CN110179122A - 一种具有持续解毒功能的afb1复合解毒剂制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌及其活性成分结合制备一种具有持续解毒功能的黄曲霉毒素B1解毒剂。本发明是将两种菌分别发酵，然后喷雾干燥处理发酵液，将得到菌体和发酵产物按照一定比例混合均匀制备得到一种具有持续解毒功能的解毒剂，可以安全高效的将粮食中的黄曲霉毒素降解到国家安全限20μg/kg以下，并且戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌能够耐受胃肠道强酸环境，可以在短期内存留在肠道内发挥持续解毒的功能。pH值为5~7时，解毒剂能够高效的解除黄曲霉毒素B1。同等条件下复合解毒剂与凝结芽孢杆菌单独处理黄曲霉毒素B1的效率相比，提升了30~50%。本发明在高效解除粮食中黄曲霉毒素B1中有十分广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生态制剂领域，具体涉及到戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的菌酶混合物按照一定的组分比混合制成的复合解毒剂，此解毒剂既能高效解除粮食中的黄曲霉毒素B1，又能对人和动物肠道起到持续解毒，调理肠道菌群的功效。
背景技术
当人和动物摄取被黄曲霉毒素B1污染的粮食后，黄曲霉毒素B1主要被肠道系统吸收，会危害肠道、肝脏、肾脏等器官的健康。所以，迫切需要一种能够高效解除黄曲霉毒素B1的安全方法。传统的脱毒方法有物理和化学方法,包括碱法、高温法、射线辐照法、吸附法等。由于这些方法特异性不强、营养成分损失大、容易对环境造成二次污染等均无法广泛应用。生物脱毒法是利用微生物及其分泌的酶等代谢产物降解黄曲霉毒素的方法，生物脱毒法具有特异性强、效率高以及对食品、饲料和环境没有污染等优点,是黄曲霉毒素脱毒的主要发展方向。
目前国内外关于降解黄曲霉毒素B1的菌株虽有较多报道,但是种类依然受限,且多数降解菌的代谢产物及其毒性不清楚,因此实际应用受到了限制。本发明复合解毒剂中戊糖乳杆菌和植物乳杆菌代谢产物均对人和动植物没有毒性，不会造成机体损伤。
本发明复合解毒剂中的戊糖乳杆菌，其能够较好的耐受胃酸的影响，并且能够与肠上皮细胞之间存在较好的黏附能力，并且研究发现戊糖乳杆菌能够产细菌素，还能够产酸降低肠道的pH，对肠道中的大肠杆菌等有害菌能够产生抑制，戊糖乳杆菌能够调节肠道内有益和有害微生物菌群间的平衡，能持续的对肠道菌群发挥调节功效，还能够有效防治动物出现腹泻症状，有效的保护人和动物的肠道健康，能够与黄曲霉毒素B1紧密结合，快速脱除黄曲霉毒素B1，防止因黄曲霉毒素B1的摄入导致人体其他器官受到损伤。本发明复合解毒剂中的凝结芽孢杆菌具有极强的胃酸耐受性能，能够顺利通过胃部进入肠道，从而保障复合解毒剂功能的正常发挥。凝结芽孢杆菌能够在人和动物肠道长期定植，并且通过产生大量的乳酸、维生素、氨基酸、消化酶、抗菌凝固素等物质促进肠道双歧杆菌等有益菌的繁殖，同时抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌等的生长。并且经我们的研究发现，复合解毒剂中的凝结芽孢杆菌具有降解黄曲霉毒素B1的作用，能够有效的降低黄曲霉毒素B1避免其对人和动物机体产生损害。
Sangsila等研究表示戊糖菌株是一种新型有希望的菌株，可减少食品中的霉菌毒素污染。公开号CN109097312A公开了一株戊糖乳杆菌HN127及其在制备发酵香肠中的应用，戊糖乳杆菌HN127能够产蛋白酶、快速产酸、耐受高盐浓度、耐受胃液，并在应用于发酵香肠时，可以显著提高发酵香肠中乳酸菌活菌的数量，降低香肠的pH值，抑制有害菌的生长。申请号CN201710868073.6公开了一种戊糖乳杆菌及其在抑制沙门氏菌方面的应用，证实其能够抑制沙门氏菌生长，降低沙门氏菌在小鼠肠道内容物和器官中的载量，减缓沙门氏菌引起的小鼠死亡。李铁（2017）对戊糖乳杆菌制剂在仔猪腹泻防治中的临床效果进行研究，并表示预防仔猪腹泻采用戊糖乳杆菌制剂效果明显。刘聪等研究发现日粮添加凝结芽孢杆菌可改善肠道形态, 提升其抗氧化能力, 降低盲肠沙门氏菌定植数量, 缓解病源性感染应激,保证了蛋鸡机体健康。申请号CN201610635151.3公开了一种含凝结芽孢杆菌的复合菌剂及其制备方法，该复合菌剂含有凝结芽孢杆菌、粪肠球菌及酿酒酵母菌混合发酵的活性菌泥和稳定化保护剂，能够促进动物对饲料的消化吸收、节约成本，还可调节动物肠道内环境,从而提高动物免疫力、促进动物健康生长。申请号CN201610724131.3公开了提高凝结芽孢杆菌产抑菌活性物质的能力，可以应用于食品防腐剂，保鲜剂。申请号CN201610633178.9公开了具有益生作用的凝结芽孢杆菌，可有效抑制肠道致病大肠杆菌、等的生长繁殖，可有效调节动物肠道微生物平衡,抑制有害微生物生长,促进动物对营养的吸收,提高饲料转化率,提高动物生产性能。
