CN110157667A - 一种小鼠红细胞悬液的制备方法 - Google Patents

一种小鼠红细胞悬液的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种小鼠红细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：a.采集多只成年小鼠血液各0.2～0.4ml，将小鼠血液与红细胞保存液按照体积比为1:1.5～2.5混合均匀后保存，保存温度为2～8℃；b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，在转速为1400～1600rpm下离心4～6min，弃去上清液；c.重复步骤b两次到四次后，再加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，在转速为1400～1600rpm下离心10min，弃去上清液；d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为2～8℃；延长小鼠红细胞的有效保存时间。

Description

一种小鼠红细胞悬液的制备方法
技术领域
本发明涉及红细胞悬液制备技术领域，特别涉及一种小鼠红细胞悬液的制备方法。
背景技术
红细胞是血液中数量最多的有形成分，起源于骨髓造血干细胞，在红细胞生成素作用下，分化为原红细胞，经数次有丝分裂发育为早幼、中幼和晚幼红细胞。红细胞有交换和携带气体的功能，它的功能是通过红细胞内的血红蛋白来实现，因为血红蛋白中含有铁元素。
小鼠红细胞经常用于各种医学实验中，现有的小鼠红细胞的提取方法也是多种多样的，而这些方法制备得到的小鼠红细胞的有效保存时间短，导致需要经常配制和造成小鼠红细胞的浪费。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中制备小鼠红细胞的方法得到的小鼠红细胞的有效保存时间短的问题，提供一种小鼠红细胞悬液的制备方法。
本发明采用的技术方案是：
一种小鼠红细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：
a.采集多只成年小鼠的血液各0.2～0.4ml，将小鼠血液与红细胞保存液混合均匀后保存，其中，小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:1.5～2.5，保存温度为2～8℃；
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，然后在转速为1400～1600rpm的条件下离心4～6min，弃去上清液；
c.重复步骤b两次到四次后，再加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，然后在转速为1400～1600rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为2～8℃。
进一步限定，所述红细胞保存液为阿氏液或CPDA-1。
进一步限定，所述阿氏液由以下方法制备得到：称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g，混合后加入100ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml，加热溶化既得所述阿氏液，保存温度为4℃，有效保存时间为180天，其中，加热温度为110～120℃，加热时间为10min。
进一步限定，所述CPDA-1由以下方法制备得到：无水葡萄糖25.5g、枸橼酸钠.2H2O26.3g、枸橼酸.H2O 3.27g、磷酸二氢钠2.22g以及腺嘌呤173.0g，混合后加入1000ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至1000ml，加热溶化既得所述CPDA-1，保存温度为4℃，有效保存时间为180天，其中，加热温度为110～120℃，加热时间为6min。
进一步限定，所述生理盐水由以下方法制备得到：称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中即可得到。
进一步限定，小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:2。
进一步限定，步骤b中和步骤C中所述转速为均1500rpm。
进一步限定，步骤c中所述重复步骤b三次。
进一步限定，所述步骤b中和步骤C中离心时间为5min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：通过将小鼠血液与红细胞保存液的体积比设置为1:1.5～2.5，小鼠血液能够充分地以液体的形成存在便于后续红细胞的分离；采用离心的步骤主要是将小鼠血液中的血浆进行分离得到，得到纯度高的红细胞悬液；该小鼠红细胞悬液的保存时间长达32天，比现有的技术中制备的小鼠红细胞悬液保存时间更长，具有延长小鼠红细胞的有效保存时间，减少小鼠红细胞的浪费和经常配制带来的麻烦。
附图说明
图1是刚制备出来的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图2是制备出来第7天的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图3是制备出来第15天的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图4是制备出来第24天的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图5是制备出来第28天的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图6是制备出来第32天的小鼠红细胞在显微镜下的视图；
图7是制备出来第35天的小鼠红细胞在显微镜下的视图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本发明的描述中，有的步骤未作具体描述的，理解为现有技术中有能实现的步骤。
制备所需工具：规格分别为1ml、2ml、5ml、15ml以及100ml的量筒各两支，实验用称重天平一台，规格为1升的烧杯一个，实验用小型冰箱一台，离心机一台，规格为100～200的高温温度计一只，常温温度计一台，计时器一台，试管若干只。
制备所需实验试剂：葡萄糖、氯化钠、蒸馏水、柠檬酸钠以及柠檬酸。
实施例1
一种小鼠红细胞悬液的制备方法，a.采集5只成年小鼠的血液各0.2ml，一共得到1ml的小鼠血液，将1ml的小鼠血液与1.5ml阿氏液混合均匀后保存，保存温度为2℃。
其中，阿氏液由以下方法制得：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g，混合后加入100ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml，在温度为110～120℃下，加热10min后融化得到。
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1400rpm的条件下离心4min，弃去上清液；
其中：生理盐水由以下方法制备得到：称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中摇匀融化即可得到。
c.重复步骤b两次后，再加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1400rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为2℃。
