CN110100731A - 一种提高梅花组培快繁增殖率的方法 - Google Patents

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张力
唐桂梅
李卫东
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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，公开了一种提高梅花组培快繁增殖率的方法，包括：外植体的选择；外植体预处理；外植体灭菌；初代培养：将所得的外植体放置于诱导培养基中进行初代培养，直接诱导培养产生丛芽；继代培养：在初代培养产生的丛芽生长至1.8－2.4cm时，将其放置于继代增殖培养基中进行增殖培养；生根培养：3cm以上的上部茎，或3cm以上的经过壮苗培养后的组培苗，接种于生根培养基中进行生根培养，生根培养直至在组培苗的基部诱导出根；练苗：将生根培养后的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行练苗；移栽：经练苗后的生根芽苗移栽至育苗盘中。本发明实现了梅花组织培养的快速繁殖，增殖率高。

Description

一种提高梅花组培快繁增殖率的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种提高梅花组培快繁增殖率的方法。
背景技术
目前，最接近的现有技术：
梅花(Prunus mume)是中国传统十大名花之一，花色绚丽多彩，枝型变异丰富，是重要的观赏花木与果树。梅花的栽培范围，2000多年来一直局限在长江及淮河流域，为了将这一传统名花扩大栽培地区范围，尤其是将梅花推广应用到三北地区，在半世纪前就已开展抗寒梅花育种工作。早期通过将真梅系品种与杏等近缘种进行种间杂交，培育出具有抗寒能力的杏梅梅花品种，丰富了北方早春的植物景观。
为了保持梅花品种的优良性状，生产上常采取嫁接和扦插等无性繁殖手段扩繁植株，但存在着扩繁系数小、周期长等问题。传统梅花品种改良和新品种选育一般采用杂交育种及实生苗选择育种等方法，由于梅花从开花授粉到果实成熟，需要2-3个月的时间，收获的种子必须经过沙藏处理后才能萌发，梅花传统育种存在育种周期长，选择局限性等限制因素。同时现有梅花组培快繁增过程中，选择的移栽基质，不能保持良好的透气性和保湿性，降低了幼苗的成活率；并且传统的梅花组培快繁增外植体预处理方法，不能有效对选择的材料进行杀菌消毒，提高了污染率。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)培育梅花植株技术扩繁系数小、周期长、选择有局限性。
(2)梅花组培快繁增过程中，选择的移栽基质，不能保持良好的透气性和保湿性，降低了幼苗的成活率。
(3)梅花组培快繁增过程中，传统的外植体预处理方法，不能有效对选择的材料进行杀菌消毒，提高了污染率。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种提高梅花组培快繁增殖率的方法。
本发明是这样实现的，一种提高梅花组培快繁增殖率的方法。所述提高梅花组培快繁增殖率的方法包括：
步骤一，外植体的选择：选取1～2年生半木质化的梅花枝条，从枝条中部剪去顶端部分，待其新稍萌发成至少带1个腋芽、长度为1－2cm时，切割成带 1～2个叶基的茎段和茎尖；
步骤二，外植体预处理：在加有洗洁精的自来水中漂洗3-5min，然后再用自来水冲洗干净，将预处理好的材料放在超净工作台上；
步骤三，外植体灭菌：首先，用体积百分含量为75％的酒精浸泡0.5～ 1.0min，用无菌水冲洗1次；再放入添加了1～2滴吐温80的1g/L HgCl2水溶液中振荡消毒10～15min；最后用无菌水冲洗4～5次，将灭菌过的材料放在灭菌过的滤纸上吸干水分；
步骤四，初代培养：将所得的外植体放置于诱导培养基中进行初代培养，直接诱导培养产生丛芽；
步骤五，继代培养：在初代培养产生的丛芽生长至1.8－2.4cm时，将其放置于继代增殖培养基中进行增殖培养；
步骤六，生根培养：3cm以上的上部茎，或3cm以上的经过壮苗培养后的组培苗，接种于生根培养基中进行生根培养，生根培养直至在组培苗的基部诱导出根；
步骤七，练苗：将生根培养后的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行练苗；
步骤八，移栽：经练苗后的生根芽苗移栽至育苗盘中。
进一步，所述诱导培养基为：QL培养基+蔗糖 (20-30g/L)+6-BA(0.25-0.50mg/L)+NAA(0.05-0.10mg/L)+IBA(0.05-0.10mg/L)+琼脂适量(一般5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为QL培养基+蔗糖(25g/ L)+6-BA(0.50mg/L)+NAA(0.10mg/L)+IBA(0.05mg/L)+琼脂适量(一般5.5g/L)，pH 值5.8-6.0。