本发明复合解毒剂具有安全高效的解毒效应，能够将粮食中的黄曲霉毒素B1高效解除，解毒剂中的戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别起到对黄曲霉毒素B1吸附和降解的作用，二者的结合使解毒剂具备良好的解毒能力。本发明解毒剂中的戊糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌能够在人和动物肠道内长期生存，并起到对黄曲霉毒素B1持续解毒的作用，还能够促进肠道中有益微生物的快速生长，抑制肠道内有害微生物的繁殖，进而起到保护机体健康的重要作用。
发明内容
本发明提供一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂制备方法。
本发明所涉及的戊糖乳杆菌（ATCC 8041）和凝结芽孢杆菌（ATCC 7050）来自试剂公司购买，粮食来自于农场。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂制备方法，主要为将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别发酵，并将二者的菌体和活性成分干燥处理后按照一定比例混合均匀而成。
进一步，在制备具有持续解毒功能的复合解毒机时，由戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的有效成分按照1/4~4/1的组分比混合而成。
一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂制备方法包括以下步骤：
将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别接种在合适的发酵培养基中扩大培养，之后分别获得戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的菌酶混合物，并将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的菌酶混合物按照1/4~4/1的组分比混合制成复合解毒剂。
利用国标法(GB 5009.22-2016 )检测粮食中黄曲霉毒素B1的含量。
复合解毒剂在降解粮食中的黄曲霉毒素B1的应用，其能够将粮食中的黄曲霉毒素B1含量解除到国家安全限以内。
进一步，复合解毒剂在降解粮食中的黄曲霉毒素B1时，依据粮食中毒素含量的差异，添加复合解毒剂有效成分与粮食的质量比为0.1%~5%。
进一步，复合解毒剂在降解粮食中的黄曲霉毒素B1时，复合解毒剂的最适解毒pH值为5~7。
本发明复合解毒剂在相同的作用条件下，其与凝结芽孢杆菌单独处理黄曲霉毒素B1相比，解毒率提升了30~50%。
本发明复合解毒剂中的戊糖乳杆菌可以有效的吸附黄曲霉毒素B1，并且其能够在肠道中长期生存，其生产的戊糖乳杆菌素能够很好的起到对解毒剂的保护作用，并能抑制有害菌生长。
本发明复合解毒剂中的凝结芽孢杆菌能够高效降解黄曲霉毒素B1，其具有极强的耐胃酸能力，能够保护解毒剂安全抵达肠道，并能够在肠道长期存活，还能够改善肠道菌群结构、维持肠道内菌群平衡和提高机体免疫水平、促进营养物质代谢和利用。
本发明通过将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的菌酶混合物组合制备的复合解毒剂，具有安全、高效降解粮食中黄曲霉毒素B1的应用。将解毒剂与发霉粮食混合均匀，可以很好的降解黄曲霉毒素B1，将发霉粮食中的黄曲霉毒素B1降低到国家安全标准限以下。当复合解毒剂处理pH值为5-7的发霉粮食时，与凝结芽孢杆菌菌酶混合物单独处理黄曲霉毒素B1相比，解毒率提升了30~50%。本发明复合解毒剂中的戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌可以耐受胃酸影响进入肠道，可以在肠道中长期保持高活性，有利于在肠道中对黄曲霉毒素B1起到二次解毒的效果，当人和动物再次接触黄曲霉毒素B1时，依然具有再次有效降解毒素的能力，防止黄曲霉毒素B1危害人和动物机体健康。
具体实施方式
下面结合实例，对本发明的的具体实施方式做进一步的说明。以下实施例是用来进一步说明本发明的内容，而不限制于本发明的保护范围。对于本发明所涉及的相关内容及所做的修改，均属于本发明保护范围。
实施例1
