CN110106185A

CN110106185A - 分离出的dna分子、编码蛋白质分子及其应用

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Publication number: CN110106185A
Application number: CN201910380529.3A
Authority: CN
Inventors: 明凤; 盖若男; 王玉霞; 毛婵娟; 周子硕
Original assignee: Shanghai Normal University
Current assignee: Shanghai Normal University; University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2019-05-08
Filing date: 2019-05-08
Publication date: 2019-08-09

Abstract

本发明属于基因工程技术领域，具体为一种在水稻中表达的参与水稻根长的生长素应答因子基因的编码序列及其应用，为从水稻中克隆出的基因，记为OsARF25，全长6057bp，其中开放阅读框为2700bp，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。本发明具体包括：基因OsARF25的克隆，对水稻此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，不同激素、不同胁迫处理后OsARF25的表达量的变化。本发明公开了基因OsARF25的Tilling突变体的测序鉴定。对于突变体的表型鉴定，显示OsARF25在植物根长起到了重要作用。该基因OsARF25可用于水稻根系生长机制研究，对植物改良具有一定的指导作用。

Description

分离出的DNA分子、编码蛋白质分子及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及分离出的DNA分子及编码的蛋白质分子及其应用，即在水稻中表达的OsARF25基因编码序列及其应用。

背景技术

根系是植物的全部根的总称，它是植物与土壤进行物质交换和信息交流的桥梁，对植物生长和发育具有至关重要的作用(Hochholdinger et al.,2004)，也是植物激素、有机酸和氨基酸等物质合成与转化的重要场所。水稻属于单子叶植物，根系由种子根、不定根和侧根组成(石庆华.,1988)。水稻根系的生长直接影响地上部分的生长发育以及产量的形成，是制约水稻产量潜力进一步发挥的关键因素，因此研究水稻根系的发育，对水稻生长发育分子机理的探讨有重要意义。

近年来，随着生物技术的发展，与水稻根系发育相关的基因也有很多报导。如与水稻根系发育相关的基因OsRAA1过量表达，会导致主根变短(Ge et al.,2004)。而水稻中QHB基因过量表达，会引起不定根的减少(Kamiya et al.,2003)。WOX11能直接抑制在冠状根原基表达的A型细胞分裂素响应调节因子RR2的表达，与RR2共同在冠状根发育中调节细胞的增殖(Zhao et al.,2009)。而某些基因的突变也会影响根系水稻根系的发育。如碱性转化酶基因OsCyt-inv1的突变体，根系伸长细胞萎缩(Jia et al.,2008)。水稻的葡聚糖内切酶基因OsGLU3突变后，也会影响根细胞的分裂及伸长(Zhang et al.,2012)。

水稻根系的发育实则受很多因素的影响，如植物激素，而生长素和细胞分裂素在根系中的研究较多。在水稻中，生长素的代谢和转运都与根系的发育有密切关系。当OsYUCCA1过表达后，植株体内IAA含量上升，不定根的数目增多(Yuko et al.,2007)。而抑制OsPIN1的表达时，水稻不定根的产生和发育受抑制(Xu et al.,2005)。突变OsCOW1基因会导致不定根减少，根冠比降低。

此外，随着全基因组的测序，ARF基因家族在许多植物中有报道，其中拟南芥中发现了23个，在水稻中发现25个，玉米中有35个等(Hagen et al.,2002；Wang et al.,2007)。ARF基因的N-端有DNA结合区(DNA binding domain)，能直接与生长素的响应基因的启动子中的TGTCTC特异性结合，但DBD不能决定ARF基因的调控特性；C-端含结构域III和IV，负责ARF和AUX/IAA形成异源二聚体，或是和ARF形成同源二聚体，可以激活或抑制基因的表达；其中间区域(middle region)是长短各异且不保守的序列，其氨基酸的组成可决定该蛋白是转录激活子或是转录抑制子。有研究表明，中间区域若富含丝氨酸(S)、亮氨酸(L)和谷氨酰胺(Q),此ARF基因是激活型的，如OsARF5、OsARF12、OsARF19和OsARF25等；若中间区域富含亮氨酸(L)、甘氨酸(G)、丝氨酸(S)和脯氨酸(P)时,则是抑制型的ARF，如OsARF1、OsARF2、OsARF15和OsARF18等(Ulmasoy et al.,1999；Tiwari et al.,2003)。

本发明主要分析OsARF25基因在不同器官的表达水平。进一步，通过定向诱导基因组局部突变技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes(TILLIG))获得了osarf25 TILLIG纯合突变体，分析osarf25突变体和野生型株表型，明确其在水稻根长进程中的功能，为其作用机制提供理论依据。

发明内容

本发明的目的在于提出一种新的水稻基因，还提供该水稻基因的蛋白编码序列，并提供该水稻基因的应用。

本发明具体包括了水稻生长素应答因子基因OsARF25的核苷酸编码序列的克隆，对水稻此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及在水稻zhonghua11中获得的Tilling突变体，进行分子鉴定和胁迫实验，检测其基因表达量变化及其表型变化。zhonghua11(中花11号)，是京风五号/特特普♀/福锦♂花培获得的粳稻，株高110-115厘米左右，株型较紧凑，较繁茂，叶色浓绿。穗大、码密，穗颈长，有弯腰现象。穗长20厘米，大穗型品种。平均穗粒数115-120粒，空秕罴率为15-20％，较高。谷粒椭圆形，颖及颖尖杆黄色，千短顶芒，粒重26-27克。米质优，垩白少，透明度好，食味佳。全生育期160天左右，属中熟品种。分蘖力强，耐肥，抗倒伏性和抗病性较强，抗寒，抗盐碱。秧令弹性较大。

本发明提供的水稻中表达的水稻生长素应答因子OsARF25基因的序列及其应用，具体包括：OsARF25基因的核苷酸编码序列的克隆，序列的同源比对，对水稻此基因内源的不同器官、组织的空间表达模式，干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后的表达模式变化进行分析鉴定，以及基于水稻zhonghua11获得Tilling突变体，进行分子鉴定和根长测量实验，检测其基因表达量变化及根长改变等。

