CN110129445A

CN110129445A - 一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用

Info

Publication number: CN110129445A
Application number: CN201910457863.4A
Authority: CN
Inventors: 李刚; 张宇; 薛皓; 韩琳; 郭钦栋; 刘宏; 薛付忠
Original assignee: Qilu Hospital of Shandong University
Current assignee: Qilu Hospital of Shandong University
Priority date: 2019-05-29
Filing date: 2019-05-29
Publication date: 2019-08-16

Abstract

本发明提供一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用，属于分子诊断和分子生物学技术领域。本发明首次发现了脑脊液外泌体中的hsa‑miR‑1246可作为胶质瘤的生物标志物，具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。同时，本发明还提供了用于诊断胶质瘤的试剂盒，包括检测脑脊液外泌体miRNA标志物的逆转录引物、上下游引物等，其逆转录效率高，引物特异性强，灵敏度高，检测全面、快速、准确，应用广泛，检测结果可用于临床诊断和治疗。

Description

一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用

技术领域

本发明属于分子诊断和分子生物学技术领域，具体涉及一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

人脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，虽然其预后取决于多种因素及诊治措施，但是一般而言，III级者生存期2-3年，IV级者生存期仅为一年左右。恶性胶质瘤的临床表现缺乏特异性，后期以神经系统功能缺失伴颅内压增高症状为主，目前，初步诊断主要依靠CT及MRI检查等影像学检查方法，最终诊断还需要通过肿瘤切除术或活检术获取标本进行病理学诊断加以明确。由于缺乏有效的胶质瘤早期筛查及诊断方法，多数患者发现时已错过最佳手术时机，预后不佳。

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质、直径在30-100nm的盘状囊泡。作为人体内一类重要的外分泌微小囊泡，多种细胞在正常及病理状态下均可选择性地包裹多种调控分子，以外泌体的形式转运至特定的靶细胞中，发挥相应调控作用。因此，外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等。胶质瘤作为中枢神经系统中侵袭性生长的恶性肿瘤，生长初期即可分泌大量外泌体至脑脊液中。

随着液体活检领域的发展，外泌体来源的生物标志物越来越被大家所重视。胶质瘤外泌体在脑脊液循环中具有很强的稳定性及易得性，是一类灵敏、高效的肿瘤标志物的载体。

发明人发现，miRNA(microRNA)是广泛存在于生物体内的19-25nt的非编码单链小分子RNA，其通过与靶基因mRNA的互补配对降解靶mRNA或抑制其翻译。研究表明miRNA在肿瘤发生过程中起重要作用，miRNA业已成为癌症治疗与诊断的新途径。外泌体中的非编码RNA以miRNA为主，且种类丰富，其可以影响干细胞分化、器官形成、造血作用、肿瘤发生以及新陈代谢等诸多生理活动。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用。本发明经研究发现，脑脊液外泌体中的miR-1246的相对表达水平与胶质瘤发生呈正相关。从而使得miR-1246可作为胶质瘤的生物标志物，其具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供用于检测miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

进一步的，所述用于检测miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组；

所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

(b2)将SEQ ID NO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.2具有相同功能的DNA分子；

所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

(c2)将SEQ ID NO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.3所示具有相同功能的DNA分子；

所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

(d2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.4具有相同功能的DNA分子。

本发明的第二个方面，提供一种引物组，由逆转录引物、上游引物和下游引物组成；

所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

所述引物组的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

本发明的第三个方面，提供所述引物组在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

以上任一所述miR-1246如SEQ ID NO.1所示。

以上任一所述检测miR-1246的物质为检测外泌体中miR-1246的物质。

以上任一所述检测miR-1246的物质为检测脑脊液外泌体中miR-1246的物质。

以上任一所述产品具体可为试剂盒。

本发明的有益技术效果：本发明首次发现了脑脊液外泌体中的hsa-miR-1246可作为胶质瘤的生物标志物，具有较高诊断价值，为临床提供快速准确的诊断方式，使胶质瘤的诊断更加方便易行。同时，本发明还提供了用于诊断胶质瘤的试剂盒，包括检测脑脊液外泌体miRNA标志物的逆转录引物、上下游引物等，其逆转录效率高，引物特异性强，灵敏度高，检测全面、快速、准确，应用广泛，检测结果可用于临床诊断和治疗。

