CN110129240A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用 - Google Patents

一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用。本发明提供了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16777。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌ZF75是一株芹菜土壤根际微生物，对人、畜、农作物安全，对环境友好。该菌株对芹菜软腐病具有强拮抗作用。利用该菌株对芹菜软腐病进行生防，是一种高效稳定的芹菜软腐病生防方式，其利用了所述解淀粉芽孢杆菌在芹菜植株上易于作用且对芹菜软腐病菌具有强拮抗作用的特点，能更好地满足农业生产中防治芹菜软腐病的要求。

Description

一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用
技术领域
本发明涉及植物病害生物防治技术领域，特别涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用。
背景技术
芹菜软腐病是由胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)引起的一种世界性流行病害，是芹菜生产中的重要病害之一，严重影响芹菜的产量。前期出现水浸透明状软腐，后期发黄并逐渐变为深褐色，伴有腥臭味，严重时导致整个植株瘫软和腐烂，给种植户带来巨大的经济损失。
对于芹菜软腐病的防治，多年来国内外一直高度重视。目前，采用的化学农药防治存在环境压力、致使病原产生抗药性等问题。抗病育种的难度较大，农业措施也有较大的局限性。因此，生物防治逐渐成为人们关注的热点。
近几年芽孢杆菌(Bacillus sp.)得到了广泛的应用，大量实践证明芽孢杆菌易于从土壤和植物组织内分离，并且能产生耐热、抗紫外线的芽孢，在植株上定殖和繁殖迅速。目前研究的芽孢杆菌中具有抑菌活性的主要有：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atropheaus)、短短芽孢杆(Brevibacillus brevs)等。Chen等研究发现解淀粉芽孢杆菌基因组中10％的基因参与抗菌素的合成，能够直接抑制土壤中多种病原微生物的生长，细胞内合成的一些挥发性次级代谢产物，例如3-羟基丁酮、2-氨基苯甲酸及脂肽等，还可以作启动因子诱导植物产生免疫反应，增强植物对病原微生物的抗性。
发明内容
为改进现有防治技术的不足，本发明的目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌及其应用，该解淀粉芽孢杆菌对芹菜软腐病具有良好的防治效果，同时对番茄疮痂病菌等10多种病原菌均具有较强的拮抗效果。
第一方面，本发明要求保护一株解淀粉芽孢杆菌。
本发明所要求保护的解淀粉芽孢杆菌具体为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75，其于2018年11月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.16777。
第二方面，本发明要求保护一种微生物制剂。
本发明所要求保护的微生物制剂含有所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75。
进一步地，所述微生物制剂可为生防制剂。
更进一步地，所述生防制剂可由所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75和助剂或者基质配制而成。当所述生防制剂为液体形式时，所述解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)ZF75在所述生防制剂中的有效含量可为1.0×107～1.0×109cfu/mL，如1.0×108cfu/mL。
第三方面，本发明要求保护一种菌悬液。
本发明所要求保护的菌悬液为所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75的菌悬液，其中所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75的含量为1.0×107～1.0×109cfu/mL。
进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的含量为1.0×108 cfu/mL。
第三方面，本发明要求保护所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：
(A1)防治芹菜软腐病；
(A2)制备用于防治芹菜软腐病的产品。
第四方面，本发明要求保护所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：
(B1)促进植物生长发育；
(B2)制备用于促进植物生长发育的产品；
进一步地，所述植物为蔬菜；
更进一步地，所述蔬菜为芹菜。
其中，所述促进植物生长发育为促进株高增高和/或茎粗增粗和/或重量增加。
第五方面，本发明要求保护所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：
(C1)抑制植物病原菌；
(C2)制备用于抑制植物病原菌的产品；
(C3)防治由植物病原菌所致疾病；
(C4)制备用于防治由植物病原菌所致疾病的产品。
其中，所述植物病原菌可为植物病原细菌或植物病原真菌。
进一步地，所述植物病原细菌具体可为胡萝卜果胶杆菌(P.carotovorum)、黄单胞菌(Xanthomonas vesicatoria)、茄科雷尔氏菌(Pseudomonas solanacearum)、燕麦嗜酸菌(Acidovorax citrulli)、丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringaepv.tomato)和/或密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensissubsp.michiganensis)。
