过研究前健康检查所确定的健康)的药代动力学研究(非交叉，单剂量)中，评价构建体的药代动力学特征。将构建体静脉内施用。
在给药前，并且在给药前、给药后24小时、给药后168小时和给药后336小时收集血液样品之前，将动物过夜禁食(不间断地接触水)(总禁食时间不超过24小时)。在给药后4小时返回食物，或在24小时、168小时和336小时的血液收集后立即返回食物。在研究期间还记录和跟踪体重。
在给药前和在初始给药后5、15、30分钟和1、4、8、12、24、72、168、240、336、504和672小时，从外周血管收集1ml全血(或在给药前和在24、168和336小时2-3ml)用于血浆。将用于血清处理的经收集的样品保持在室温下并使其凝结。使用冷冻离心机(设定为保持4℃)，将血液以10,000rpm离心2分钟。样品在收集后30分钟内冷冻，直到将它们提交进行分析(包括相关纳米抗体构建体浓度的测量)。

Claims (18)

1.氨基酸序列，其是能够与(人)血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，其具有：
-CDR1(根据Abm)，所述CDR1是氨基酸序列GGTFSTYVMG(SEQ ID NO：12)或与SEQ ID NO：12的氨基酸序列具有2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR2(根据Abm)，所述CDR2是氨基酸序列AISQNSIHTY(SEQ ID NO：13)或与SEQ ID NO：13的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列；和
-CDR3(根据Abm)，所述CDR3是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)或与SEQID NO：14的氨基酸序列具有3个、2个或1个氨基酸差异(如本文所定义)的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的氨基酸序列，其具有：
-CDR1(根据Abm)，所述CDR1是氨基酸序列GGTFSTYVMG(SEQ ID NO：12)；和
-CDR2(根据Abm)，所述CDR2是氨基酸序列AISQNSIHTY(SEQ ID NO：13)；和
-CDR3(根据Abm)，所述CDR3是氨基酸序列SRFTSWYTADYEYDY(SEQ ID NO：14)。
3.根据权利要求1所述的氨基酸序列，其能够以优于100nM，优选优于50nM的亲和力与人血清白蛋白结合，如使用ProteOn所测定。
4.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其为重链免疫球蛋白单可变结构域。
5.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其为VHH、人源化的VHH或骆驼源化的VH(并且特别是骆驼源化的人VH)。
6.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其是这样的：
它具有超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表达为t1/2β)；
和/或这样的：
当它与治疗结构部分或实体连接时，其赋予本发明所得多肽超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表达为t1/2β)。
7.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其具有：
-与SEQ ID NO：18和/或19的序列(其中用于确定序列同一性程度不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性程度；
和/或其具有：
-与SEQ ID NO：18和/或19的序列不超过7个，优选不超过5个，例如仅3个、2个或1个“氨基酸差异”(如本文所定义，且不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)。
8.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其具有：
-与SEQ ID NO：18的序列(其中用于确定序列同一性程度不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性程度；
和/或其具有：
-与SEQ ID NO：18的序列不超过7个，优选不超过5个，例如仅3个、2个或1个“氨基酸差异”(如本文所定义，且不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)。
9.根据权利要求1-7任一项所述的氨基酸序列，其具有：
-与SEQ ID NO：19的序列(其中用于确定序列同一性程度不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)至少85％，优选至少90％，更优选至少95％的序列同一性程度；
和/或其具有：
-与SEQ ID NO：19的序列不超过7个，优选不超过5个，例如仅3个、2个或1个“氨基酸差异”(如本文所定义，且不考虑CDR和可能存在的任何C端延伸)。
10.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，与SEQ ID NO：18的序列相比，其含有一个或更多个降低预先存在的抗体结合的突变。
11.根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列，其为VHH，并且与SEQ ID NO：18的序列相比其含有一个或更多个人源化置换。
12.氨基酸序列，该氨基酸序列是能够与(人)血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变结构域，且该氨基酸序列选自SEQ ID NO：18至44。
