CN110151807A - 一种熟三七提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
一种熟三七提取物，所述熟三七提取物中的总皂苷的浓度为68.08‑77.73mg/g，所述总皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)‑Rg3、20(S)‑Rg3和三七皂苷R1，其中，三七皂苷R1的浓度≥4.93mg/g，人参皂苷Rg1的浓度≥20.19mg/g，人参皂苷Re的浓度≥2.52mg/g，人参皂苷Rb1的浓度≥17.37mg/g，人参皂苷Rd的浓度≥5.76mg/g，人参皂苷Rh1的浓度≥0.13mg/g，人参皂苷Rk3的浓度≥5.00mg/g，人参皂苷Rh4的浓度≥8.64mg/g，人参皂苷20(R)‑Rg3的浓度≥2.32mg/g，人参皂苷20(S)‑Rg3的浓度≥1.22mg/g。还公开了熟三七提取物的制备方法及其抗氧化用途。本申请的熟三七提取物具有较佳的抗氧化活性。
Description
技术领域
本申请涉及但不限于中药制备技领域术，尤其涉及但不限于一种熟三七提取物及其制备方法和用途。
背景技术
三七素有“生打熟补”之说，“生打”是指生三七具有活血化瘀、消炎镇痛、止血的功效，而“熟补”是指熟三七具有理气补血、强身健体之功。许多研究表明，皂苷是三七的主要活性成分，同时也是导致生熟三七药理作用有着显著差异的主要原因。当生三七经过蒸制后，三七中的皂苷R1，Rg1，Rb1，Re，Rd含量有不同程度的降低，同时新生皂苷Rh1，Rk3，Rh4，20(R)-Rg3，20(S)-Rg3有不同程度的增加。目前大多数研究者都集中在对生三七总皂苷的研究上面，而对熟三七总皂苷的制备研究较少。
因此，开发一种皂苷含量高、提取效率高的熟三七提取物制备方法具有重要意义。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
本申请提供了一种皂苷含量高、干膏率高、抗氧化活性好的熟三七提取物及其制备方法和用途。
具体地，本申请提供了一种熟三七提取物，所述熟三七提取物中的总皂苷的浓度为68.08-77.73mg/g，所述总皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3和三七皂苷R1，其中，三七皂苷R1的浓度≥4.93mg/g，人参皂苷Rg1的浓度≥20.19mg/g，人参皂苷Re的浓度≥2.52mg/g，人参皂苷Rb1的浓度≥17.37mg/g，人参皂苷Rd的浓度≥5.76mg/g，人参皂苷Rh1的浓度≥0.13mg/g，人参皂苷Rk3的浓度≥5.00mg/g，人参皂苷Rh4的浓度≥8.64mg/g，人参皂苷20(R)-Rg3的浓度≥2.32mg/g，人参皂苷20(S)-Rg3的浓度≥1.22mg/g。
在一些实施方式中，所述熟三七提取物中的总皂苷的浓度为68.08-77.73mg/g，所述总皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3和三七皂苷R1，三七皂苷R1的浓度可以为4.93-5.64mg/g，人参皂苷Rg1的浓度可以为20.19-23.49mg/g，人参皂苷Re的浓度可以为2.52-3.20mg/g，人参皂苷Rb1的浓度可以为17.37-17.61mg/g，人参皂苷Rd的浓度可以为5.76-6.59mg/g，人参皂苷Rh1的浓度可以为0.13-0.15mg/g，人参皂苷Rk3的浓度可以为5.00-6.13mg/g，人参皂苷Rh4的浓度可以为8.64-10.71mg/g，人参皂苷20(R)-Rg3的浓度可以为2.32-2.70mg/g，人参皂苷20(S)-Rg3的浓度可以为1.22-1.52mg/g。
本申请还提供了一种熟三七提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)提取：将熟三七粉末加入乙醇-水溶液中浸泡，在80-90℃下用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩提取液，所述熟三七粉末的质量与所述乙醇-水溶液的体积之比为1:10-14，单位为g/ml；
(2)上大孔树脂：将浓缩得到的浓缩液加水稀释至一定浓度，离心，取上清液，上大孔树脂，先用水冲洗，弃去水洗液，再用乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，得熟三七提取物。
在一些实施方式中，所述熟三七粉末可以通过下述方法制备得到：取生三七粉末灭菌，在105-125℃的条件下蒸制2-6小时，将蒸好的粉末在40-50℃下干燥至恒重；
任选地，所述生三七粉末能通过30-50目筛。
在一些实施方式中，所述步骤(1)中的乙醇-水溶液的体积浓度可以为60％-80％。
在一些实施方式中，在所述乙醇-水溶液中浸泡的时间可以为0.5-1小时。
在一些实施方式中，所述步骤(1)中的熟三七粉末能通过30-50目筛。
在一些实施方式中，可以回流提取3-5次，每次可以提取1-2小时。
在一些实施方式中，所述步骤(1)中可以采用减压浓缩法浓缩提取液，任选地，所述减压浓缩的真空度可以为0.07-0.08Mpa。