由于判定小鼠红细胞的有效保存时间是根据小鼠红细胞形态的完整性以及破裂时间的衡量的，因此将上述制备得到的小鼠红细胞悬液每隔一段时间取0.5ml放于显微镜下观察红细胞的形态，时间间隔为制备出来时结果如图1所示，第7天结果如图2所示，第15天结果如图3所示，第24天结果如图4所示，第28天结果如图5所示，第32天结果如图6所示以及第35天结果如图7所示；由图1-7可知，在28天及以前，小鼠红细胞是形态是完整且细胞边缘是光滑的，图6所示的小鼠红细胞是完整的但是周围有一点毛糙，不再光滑，说明小鼠红细胞出现了变形，图7所示的小鼠红细胞虽然是完整的，但是小鼠红细胞的周围出现了很明显的变形，说明小鼠红细胞即将破裂，从而说明该小鼠红细胞的悬液不能再进行实验使用。
实施例2
一种小鼠红细胞悬液的制备方法，a.采集10只成年小鼠的血液各0.2ml，一共得到2ml的小鼠血液，将2ml的小鼠血液与4ml阿氏液混合均匀后保存，保存温度为5℃。
其中，阿氏液由以下方法制得：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g，混合后加入100ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml，在温度为110～120℃下，加热10min后融化得到。
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1500rpm的条件下离心5min，弃去上清液；
其中：生理盐水由以下方法制备得到：称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中摇匀融化即可得到。
c.重复步骤b两次后，再加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1500rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为5℃。
实施例3
一种小鼠红细胞悬液的制备方法，a.采集3只成年小鼠的血液各0.4ml，一共得到1.2ml的小鼠血液，将1.2ml的小鼠血液与3ml阿氏液混合均匀后保存，保存温度为8℃。
其中，阿氏液由以下方法制得：葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g，混合后加入100ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml，在温度为110～120℃下，加热10min后融化得到。
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1600rpm的条件下离心5min，弃去上清液；
其中：生理盐水由以下方法制备得到：称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中摇匀融化即可得到。
c.重复步骤b两次后，再加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1600rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为8℃。
实施例4
一种小鼠红细胞悬液的制备方法，a.采集3只成年小鼠的血液各0.4ml，一共得到1.2ml的小鼠血液，将1.2ml的小鼠血液与3ml CPDA-1混合均匀后保存，保存温度为8℃。
其中，CPDA-1由以下方法制得：所述CPDA-1由以下方法制备得到：无水葡萄糖25.5g、枸橼酸钠.2H2O 26.3g、枸橼酸.H2O 3.27g、磷酸二氢钠2.22g以及腺嘌呤173.0g，混合后加入1000ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至1000ml，加热溶化既得所述CPDA-1，保存温度为4℃，有效保存时间为180天，其中，加热温度为110～120℃，加热时间为6min。
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1600rpm的条件下离心5min，弃去上清液；
其中：生理盐水由以下方法制备得到：称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中摇匀融化即可得到。
c.重复步骤b两次后，再加入生理盐水至总体积为15ml，置于试管中且摇匀，然后在转速为1600rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为8℃。
本发明不局限于上述可选实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是落入本发明权利要求界定范围内的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.采集多只成年小鼠的血液各0.2～0.4ml，将小鼠血液与红细胞保存液混合均匀后保存，其中，小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:1.5～2.5，保存温度为2～8℃；
b.向步骤a得到的混合液中加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，然后在转速为1400～1600rpm的条件下离心4～6min，弃去上清液；
c.重复步骤b两次到四次后，再加入生理盐水至总体积为15ml且摇匀，然后在转速为1400～1600rpm的条件下离心10min，弃去上清液；
d.向步骤c中弃去上清液所得的溶液中加入无菌生理盐水制备体积分数为2％的小鼠红细胞悬液然后保存，保存温度为2～8℃。
2.根据权利要求1所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述红细胞保存液为阿氏液或CPDA-1。
3.根据权利要求2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述阿氏液由以下方法制备得到：
称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g以及氯化钠0.42g，混合后加入100ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至100ml，加热溶化既得所述阿氏液，保存温度为4℃，有效保存时间为180天，其中，加热温度为110～120℃，加热时间为10min。
4.根据权利要求2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述CPDA-1由以下方法制备得到：无水葡萄糖25.5g、枸橼酸钠.2H2O26.3g、枸橼酸.H2O3.27g、磷酸二氢钠2.22g以及腺嘌呤173.0g，混合后加入1000ml的试剂瓶中，向试剂瓶中加入蒸馏水至1000ml，加热溶化既得所述CPDA-1，保存温度为4℃，有效保存时间为180天，其中，加热温度为110～120℃，加热时间为6min。
5.根据权利要求1所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述生理盐水由以下方法制备得到：
称取氯化钠8.5g且溶于1000ml蒸馏水中即可得到。
6.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，小鼠血液与红细胞保存液的体积比为1:2。
7.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，步骤b中和步骤C中所述转速为均1500rpm。
8.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，步骤c中所述重复步骤b三次。
9.根据权利要求1或2所述的小鼠红细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述步骤b中和步骤C中离心时间为5min。
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