进一步，所述继代增殖培养基为：QL培养基+蔗糖 (20-25g/L)+6-BA(0.10-0.20mg/L)+NAA(0.05-0.10mg/L)+琼脂适量(一般 5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为QL培养基+蔗糖(25g/L)+6-BA(0.20mg/L)+NAA (0.10mg/L)+琼脂适量(一般5.5g/L)，pH值5.8-6.0。
进一步，所述生根培养基为：1/2MS培养基+蔗糖 (20-25g/L)+IBA(0.15-0.30mg/L)+琼脂适量(一般5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为1/2MS培养基+蔗糖(20g/L)+IBA(0.30mg/L)+琼脂适量(一般5.8g/L)，pH值 5.8-6.0。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明中外植体预处理方法能有效对选取的材料进行消毒杀菌，降低材料的污染率，提高后续的成活率；在生根培养基中进行培养过程中，将温度控制在22到25摄氏度，光照强度在1500LX到2000LX，光照时间10h/天，可以有效提高幼苗的光合作用，促进幼苗的成活率；并且在育苗盘中的移栽基质选择珍珠岩，能有效提高疏松透气性，保持适宜的水分，存进幼苗的生长。
本发明实现了梅花组织培养的快速繁殖，增殖率高。本发明提供的方法简单，操作简便，繁殖速度快，对母本材料要求不高，劳动强度不大，生产成本低，有利于产业化、规模化生产。
附图说明
图1是本发明实施例提供的提高梅花组培快繁增殖率的方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细描述。
如图1所示，本发明实施例提供的提高梅花组培快繁增殖率的方法包括：
S101：外植体的选择：选取1～2年生半木质化的梅花枝条，从枝条中部剪去顶端部分，待其新稍萌发成至少带1个腋芽、长度为1－2cm时，切割成带1～ 2个叶基的茎段和茎尖；
S102：外植体预处理：在加有洗洁精的自来水中漂洗3-5min，然后再用自来水冲洗干净，将预处理好的材料放在超净工作台上；
S103：外植体灭菌：首先，用体积百分含量为75％的酒精浸泡0.5～1.0min，用无菌水冲洗1次；再放入添加了1～2滴吐温80的1g/L HgCl2水溶液中振荡消毒10～15min；最后用无菌水冲洗4～5次，将灭菌过的材料放在灭菌过的滤纸上吸干水分；
S104：初代培养：将所得的外植体放置于诱导培养基中进行初代培养，直接诱导培养产生丛芽；
S105：继代培养：在初代培养产生的丛芽生长至1.8－2.4cm时，将其放置于继代增殖培养基中进行增殖培养；
S106：生根培养：3cm以上的上部茎，或3cm以上的经过壮苗培养后的组培苗，接种于生根培养基中进行生根培养，生根培养直至在组培苗的基部诱导出根；
S107：练苗：将生根培养后的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行练苗；
S108：移栽：经练苗后的生根芽苗移栽至育苗盘中。
进一步，所述诱导培养基为：QL培养基+蔗糖 (20-30g/L)+6-BA(0.25-0.50mg/L)+NAA(0.05-0.10mg/L)+IBA(0.05-0.10mg/L)+琼脂适量(一般5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为QL培养基+蔗糖(25g/ L)+6-BA(0.50mg/L)+NAA(0.10mg/L)+IBA(0.05mg/L)+琼脂适量(一般5.5g/L)，pH 值5.8-6.0。
进一步，所述继代增殖培养基为：QL培养基+蔗糖 (20-25g/L)+6-BA(0.10-0.20mg/L)+NAA(0.05-0.10mg/L)+琼脂适量(一般 5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为QL培养基+蔗糖(25g/L)+6-BA(0.20mg/L)+NAA (0.10mg/L)+琼脂适量(一般5.5g/L)，pH值5.8-6.0。
进一步，所述生根培养基为：1/2MS培养基+蔗糖 (20-25g/L)+IBA(0.15-0.30mg/L)+琼脂适量(一般5.5-6.2g/L)，pH值5.8-6.0；优选为1/2MS培养基+蔗糖(20g/L)+IBA(0.30mg/L)+琼脂适量(一般5.8g/L)，pH值 5.8-6.0。
作为本发明的优选实施例，洗洁精的体积百分比为1％。
所述外植体预处理的具体过程如下：