本发明通过克隆水稻中生长素应答因子基因OsARF25，对其时空表达模式及胁迫响应方式进行确定，结果显示基因在各个器官中组成型表达，在叶中表达量最低，在根中表达量最高。在接受IAA、6-BA、KT、ABA、GA处理后，OsARF25的表达量均升高，其中6-BA及KT处理后的水稻植株中OsARF25的表达量显著升高。盐胁迫(150mmol/L NaCl)处理到8h表达量达到最大值，与对照相比，提高大约4倍；在进行干旱胁迫(20％PEG)处理4h后OsARF25的表达量显著升高，并到达峰值。在以水稻Zhonghua11为遗传背景的OsARF25突变体中，观察到突变体株系较野生型根长变短，主根长显著变短，冠根数显著变少。在成熟期发现突变体株系千粒重，籽粒数，结实率减少，这为水稻在根长发育中提供基因来源与技术支持。

本发明首先从水稻中克隆出一种生长素应答因子的基因，命名为OsARF25。为具有特定序列的DNA分子，全长6057bp，其中开放阅读框为2700bp，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供这种水稻OsARF25蛋白编码序列，有899个氨基酸残基，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供用于调取获得水稻样品中基因OsARF25的一对核苷酸引物。该引物根据基因OsARF25设计，使用此对引物对水稻样品cDNA进行PCR扩增可获得长2700bp的基因片段。具体的引物序列为：

Forward Primer：5'ATGAAGCTCTCTCCGCCGGCGT 3'(SEQ ID NO.3)

Reverse Primer：5'TCAGTAGTCCAGAGGCGCTACA 3'(SEQ ID NO.4)

本发明提供了一种检测水稻基因OsARF25在不同器官表达模式的方法，即利用所述基因OsARF25的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列：

Forward Primer：5'CTGCGATAATGGAACTGGT 3'(SEQ ID NO.5)

Reverse Primer：5'ACAATGCTGGGGAAGACA 3'(SEQ ID NO.6)，

对水稻cDNA样品进行Real-time PCR,然后检测该基因在茎、叶、根中的表达；样品为水稻的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：

(1)提取水稻器官的总RNA(RNAiso plus，市售)。

(2)利用反转录试剂盒(TaKaRa RT reagent Kit DRR037A，市售)将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6设计引物，根据SEQ ID NO.1，进行实时定量PCR检测。

本发明提供了一种检测水稻基因OsARF25在高盐、干旱胁迫以及激素处理下的表达模式变化的方法，即将水稻进行高盐、干旱胁迫以及激素处理后，提取水稻叶片中的RNA(RNAiso plus，市售)；利用反转录试剂盒(TaKaRaRT reagent Kit DRR037A，市售)将RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5与SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。其步骤如下：

(1)将两周大的水稻苗置于150mM氯化钠溶液中，28℃培养高盐胁迫处理0、2、4、8、以及12h；置于含20％PEG溶液中以进行干旱处理0、2、4、8以及12h；置于10μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA中，以进行激素处理8h。

(2)提取前述个处理的水稻苗的叶和根中的总RNA(RNAiso plus，市售)。

(3)利用反转录试剂盒(市售)将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6设计引物，根据SEQ ID NO.1，进行Real-time PCR检测。

本发明提供了一种检测osarf25 Tilling突变体的水稻的方法，其步骤如下：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨。随后将种子玻璃培养皿内，放在水稻恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉。选取萌发一致的种子，将其转移至种子架上，置于基础营养液中，28℃培养箱培养。

(2)分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物进行PCR检测，确定突变位置以及筛选纯合株系。对应的引物序列为：

Forward Primer：5'CTCTTTAACCACTTCTTTTTCTGC 3'(SEQ ID NO.7)

Reverse Primer：5'TGATGGATTTACAGATATGTTA 3'(SEQ ID NO.8)

本发明提供了一种osarf25 Tilling突变体水稻与野生型水稻表型分析及产量改变的方法，其步骤如下：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨。放于培养皿内，恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉。

(2)将催芽后的种子均匀地散在苗床上，表面不能积水，种子播撒后，用手抹平，让种子陷入泥中，不应太深。

(3)育苗3-4周后，三叶苗，根系发达方可移苗。过早会造成根部损伤，后期发育不良。移苗后1-2周可按每颗苗0.5g尿素少量施肥。浇水一般提前将水放在温室内1天温热后再浇。

(4)生长期测定突变体与野生型的根长和冠根数；成熟期测量突变体与野生型水稻的籽粒饱满度，并统计籽粒数、千粒重与结实率。

可见，本发明提供的水稻基因OsARF25可用于植物品种改良，如帮助阐明水稻抵抗干旱以及盐胁迫的机理，用于改善水稻抗干旱以及盐胁迫性能，提高水稻应对非生物胁迫的能力，从而提高水稻的产量。

附图说明

图1是水稻OsARF25基因器官表达模式分析检测图。

图2是水稻基因OsARF25在干旱、高盐胁迫以及植物激素处理下的表达模式分析图，其中图2a是NaCl处理后OsARF25的表达量示意图，图2b经过20％PEG8000处理OsARF25的表达量图，图2c为OsARF25是否受植物激素的调控图。

图3是OsARF25 tilling突变体的分子鉴定图。

图4是osarf25 tilling突变体和野生型水稻苗进行表型分析，osarf25 Tilling突变体株系较野生型根长变短，如图4a所示。并对osarf25 Tilling突变体和野生型水稻苗进行主根长和冠根数统计，如图4b和图4c所示。

图5是突变体株系osarf25与野生型Zhonghua11对照组进行照相，突变体水稻osarf25与野生型Zhonghua11相比，其籽粒不饱满，如图5a所示，籽粒数较少，如图5b所示，千粒重，如图5c所示、结实率，如图5d所示都相对较低。

具体实施方式

下面结合具体实施实例进一步阐释本发明。应理解，这些实例仅以用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实例中未注明具体的实验方法，均可按照常规方法进行。如Sambrook等分子克隆：实验手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述条件，或按照制造生产厂商的使用说明。

实施例1水稻基因OsARF25的克隆

1.水稻品种Zhonghua11在培养箱(SPX-250-GB,Shanghai,China)中培养：生长条件为光周期16h/8h(L/D)，28℃。

2.DNA提取。取500mg左右新鲜的水稻植物组织材料，加入80μl Lysis Buffer，用研磨棒将植物组织研碎，加入120μl ddH₂O。12000rpm离心15min后将上清转移至新的离心管，测OD值，电泳检测。