13.包含至少一个根据权利要求1-12中任一项所述的氨基酸序列的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体。
14.根据权利要求13所述的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体，其包含至少一个治疗结构部分或实体。
15.根据权利要求13或14所述的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体，其为融合蛋白。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体，其具有超过6小时，优选超过12小时，更优选超过24小时，甚至更优选超过72小时的人血清半衰期(表达为t1/2β)。
17.根据权利要求13-16中任一项所述的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体，其是这样的：
-当其在C端末端具有ISVD时，则所述蛋白质、多肽、化合物、构建体(的C端ISVD)在其C端末端具有C端延伸(X)n(如本文进一步所述)；和/或
-当其在C端末端具有ISVD时，则至少所述C端ISVD含有一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变(如本文进一步所述)；和/或
-当其在N端末端具有ISVD时，则所述蛋白质、多肽、化合物、构建体(的N端ISVD)优选在位置1含有D；和/或
-其中所述ISVD，其蛋白质、多肽或其他化合物在其N端末端也可具有ISVD，在这种情况下，所述N端ISVD末端优选在位置1具有D或E1D；和/或
-优选地，存在于所述蛋白质、多肽、化合物、构建体中的基本上所有的ISVD含有一个或更多个降低预先存在的抗体的结合的突变。
18.包含根据权利要求13-17中任一项所述的蛋白质、多肽或其他构建体、化合物、分子或化学实体的药物组合物。
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11644471B2 (en) 2010-09-30 2023-05-09 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
MX350074B (es) * 2011-06-23 2017-08-25 Ablynx Nv Tecnicas para predecir, detectar, y reducir la interferencia de proteinas no especificas en ensayos que implican dominios variables individuales de inmunoglobulina.
IL310340A (en) 2016-12-07 2024-03-01 Ablynx Nv Immunoglobulin sites with a single variable enhance serum albumin binding
JP7300385B2 (ja) 2017-01-17 2023-06-29 アブリンクス エン．ヴェー． 改善された血清アルブミン結合剤
BR112019014599A2 (pt) * 2017-01-17 2020-03-03 Ablynx N.V. Ligantes de albumina sérica melhorados
EP4069293A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Ablynx N.V. Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting tnfa and ox40l
BR112022009799A2 (pt) 2019-12-06 2022-08-16 Ablynx Nv Polipeptídeos compreendendo domínios variáveis únicos de imunoglobulina alvejando tnfalfa e il-23
AU2020400938A1 (en) 2019-12-09 2022-07-28 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting IL-13 and TSLP
WO2021140205A1 (en) 2020-01-10 2021-07-15 Confo Therapeutics N.V. Methods for generating antibodies and antibody fragments and libraries comprising same
JP2023519967A (ja) 2020-03-30 2023-05-15 アブリンクス・エヌ・フェー 多価免疫グロブリン単一可変ドメインの製造及び精製のための方法
JP2023544124A (ja) 2020-09-25 2023-10-20 アブリンクス エン．ヴェー． Ｉｌ－１３およびｏｘ４０ｌを標的化する免疫グロブリン単一可変ドメインを含むポリペプチド
AU2021399955A1 (en) 2020-12-18 2023-08-03 Ablynx Nv Polypeptides comprising immunoglobulin single variable domains targeting glypican-3 and t cell receptor
MX2023007299A (es) 2020-12-18 2023-07-04 Ablynx Nv Polipeptidos de reclutamiento de celulas t basados en la reactividad de tcr alfa/beta.