附图说明

图1为本发明实施例1采用投射电子显微镜观察外泌体的照片(100000x)。

图2为本发明实施例1采用纳米激光粒度仪检测外泌体的直径结果图。

图3为本发明实施例1采用westernblot检测外泌体的标志性抗原的结果图。

图4为本发明实施例1胶质瘤患者术前组和术后组外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

到目前为止，脑脊液外泌体相关miRNA作为分子标志物用于胶质瘤诊断中的应用报道甚少。

有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供用于检测hsa-miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

本发明的又一具体实施方式中，所述用于检测hsa-miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组；

所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

本发明又一具体实施方式中，提供一种引物组，由逆转录引物、上游引物和下游引物组成；

所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

本发明的又一具体实施方式中，所述引物组还包括内参U6的逆转录引物以及检测U6的上游引物和下游引物。

所述U6的逆转录引物为如下(e1)或(e2)：

(e1)如SEQ ID NO.6所示的单链DNA分子；

(e2)将SEQ ID NO.6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.6具有相同功能的DNA分子；

所述检测U6的上游引物为如下(f1)或(f2)：

(f1)如SEQ ID NO.7所示的单链DNA分子；

(f2)将SEQ ID NO.7所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.7所示具有相同功能的DNA分子；

所述检测U6的下游引物为如下(g1)或(g2)：

(f1)如SEQ ID NO.8所示的单链DNA分子；

(f2)将SEQ ID NO.8所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.8所示具有相同功能的DNA分子；

其中，所述U6如SEQ ID NO.5所示。

所述引物组的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

本发明又一具体实施方式中，本发明还保护所述引物组在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

以上任一所述miR-1246如SEQ ID NO.1所示。

以上任一所述产品具体可为试剂盒。

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员在本发明的纰漏范围内，根据本发明的技术方案及构思进行替换或改变均属于本发明的保护范畴。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。使用T检验方法统计实验所得数据，P值小于0.05且变化倍数大于2倍被认为具有统计学意义。

PBS缓冲液(pH7.4)：含140mM NaCl、2.7mM KCl、10mM Na2HPO4、1.8mMKH2PO4，余量为水。

抗CD63的兔多抗：Proteintech,25682-1-AP。

抗CD9的兔多抗：Proteintech,20597-1-AP。

实施例1

脑脊液样本为46份，其中46份来自在齐鲁医院确诊的23例胶质瘤患者(知情同意的志愿者，经病理组织学确诊为I-IV级胶质瘤患者，于入院后未经手术及放化疗前取脑脊液，手术后取脑脊液。每位患者取两份)。各个脑脊液样本分别进行检测。

一、脑脊液外泌体的提取及鉴定

1、取脑脊液样本，采用超速离心法提取外泌体。

2、取步骤1得到的外泌体，采用投射电子显微镜进行观察。各个脑脊液样本均得到了外泌体，示例性结果见图1。

3、取步骤1得到的外泌体，采用纳米激光粒度仪(德国新帕泰克公司)检测外泌体的直径。各个脑脊液样本得到的外泌体的直径情况一致，均集中于30nm-100nm，结果见图2。

4、取步骤1得到的外泌体，用细胞裂解液裂解后提取总蛋白。取总蛋白，进行SDS-PAGE和westernblot。采用的一抗为抗CD63的兔多抗或抗CD9的兔多抗，采用的二抗为辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔lgG。将脑脊液样本作为外泌体的对照。各个脑脊液样本得到的外泌体均为CD63和CD9双阳性，示例性结果见图3，可以看到，TGS101为外泌体特异性蛋白标记，于外泌体样品中为阳性，细胞蛋白中为阴性；Calnexin为细胞内质网相关蛋白，因外泌体中无内质网成分，故外泌体样品中为阴性，细胞蛋白中为阳性。

二、外泌体总RNA的抽提

取步骤一的1得到的外泌体，提取总RNA。

三、逆转录以及qPCR检测

1、取步骤二得到的总RNA，进行逆转录，得到cDNA。

2、以步骤三得到的cDNA为模板，进行荧光定量PCR，检测hsa-miR-1246。

反应体系(20μl)：由10μl 2×SYBR Green qPCR Mix、上游引物溶液(20μM)、下游引物溶液(20μM)、模板、rTaq DNA聚合酶溶液(5U/μL)和dd H2O组成。反应体系中，上游引物和下游引物的浓度均为0.10μM，rTaq DNA聚合酶的浓度为0.05U/μL，模板加入量为50ng。