3.基因的克隆。以提取的水稻DNA为模板，利用正向引物和反向引物进行PCR，获得基因全长，具体序列信息参见SEQ ID NO.1。

实施例2水稻OsARF25基因器官表达模式分析

分别提取水稻根、茎、叶中的总RNA，利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测，如图1所示。结果显示，该基因为组成型表达，在叶中表达量最低，根中表达量最高。

实施例3水稻基因OsARF25在干旱、高盐胁迫以及植物激素处理下的表达模式分析

对两周大的水稻幼苗分别进行150mM NaCl以及20％PEG干旱处理12h，分别提取处理0、2、4、8、12h后的根中的总RNA；进行4℃低温处理12h，分别提取处理0、0.25、0.5、1、1.5、2、4、8、12h后的叶中的总RNA；进行50μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA浸泡处理8h，提取根中的总RNA。利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。结果显示，NaCl处理后OsARF25的表达量迅速升高，到8h表达量达到最大值，表达量显著升高，如图2a所示，经过20％PEG8000处理4h后，OsARF25的表达量显著升高，并到达峰值，表达量提高4.5倍左右，如图2b所示，为研究OsARF25是否受植物激素的调控，故进行了植物激素的处理，发现OsARF25受生长素，细胞分裂素(6-BA，KT，IAA，2,4-D，NAA)的调控，如图2c所示。

实施例4 OsARF25 tilling突变体的分子鉴定

分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8，进行PCR检测。结果显示，突变体osarf25-2和osarf25-3位于编码区48位碱基A发生缺失，如图3所示；突变体osarf25-1位于编码区749位碱基G发生缺失，如图3所示；突变体osarf25-3位于编码区的1091位碱基由A突变成T,密码子由CAT变成CTT,氨基酸由组氨酸变成亮氨酸。筛选出纯合突变体，并进行繁殖。

实施例5 osarf25 tilling突变体表型分析

分别选取osarf25-1，osarf25-2，osarf25-3突变体以及野生型对照组两周龄水稻苗，osarf25 tilling突变体和野生型水稻苗进行表型分析，osarf25 Tilling突变体株系较野生型根长变短，如图4a所示。并对osarf25 Tilling突变体和野生型水稻苗进行主根长和冠根数统计,如图4b和图4c所示，结果显示在osarf25 Tilling突变体中主根长显著变短，冠根数显著变少。

实施例6 osarf25突变体水稻株高和产量的改变

突变体株系osarf25与野生型Zhonghua11对照组进行照相，并且进行籽粒饱满度、穗、千粒重及结实率统计。结果显示，突变体水稻osarf25与野生型Zhonghua11相比，其籽粒不饱满，如图5a所示，籽粒数较少，如图5b所示，千粒重，如图5c所示、结实率，如图5d所示都相对较低。

