CN110156582A - 一种高纯度根皮素的制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种高纯度根皮素的制备方法，包括如下步骤：S1：取待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值；S2、将根皮素原料溶解于浓度为60％～70％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经层析柱富集纯化；S3、依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱；S4、收集浓度为62％～67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，离心回收固体，得到提纯后的根皮素，所述提纯后的根皮素的纯度高于第一预值。本发明利用62％～67％的乙醇水溶液溶解根皮素，提取高纯度、无杂色的根皮素，使用范围不受限制，本方法简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

Description

一种高纯度根皮素的制备方法

技术领域

本发明涉及分离纯化技术领域，更具体地说，它涉及一种高纯度根皮素的制备方法。

背景技术

根皮素，别名三羟苯酚丙酮2,4,6-三羟基-3-(4-羟基苯基)苯丙酮。是国外新近研究开发出来的一种新型天然皮肤美白剂，主要分布于苹果、梨等多汁水果的果皮及根皮。根皮素可应用于面膜、护肤膏霜、乳液和精华素中。为珍珠白结晶粉末，能溶于乙醇和丙酮，几乎不溶于水。除此之外，具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、抗癌、抗炎、抗菌和雌激素作用等多种生物活性。近年来，根皮素作为抗氧化功效因子在食品领域应用广泛。

然而，根皮素在植物中的含量较低，目前生产根皮素的方法包括有机化学方法合成，也可以通过天然的根皮苷进行酶解、酸解、碱解等方法来制备。但是这些方法制得的根皮素往往纯度不够高，有一定的色泽，因而限制了其使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度根皮素的制备方法，其解决了现有的根皮素纯度低、具有色泽的问题。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种高纯度根皮素的制备方法，包括如下步骤：S1：取待提纯的根皮素原料，所述根皮素原料的纯度为第一预值；S2、将所述根皮素原料溶解于浓度为60％～70％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经层析柱富集纯化；S3、依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱；S4、收集浓度为62％～67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，离心回收固体，得到提纯后的根皮素，所述提纯后的根皮素的纯度高于第一预值。

进一步地，步骤S2中加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍。

进一步地，步骤S2中乙醇水溶液的温度为50℃～60℃。

进一步地，步骤S2中所述层析柱选用型号为D101、AB-8或者HP-20的大孔树脂柱层析。

进一步地，步骤S3中依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱具体包括：

用浓度为3％～7％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱3个柱体积，洗脱速率为50mL/min。

进一步地，步骤S4中离心速度为8000～12000r/min。

进一步地，所述第一预值低于85％。

进一步地，所述提纯后的根皮素的纯度高于98％。

进一步地，所述方法还包括如下步骤：

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

综上所述，本发明具有以下有益效果：本发明通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用62％～67％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本发明优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

具体实施方式

实施例1：

S1：取50g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(HPLC检测纯度，检测方法采用GB1886.261—2016的方法)；

S2、将根皮素原料溶解于浓度为60％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经D101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3L，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为250ml，温度为60℃；

S3、用浓度为3％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50mL/min；

S4、收集浓度为67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，10000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经HPLC检测纯度为98.7％；

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用67％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

实施例2：

S1：取60g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(HPLC检测纯度，检测方法采用GB1886.261—2016的方法)；

S2、将根皮素原料溶解于浓度为65％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经AB-8型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3L，柱直径为8cm，柱高为1.2m)进行富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，加入乙醇水溶液和纯水的体积均为300ml，温度为55℃；

S3、用浓度为5％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为64％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50mL/min；

S4、收集浓度为64％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，10000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经HPLC检测纯度为98.3％；

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用64％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

实施例3：

S1：取40g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(HPLC检测纯度，检测方法采用GB1886.261—2016的方法)；

S2、将根皮素原料溶解于浓度为62％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经HP-20型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3L，柱直径为8cm，柱高为1.2m)进行富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为200ml，温度为50℃；

S3、用浓度为7％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为62％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50mL/min；

S4、收集浓度为62％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，12000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经HPLC检测纯度为98.5％；

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用62％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

实施例4：

S1：取50g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为85％(HPLC检测纯度，检测方法采用GB1886.261—2016的方法)；

S2、将根皮素原料溶解于浓度为63％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经D101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3L，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，具体地，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为250ml，温度为60℃；

S3、用浓度为4％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为63％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50mL/min；

S4、收集浓度为63％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，8000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经HPLC检测纯度为98.6％；

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用63％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

实施例5：

S1：取70g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为80％(HPLC检测纯度，检测方法采用GB1886.261—2016的方法)；

S2、将根皮素原料溶解于浓度为68％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经D101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3L，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，具体地，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为350ml，温度为60℃；

S3、用浓度为6％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为66％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50mL/min；

S4、收集浓度为66％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，9000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经HPLC检测纯度为98.5％；

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。

本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用66％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种高纯度根皮素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：取待提纯的根皮素原料，所述根皮素原料的纯度为第一预值；

S2、将所述根皮素原料溶解于浓度为60％～70％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经层析柱富集纯化；

S3、依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱；

S4、收集浓度为62％～67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，离心回收固体，得到提纯后的根皮素，所述提纯后的根皮素的纯度高于第一预值。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中乙醇水溶液的温度为50℃～60℃。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述层析柱选用型号为D101、AB-8或者HP-20的大孔树脂柱层析。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱S2中的层析柱具体包括：

用浓度为3％～7％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积，洗脱速率为50mL/min，洗脱液弃去；用浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱3个柱体积，洗脱速率为50mL/min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中离心速度为8000～12000r/min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一预值低于85％。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提纯后的根皮素的纯度高于98％。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

S5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。