反应条件：94℃3min；94℃12s、62℃30s、72℃30s，40个循环。

hsa-miR-1246的序列(SEQ ID NO.1)：5’-AAUGGAUUUUUGGAGCAGG-3’。

用于hsa-miR-1246的逆转录引物如下(SEQ ID NO.2)：5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTAA-3’。

用于检测hsa-miR-1246的引物如下：

上游引物(SEQ ID NO.3)：5’-cgcagaatggatttttggag-3’；

下游引物(SEQ ID NO.4)：5’-gtccagtttttttttttttttcctg-3’。

将U6作为hsa-miR-1246的内参。U6为已知在脑脊液外泌体中含量稳定的miRNA。

U6的序列(SEQ ID NO.5)：

5’-GCCGCAACCCCTGTCGGCCCCTTCCAGCCCACAGTGGGTGGCCCCAGGCCTCGCTAGGGTCACGTCTCTCGGGTCCCCGCGCAGGGAAGGGTCCAACCAGCGACTCGCAACCTTTTCGGGGTCCCGAGTCCAACACCCGTGGGAATCCCATGGGCACCATGGCCCCTCGCTCCAAAAATGCTTTCGCGTCGCGCAGACACTGCTCGGTAGTTTCGGGGATCAGCGTTTGAGTAAGAGCCCGCGTCTGAACCCTCCGCGCCGCCCCGGCCCCAGTGGAAAGACGCGCAGGCAAAACGCACCACGTGACGGAGCGTGACCGCGCGCCGAGCGCGCGCCAAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCGTGCTCGCTTCGGCAGCACATATACTAAAATTGGAACGATACAGAGAAGATTAGCATGGCCCCTGCGCAAGGATGACACGCAAATTCGTGAAGCGTTCCATATTTTTACATCAGGTTGTTTTTCTGTTTTTACATCAGGTTGTTTTTCTGTTTGGTTTTTTTTTTACACCACGTTTATACGCCGGTGCACGGTTTACCACTGAAAACACCTTTCATCTACAGGTGATATCTTTTAACACAAATAAAATGTAGTAGTCCTAGGAGACGGAATAGAAGGAGGTGGGGCCTAGGCAGATTCATCTCTGCGGTGCATTTTGCCTCTGGCCCTCGGGCCCTAGTTTGCGATCTTTCCCATCTTGCCTCTGCTTCCCTCTGCACAATCCTGAGTATTGCAGTACCTTACACTTAAGGAAATTTCGTCTTGCCAAAGTTGATCCATTTCAGCTCCGAAACATAACAGGAACTAGTGCAACGATAAACGTATGAGGAACTTGCAATAAGAGTGACAGAATCCTTTGAATCAAAAAAAAAAAAAAAGCCACCACTTAATGAGTATCTACCATATGTCAAGGGCTTCACCAATATTTCATTGAAATATTCCAGACCAAATAAATAAATAATAAAAGAAAAAAAGAAAAGGGGGAGGGGGCAGAAAAATAAAATAATGTTTAAAAAATTCCTGACAGCCCCACCCTGTGGGTTTTACT-3’。

用于U6的逆转录引物如下(SEQ ID NO.6)：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

用于检测U6的引物如下：

上游引物(SEQ ID NO.7)：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’。

下游引物(SEQ ID NO.8)：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。

将脑脊液外泌体中U6的含量作为1，计算hsa-miR-1246相对表达水平。

比较胶质瘤患者组手术前和手术后脑脊液外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平。使用医学统计常用的R语言配合DEGseq 2软件包进行分析。DEGseq 2是一个识别差异基因的R软件包，其基于二项分布模型集成了Fisher检验和似然比检验进行差异表达检验，也提供基因标准化的表达量给其他软件进行检验。在胶质瘤患者组中脑脊液外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平显著低于术后组(p＝0.01259)。脑脊液外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平术前为239.457，术后脑脊液外泌体相对含量为49.29。结果表明，脑脊液外泌体中hsa-miR-1246的相对表达水平与胶质瘤发生相关。