在一些实施方式中，所述步骤(2)中的大孔树脂可以为HPD100大孔吸附树脂。
在一些实施方式中，所述步骤(2)中的乙醇-水溶液的体积浓度可以为60％-80％。
在一些实施方式中，所述步骤(2)中将浓缩液加水稀释至总皂苷的浓度可以为10.6-16.96mg/ml，上大孔树脂时的上样体积可以为3-5倍的柱体积，上样速度可以为1-3倍柱体积每小时，水洗体积可以为1.5-3.5倍柱体积，水洗速度可以为1.5-3倍柱体积每小时，乙醇-水溶液洗脱液的体积可以为3-5倍的柱体积，洗脱速度可以为0.6-2倍柱体积每小时。
在一些实施方式中，所述熟三七提取物的制备方法可以由以下步骤组成：
取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末在45℃下干燥至恒重，得到熟三七粉末；
取适量的熟三七粉末加入其重量的10倍量体积的60％乙醇-水溶液中浸泡0.5小时，在85℃的水浴锅中回流提取3次，每次提取1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
将浓缩得到的浓缩液加纯水稀释至总皂苷浓度为11.22mg/ml，离心，取4.97倍柱体积的上清液，以每小时1.5倍柱体积的速度上HPD100大孔吸附树脂，先用2倍柱体积的纯水，以每小时2倍柱体积的速度冲洗，弃去水洗液，再用3.31倍柱体积的70％的乙醇-水溶液以1.5倍柱体积的速度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，得熟三七提取物。
本申请还提供了如上所述的熟三七提取物或通过如上所述的方法制备得到的熟三七提取物的抗氧化用途。
本申请以与熟三七的生理活性有关的十种成分(三七皂苷R1，人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd结合新生成的人参皂苷Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3)作为评价指标，对于熟三七的提取更具有针对性和目的性。具体来说，以十种皂苷成分作为评价指标，结合熟三七提取物的抗氧化活性，筛选出较好的抗氧化活性对应的熟三七提取物的十种皂苷的较适宜浓度范围，使得根据十种皂苷的浓度就能判断出熟三七提取物的抗氧化活性。同时，筛选出具有较好抗氧化活性的熟三七提取物的较适宜制备工艺，使得在筛选出的制备工艺范围内生产时就能得到具有高干膏率、高皂苷成分含量以及高抗氧化活性的熟三七提取物。
本申请的熟三七提取物的制备方法的优点为：工艺简单，提取效率好，熟三七总皂苷回收率和纯度高，质量稳定，并易于工业化生产。
制备得到的熟三七提取物的总皂苷含量为68.08-77.73mg/g，干膏率为29.06％-33.68％，IC50为0.0366-0.0536mg/ml，回收率为79.68％-85.06％，总皂苷纯度为75.32％-79.45％。
本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的目的和其他优点可通过在说明书以及权利要求书中所特别指出的结构来实现和获得。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本申请的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
以下实施例中所使用的生三七产自云南文山，其他原料和试剂，如无特别说明，均为普通市售产品。
实施例1
一种制备熟三七提取物的方法，包括以下步骤：
(1)取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件下蒸制2小时，将蒸好的粉末放置于45℃左右的热风干燥箱中，干燥至恒重，得到熟三七粉末；
(2)准确称量上述得到的熟三七粉末5g，加50ml的60％乙醇-水溶液浸泡0.5小时之后，在85℃的水浴锅中用乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
(3)取浓缩液适量，加纯水配置成总皂苷浓度为11.22mg/ml的溶液，离心，取4.97倍柱体积的上清液，以每小时2倍柱体积的上样速度上HPD100大孔吸附树脂，用2倍柱体积的纯水以每小时1.5倍柱体积的水洗速度除杂，弃去水洗液，用3.31倍柱体积的70％乙醇-水溶液洗脱，洗脱速度为每小时1.5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，洗脱液减压4干燥得熟三七提取物。
实施例2
一种制备熟三七提取物的方法，包括以下步骤：
(1)取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末放置于45℃左右的热风干燥箱中，干燥至恒重，得到熟三七粉末；
(2)准确称量上述得到的熟三七粉末5g，加60ml的70％乙醇-水溶液浸泡0.5小时之后，在85℃的水浴锅中用乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