进一步地，所述植物病原真菌具体可为茄链格孢菌(Alternaria solani)、匍柄霉菌(Stemphylium solani Weber)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、多主棒孢菌(Corynespora nessccda)、瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)和/或尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)。
第六方面，本发明要求保护所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液在如下任一中的应用：
(D1)生产IAA；
(D2)制备用于生产IAA的产品。
进一步，所述生产IAA时，可加入色氨酸(色氨酸能够促进所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75产生IAA)。
第七方面，本发明要求保护一种防治芹菜软腐病的方法。
本发明所要求保护的防治芹菜软腐病的方法，包括如下任一步骤：
(D1)将所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液施于芹菜植株上；
(D2)将所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液施于芹菜植株的根际土壤或整个种植田。
在步骤(D1)中，将所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液施于(如喷施)芹菜植株上，使所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75在芹菜叶片上定植，进而抑制芹菜软腐病。
在步骤(D2)中，可为将所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或所述微生物制剂或所述菌悬液搅拌于芹菜植株的根际土壤中(如搅拌时每kg土壤中加入250mL浓度为1.0×108cfu/mL的所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的菌悬液)，也可以充施于整个种植田(如每亩种植田冲施浓度为1.0×108cfu/mL的所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75菌悬液4L)。
芽孢代谢相对静止，抗逆能力强，能够长期保存，利于开发为菌剂。所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的芽孢可以采用如下方法而获得：利用LB培养基，在28℃温度下培养所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF752天，大量产生解淀粉芽孢杆菌的芽孢。保存温度为22～28℃，如21～27℃。
第七方面，本发明要求保护所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75在制备所述微生物制剂或所述菌悬液中的应用。
本发明的有益效果：
(1)本发明提供的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75是一株芹菜土壤根际微生物，对人、畜、农作物安全，对环境友好。
(2)本发明提供的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病具有强拮抗作用。本发明利用解淀粉芽孢杆菌对芹菜软腐病进行生防，是一种高效稳定的芹菜软腐病生防方式，其利用了所述解淀粉芽孢杆菌在芹菜植株上易于作用且对芹菜软腐病菌具有强拮抗作用的特点，能更好地满足农业生产中防治芹菜软腐病的要求。
保藏说明
菌株名称：解淀粉芽孢杆菌
拉丁名：Bacillus amyloliquefaciens
参椐的生物材料(株)：ZF75
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2018年11月26日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.16777
附图说明
图1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75在固体LB上的菌落形态。
图2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75基于16S rDNA和gyrB多基因联合系统发育树。
图3为芹菜软腐病拮抗菌株筛选。
图4为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的抑菌谱测定。A瓜果腐霉菌；B多主棒孢菌；C尖孢镰孢菌；D茄链格孢菌；E匍柄霉菌；F辣椒疫霉菌；G黄单胞菌；H胡萝卜果胶杆菌；I燕麦嗜酸菌；G密执安棒形杆菌密执安亚种；K丁香假单胞菌番茄致病变种；L茄科雷尔氏菌。
图5为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病盆栽防治效果。A：清水对照；B：菌株ZF75；C：中生菌素；D：春雷霉素。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例涉及到的各种培养基都是本领域常用的标准培养基，例如：
LB液体培养基：胰蛋白胨1％(w/v)，酵母提取物0.5％(w/v)，氯化钠1％(w/v)，pH7.0。
LB固体培养基(简称LB培养基)是在上述LB液体培养基的基础上添加了琼脂1.5％-2％(w/v)，即为胰蛋白胨1％(w/v)，酵母提取物0.5％(w/v)，氯化钠1％(w/v)，琼脂1.8％(w/v)，pH7.0。
实施例1、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的分离筛选及鉴定
从天津市武清区多年连续种植芹菜的大棚采集的根际土壤分离得到若干菌株。挑取单菌落于LB液体培养基中培养，得到菌悬液；用芹菜茎段法从上述选取的菌落中筛选出对芹菜软腐病具有抑菌作用的菌株(见表1)。其中，编号为ZF75的菌株对芹菜软腐病防效显著好于其他菌株。
