CN110122484A - 粉剂型玫瑰黄链霉菌nkz-259及其对番茄促生方法 - Google Patents

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姜明国
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Abstract

本发明提供一种粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259，包括玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的孢子粉、高岭土、分散剂和淀粉，所述玫瑰黄链霉菌NKZ‑259中孢子浓度为5.3×105‑5.5×105cfu/ml，所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259的悬浮率大于73%，润湿时间为80s秒。本发明的有益效果是：粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ‑259有利于加速玫瑰黄链霉菌NKZ‑259在生物防治中的推广应用进程，具有重要理论和实践意义。

Description

粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259及其对番茄促生方法
技术领域
本发明涉及玫瑰黄链霉菌NKZ-259制剂制备领域，更具体地说涉及一种制备粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的方法及其对番茄的促生作用。
背景技术
玫瑰黄链霉菌NKZ-259是由中国农业科学院植物保护研究所国家病虫害重点实验室农用抗生素组从青海省祁连山地区土壤中分离而来的一株生防菌，已于2016年12月2日保藏于中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心（CGMCC）,保藏号为NO.13416。研究发现该菌株对植株的生长具有明显的促进作用，其在发酵过程中可产生多种次生代谢产物，其中IAA是代谢产物中重要的一种，在促进植物生长方面发挥着重要作用。但是目前该产品的应用还是依靠对菌株进行发酵，过滤发酵液后进行浓缩处理来喷施到农作物生产当中。而水剂的使用在生产过程中存在运输成本高且不方便、货架期短等一系列问题，因此开发新的产品剂型是提高产品商业化应用的必然之举。
发明内容
本发明克服了现有技术中的不足，提供了一种制备粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的方法，及粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259对番茄的促生作用。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
一种粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259，包括玫瑰黄链霉菌NKZ-259的孢子粉、高岭土、分散剂和淀粉，所述玫瑰黄链霉菌NKZ-259中孢子浓度为5.3×105-5.5×105cfu/ml，所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的悬浮率大于73%，润湿时间为80s秒。
进一步，所述分散剂为0.3%的海藻酸钠。
进一步，所述玫瑰黄链霉菌NKZ-259孢子菌液体积为200-300ml、所述高岭土质量为90-110g、所述海藻酸钠的质量为0.3g、所述淀粉为9-11g。
进一步，包括如下步骤：
第一步，按量称取粉剂中各组分；
第二步，将混合的所述高岭土、分散剂和淀粉高温灭菌；
第三步，将灭菌后的混合粉末与孢子浓度为5.3×105-5.5×105cfu/ml的玫瑰黄链霉菌NKZ-259菌液混合，倒入灭菌后的蒸馏水至总体积达到500ml，混合后将其在37℃下过夜晾干。
进一步，玫瑰黄链霉菌NKZ-259孢子的制备方法:挑取NKZ-259孢子于YEME培养基中进行培养，待菌液孢子浓度为5.4×105cfu/ml时，吸取100mL的菌液与高温灭菌的250g滑石粉、3.75g碳酸钙以及2.5g羧甲基纤维素充分混合，将混合物在37℃干燥过夜，称重后于4℃条件下保存。
进一步，所述YEME培养基配方为：葡糖糖10g，蛋白胨5g，麦芽提取物3g，酵母粉3g，蔗糖340g，加蒸馏水至1000ml，调制pH 7.2-7.3。121℃高温灭菌30min。
进一步，将粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259与无菌蒸馏水混合浇灌番茄种子。
进一步，所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259与所述无菌蒸馏水的份数比为1：5。
如权利要求1-3所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259在番茄促生方面的应用。
本发明的有益效果为：可湿性粉剂悬浮率国家标准要求悬浮率≥60%，本试验结果显示，高岭土作为可湿性粉剂载体悬浮率达73.74%，高岭土作为可湿性粉剂载体悬浮率远远高于国家标准；该发明为粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259大规模商品化生产奠定了基础，有利于加速玫瑰黄链霉菌NKZ-259在生物防治中的推广应用进程，具有重要理论和实践意义。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。
实施例1玫瑰黄链霉菌NKZ-259剂型加工
滑石粉作为粉剂载体：挑取NKZ-259孢子于YEME培养基中进行培养，YEME培养基培养基配方为：葡糖糖10g，蛋白胨5g，麦芽提取物3g，酵母粉3g，蔗糖340g，加蒸馏水至1000ml，调制pH 7.2-7.3。121℃高温灭菌30min。菌液培养2天后（孢子浓度为5.4×105cfu/ml）吸取100mL的菌液与高温灭菌的250g滑石粉、3.75g碳酸钙以及2.5g羧甲基纤维素（粘合剂）充分混合。将混合物在37℃干燥过夜，称重后于4℃条件下保存。
高岭土作为粉剂载体：挑取NKZ-259孢子于YEME培养基中进行培养，2天后（孢子浓度为5.4×105cfu/ml）停止待用。将0.3%的海藻酸钠（分散剂）、10g淀粉、100g高岭土于121℃高温灭菌30min。灭菌后将250 ml孢子浓度为5.4×105cfu/ml的NKZ-259菌液混合，倒入灭菌后的蒸馏水至总体积达到500ml。混合后将其在37℃下过夜晾干。