(3)取浓缩液适量，加纯水配置成总皂苷浓度为16.96mg/ml的溶液，离心，取5倍柱体积的上清液，以每小时2倍柱体积的上样速度上HPD100大孔吸附树脂，用2倍柱体积的纯水以每小时1.5倍柱体积的水洗速度除杂，弃去水洗液，用3倍柱体积的70％乙醇-水溶液洗脱，洗脱速度为每小时1.5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，洗脱液减压干燥得熟三七提取物。
实施例3
一种制备熟三七提取物的方法，包括以下步骤：
(1)取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末放置于45℃左右的热风干燥箱中，干燥至恒重，得到熟三七粉末；
(2)准确称量上述得到的熟三七粉末5g，加60ml的70％乙醇-水溶液浸泡0.5小时之后，在85℃的水浴锅中用乙醇回流提取5次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
(3)取浓缩液适量，加纯水配置成总皂苷浓度为10.60mg/ml的溶液，离心，取5倍柱体积的上清液，以每小时2倍柱体积的上样速度上HPD100大孔吸附树脂，用2倍柱体积的纯水以每小时1.5倍柱体积的水洗速度除杂，弃去水洗液，用3倍柱体积的70％乙醇-水溶液洗脱，洗脱速度为每小时1.5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，洗脱液减压干燥得熟三七提取物。
实施例4
一种制备熟三七提取物的方法，包括以下步骤：
(1)取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末放置于45℃左右的热风干燥箱中，干燥至恒重，得到熟三七粉末；
(2)准确称量上述得到的熟三七粉末5g，加50ml的60％乙醇-水溶液浸泡0.5小时之后，在85℃的水浴锅中用乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
(3)取浓缩液适量，加纯水配置成总皂苷浓度为10.60mg/ml的溶液，离心，取3倍柱体积的上清液，以每小时2倍柱体积的上样速度上HPD100大孔吸附树脂，用2倍柱体积的纯水以每小时1.5倍柱体积的水洗速度除杂，弃去水洗液，用3倍柱体积的70％乙醇-水溶液洗脱，洗脱速度为每小时1.5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，洗脱液减压干燥得熟三七提取物。
实施例5
一种制备熟三七提取物的方法，包括以下步骤：
(1)取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末放置于45℃左右的热风干燥箱中，干燥至恒重，得到熟三七粉末；
(2)准确称量上述得到的熟三七粉末5g，加50ml的80％乙醇-水溶液浸泡0.5小时之后，在85℃的水浴锅中用乙醇回流提取5次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
(3)取浓缩液适量，加纯水配置成总皂苷浓度为10.60mg/ml的溶液，离心，取3倍柱体积的上清液，以每小时2倍柱体积的上样速度上HPD100大孔吸附树脂，用3.5倍柱体积的纯水以每小时1.5倍柱体积的水洗速度除杂，弃去水洗液，用5倍柱体积的70％乙醇-水溶液洗脱，洗脱速度为每小时1.5倍柱体积，收集乙醇洗脱液，洗脱液减压干燥得熟三七提取物。
干膏率及其他性能参数检测
称取实施例1-5中步骤(2)得到的浓缩液适量，置于已恒定质量的蒸发皿中，放入103℃的热风干燥箱中，干燥至恒重，计算得干膏率。
表1
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 干膏率 | 31.96％ | 31.68％ | 32.68％ | 29.06％ | 33.68％ |
| 回收率 | 82.81％ | 80.62％ | 83.54％ | 79.68％ | 85.06％ |
| 提取物纯度 | 77.24％ | 77.48％ | 75.84％ | 79.45％ | 75.32％ |
熟三七提取物皂苷浓度检测
采用以下方法检测实施例1-5制备的熟三七提取物中的皂苷浓度：
以三七原有成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd结合新生成的人参皂苷Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3为评价指标。
1仪器与试剂
1.1仪器
高效液相色谱、紫外可见分光光度计、层析柱。
1.2标准品、供试品、试剂
标准品：三七皂苷R1(购买自四川省维克奇生物科技有限公司)
人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3(购买自四川省维克奇生物科技有限公司)
供试品：实施例1-5制备的熟三七总皂苷提取物
试剂：HPD100大孔吸附树脂(购买自陕西乐博生化科技有限公司)
乙醇(分析纯)、甲醇(分析纯)、乙腈(色谱纯)。
(1)确定色谱条件：
操作系统：Agilent 1260HPLC系统(Agilent Technologies)；