应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学齐鲁医院

<120> 一种与胶质瘤相关的脑脊液外泌体miRNA标志物及其应用

<130> 2010

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工合成

<400> 1

aauggauuuu uggagcagg 19

<210> 2

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 2

caggtccagt tttttttttt ttttaa 26

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

cgcagaatgg atttttggag 20

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

gtccagtttt tttttttttt tcctg 25

<210> 5

<211> 1307

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

gccgcaaccc ctgtcggccc cttccagccc acagtgggtg gccccaggcc tcgctagggt 60

cacgtctctc gggtccccgc gcagggaagg gtccaaccag cgactcgcaa ccttttcggg 120

gtcccgagtc caacacccgt gggaatccca tgggcaccat ggcccctcgc tccaaaaatg 180

ctttcgcgtc gcgcagacac tgctcggtag tttcggggat cagcgtttga gtaagagccc 240

gcgtctgaac cctccgcgcc gccccggccc cagtggaaag acgcgcaggc aaaacgcacc 300

acgtgacgga gcgtgaccgc gcgccgagcg cgcgccaagg tcgggcagga agagggccta 360

tttcccatga ttccttcata tttgcatata cgatacaagg ctgttagaga gataattaga 420

attaatttga ctgtaaacac aaagatatta gtacaaaata cgtgacgtag aaagtaataa 480

tttcttgggt agtttgcagt tttaaaatta tgttttaaaa tggactatca tatgcttacc 540

gtaacttgaa agtatttcga tttcttggct ttatatatct tgtggaaagg acgaaacacc 600

gtgctcgctt cggcagcaca tatactaaaa ttggaacgat acagagaaga ttagcatggc 660

ccctgcgcaa ggatgacacg caaattcgtg aagcgttcca tatttttaca tcaggttgtt 720

tttctgtttt tacatcaggt tgtttttctg tttggttttt tttttacacc acgtttatac 780

gccggtgcac ggtttaccac tgaaaacacc tttcatctac aggtgatatc ttttaacaca 840

aataaaatgt agtagtccta ggagacggaa tagaaggagg tggggcctag gcagattcat 900

ctctgcggtg cattttgcct ctggccctcg ggccctagtt tgcgatcttt cccatcttgc 960

ctctgcttcc ctctgcacaa tcctgagtat tgcagtacct tacacttaag gaaatttcgt 1020

cttgccaaag ttgatccatt tcagctccga aacataacag gaactagtgc aacgataaac 1080

gtatgaggaa cttgcaataa gagtgacaga atcctttgaa tcaaaaaaaa aaaaaaagcc 1140

accacttaat gagtatctac catatgtcaa gggcttcacc aatatttcat tgaaatattc 1200

cagaccaaat aaataaataa taaaagaaaa aaagaaaagg gggagggggc agaaaaataa 1260

aataatgttt aaaaaattcc tgacagcccc accctgtggg ttttact 1307

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 6

cgcttcacga atttgcgtgt cat 23

<210> 7

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 7

ctcgcttcgg cagcaca 17

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 8

aacgcttcac gaatttgcgt 20

Claims

1.用于检测miR-1246的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述用于检测hsa-miR-1246的物质为由逆转录引物、上游引物和下游引物组成的引物组。

3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

(b2)将SEQ ID NO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO.2具有相同功能的DNA分子。

4.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

(c2)将SEQ ID NO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.3所示具有相同功能的DNA分子。

5.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

(d2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO.4具有相同功能的DNA分子。

6.一种引物组，其特征在于，由逆转录引物、上游引物和下游引物组成；

所述逆转录引物为如下(b1)或(b2)：

(b1)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；

(b2)将SEQ ID NO.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO.2具有相同功能的DNA分子；

所述上游引物为如下(c1)或(c2)：

(c1)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；

(c2)将SEQ ID NO.3所示经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.3所示具有相同功能的DNA分子；

所述下游引物为如下(d1)或(d2)：

(d1)SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；

(d2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO.4具有相同功能的DNA分子；

所述引物组的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

7.权利要求6所述引物组在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a1)或(a2)：

(a1)鉴定或辅助鉴定胶质瘤细胞；

(a2)诊断或辅助诊断胶质瘤。

8.如权利要求1-5任一项所述应用，其特征在于，检测miR-1246的物质为检测外泌体中miR-1246的物质。

9.如权利要求1-5任一项所述应用，其特征在于，检测miR-1246的物质为检测脑脊液外泌体中miR-1246的物质。

10.如权利要求1-5任一项所述应用，其特征在于，所述产品为试剂盒。