将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别接种在合适的发酵培养基中扩大培养，其中戊糖乳杆菌进行厌氧发酵，凝结芽孢杆菌进行好氧发酵。培养结束后戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的发酵液分别进行喷雾干燥处理，将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌干燥后的成分按照1/4的组分比混合而成复合解毒剂，备用。
添加适量的无菌水将复合解毒剂进行稀释，将复合解毒剂按照0.5%的质量比加入到提前准备好的发霉粮食中，并将黄曲霉毒素B1超标的粮食与复合解毒剂充分混合均匀，在pH=7的条件下，解毒处理48h，检测粮食中残存的黄曲霉毒素B1的含量。经检测，复合解毒剂能够有效将粮食中的黄曲霉毒素B1解除到国家安全限以下。
实施例2
将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别接种在合适的发酵培养基中扩大培养，其中戊糖乳杆菌进行厌氧发酵，凝结芽孢杆菌进行好氧发酵。培养结束后戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的发酵液分别进行喷雾干燥处理，将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌干燥后的成分按照1/1的组分比混合而成复合解毒剂，备用。
添加适量的无菌水将复合解毒剂进行稀释，按照1%的质量比加入到提前准备好的发霉粮食中，并将黄曲霉毒素B1超标的粮食与复合解毒剂充分混合均匀，在pH=5的条件下，解毒处理48h，检测粮食中残存的黄曲霉毒素B1的含量。经检测，复合解毒剂能够有效将粮食中的黄曲霉毒素B1解除到国家安全限以下，同等条件下，其与凝结芽孢杆菌单独处理黄曲霉毒素B1相比，解毒率提升了50%。
实施例3
将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌分别接种在合适的发酵培养基中扩大培养，其中戊糖乳杆菌进行厌氧发酵，凝结芽孢杆菌进行好氧发酵。培养结束后戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的发酵液分别进行喷雾干燥处理，将戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌干燥后的成分按照2/1的组分比混合而成复合解毒剂，备用。
添加适量的无菌水将复合解毒剂进行稀释，将待解毒的两份粮食均分为两份，然后将复合解毒剂按照1.5%的质量比加入到提前准备好的第一份发霉粮食中，并将黄曲霉毒素B1超标的粮食与复合解毒剂充分混合均匀，在pH=6的条件下，解毒处理48h，检测粮食中残存的黄曲霉毒素B1的含量。经检测，复合解毒剂能够有效将粮食中的黄曲霉毒素B1解除到国家安全限以下。在以上解毒的基础上，向经过解毒的粮食中再次添加第二份待解毒的粮食并搅拌均匀，在pH=6的条件下，解毒处理48h，检测粮食中残存的黄曲霉毒素B1的含量，经检测，复合解毒剂依然能够有效将粮食中的黄曲霉毒素B1解除到国家安全限20μg/kg以下。
Claims (7)
1.一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂制备方法，主要由戊糖乳杆菌ATCC 8041和凝结芽孢杆菌ATCC 7050组合而成。
2.如权利要求1所述的一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂，其由戊糖乳杆菌和凝结芽孢杆菌的菌体和活性成分按照1/4~4/1的组分比混合而成。
3.如权利要求1或权利要求2所述的一种具有持续解毒功能的AFB1复合解毒剂，其特征在于：复合解毒剂在降解粮食中的黄曲霉毒素B1的应用。
4.如权利要求1~3所述的复合解毒剂，其在降解粮食中的黄曲霉毒素B1时，复合解毒剂有效成分与粮食的质量比为0.1%~5%。
5.如权利要求1~4所述的复合解毒剂的最适解毒pH值为5~7。
6.如权利要求1~5所述的复合解毒剂，同等条件下，其与凝结芽孢杆菌单独处理黄曲霉毒素B1相比，解毒率提升了30~50%。
7.如权利要求1~6所述的复合解毒剂，其在人和动物肠道中对黄曲霉毒素B1具有持续解毒的作用，机体在短时间内误食含有黄曲霉毒素的粮食后，存留在胃肠道内的这两种益生菌能够迅速对进入胃肠道的黄曲霉毒素发挥解除作用，与黄曲霉毒素快速结合从而排除体外，降低其对机体的损伤。
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