将切割成带1～2个叶基的茎段和茎尖表面去除，用洗洁精浸泡8～15分钟，用加有洗洁精的自来水中漂洗3-5min，然后再用自来水冲洗30分钟，冲洗干净，将预处理好的材料放在超净工作台上；本发明中的材料为春季，当选择其他季节的材料时，则选取生长健壮的徒长枝为外植体，并且用百分之75的酒精表面消毒30s，用无菌水冲洗1次，接着用百分之0.1的升汞消毒3～6分钟，吐温1～2 滴，无菌水冲洗5～6次，进行后续的接种。
所述步骤七中，在练苗的过程中，需要在生根培养基中进行培养，培养的条件如下：
培养温度在22到25摄氏度，光照强度在1500LX到2000LX，光照时间10h/ 天。
所述步骤八中，经练苗后的生根芽苗移栽至育苗盘中，需要对移栽基质进行选择，移栽基质最重要的是疏松通气，适宜的保水性；移栽基质为珍珠岩，并用百分之3的高猛酸钾溶液淋浇灭菌，避光放置2天，移栽前用清水冲洗至无色。
下面结合实验对本发明的应用原理作详细的描述。
为了证明珍珠岩作为本发明的移栽基质，能提高成活率；分别取珍珠岩、珍珠岩：菜园土＝1:2、珍珠岩：菜园土＝1:1、菜园土、珍珠岩：菜园土＝2:1作为本实验的移栽基质，15天后对幼苗的高度和成活率进行统计，实验结果如下表：
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述提高梅花组培快繁增殖率的方法包括：
步骤一，外植体的选择：选取1～2年生半木质化的梅花枝条，从枝条中部剪去顶端部分，待其新稍萌发成至少带1个腋芽、长度为1－2cm时，切割成带1～2个叶基的茎段和茎尖；
步骤二，外植体预处理：在加有洗洁精的自来水中漂洗3-5min，然后再用自来水冲洗干净，将预处理好的材料放在超净工作台上；
步骤三，外植体灭菌：首先，用体积百分含量为75％的酒精浸泡0.5～1.0min，用无菌水冲洗1次；再放入添加了1～2滴吐温80的1g/L HgCl2水溶液中振荡消毒10～15min；最后用无菌水冲洗4～5次，将灭菌过的材料放在灭菌过的滤纸上吸干水分；
步骤四，初代培养：将所得的外植体放置于诱导培养基中进行初代培养，直接诱导培养产生丛芽；
步骤五，继代培养：在初代培养产生的丛芽生长至1.8－2.4cm时，将其放置于继代增殖培养基中进行增殖培养；
步骤六，生根培养：3cm以上的上部茎，或3cm以上的经过壮苗培养后的组培苗，接种于生根培养基中进行生根培养，生根培养直至在组培苗的基部诱导出根；
步骤七，练苗：将生根培养后的组培苗从培养室取出，将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行练苗；
步骤八，移栽：经练苗后的生根芽苗移栽至育苗盘中。
2.如权利要求1所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述诱导培养基为：QL培养基+蔗糖20-30g/L+6-BA0.25-0.50mg/L+NAA0.05-0.10mg/L+IBA0.05-0.10mg/L+琼脂5.5-6.2g/L，pH值5.8-6.0。
3.如权利要求2所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述诱导培养基为QL培养基+蔗糖25g/L+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L+IBA0.05mg/L+琼脂5.5g/L，pH值5.8-6.0。
4.如权利要求1所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述继代增殖培养基为：QL培养基+蔗糖20-25g/L+6-BA0.10-0.20mg/L+NAA0.05-0.10mg/L+琼脂5.5-6.2g/L，pH值5.8-6.0。
5.如权利要求4所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述继代增殖培养基为：QL培养基+蔗糖25g/L+6-BA0.20mg/L+NAA0.10mg/L+琼脂5.5g/L，pH值5.8-6.0。
6.如权利要求1所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述生根培养基为：1/2MS培养基+蔗糖20-25g/L+IBA0.15-0.30mg/L+琼脂5.5-6.2g/L，pH值5.8-6.0。
7.如权利要求6所述提高梅花组培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述生根培养基为：1/2MS培养基+蔗糖20g/L+IBA0.30mg/L+琼脂5.8g/L，pH值5.8-6.0。
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