菌株ZF75形态特征：ZF75为革兰氏阳性菌，为杆状，内生芽孢，无鞭毛。
菌株ZF75在牛肉膏蛋白胨培养基(LB培养基)上形成乳白色菌落，有褶皱，边缘不整齐。图1为菌株ZF75的菌落形态。
菌株ZF75的最适生长温度为28-30℃，NaCl含量1％-5％之间均可以生长，有游动性。接触酶、V-P、淀粉水解反应为阳性，柠檬酸盐利用、氧化酶反应为阴性。
菌株ZF75的16S rDNA和gyrB基因序列的扩增方法为：挑取单菌落，置于装有LB液体培养基的摇菌管中培养后进行DNA提取，以DNA为模板进行PCR扩增。
PCR扩增体系为25μL：Buffer 2.5μL，Taq酶0.5μL，dNTP 2μL，引物各1μL，ddH2O补足剩余体积。扩增条件：94℃5min；94℃30s，50℃30s，72℃90s，35个循环；72℃10min。
PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，经系列分析菌株ZF75扩增所得的16S rDNA序列长度约为1500bp(SEQ ID No.1)，gyrB基因序列长度约1100pb(SEQ ID No.2)，并将所述16S rDNA和gyrB基因序列基因测序后进行BLAST比对分析，结果显示所述16S rDNA与解淀粉芽孢杆菌的相似度最高，达到了100％，gyrB基因序列与解淀粉芽孢杆菌的相似性达98.97％。
将所述16S rDNA和gyrB序列在NCBI数据库整理比对后，用MEGA 6.0、SequenceMatrix、Seaview4按顺序连接、比对不同菌株的16S rDNA和gyrB基因，采用最大似然法构建多基因联合系统发育树，分析其亲缘关系。参见图2所示，本发明的菌株(图2中标记为ZF75)与Bacillus amyloliquefaciens的进化距离最短。再综合上述形态学以及生理生化测定，最终确定本发明的菌株ZF75为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
菌株ZF75已于2018年保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日期2018年11月26日。保藏号为CGMCC No.16777。菌株名称：解淀粉芽孢杆菌；拉丁名：Bacillus amyloliquefaciens；参椐的生物材料(株)：ZF75。
实施例2、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75菌悬液的制备
将纯化后的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75，单菌落接种在LB液体培养基中，在28℃下180r/min条件下培养2天，大量产生解淀粉芽孢杆菌的芽孢。所得菌悬液含所述解淀粉芽孢杆菌的有效含量为107～109cfu/mL。
实施例3、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病菌的抑制作用的简单鉴定
将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75挑取单菌落，接种于LB液体培养基中，28℃下振荡培养24h备用，将7个5厘米长的芹菜段竖直码放在盛有108cfu/mL解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75菌悬液的保湿盒内，以0.5～1cm的茎秆浸泡在菌悬液里为宜。浸菌20min后取出茎段，水平均匀码放在滤纸上，室内自然风干1h。而后以相同方式在芹菜软腐病菌(胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum))菌悬液(浓度1×108cfu/mL)中浸泡1h。每隔8h观察1次病原菌的侵染情况，当清水对照处理发病率达到90％以上时，调查各处理芹菜茎段的病情指数并计算防效。
病害调查采用芹菜软腐病分级标准：以发病组织占茎段长度的比例(R)为依据进行病级划分。0级：茎段无任何变化；1级：0％<R≤10％；2级：10％<R≤30％；3级：30％<R≤50％；4级：50％<R≤100％。
病情指数＝∑(各级病茎数×相对级数的代表值)/(总茎段数×最高级数的代表值)×100；
防效＝(清水对照平均病情指数-处理平均病情指数)/清水对照平均病情指数×100。得到具有抑菌作用菌株，转入LB平板上培养保存。参见图3，在清水对照处理下，计算解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病的防效为81.81％，显著高于其他菌株。
表1拮抗细菌菌株对芹菜软腐病的防效
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。ZF+阿拉伯数字为实施例1分离得到的不同菌株的编号。
实施例4、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的抑菌作用测定
采用平板对峙法和Stonie双层培养法，测定了解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75对6种病原细菌和6种病原真菌的抑制效果。
真菌抑菌谱采用平板对峙法，在90mm的PDA培养基平板中心分别接种5mm的真菌靶标菌片，25℃培养2d后，将菌株ZF75接种在LB液体培养基中，28℃、160r/min培养16h。在距离培养皿边缘10mm处相对的4点用10μL的枪头打孔，在其中加入5μL菌株ZF75的菌悬液(浓度1×108cfu/mL)，以接种LB液体培养基作为空白对照，25℃培养5d。待对照真菌即将长满培养皿时，测量对照真菌的生长量(菌落直径)和处理生的长量(接种细菌后的生长直径)，并计算其抑菌率。
抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100％