KR20230123497A (ko) 2020-12-18 2023-08-23 아블린쓰 엔.브이. IL-6 및 TNF-α를 표적화하는 면역글로불린 단일 가변도메인을 포함하는 폴리펩티드
TW202342508A (zh) 2021-12-17 2023-11-01 比利時商艾伯霖克斯公司 包含靶向ＴＣＲαβ、ＣＤ３３和ＣＤ１２３的免疫球蛋白單可變結構域的多肽
US20240109965A1 (en) 2022-06-14 2024-04-04 Ablynx N.V. Immunoglobulin single variable domains targeting t cell receptor
US20240132624A1 (en) 2022-07-27 2024-04-25 Ablynx N.V. Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
WO2024084203A1 (en) 2022-10-18 2024-04-25 Isogenica Limited Single domain antibodies binding to albumin
WO2024133935A1 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Ablynx Nv Protein-based conjugation carriers
WO2024151515A2 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Odyssey Therapeutics, Inc. Anti-tnfr2 antigen-binding proteins and uses thereof
WO2024170756A1 (en) 2023-02-17 2024-08-22 Ablynx N.V. Polypeptides binding to the neonatal fc receptor

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101646689A (zh) * 2006-09-08 2010-02-10 埃博灵克斯股份有限公司 具有长半衰期的血清清蛋白结合蛋白
CN101965364A (zh) * 2007-02-08 2011-02-02 杜门蒂斯有限公司 抗血清白蛋白的抗体单个可变区
US20140186365A1 (en) * 2013-01-03 2014-07-03 Institute For Cancer Research D/B/A The Research Institute Of Fox Chase Cancer Center Antibodies that specifically bind to serum albumin without interfering with albumin's capability to interact with the fcrn
US20140205597A1 (en) * 2010-09-30 2014-07-24 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
CN104203975A (zh) * 2011-06-23 2014-12-10 埃博灵克斯股份有限公司 用于预测、检测和减少涉及免疫球蛋白单可变结构域的测定法中的非特异性蛋白干扰的技术
EP2944653A1 (en) * 2011-06-23 2015-11-18 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains
US20150344568A1 (en) * 2011-06-23 2015-12-03 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0739981A1 (en) 1995-04-25 1996-10-30 Vrije Universiteit Brussel Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes
EP1027439B1 (en) 1997-10-27 2010-03-17 Bac Ip B.V. Multivalent antigen-binding proteins
US6742038B2 (en) 2000-04-07 2004-05-25 Danger, Inc. System and method of linking user identification to a subscriber identification module
JP2005289809A (ja) 2001-10-24 2005-10-20 Vlaams Interuniversitair Inst Voor Biotechnologie Vzw (Vib Vzw) 突然変異重鎖抗体
US20060002935A1 (en) 2002-06-28 2006-01-05 Domantis Limited Tumor Necrosis Factor Receptor 1 antagonists and methods of use therefor
CN1678634A (zh) 2002-06-28 2005-10-05 多曼蒂斯有限公司 免疫球蛋白单个变体抗原结合区及其特异性构建体
CA2505326A1 (en) 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against immunoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders
MXPA05006043A (es) 2003-01-10 2006-01-30 Ablynx Nv Polipeptidos terapeuticos, homologos de los mismos, fragmentos de los mismos y para uso al modular la agregacion mediada de plaquetas.
CN101133084A (zh) 2004-12-02 2008-02-27 多曼蒂斯有限公司 采用白细胞介素-1ⅰ型受体拮抗剂治疗呼吸道疾病的方法
ATE537188T1 (de) 2005-05-18 2011-12-15 Ablynx Nv Serumalbuminbindende proteine
SI2444424T1 (sl) 2005-05-20 2018-10-30 Ablynx N.V. Izboljšana protitelesa (TM) za zdravljenje z agregacijo posredovanih motenj
BRPI0619225A2 (pt) 2005-12-01 2017-11-07 Domantis Ltd monômero de anticorpo de domínio, ligando, ácidos nucleicos isolado e recombinante, vetor, célula hospedeira, método para produzir um monômero de dab de ligando, composição farmacêutica, dispositivo de liberação de medicamento, uso de um monômero de anticorpo de domínio, e, método para tratar uma doença inflamatória, artrite ou doença respiratória
EP1957537A2 (en) 2005-12-01 2008-08-20 Domantis Limited Competitive domain antibody formats that bind interleukin 1 receptor type 1
FR2894741B1 (fr) 2005-12-08 2009-12-04 Centre Nat Etd Spatiales Chaine de reception par satellite
CA2640066A1 (en) 2006-01-24 2007-08-02 Roland Beckmann Fusion proteins that contain natural junctions
JP2010500876A (ja) 2006-08-18 2010-01-14 アブリンクス エン．ヴェー． Ｉｌ−６媒介性シグナル伝達に関連する疾患及び障害の治療のための、ｉｌ−６ｒに指向性を有するアミノ酸配列及びこれを含むポリペプチド
KR20120125601A (ko) 2007-05-24 2012-11-16 아블린쓰 엔.브이. Ｒａｎｋ-ｌ에 대한 아미노산 서열, 및 이를 포함하는 골 질환 및 장애 치료용 폴리펩티드
AU2008328785A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Method for obtaining polypeptide constructs comprising two or more single domain antibodies
DE102008023620A1 (de) 2008-05-15 2009-11-19 Mettler-Toledo (Albstadt) Gmbh Funktionseinheit mit einer aufrufbaren Funktion und Verfahren zu deren Aufruf
MX2010012518A (es) 2008-05-16 2010-12-06 Ablynx Nv Secuencias de aminoacidos dirigidas contra cxcr4 y otros receptores acoplados a proteina g y compuestos que comprenden los mismos.