实施例2玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体悬浮率检测
根据我国可湿性粉剂悬浮率检测标准GB/T 14825-93，分别精确称取1g实施例1中的样品粉末加入到50ml标准硬水中，以120 r/min速度振动 2 min使其均匀分散后置于30℃水浴13min。水浴后用标准硬水稀释至250ml，在1min内上下颠倒混匀样品30次。打开瓶塞后将液体置于30℃静置半小时。将样品上部9/10的菌悬液转移到新的烧杯中，剩余1/10留在原烧杯中。放置于54℃烘箱中烘干称重，计算产品悬浮率。产品悬浮率= (m1-m2)/m1×10/9×100%，其中m1指样品质量（g），m2指剩余1/10残留物质量（g）
结论：可湿性粉剂悬浮率国家标准要求悬浮率≥60%，本试验结果显示，高岭土作为可湿性粉剂载体悬浮率达73.74%，而滑石粉作为可湿性粉剂载体悬浮率仅50.55%，不足60%，二者差异显著。因此，高岭土作为可湿性粉剂载体优于滑石粉，且悬浮率远远高于国家标准（表1）。
表1. 根据国家标准评估不同载体的产品悬浮率
处理 pH 悬浮率(%)
国家标准 - ≥60
高岭土为可湿性粉剂载体 8.10 ± 0.36 a 73.74 ± 6.00 a
滑石粉为可湿性粉剂载体 8.15 ± 0.36 a 50.55 ± 6.12 b
实施例3玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体润湿时间检测
将100ml标准硬水置于250ml烧杯中，25℃恒温水浴，样品液面与水浴锅中水面保持水平。温度检测硬水温度达到25℃时，分别取0.1g实施例1中的样品粉末通过置于铁架台上的漏斗缓慢加入硬水中。漏斗最底端距离液面10cm，液面保持静止，不受外界因素干扰。利用秒表记录完成润湿所需要是时间，精确到秒。试验重复5次，计算平均结果。
结论：可湿性粉剂国家要求标准润湿时间≤120s，本试验结果显示，高岭土作为可湿性粉剂载体润湿时间为80.0s，而滑石粉作为可湿性粉剂载体润湿时间需要97.2s，润湿时间高于高岭土，在应用过程中耗时长。因此，高岭土作为可湿性粉剂载体优于滑石粉，其润湿时间不仅满足国家标准要求，而且低于滑石粉所用时间，在生产应用中大量的节约了时间成本（表2）。在实施例2和3中可以发现，玫瑰黄链霉菌NKZ-259可湿性粉剂的剂型载体中高岭土显著优于滑石粉，因此在该生防菌剂的分级生产中采用高岭土作为载体。
表2. 根据国家标准评估不同载体的产品悬浮率
处理 pH 润湿时间 (s)
国家标准 - ≤120
高岭土为可湿性粉剂载体 8.10 ± 0.36 a 80.0± 6.32 a
滑石粉为可湿性粉剂载体 8.15 ± 0.36 a 97.2 ± 14.79 a
实施例4玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体产品货架期测试
针对实施例1中配置好的玫瑰黄链霉菌NKZ-259高岭土载体粉剂和玫瑰黄链霉菌NKZ-259滑石粉载体粉剂放置于4℃和室温条件下储藏，玫瑰黄链霉菌NKZ-259原始菌液浓度为5.6×105cfu/ml，每隔30天测试一次活菌数。将粉剂溶于无菌水中进行梯度稀释，利用血球计数板记录活菌数。
结果显示，在4℃条件下，产品生产30天后，高岭土做载体的活菌数为5.6×105cfu/ml，保持最初的原始菌量，而滑石粉做载体的粉剂中活菌数仅1.4×104cfu/ml，下降了一个数量级。储存两个月后，高岭土做载体的粉剂活菌数略有下降，而滑石粉做载体的粉剂中活菌数下降了两个数量级。数据显示，室温条件下菌体存活量低于4℃条件下菌体存活量，高岭土的货架期远远长于滑石粉货架期（表3）。
表3.玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体的货架期
实施例5玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体对番茄促生试验检测
试验采用穴盘种植，于营养土中进行，营养土与蛭石按9:1的比例配置基质，将其置于穴盘中。每穴撒2-3粒灭菌消毒后发番茄种子，用少量的营养土覆盖种子，浇灌适量的水，并用保鲜膜覆盖，待苗出土长出2片子叶时去掉保鲜膜。试验分为5组，组1为对照，进行清水处理，组2为高岭土单独处理，组3为滑石粉单独处理，组4为玫瑰黄链霉菌NKZ-259高岭土载体粉剂处理，组5为玫瑰黄链霉菌NKZ-259滑石粉载体粉剂处理。称取每种代表性样品2g溶于10ml无菌蒸馏水中，每隔7天向穴盘中倒入2ml，从撒种后开始施用。番茄苗置于25℃、相对湿度为60%的环境下以16小时光照和8小时暗处理的光周期条件下培养。35天后，测量植株的根长、茎长、株高、鲜重和干重指标。
结论：与清水对照相比，玫瑰黄链霉菌NKZ-259高岭土载体粉剂和玫瑰黄链霉菌NKZ-259滑石粉载体粉剂处理的番茄植株都显示出植物促生作用。单独施用高岭土和滑石粉较对照相比，除了在根长上稍有提高外，在株高、鲜重、干重方面均不如清水对照，而分别以上述二者作为可湿性粉剂载体后，植株各个指标的促生效果十分明显。比较玫瑰黄链霉菌NKZ-259高岭土载体粉剂和滑石粉载体粉剂，在根长、株高、鲜重和干重四个方面，高岭土较滑石粉均表现出明显的优势，且根长、茎粗指标二者差异显著（表4）。
表4. 玫瑰黄链霉菌NKZ-259不同剂型载体对番茄促生试验
处理 根长 (cm) 株高 (cm) 干重 (g) 鲜重(g)
组1 4.18± 1.12 d 27.46±2.39 bc 0.48± 0.33 bc 3.87±1.20 b
组2 5.33± 0.84 cd 24.13±2.13 de 0.39±0.26 c 2.57±0.54 b
组3 5.40±1.33 cd 21.77±2.52 e 0.38±0.21 c 2.61±0.71 b
组4 7.97±1.26 a 32.77±3.70 a 1.34±0.68 a 6.72±2.14 a
组5 6.92±0.95 ab 30.33±2.99 ab 1.24±0.50 a 6.65±1.93 a
结论：综合实例1-5可以发现，不论是从产品悬浮率、润湿时间和货架期比，高岭土做载体的粉剂都优于滑石粉做载体的粉剂，就二者对番茄促生指标来看，高岭土仍然显著优于滑石粉。因此，对玫瑰黄链霉菌NKZ-259进行粉剂产品制备时应该优选高岭土。
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (9)