色谱柱：C18色谱柱(月旭科技(上海)股份有限公司，welchmat系列)(250mm×4.6mm，5μm)；
流动相：水(A)和乙腈(B)；
梯度洗脱条件：0-20min，80体积％A；20-45min，54体积％A；45-55min，45体积％A；55-60min，45体积％A；60-65min，100体积％B；65-70min，80体积％A；70-90min，80％体积A；
流动相流速：1.0ml/min；
检测波长：203nm；
进样量：10μl。
(2)配制混合对照品溶液：
分别精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3标准品1mg，加甲醇制成每1ml含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3 1mg的混合对照品溶液。
(3)配制供试品溶液：
分别精密称取实施例1-5制备的熟三七提取物2ml，加纯水定容至25ml。
(4)检测熟三七提取物中的皂苷浓度
采用步骤(1)中的色谱条件对所述混合对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，根据测得的峰面积按照下述公式计算所述熟三七提取物中的皂苷浓度：
R1：Y＝2705.6X+50.697………………….公式(1)
Rg1：Y＝3944.9X+69.409………………..公式(2)
Re：Y＝2646.8X+22.808…………………公式(3)
Rb1：Y＝3227.3X+49.436………………...公式(4)
Rd：Y＝2953.5X+41.408…………………公式(5)
Rh1：Y＝9165X+63.297…………………..公式(6)
Rk3：Y＝4948.7X+45.521…………………公式(7)
Rh4：Y＝4911.8X+33.761…………………公式(8)
20(R)-Rg3：Y＝2172.6X+9.845……………公式(9)
20(S)-Rg3：Y＝2949.24X+3.6774………….公式(10)
检测结果请见表2。
表2
熟三七提取物抗氧化活性检测
采用下述方法检测实施例1-5制备的熟三七提取物的抗氧化活性：
(1)将实施例1-5的步骤(2)得到的浓缩液用纯水分别配成浓度为0.05、0.075、0.1、0.25、0.5、1.0、1.50mg/ml的溶液(因为实施例步骤(3)中使用了乙醇，乙醇会导致IC50测量结果有误差，所以采用步骤(2)得到的浓缩液进行检测)；
(2)取1.5ml上述不同浓度的熟三七提取物溶液加入含有60μl 1.0mM FeCl2、90μl1mM 1,10-菲咯啉、2.4ml 0.2M磷酸盐缓冲液(pH为7.8)和150μl 0.17M H2O2的混合溶液中。通过加入H2O2开始反应。
(3)在室温下孵育5分钟后，用Beckman分光光度计在560nm处检测混合物的吸光度。
(4)按照下述公式计算羟基自由基清除率：
羟基自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]×100％
其中，A0为空白对照组(无提取物)的吸光度；A1为加了熟三七提取物的吸光度；A2为没有1,10-菲咯啉的吸光度。
(5)利用不同浓度的熟三七提取物得到的羟基自由基清除率计算IC50值。计算结果请见表3。
表3
| IC<sub>50</sub>(mg/ml) | |
| 实施例1 | 0.0421 |
| 实施例2 | 0.0457 |
| 实施例3 | 0.0426 |
| 实施例4 | 0.0536 |
| 实施例5 | 0.0366 |
IC50值越低，表示抗氧化活性越强。因此，结合表2和表3可以看出皂苷含量越高，抗氧化活性越强，皂苷含量越低，抗氧化活性越低。本申请实施例1-5制备的熟三七提取物具有较佳的抗氧化活性。
虽然本申请所揭露的实施方式如上，但所述的内容仅为便于理解本申请而采用的实施方式，并非用以限定本申请。任何本申请所属领域内的技术人员，在不脱离本申请所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式及细节上进行任何的修改与变化，但本申请的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。
Claims (11)
1.一种熟三七提取物，所述熟三七提取物中的总皂苷的浓度为68.08-77.73mg/g，所述总皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3和三七皂苷R1，其中，三七皂苷R1的浓度≥4.93mg/g，人参皂苷Rg1的浓度≥20.19mg/g，人参皂苷Re的浓度≥2.52mg/g，人参皂苷Rb1的浓度≥17.37mg/g，人参皂苷Rd的浓度≥5.76mg/g，人参皂苷Rh1的浓度≥0.13mg/g，人参皂苷Rk3的浓度≥5.00mg/g，人参皂苷Rh4的浓度≥8.64mg/g，人参皂苷20(R)-Rg3的浓度≥2.32mg/g，人参皂苷20(S)-Rg3的浓度≥1.22mg/g。