PL2334705T3 (pl) 2008-09-26 2017-06-30 Ucb Biopharma Sprl Produkty biologiczne
WO2010130832A2 (en) 2009-05-15 2010-11-18 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against dickkopf-1 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with bone loss and/or osteolytic lesions
BR112012001681A2 (pt) * 2009-07-16 2019-09-24 Graxo Group Ltd domínios variáveis de ligação de anti-albumina sérica aperfeiçoados
AU2010303112A1 (en) 2009-09-30 2012-04-26 Glaxo Group Limited Drug fusions and conjugates with extended half life
US9012609B2 (en) 2010-08-13 2015-04-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-serum albumin binding variants
BR112013003899A2 (pt) 2010-08-20 2016-06-07 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd domínio variável único da imunoglobina anti-albumina sérica (sa), ligando multiespecífico, proteína de fusão, composição, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira isolada, e, método de tratar ou previnir uma doença ou distúrbio em um paciente
EP4218933A1 (en) 2011-06-23 2023-08-02 Ablynx NV Serum albumin binding proteins
WO2012174741A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 Google Inc. Determining cross-language query suggestion based on query translations
MX2014001883A (es) 2011-08-17 2014-05-27 Glaxo Group Ltd Proteinas y peptidos modificados.
US20130129727A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Nanjingjinsirui Science & Technology Biology Corporation Methods and systems for increasing protein stability
WO2014037419A1 (en) 2012-09-04 2014-03-13 Vib Vzw Immunoglobulin single variable domains directed against cd74 and uses derived thereof
WO2014111550A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Modified anti-serum albumin binding proteins
RS60717B1 (sr) 2014-05-16 2020-09-30 Ablynx Nv Varijabilni domeni imunoglobulina
CA2974192C (en) 2015-01-21 2024-02-20 Inhibrx Biopharma LLC Non-immunogenic single domain antibodies
EP3294768B1 (en) 2015-05-13 2019-08-21 Ablynx N.V. T cell recruiting polypeptides based on tcr alpha/beta reactivity
CN108290943A (zh) * 2015-11-13 2018-07-17 埃博灵克斯股份有限公司 改进的血清白蛋白结合免疫球蛋白可变结构域
AU2016360987A1 (en) 2015-11-27 2018-06-07 Ablynx Nv Polypeptides inhibiting CD40L
IL310340A (en) 2016-12-07 2024-03-01 Ablynx Nv Immunoglobulin sites with a single variable enhance serum albumin binding
BR112019014599A2 (pt) * 2017-01-17 2020-03-03 Ablynx N.V. Ligantes de albumina sérica melhorados
JP7300385B2 (ja) * 2017-01-17 2023-06-29 アブリンクス エン．ヴェー． 改善された血清アルブミン結合剤

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101646689A (zh) * 2006-09-08 2010-02-10 埃博灵克斯股份有限公司 具有长半衰期的血清清蛋白结合蛋白
CN101965364A (zh) * 2007-02-08 2011-02-02 杜门蒂斯有限公司 抗血清白蛋白的抗体单个可变区
US20140205597A1 (en) * 2010-09-30 2014-07-24 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
CN104203975A (zh) * 2011-06-23 2014-12-10 埃博灵克斯股份有限公司 用于预测、检测和减少涉及免疫球蛋白单可变结构域的测定法中的非特异性蛋白干扰的技术
EP2944653A1 (en) * 2011-06-23 2015-11-18 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobin single variable domains
US20150344568A1 (en) * 2011-06-23 2015-12-03 Ablynx N.V. Techniques for predicting, detecting and reducing aspecific protein interference in assays involving immunoglobulin single variable domains
US20140186365A1 (en) * 2013-01-03 2014-07-03 Institute For Cancer Research D/B/A The Research Institute Of Fox Chase Cancer Center Antibodies that specifically bind to serum albumin without interfering with albumin's capability to interact with the fcrn

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AU2018209151A1 (en) 2019-07-25

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