本发明涉及的序列及记号分别如下：

SEQ ID NO.1：

长度：6057bp

类型：核苷酸

链型：单链

拓扑结构：线性

ACTACCTCCAAGAAGCTCTCTCTCCGTTTTTCTTCTCTTCCTACTAAACCCCTCAAAACGGAAAGAAAAAAAGAAGAAAAAAAAAACTCGACCACCACCTCCACCACTCACACCTCGATCCGGCCATGGCGGCCTAGCCCTAGCACCTAGGGTTCGCGCCCCCACCACCCTCCCCGCCGTCTCGGAGACCGCGCGCCCCCAGCTCCCGCCTCGCTGTCGCGCCGCCTGATTCCGCCGCCGGCGCCGAATGCTACGCCGTTTGGTGGTGGTGGTGGTCGTCGTCGCCTGATTCCGCGATCTCGTGAGCTCCGGGGGGTGCGCGGTTGCGGCGGCGGCGCCTGAGAGGAAGGCTGGACTCGTCCGCGGCGGCGGCGGCTGCGGGCTAGTGTCGGTGGCGATTTGAGGGCGGCGGTTTGGGTTAGCCGTCGCCGAGAGTGAAGGTGCTGTGTTTTGAGTGCTTGGGATGAGCTGCGTGTTGATCTGATGAACTCGGGGTCGGCGGCGTTCTTCGGTTTCTCCGCTCACTTGCTCCCGCCGTTGGCGAAAATCCGGTTCTTCGGATCGAGTTGCGGTCGCCTGGGTGTTTTTCATCAGTTTTGGGTGAAAATACTCGAGCTCTGAGGGGGGTGATTGGTTTCCAAGTTTGATTGATTTAAAGAGTTTGTGTGGAATTTTTTCGGGGAGATGAAGGGGAGGATTTGCTGCGACGGTCCAGGTTTTGGTTAGTTGTTGAGGGAGAAAAAAATGGAAGATATTTCTGGGCGCAAGAGAGGAAGGCAGGTGTTTGCTGCTGCTGCTGGGAGCATGATGGGAAGCTGACCAGCAGCTTCTCCGGTATCCTGGTGCGGCGGAGTTTCGTGCTCTTTGGCGACGGGTGCACTGGTGATTGGAGATGAAGCTCTCTCCGCCGGCGTCGGCGGATATGCCGCAGGCCTTGCCGGAGAACGACGGTATATATCCTTGCTCACAATTTCGACATTGTTTCAGTTCTGCACTTTCTCAGCTTGTGTTGATGCCTGCATTGTAAAGTGGATTATGGATCATGGAGCTTTGTGATTCTGCACTTTGAGTTGTTTGTGCATGATTACATAATGCATAAATGAGTCTCCATTGCTGCCTTGCACACACTCCGCACATACACACACAAAGAAAAAAGAAAGAAAAAAAAAGAACTACTCCTACATTACTTGGCTCTGTTCATTGCCCTCATGTTATAACATTATTTGATACTGACTGAACCTCCTACTGTCTGTGGGCAAGTACAAATAGTAGCTTCACATGAACTTAACTTTCTGGTGGTTTGCTGTTCAGCTCATGTGTGTTTGGCATGTTGCAGGGGAACAAAGATGTCTGAACTCGGAGCTGTGGCATGCATGCGCTGGGCCCCTTGTGTCTTTGCCAGTGGTCAGGAGCAGGGTCGTCTACTTTCCACAGGGCCATAGCGAGCAGGTCAGTCACTTGGTTTGTAGTCTGTGCACATCTCTTTCATTATGCTAGGCATGGCCGGATTTTGTTGACTCGAATTTACTAGAATTTATAAAAGAAGGTAGAACAGCTCTGCTTTTGCATTTGTGCATCAGTACATAATAGGGCAGAGGATTGTCTTTATTGTTTGCTCAGTGCATCATTAAACTTAATATGGCAGAAGAATGAACTGAAACTGTACTGTCTAAAGTAATTTTAGTTCTGTGCAGGTTGCGGCATCAACTAATAAGGAAGTTGATGCTCAAATCCCAAATTATCCAAACTTACCTCCTCAGTTAATCTGCCAGCTTCATAATGTCACCATGCATGTGAGTTCACTCTTAAAGAAACCATCATGTAGCTTCTTAATAAGCAGCTTATGATAATTCACCTGGTGCTTTTGCAGGCTGATGCAGAGACAGATGAAGTTTATGCTCAGATGACATTGCAACCATTGAGCCCGGTATTTGACCACTGCTTTGCACTTCTAGCCTTATTTCTTTTAAAAGGGCAAAGATGTTACAAGGATTATGTATTTGTCATGTAATCCTGTTGACAGGAAGAGCAAAAGGAGCCTTTCCTTCCAATGGAGTTGGGTGCTGCTAGCAAGCAACCCACTAATTACTTCTGCAAGACATTGACTGCAAGTGACACGAGCACTCATGGTGGTTTCTCTGTTCCCCGCCGGGCAGCTGAGAAAGTCTTCCCTCCACTAGTATGCCTTTAAGCTCAGTCTTTTTTTTGGTAGGAAATGTTCATTTGCTATGTGTTCTTCAAATTGACTCCTTTAGTTCTCTGTAGGATTTTTCACAGCAGCCTCCGGCACAGGAGCTGATTGCAAGAGATTTGCATGATAATGAATGGAAATTTCGCCATATATTTCGTGGTATGTAACTATGGCCGACACACATAGAACTGATTATGAGTTGTTTGTGTACACAAAAAAATTGACATAAAATCATGTACTATGCCTTTTAGATAGCATTTCCATTAGACATGACATCTATCCGTTTTGCTCTTTTTTCTTTGTTGCCAAGATCTGTTTTTGCATTTTTATCTGGCTAAGAAATTACCTGGACATGCTATAATGACAATACTGCAACTAGCCTCCTTCTGTTCCTGCCTTGCAGAATTGTTGAATTATGAAATTATATTGTGAGGGTATCTTCTTCTATTGAACTTTCAATTGGCTATGCATTTGTCGTGCAGGTCAGCCTAAAAGGCATCTCCTGACAACAGGCTGGAGTGTGTTTGTGAGTGCGAAAAGACTAGTAGCAGGAGACTCTGTTATATTTATCTGGTACCACCCACTTTATTCCTTATTTAAATTGTATACTGTTGCTAGAGGTTGTACTCATTGCTGAGACTTAATTACCTTTATCATTTTTACCAGGAATGATAACAATCAACTTCTTTTGGGAATACGTCGTGCAAATCGCCAACAGACTGTTATGCCCTCTTCCGTGTTGTCAAGCGATAGCATGCATATAGGTCTTCTTGCAGCAGCAGCTCATGCTGCAGCCACAAATAGTCGCTTCACTATTTTCTATAACCCCAGGTAAATGTACTGCAATCTTACAGCAGAGCCTTTAACGTTTTATTTTATTTCCATATTTAATTGACATGGGCATCCTTTTTCAGGGCTAGCCCTTCTGAATTTGTGATTCCATTGGCCAAGTATGTGAAAGCTGTTTACCACACACGTGTATCTGTTGGAATGCGTTTTAGAATGCTTTTCGAGACAGAGGAGTCAAGTGTCAGGCGGTAAGCTGATATTAAGCACACAGCATGAACCGTGAAAGCTCCATTAATTCTTATATTTACCTCTTACTTTCAGATACATGGGTACAATCACCAGCATAAGTGATCTAGATTCAGTGCGCTGGCCAAACTCACACTGGCGTTCTGTTAAGGTAATATCTGCTAAATATATTTTGTGGTCTCTACAGAAATGATGTTATCTTGTTCCATTATCTAGTAGTCTGTCAAATCTGTTATCACATCCCTCATGGATCCCTTTCTGTGGATATGTTTTCCTTGTGATTTTTTTTTCATTTTGGATTTATGGCACATTAGGTTGGTTGGGATGAGTCCACCACTGGTGATAAACAGCCAAGGGTTTCTCTTTGGGAGATTGAGCCTTTGACAACCTTTCCGATGTACCCCAGTGCTTTTCCTTTAAGACTTAAGCGTCCGTGGGCTTCAGGACTGCCTATGCATGGCATGTTCAATGGTATGCTGATTGATGGCCGGAACACTAGCACGCATAATTCTAAGAGCATACTCTTTAACCACTTCTTTTTCTGCAGGTGGGGGAAATGACGATTTTGCACGCTATTCTTCTCTCATGTGGCTTCGAGACGGAAATAGAGGAACCCAGTCCCTGAATTTTCAAGGACATGGAGTCTCACCATGGCTTCAGCCAAGAATAGATTCTCCATTGCTGGGCCTTAAGCCAGACACGTACCAGCAAATGGCTGCAGCAGCACTGGAAGAAATTCGATATGGGGACCCTTCAAAGCAGCATCCAGCTACTCTGCAATACCAACAGACTCATAATCTGAACAGTGGATTAAATTCTCTGTTTGCAAGCCATGTTCTAGGGCAGGTGCAGTTTCAACCTCAGCAGTCACCCCTGCAAGTTGTTCAGCAAGGCCATTGTCAGAACACTGGTGACTCTGGGTTCCTTCAAGGTCAGCTTCCACGGCTGCAGTTGCATAACACTCAGCAGCTGCTAAAGGAGCAAGAGTTGCAGCAGCAGCAAAGACAGCATGTTTTACAAGAGCAATCTAGTCAAGAGATGCAACAGCAGCTCCCATCTAGTGATCATCATGTTGCTGATGTAGCTTCTGAGTCTGGATCTGCTCCTCAGGCACAATCATCATTGCTTAGTGGATCATCATTCTACAATCAGAACCTCTTAGAAGGAAATAGTGATCCCCCTTTACATCTACACAACAATTTCCACAACTTCTCTAACCAGGAAGCCTCAAACCTTCTTATTTTGCCTCGAAGTAGCCAATTAATGGCATCAGATGGGTGGCCTTCAAAGCGATTAACTTTAGAATCTGCTGTTCATCCTGAAGCTCCGTCCATGCACCCCAAGATTGAGAAAGTAAATCACCAGGGTATATCTCATTTTCCTGGCGCCTTTCCACCACAATCAGCAAGAGGCTGTTCCATCGTCCAGGATTGCAGGGCAGATGCTGAGAACCGCCTACTTTCATCATCATTTGAACTCCAGGATGGCATGACAAGCATCATAACTGATGCTAACAGAGAAACTGATACTATGGCCATACCTTTGTTGAGATATAGTGGTGCAGATTTGACAACTGAAAACACCTTAGCAACCTCCAATTGTTTAGGTGAATCTGGAACGTTCAATCCTCTTAATAACATATCTGTAAATCCATCACAAGGAGCAACCTTTGTGAAGGTATGCATTTTCAACTTGTGTGTTAGCTTGCGTTAATTCTTCTCTCTGCATTTCTTTTTTCAATTTTCACTGATTGCGAACATTGGTCGCTAAAAGT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SEQ ID NO.2：