细菌抑菌谱采用Stonie双层培养法，在90mm LB固体平板中心，用10μL枪头打孔，在其中加入5μL菌株ZF75的菌悬液(浓度1×108cfu/mL)，以接种液体LB培养基为空白对照，28℃下培养16h。将培养皿倒置，在通风橱中将每个培养皿内加入3mL氯仿，静置12h以蒸干氯仿并灭活菌株ZF75。将选取的病原细菌在28℃下NB培养基中振荡培养36h，在4mL 5％(m/v)WA培养基中加入100μL菌悬液(浓度1×108cfu/mL)，混匀后倒入LB平板，作为上层。培养箱中培养48h，观察并测量抑菌圈的直径。
结果如表2和图4所示。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75能够显著抑制黄单胞菌、胡萝卜果胶杆菌、茄科雷尔氏菌、燕麦嗜酸菌、密执安棒形杆菌密执安亚种以及丁香假单胞菌番茄致病变种；同时也能够抑制茄链格孢菌、茄匍柄霉菌、辣椒疫霉菌、多主棒孢菌、瓜果腐霉菌和尖孢镰孢菌。
表2解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的抑菌谱测定
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。
实施例5、温室盆栽试验测定解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病的防治效果
该测试为温室盆栽试验，尽量排除外界干扰条件。温室位于中国农业科学院蔬菜花卉研究所。将装满无菌基质的25cm×60cm育苗钵浇透水后，撒播芹菜种子。待芹菜幼苗长至3～4片真叶时(1.5～2月苗龄)，开始制备含菌基质。待测生防菌，即解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的菌悬液(浓度1×108cfu/mL)，按照250mL/kg土与基质土搅拌均匀后，分装于5cm×5cm育苗钵中。选择对照药剂5％中生菌素可湿性粉剂按照2g/1000g土、4％春雷霉素可湿性粉剂按照2g/1000g土与基质搅拌均匀后进行分装。将生长状况一致的芹菜幼苗移栽至含生防菌基质育苗钵中，缓苗3d。待植株直立、生长正常时用75％酒精表面消毒的针刺伤芹菜植株茎基部1～2次，刺伤但不穿透，而后向伤口处灌施1×108cfu/mL致病菌(胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum))菌悬液2mL。每处理3次重复，每重复30株芹菜幼苗。人工接种病原菌后，将植物材料在温度26～30℃、相对湿度70％-85％条件下保湿培养。清水处理只接致病菌不施生防菌，空白对照不接致病菌不施生防菌。接种芹菜软腐病菌1d后，清水对照开始发病，3d后病情指数达到90以上，植株溃烂萎蔫。此时，调查各处理芹菜茎段的病情指数并计算防效。
病害调查采用芹菜软腐病分级标准同实施例3。
病情指数＝∑(各级病茎数×相对级数的代表值)/(总茎段数×最高级数的代表值)×100；
防效＝(清水对照平均病情指数-处理平均病情指数)/清水对照平均病情指数×100。
结果如表3和图5所示。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病的防治效果为89.62％，对照5％中生菌素可湿性粉剂施用后对芹菜软腐病的防治效果为37.74％，4％春雷霉素可湿性粉剂对芹菜软腐病的防治效果为15.09％。
表3解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对芹菜软腐病的防治效果
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。
实施例6、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75产IAA能力测定
称取0.01g的IAA纯品溶于1mL无水乙醇中，混匀后吸取100μL加无菌水稀释至1mL，混匀后再吸取100μL加去无菌水稀释至1mL，得到浓度为100μg/mL的IAA母液。在此基础上分别配制浓度梯度为5、10、15、20、25、30μg/mL的IAA水溶液。以去无菌水作为空白对照。检测各浓度梯度的IAA水溶液在530nm处吸光值，并根据所得数据绘制IAA含量标准曲线。
将菌株ZF75分别接种于DF和DF+培养基中，于28℃培养7d后12000r/min离心5min，取1mL上清液于试管中，加入50μL SolutionⅠ(10mmol/L磷酸)和2mLSolutionⅡ(1mL0.5mol/L FeCl3溶于50mL 35％HClO4)并混匀，常温反应25min，检测530nm处吸光度，在标准曲线上比对并计算其IAA产量。重复3次，结果取平均值。
通过测定IAA不同浓度梯度的标准品在OD530nm处的吸光值，得到的IAA含量的标准曲线为：y＝36.275x+4.296，R2＝0.9912，根据标曲计算IAA产量。菌株ZF75分别在DF和DF+培养基中摇培7d后，开始进行IAA产量的检测。结果表明，菌株ZF75在DF+培养基中在第7d可以检测到IAA，浓度达到17.35μg/mL。在不含有色氨酸的DF培养基中，第7d时菌株ZF75产生的IAA浓度为10.46μg/mL(表4)。上述结果表明，菌株ZF75自身能够产生IAA，且色氨酸能诱导菌株ZF75产生IAA。
表4菌株ZF57产IAA能力测定
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。
实施例7、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75在芹菜促生中的应用
在温室条件下，随机选择颗粒饱满程度一致、健康的芹菜种子进行播种，待幼苗长出3-4片真叶后移至72*24*25cm的育苗盆中，缓苗1周后将浓度为1×108cfu/mL解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75菌悬液以4L/亩进行冲施处理，以冲施清水作为对照。经过解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75菌悬液处理的芹菜在30d后，山东寿光基地的芹菜植株平均株高和平均茎粗分别达24.18cm和0.51cm。与清水对照相比，平均株高和平均茎粗分别增加4.39cm和0.07cm。天津武清基地的芹菜总重量达226.42kg，与不施用菌剂的清水对照相比，促生率达9.72％。见表5和表6。