2.根据权利要求1所述的熟三七提取物，其中，所述熟三七提取物中的总皂苷的浓度为68.08-77.73mg/g，所述总皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rd、Rh1、Rk3、Rh4、20(R)-Rg3、20(S)-Rg3和三七皂苷R1，三七皂苷R1的浓度为4.93-5.64mg/g，人参皂苷Rg1的浓度为20.19-23.49mg/g，人参皂苷Re的浓度为2.52-3.20mg/g，人参皂苷Rb1的浓度为17.37-17.61mg/g，人参皂苷Rd的浓度为5.76-6.59mg/g，人参皂苷Rh1的浓度为0.13-0.15mg/g，人参皂苷Rk3的浓度为5.00-6.13mg/g，人参皂苷Rh4的浓度为8.64-10.71mg/g，人参皂苷20(R)-Rg3的浓度为2.32-2.70mg/g，人参皂苷20(S)-Rg3的浓度为1.22-1.52mg/g。
3.一种熟三七提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)提取：将熟三七粉末加入乙醇-水溶液中浸泡，在80-90℃下用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩提取液，所述熟三七粉末的质量与所述乙醇-水溶液的体积之比为1:10-14，单位为g/ml；
(2)上大孔树脂：将浓缩得到的浓缩液加水稀释至一定浓度，离心，取上清液，上大孔树脂，先用水冲洗，弃去水洗液，再用乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，得熟三七提取物。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述熟三七粉末通过下述方法制备得到：取生三七粉末，在105-125℃的条件下蒸制2-6小时，将蒸好的粉末在40-50℃下干燥至恒重；
任选地，所述生三七粉末能通过30-50目筛。
5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(1)中的乙醇-水溶液的体积浓度为60％-80％；任选地，在所述乙醇-水溶液中浸泡的时间为0.5-1小时。
6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(1)中的熟三七粉末能通过30-50目筛；任选地，回流提取3-5次，每次提取1-2小时。
7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(1)中采用减压浓缩法浓缩提取液，任选地，所述减压浓缩的真空度为0.07-0.08Mpa。
8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(2)中的大孔树脂为HPD100大孔吸附树脂；
任选地，所述步骤(2)中的乙醇-水溶液的体积浓度为60％-80％。
9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(2)中将浓缩液加水稀释至总皂苷的浓度为10.6-16.96mg/ml，上大孔树脂时的上样体积为3-5倍的柱体积，上样速度为1-3倍柱体积每小时，水洗体积为1.5-3.5倍柱体积，水洗速度为1.5-3倍柱体积每小时，乙醇-水溶液洗脱液的体积为3-5倍的柱体积，洗脱速度为0.6-2倍柱体积每小时。
10.根据权利要求3-9中任一项所述的方法，由以下步骤组成：
取三七干燥根及根茎，粉碎，过40目筛，取适量生三七粉末置于高压灭菌锅中，在120℃的条件蒸制2小时，将蒸好的粉末在45℃下干燥至恒重，得到熟三七粉末；
取适量的熟三七粉末加入其重量的10倍量体积的60％乙醇-水溶液中浸泡0.5小时，在85℃的水浴锅中回流提取3次，每次提取1.5小时，合并提取液，减压浓缩；
将浓缩得到的浓缩液加纯水稀释至总皂苷浓度为11.22mg/ml，离心，取4.97倍柱体积的上清液，以每小时1.5倍柱体积的速度上HPD100大孔吸附树脂，先用2倍柱体积的纯水，以每小时2倍柱体积的速度冲洗，弃去水洗液，再用3.31倍柱体积的70％的乙醇-水溶液以1.5倍柱体积的速度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，得熟三七提取物。
11.根据权利要求1或2所述的熟三七提取物或通过根据权利要求3-10中任一项所述的方法制备得到的熟三七提取物的抗氧化用途。
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| CN101323635A (zh) * | 2008-07-25 | 2008-12-17 | 中国科学院昆明植物研究所 | 三七皂苷st-4,其药物组合物和其制备方法及其应用 |
| CN101485705A (zh) * | 2007-09-14 | 2009-07-22 | 中国科学院昆明植物研究所 | 熟三七和熟三七标准提取物和其应用 |
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190823 |