长度：899

类型：氨基酸

链型：单链

拓扑结构：线性

MKLSPPASADMPQALPENDGEQRCLNSELWHACAGPLVSLPVVRSRVVYFPQGHSEQVAASTNKEVDAQIPNYPNLPPQLICQLHNVTMHADAETDEVYAQMTLQPLSPEEQKEPFLPMELGAASKQPTNYFCKTLTASDTSTHGGFSVPRRAAEKVFPPLDFSQQPPAQELIARDLHDNEWKFRHIFRGQPKRHLLTTGWSVFVSAKRLVAGDSVIFIWNDNNQLLLGIRRANRQQTVMPSSVLSSDSMHIGLLAAAAHAAATNSRFTIFYNPRASPSEFVIPLAKYVKAVYHTRVSVGMRFRMLFETEESSVRRYMGTITSISDLDSVRWPNSHWRSVKVGWDESTTGDKQPRVSLWEIEPLTTFPMYPSAFPLRLKRPWASGLPMHGMFNGGGNDDFARYSSLMWLRDGNRGTQSLNFQGHGVSPWLQPRIDSPLLGLKPDTYQQMAAAALEEIRYGDPSKQHPATLQYQQTHNLNSGLNSLFASHVLGQVQFQPQQSPLQVVQQGHCQNTGDSGFLQGQLPRLQLHNTQQLLKEQELQQQQRQHVLQEQSSQEMQQQLPSSDHHVADVASESGSAPQAQSSLLSGSSFYNQNLLEGNSDPPLHLHNNFHNFSNQEASNLLILPRSSQLMASDGWPSKRLTLESAVHPEAPSMHPKIEKVNHQGISHFPGAFPPQSARGCSIVQDCRADAENRLLSSSFELQDGMTSIITDANRETDTMAIPLLRYSGADLTTENTLATSNCLGESGTFNPLNNISVNPSQGATFVKVYKSGSLGRSLDISRFSSYCELRSELERLFGLEGQLEDPVRSGWQLVFVDRENDILLVGDDPWQEFANSVWCIKILSPQEVQQLVRGGDGLLSSPGARMQQSNACDDYSASHNMQNIAGNIASVAPLDY

SEQ ID NO.3：5'ATGAAGCTCTCTCCGCCGGCGT 3'

SEQ ID NO.4：5'TCAGTAGTCCAGAGGCGCTACA 3'

SEQ ID NO.5：5'CTGCGATAATGGAACTGGT 3'

SEQ ID NO.6：5'ACAATGCTGGGGAAGACA 3'

SEQ ID NO.7：5'CTCTTTAACCACTTCTTTTTCTGC 3'

SEQ ID NO.8：5'TGATGGATTTACAGATATGTTA 3'

序列表

<110> 上海师范大学

<120> 分离出的DNA分子、编码蛋白质分子及其应用

<130> 2019.5.1

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 6057

<212> DNA

<213> 水稻()