表5解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对寿光芹菜田间促生效果
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。
表6解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75对天津芹菜田间促生效果
注：不同小写字母表示在0.05水平上有显著性差异。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。
序列表
<110> 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
<120> 一株解淀粉芽孢杆菌及其在防治芹菜软腐病中的应用
<130> GNCLN191137
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1454
<212> DNA
<213> Bacillus amyloliquefaciens
<400> 1
caatgtcgag tgctatacat gcaagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt 60
agcggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg 120
aaaccggggc taataccgga tggttgtctg aaccgcatgg ttcagacata aaaggtggct 180
tcggctacca cttacagatg gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca 240
ccaaggcgac gatgcgtagc cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac 300
ggcccagact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac 360
ggagcaacgc cgcgtgagtg atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag 420
aacaagtgcc gttcaaatag ggcggcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta 480
actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc 540
gtaaagggct cgcaggcggt ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga 600
gggtcattgg aaactgggga acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc 660
ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa 720
ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg 780
ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg gtttccgccc cttagtgctg cagctaacgc 840
attaagcact ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg 900
gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 960
tcttgacatc ctctgacaat cctagagata ggacgtcccc ttcgggggca gagtgacagg 1020
tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080
caacccttga tcttagttgc cagcattcag ttgggcactc taaggtgact gccggtgaca 1140
aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct gggctacaca 1200
cgtgctacaa tggacagaac aaagggcagc gaaaccgcga ggttaagcca atcccacaaa 1260
tctgttctca gttcggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta 1320
atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac 1380
accacgagag tttgtaacac ccgaagtcgg tgaggtaacc tttatggagc cagccgccga 1440
agtgcacaag aatc 1454
<210> 2
<211> 1101
<212> DNA
<213> Bacillus amyloliquefaciens
<400> 2
taggggcatc tgtcgtaaac gccttgtcga cactcttgac gttacggttc atcgtgacgg 60
aaaaatccac tatcaggcgt acgagcgcgg tgtacctgtg gccgatcttg aagtgatcgg 120
tgatactgat aagaccggaa cgattacgca cttcgttccg gatccggaaa tcttcaaaga 180
aacaaccgta tacgactatg atctgctttc aaaccgtgtc cgggaattgg ccttcctgac 240
aaaaggcgta aacatcacga ttgaagacaa acgtgaagga caagaacgga aaaacgagta 300
ccactacgaa ggcggaatca aaagctatgt tgagtactta aaccgttcca aagaagtcgt 360