1.一种粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259，其特征在于：包括玫瑰黄链霉菌NKZ-259的孢子粉、高岭土、分散剂和淀粉，所述玫瑰黄链霉菌NKZ-259中孢子浓度为5.3×105-5.5×105cfu/ml，所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的悬浮率大于73%，润湿时间为80s。
2.根据权利要求1所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259，其特征在于：所述分散剂为0.3%的海藻酸钠。
3.根据权利要求2所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259，其特征在于：所述玫瑰黄链霉菌NKZ-259孢子菌液体积为200-300ml、所述高岭土质量为90-110g、所述海藻酸钠的质量为0.3g、所述淀粉为9-11g。
4.制备如权利要求1所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的方法，其特征在于：包括如下步骤：
第一步，按量称取粉剂中各组分；
第二步，将混合的所述高岭土、分散剂和淀粉高温灭菌；
第三步，将灭菌后的混合粉末与孢子浓度为5.3×105-5.5×105cfu/ml的玫瑰黄链霉菌NKZ-259菌液混合，倒入灭菌后的蒸馏水至总体积达到500ml，混合后将其在37℃下过夜晾干。
5.根据权利要求1所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的方法，其特征在于：玫瑰黄链霉菌NKZ-259孢子的制备方法:挑取NKZ-259孢子于YEME培养基中进行培养，待菌液孢子浓度为5.4×105cfu/ml时，吸取100mL的菌液与高温灭菌的250g滑石粉、3.75g碳酸钙以及2.5g羧甲基纤维素充分混合，将混合物在37℃干燥过夜，称重后于4℃条件下保存。
6. 根据权利要求5所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259的方法，其特征在于：所述YEME培养基配方为：葡糖糖10g，蛋白胨5g，麦芽提取物3g，酵母粉3g，蔗糖340g，加蒸馏水至1000ml，调制pH 7.2-7.3，121℃高温灭菌30min。
7.利用如权利要求1所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259对番茄的促生方法，其特征在于：将粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259与无菌蒸馏水混合浇灌番茄种子。
8.根据权利要求7所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259对番茄的促生方法，其特征在于：所述粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259与所述无菌蒸馏水的份数比为1：5。
9.如权利要求1-3所述的粉剂型玫瑰黄链霉菌NKZ-259在番茄促生方面的应用。
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