<400> 1

actacctcca agaagctctc tctccgtttt tcttctcttc ctactaaacc cctcaaaacg 60

gaaagaaaaa aagaagaaaa aaaaaactcg accaccacct ccaccactca cacctcgatc 120

cggccatggc ggcctagccc tagcacctag ggttcgcgcc cccaccaccc tccccgccgt 180

ctcggagacc gcgcgccccc agctcccgcc tcgctgtcgc gccgcctgat tccgccgccg 240

gcgccgaatg ctacgccgtt tggtggtggt ggtggtcgtc gtcgcctgat tccgcgatct 300

cgtgagctcc ggggggtgcg cggttgcggc ggcggcgcct gagaggaagg ctggactcgt 360

ccgcggcggc ggcggctgcg ggctagtgtc ggtggcgatt tgagggcggc ggtttgggtt 420

agccgtcgcc gagagtgaag gtgctgtgtt ttgagtgctt gggatgagct gcgtgttgat 480

ctgatgaact cggggtcggc ggcgttcttc ggtttctccg ctcacttgct cccgccgttg 540

gcgaaaatcc ggttcttcgg atcgagttgc ggtcgcctgg gtgtttttca tcagttttgg 600

gtgaaaatac tcgagctctg aggggggtga ttggtttcca agtttgattg atttaaagag 660

tttgtgtgga attttttcgg ggagatgaag gggaggattt gctgcgacgg tccaggtttt 720

ggttagttgt tgagggagaa aaaaatggaa gatatttctg ggcgcaagag aggaaggcag 780

gtgtttgctg ctgctgctgg gagcatgatg ggaagctgac cagcagcttc tccggtatcc 840

tggtgcggcg gagtttcgtg ctctttggcg acgggtgcac tggtgattgg agatgaagct 900

ctctccgccg gcgtcggcgg atatgccgca ggccttgccg gagaacgacg gtatatatcc 960

ttgctcacaa tttcgacatt gtttcagttc tgcactttct cagcttgtgt tgatgcctgc 1020

attgtaaagt ggattatgga tcatggagct ttgtgattct gcactttgag ttgtttgtgc 1080

atgattacat aatgcataaa tgagtctcca ttgctgcctt gcacacactc cgcacataca 1140

cacacaaaga aaaaagaaag aaaaaaaaag aactactcct acattacttg gctctgttca 1200

ttgccctcat gttataacat tatttgatac tgactgaacc tcctactgtc tgtgggcaag 1260

tacaaatagt agcttcacat gaacttaact ttctggtggt ttgctgttca gctcatgtgt 1320

gtttggcatg ttgcagggga acaaagatgt ctgaactcgg agctgtggca tgcatgcgct 1380

gggccccttg tgtctttgcc agtggtcagg agcagggtcg tctactttcc acagggccat 1440

agcgagcagg tcagtcactt ggtttgtagt ctgtgcacat ctctttcatt atgctaggca 1500

tggccggatt ttgttgactc gaatttacta gaatttataa aagaaggtag aacagctctg 1560

cttttgcatt tgtgcatcag tacataatag ggcagaggat tgtctttatt gtttgctcag 1620

tgcatcatta aacttaatat ggcagaagaa tgaactgaaa ctgtactgtc taaagtaatt 1680

ttagttctgt gcaggttgcg gcatcaacta ataaggaagt tgatgctcaa atcccaaatt 1740

atccaaactt acctcctcag ttaatctgcc agcttcataa tgtcaccatg catgtgagtt 1800

cactcttaaa gaaaccatca tgtagcttct taataagcag cttatgataa ttcacctggt 1860

gcttttgcag gctgatgcag agacagatga agtttatgct cagatgacat tgcaaccatt 1920

gagcccggta tttgaccact gctttgcact tctagcctta tttcttttaa aagggcaaag 1980

atgttacaag gattatgtat ttgtcatgta atcctgttga caggaagagc aaaaggagcc 2040

tttccttcca atggagttgg gtgctgctag caagcaaccc actaattact tctgcaagac 2100

attgactgca agtgacacga gcactcatgg tggtttctct gttccccgcc gggcagctga 2160

gaaagtcttc cctccactag tatgccttta agctcagtct tttttttggt aggaaatgtt 2220

catttgctat gtgttcttca aattgactcc tttagttctc tgtaggattt ttcacagcag 2280

cctccggcac aggagctgat tgcaagagat ttgcatgata atgaatggaa atttcgccat 2340

atatttcgtg gtatgtaact atggccgaca cacatagaac tgattatgag ttgtttgtgt 2400

acacaaaaaa attgacataa aatcatgtac tatgcctttt agatagcatt tccattagac 2460

atgacatcta tccgttttgc tcttttttct ttgttgccaa gatctgtttt tgcattttta 2520

tctggctaag aaattacctg gacatgctat aatgacaata ctgcaactag cctccttctg 2580

ttcctgcctt gcagaattgt tgaattatga aattatattg tgagggtatc ttcttctatt 2640

gaactttcaa ttggctatgc atttgtcgtg caggtcagcc taaaaggcat ctcctgacaa 2700

caggctggag tgtgtttgtg agtgcgaaaa gactagtagc aggagactct gttatattta 2760

tctggtacca cccactttat tccttattta aattgtatac tgttgctaga ggttgtactc 2820

attgctgaga cttaattacc tttatcattt ttaccaggaa tgataacaat caacttcttt 2880

tgggaatacg tcgtgcaaat cgccaacaga ctgttatgcc ctcttccgtg ttgtcaagcg 2940

atagcatgca tataggtctt cttgcagcag cagctcatgc tgcagccaca aatagtcgct 3000

tcactatttt ctataacccc aggtaaatgt actgcaatct tacagcagag cctttaacgt 3060

tttattttat ttccatattt aattgacatg ggcatccttt ttcagggcta gcccttctga 3120

atttgtgatt ccattggcca agtatgtgaa agctgtttac cacacacgtg tatctgttgg 3180

aatgcgtttt agaatgcttt tcgagacaga ggagtcaagt gtcaggcggt aagctgatat 3240

taagcacaca gcatgaaccg tgaaagctcc attaattctt atatttacct cttactttca 3300

gatacatggg tacaatcacc agcataagtg atctagattc agtgcgctgg ccaaactcac 3360