tcatgaagag ccgatttata tcgaaggcga gaaagacggc ataacggttg aagttgcatt 420
gcaatacaac gacagctata caagcaatat ttattctttc acgaataata tcaacacata 480
cgaaggcggc acgcacgagg ccggatttaa aaccggtctg acccgtgtca taaacgacta 540
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agaagggctg actgccatta tttcaattaa gcaccctgat ccgcaattcg aagggcagac 660
gaaaacgaag ctcggcaact ccgaagcgag aacgatcact gatacgctgt tttcttctgc 720
gctggaaaca ttccttcttg aaaatccgga ctcagcccgc aaaatcgttg aaaaaggttt 780
aatggccgca agagcgcgga tggcagcgaa aaaagcacgg gaattgaccc ggcgcaaaag 840
tgcgcttgag atttccaatc tgccgggcaa actggcggac tgttcttcta aagatccgag 900
catttccgag ctgtatatcg tagagggtga ctctgcgggc ggatcagcga aacagggacg 960
ggaccgtcat ttccaagcta ttctgccgct gcgcggtaag attctgaacg ttgagaaagc 1020
cagacttgat aagattctct caaacaatga ggtcagatca atgatcacgg ctctcggaac 1080
aggaatcgga gaagatttta a 1101

Claims (10)

1.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.16777。
2.微生物制剂，其特征在于：所述微生物制剂含有权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75。
3.菌悬液，其特征在于：所述菌悬液为权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75的菌悬液，其中所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZF75的含量为1.0×107～1.0×109cfu/mL；
进一步地，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75的含量为1.0×108cfu/mL。
4.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3所述的菌悬液在如下任一中的应用：
(A1)防治芹菜软腐病；
(A2)制备用于防治芹菜软腐病的产品。
5.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3所述的菌悬液在如下任一中的应用：
(B1)促进植物生长发育；
(B2)制备用于促进植物生长发育的产品；
进一步地，所述植物为蔬菜；
更进一步地，所述蔬菜为芹菜。
6.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3所述的菌悬液在如下任一中的应用：
(C1)抑制植物病原菌；
(C2)制备用于抑制植物病原菌的产品；
(C3)防治由植物病原菌所致疾病；
(C4)制备用于防治由植物病原菌所致疾病的产品。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述植物病原菌为植物病原细菌或植物病原真菌；
进一步地，所述植物病原细菌为胡萝卜果胶杆菌(P.carotovorum)、黄单胞菌(Xanthomonas vesicatoria)、茄科雷尔氏菌(Pseudomonas solanacearum)、燕麦嗜酸菌(Acidovorax citrulli)、丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringaepv.tomato)和/或密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensissubsp.michiganensis)；
和/或
进一步地，所述植物病原真菌为茄链格孢菌(Alternaria solani)、匍柄霉菌(Stemphylium solani Weber)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、多主棒孢菌(Corynespora nessccda)、瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)和/或尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)。
8.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3所述的菌悬液在如下任一中的应用：
(D1)生产IAA；
(D2)制备用于生产IAA的产品。
9.一种防治芹菜软腐病的方法，包括如下任一步骤：
(E1)将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述微生物制剂或权利要求3所述菌悬液施于芹菜植株上；
(E2)将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75或权利要求2所述微生物制剂或权利要求3所述菌悬液施于芹菜植株的根际土壤或整个种植田。
10.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZF75在制备权利要求2所述的微生物制剂或权利要求3所述的菌悬液中的应用。
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