actggcgttc tgttaaggta atatctgcta aatatatttt gtggtctcta cagaaatgat 3420

gttatcttgt tccattatct agtagtctgt caaatctgtt atcacatccc tcatggatcc 3480

ctttctgtgg atatgttttc cttgtgattt ttttttcatt ttggatttat ggcacattag 3540

gttggttggg atgagtccac cactggtgat aaacagccaa gggtttctct ttgggagatt 3600

gagcctttga caacctttcc gatgtacccc agtgcttttc ctttaagact taagcgtccg 3660

tgggcttcag gactgcctat gcatggcatg ttcaatggta tgctgattga tggccggaac 3720

actagcacgc ataattctaa gagcatactc tttaaccact tctttttctg caggtggggg 3780

aaatgacgat tttgcacgct attcttctct catgtggctt cgagacggaa atagaggaac 3840

ccagtccctg aattttcaag gacatggagt ctcaccatgg cttcagccaa gaatagattc 3900

tccattgctg ggccttaagc cagacacgta ccagcaaatg gctgcagcag cactggaaga 3960

aattcgatat ggggaccctt caaagcagca tccagctact ctgcaatacc aacagactca 4020

taatctgaac agtggattaa attctctgtt tgcaagccat gttctagggc aggtgcagtt 4080

tcaacctcag cagtcacccc tgcaagttgt tcagcaaggc cattgtcaga acactggtga 4140

ctctgggttc cttcaaggtc agcttccacg gctgcagttg cataacactc agcagctgct 4200

aaaggagcaa gagttgcagc agcagcaaag acagcatgtt ttacaagagc aatctagtca 4260

agagatgcaa cagcagctcc catctagtga tcatcatgtt gctgatgtag cttctgagtc 4320

tggatctgct cctcaggcac aatcatcatt gcttagtgga tcatcattct acaatcagaa 4380

cctcttagaa ggaaatagtg atcccccttt acatctacac aacaatttcc acaacttctc 4440

taaccaggaa gcctcaaacc ttcttatttt gcctcgaagt agccaattaa tggcatcaga 4500

tgggtggcct tcaaagcgat taactttaga atctgctgtt catcctgaag ctccgtccat 4560

gcaccccaag attgagaaag taaatcacca gggtatatct cattttcctg gcgcctttcc 4620

accacaatca gcaagaggct gttccatcgt ccaggattgc agggcagatg ctgagaaccg 4680

cctactttca tcatcatttg aactccagga tggcatgaca agcatcataa ctgatgctaa 4740

cagagaaact gatactatgg ccataccttt gttgagatat agtggtgcag atttgacaac 4800

tgaaaacacc ttagcaacct ccaattgttt aggtgaatct ggaacgttca atcctcttaa 4860

taacatatct gtaaatccat cacaaggagc aacctttgtg aaggtatgca ttttcaactt 4920

gtgtgttagc ttgcgttaat tcttctctct gcatttcttt tttcaatttt cactgattgc 4980

gaacattggt cgctaaaagt actttactta gtagataaat aacaaacatt ttagtaggtt 5040

gatggtagca aaggaggcaa ttatttttta aagttttgta tgaagtttgg aaatgcctgt 5100

ttctcttctt tttactaccc tacttaacat gtctgtgagt gtgagctgct catttattct 5160

atatgatctg gctaatatct tctgcatttt cttcaatagg tttacaaatc agggtccctt 5220

gggagatcac ttgacatctc cagattcagc agctactgcg agttacgtag tgagcttgag 5280

cgtctctttg gtcttgaagg ccaactggag gaccctgtaa gatcaggctg gcagcttgta 5340

tttgtcgacc gggaaaatga cattcttctc gtcggcgacg atccatggca gtaagcactt 5400

acaaacctaa aatgtttcgt atgcaaacac aatatttgtc aatgttcaaa gcaaacaaac 5460

atgatattct atgccatctt tttttttcag ggagtttgca aatagcgtat ggtgcatcaa 5520

aatactctcg ccacaggagg tgcagcagtt ggttcgtggt ggagacggcc ttctgtcctc 5580

acctggagca aggatgcagc agagcaatgc ctgcgacgac tattctgcaa gccacaacat 5640

gcagaatatc gccggaaaca ttgcatctgt agcgcctctg gactactgag atgtagacca 5700

gaatccaaac taagcaccct taagactgca gggtcaccat tcgtgatcgc ctgcattcca 5760

tgcgatcttc actagtcctg tccgaatcag tagcaactca gtcaataata tagctagatg 5820

atccgttgta ttccatctga tcatggacat gctgtatgat agctgcttta gctctattaa 5880

atctctaatg gcaggcaact aggcaagaac agttctatga tgaatgatgg cagtcgctgt 5940

agaattgacc ttattctgta gctataatat gatgtctaga actgatgatt ccaatttcca 6000

aatggagccc ggaacatatt aaaatcaatc atttgtcgcc ttcttcatgt ttttgcc 6057

<210> 2

<211> 899

<212> PRT

<213> 水稻()

<400> 2

Met Lys Leu Ser Pro Pro Ala Ser Ala Asp Met Pro Gln Ala Leu Pro

1 5 10 15

Glu Asn Asp Gly Glu Gln Arg Cys Leu Asn Ser Glu Leu Trp His Ala

20 25 30

Cys Ala Gly Pro Leu Val Ser Leu Pro Val Val Arg Ser Arg Val Val

35 40 45

Tyr Phe Pro Gln Gly His Ser Glu Gln Val Ala Ala Ser Thr Asn Lys

50 55 60

Glu Val Asp Ala Gln Ile Pro Asn Tyr Pro Asn Leu Pro Pro Gln Leu

65 70 75 80

Ile Cys Gln Leu His Asn Val Thr Met His Ala Asp Ala Glu Thr Asp

85 90 95

Glu Val Tyr Ala Gln Met Thr Leu Gln Pro Leu Ser Pro Glu Glu Gln

100 105 110

Lys Glu Pro Phe Leu Pro Met Glu Leu Gly Ala Ala Ser Lys Gln Pro

115 120 125

Thr Asn Tyr Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ala Ser Asp Thr Ser Thr His

130 135 140

Gly Gly Phe Ser Val Pro Arg Arg Ala Ala Glu Lys Val Phe Pro Pro

145 150 155 160

Leu Asp Phe Ser Gln Gln Pro Pro Ala Gln Glu Leu Ile Ala Arg Asp

165 170 175

Leu His Asp Asn Glu Trp Lys Phe Arg His Ile Phe Arg Gly Gln Pro

180 185 190

Lys Arg His Leu Leu Thr Thr Gly Trp Ser Val Phe Val Ser Ala Lys

195 200 205

Arg Leu Val Ala Gly Asp Ser Val Ile Phe Ile Trp Asn Asp Asn Asn

210 215 220

Gln Leu Leu Leu Gly Ile Arg Arg Ala Asn Arg Gln Gln Thr Val Met

225 230 235 240

Pro Ser Ser Val Leu Ser Ser Asp Ser Met His Ile Gly Leu Leu Ala

245 250 255

Ala Ala Ala His Ala Ala Ala Thr Asn Ser Arg Phe Thr Ile Phe Tyr

260 265 270

Asn Pro Arg Ala Ser Pro Ser Glu Phe Val Ile Pro Leu Ala Lys Tyr

275 280 285

Val Lys Ala Val Tyr His Thr Arg Val Ser Val Gly Met Arg Phe Arg

290 295 300

Met Leu Phe Glu Thr Glu Glu Ser Ser Val Arg Arg Tyr Met Gly Thr

305 310 315 320

Ile Thr Ser Ile Ser Asp Leu Asp Ser Val Arg Trp Pro Asn Ser His

325 330 335

Trp Arg Ser Val Lys Val Gly Trp Asp Glu Ser Thr Thr Gly Asp Lys

340 345 350

Gln Pro Arg Val Ser Leu Trp Glu Ile Glu Pro Leu Thr Thr Phe Pro

355 360 365

Met Tyr Pro Ser Ala Phe Pro Leu Arg Leu Lys Arg Pro Trp Ala Ser

370 375 380

Gly Leu Pro Met His Gly Met Phe Asn Gly Gly Gly Asn Asp Asp Phe

385 390 395 400

Ala Arg Tyr Ser Ser Leu Met Trp Leu Arg Asp Gly Asn Arg Gly Thr

405 410 415

Gln Ser Leu Asn Phe Gln Gly His Gly Val Ser Pro Trp Leu Gln Pro

420 425 430

Arg Ile Asp Ser Pro Leu Leu Gly Leu Lys Pro Asp Thr Tyr Gln Gln

435 440 445

Met Ala Ala Ala Ala Leu Glu Glu Ile Arg Tyr Gly Asp Pro Ser Lys

450 455 460

Gln His Pro Ala Thr Leu Gln Tyr Gln Gln Thr His Asn Leu Asn Ser

465 470 475 480

Gly Leu Asn Ser Leu Phe Ala Ser His Val Leu Gly Gln Val Gln Phe

485 490 495

Gln Pro Gln Gln Ser Pro Leu Gln Val Val Gln Gln Gly His Cys Gln

500 505 510

Asn Thr Gly Asp Ser Gly Phe Leu Gln Gly Gln Leu Pro Arg Leu Gln

515 520 525

Leu His Asn Thr Gln Gln Leu Leu Lys Glu Gln Glu Leu Gln Gln Gln

530 535 540

Gln Arg Gln His Val Leu Gln Glu Gln Ser Ser Gln Glu Met Gln Gln

545 550 555 560

Gln Leu Pro Ser Ser Asp His His Val Ala Asp Val Ala Ser Glu Ser

565 570 575

Gly Ser Ala Pro Gln Ala Gln Ser Ser Leu Leu Ser Gly Ser Ser Phe

580 585 590

Tyr Asn Gln Asn Leu Leu Glu Gly Asn Ser Asp Pro Pro Leu His Leu

595 600 605

His Asn Asn Phe His Asn Phe Ser Asn Gln Glu Ala Ser Asn Leu Leu

610 615 620

Ile Leu Pro Arg Ser Ser Gln Leu Met Ala Ser Asp Gly Trp Pro Ser

625 630 635 640

Lys Arg Leu Thr Leu Glu Ser Ala Val His Pro Glu Ala Pro Ser Met

645 650 655

His Pro Lys Ile Glu Lys Val Asn His Gln Gly Ile Ser His Phe Pro

660 665 670

Gly Ala Phe Pro Pro Gln Ser Ala Arg Gly Cys Ser Ile Val Gln Asp

675 680 685

Cys Arg Ala Asp Ala Glu Asn Arg Leu Leu Ser Ser Ser Phe Glu Leu

690 695 700

Gln Asp Gly Met Thr Ser Ile Ile Thr Asp Ala Asn Arg Glu Thr Asp

705 710 715 720

Thr Met Ala Ile Pro Leu Leu Arg Tyr Ser Gly Ala Asp Leu Thr Thr

725 730 735

Glu Asn Thr Leu Ala Thr Ser Asn Cys Leu Gly Glu Ser Gly Thr Phe

740 745 750

Asn Pro Leu Asn Asn Ile Ser Val Asn Pro Ser Gln Gly Ala Thr Phe

755 760 765

Val Lys Val Tyr Lys Ser Gly Ser Leu Gly Arg Ser Leu Asp Ile Ser

770 775 780

Arg Phe Ser Ser Tyr Cys Glu Leu Arg Ser Glu Leu Glu Arg Leu Phe

785 790 795 800

Gly Leu Glu Gly Gln Leu Glu Asp Pro Val Arg Ser Gly Trp Gln Leu

805 810 815

Val Phe Val Asp Arg Glu Asn Asp Ile Leu Leu Val Gly Asp Asp Pro

820 825 830

Trp Gln Glu Phe Ala Asn Ser Val Trp Cys Ile Lys Ile Leu Ser Pro

835 840 845

Gln Glu Val Gln Gln Leu Val Arg Gly Gly Asp Gly Leu Leu Ser Ser

850 855 860

Pro Gly Ala Arg Met Gln Gln Ser Asn Ala Cys Asp Asp Tyr Ser Ala

865 870 875 880

Ser His Asn Met Gln Asn Ile Ala Gly Asn Ile Ala Ser Val Ala Pro

885 890 895

Leu Asp Tyr

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 未知()

<400> 3

atgaagctct ctccgccggc gt 22

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 未知()

<400> 4

tcagtagtcc agaggcgcta ca 22

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 未知()

<400> 5

ctgcgataat ggaactggt 19

<210> 6

<211> 18

<212> DNA

<213> 未知()

<400> 6

acaatgctgg ggaagaca 18

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 水稻()

<400> 7

ctctttaacc acttcttttt ctgc 24

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> 水稻()

<400> 8

tgatggattt acagatatgt ta 22

Claims

1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从水稻中克隆出的基因，记为OsARF25，全长6057bp，其中开放阅读框为2700bp，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.一种如权利要求1所述的基因OsARF25编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码899个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3.一种用于调取获得水稻样品中基因OsARF25的引物序列，其特征在于，序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示。

4.一种检测水稻基因OsARF25 mRNA表达模式的方法，其特征在于，利用权利要求1所述基因OsARF25的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列见SEQID NO.5和SEQ ID NO.6，对水稻cDNA样品进行Real-time PCR，然后检测该基因在茎、叶、根中的表达；样品为水稻的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：

(1)提取水稻不同器官的总RNA；

(2)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。

5.一种基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，检测水稻在干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后表达含量的变化，具体步骤为：将水稻进行干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。

6.根据权利要求5所述的基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)将两周大的水稻苗置于150mM氯化钠溶液中，28℃培养高盐胁迫处理0、2、4、8、以及12h；置于含20％PEG溶液中以进行干旱处理0、2、4、8以及12h；置于10μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA中，以进行激素处理8h；

(2)提取前述个处理的水稻苗的叶和根中的总RNA；

(3)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6设计引物，根据SEQ ID NO.1，进行Real-time PCR检测。

7.一种检测水稻Tilling突变体中基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，提取突变体和野生型对照组水稻总DNA，利用引物SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8，进行PCR检测。

8.根据权利要求7所述的检测水稻Tilling突变体中基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，具体步骤为：

(2)分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物进行PCR检。

9.如权利要求1所述的水稻基因OsARF25在植物品种改良中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨。放于培养皿内，恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉；

(2)将催芽后的种子均匀地散在苗床上，表面不能积水，种子播撒后，用手抹平，让种子陷入泥中，不应太深；

(3)育苗3-4周后，三叶苗，根系发达方可移苗。过早会造成根部损伤，后期发育不良。移苗后1-2周可按每颗苗0.5g尿素少量施肥。浇水一般提前将水放在温室内1天温热后再浇；