CN110093311A - Icam-1标记及其应用 - Google Patents

Icam-1标记及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110093311A
CN110093311A CN201810085799.7A CN201810085799A CN110093311A CN 110093311 A CN110093311 A CN 110093311A CN 201810085799 A CN201810085799 A CN 201810085799A CN 110093311 A CN110093311 A CN 110093311A
Authority
CN
China
Prior art keywords
icam
cell
fat
stem cell
differentiation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810085799.7A
Other languages
English (en)
Inventor
时玉舫
王莹
郑纯兴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Institutes for Biological Sciences SIBS of CAS
Original Assignee
Shanghai Institutes for Biological Sciences SIBS of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Institutes for Biological Sciences SIBS of CAS filed Critical Shanghai Institutes for Biological Sciences SIBS of CAS
Priority to CN201810085799.7A priority Critical patent/CN110093311A/zh
Priority to KR1020207024785A priority patent/KR20200121316A/ko
Priority to US16/965,955 priority patent/US20210038688A1/en
Priority to JP2020562822A priority patent/JP2021511837A/ja
Priority to PCT/CN2019/073725 priority patent/WO2019144971A1/zh
Publication of CN110093311A publication Critical patent/CN110093311A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4409—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 4, e.g. isoniazid, iproniazid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0653—Adipocytes; Adipose tissue
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/58—Adhesion molecules, e.g. ICAM, VCAM, CD18 (ligand), CD11 (ligand), CD49 (ligand)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
    • C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
    • C12N2506/1346—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from mesenchymal stem cells
    • C12N2506/1384—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from mesenchymal stem cells from adipose-derived stem cells [ADSC], from adipose stromal stem cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70525—ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
    • G01N2800/044—Hyperlipemia or hypolipemia, e.g. dyslipidaemia, obesity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

本发明提供了ICAM‑1标记及其应用。具体地，本发明提供了一种ICAM‑1及其调控剂在促进或抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化中的应用，以及一种ICAM‑1或其检测试剂在(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险中的应用及相应的诊断试剂盒和方法。本发明还提供了一种体外非治疗性的制备脂肪细胞的方法。

Description

ICAM-1标记及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及ICAM-1及其在脂肪干细胞识别，以及调控脂肪细胞分化中的应用。
背景技术
肥胖的发生体现在脂肪组织的增加，这包括脂肪细胞增大(hypertrophy)——脂质过度摄入和累积，和脂肪细胞增多(hyperplasia)两种作用。成熟的脂肪细胞是没有有丝分裂能力的，因此脂肪细胞增多是脂肪前体细胞分化成为新的脂肪细胞导致的。成年人的脂肪组织以每年10％的速度进行更新，在肥胖人群中脂肪细胞的淘汰速度与正常人没有差异，但新生补充速度却显著高于正常人，导致脂肪细胞增多。在啮齿动物中，通常认为当用高脂饲料诱导肥胖时，最初是脂肪细胞的尺寸增加，随着高脂饲喂时间延长，脂肪细胞数量也逐渐增加。通过能标记新生脂肪细胞的基因修饰小鼠发现，确实在肥胖发生的早期，成脂分化作用不明显，而后期则有大量的脂肪干细胞分化新生的脂肪细胞，在内脏脂肪组织中尤为明显。因此肥胖伴随脂肪干细胞的成脂分化，不论在人类中还是在啮齿动物中，这都是肥胖的一个重要成因。然而对这些脂肪干细胞的界定以及对其体内成脂分化(特别是在肥胖阶段)的细胞和分子水平的调节机制尚不清楚。
脂肪细胞体外分化过程及其分子机制虽然在体外已经建立了完整的分化体系，但是对于体内脂肪细胞分化如何调控亟待研究。先前很多学者确立了Sca-1、CD34、CD29、CD24、PDGFR-β和PDGFR-α可以标记脂肪前体细胞，但是这些标记并不能很好的明确特定的脂肪细胞分化类型。
因此，本领域迫切需要开发能够识别脂肪干细胞和标记脂肪细胞分化的新分子。
发明内容
本发明的目的在于提供ICAM-1及其在脂肪干细胞识别，以及调控脂肪细胞分化中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种ICAM-1抑制剂的用途，用于制备一种制剂或组合物，所述的制剂或组合物用于促进脂肪干细胞向脂肪细胞的分化。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞为ICAM-1阳性的脂肪基质细胞。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞为CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1+细胞。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞表达成脂分化的调控基因。
在另一优选例中，所述的成脂分化的调控基因选自下组：Pparg、Cebpa、Cebpb、Cebpg、Gata2、Gata3、Irs1、Pparg、Cebpa和Fabp4、或其组合。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞表达选自下组的特征分子：Sca-1、CD34、CD29、CD24、Pdgfr-β、Zfp423、或其组合。
在另一优选例中，所述的制剂或组合物还用于脂肪组织的重塑。
在另一优选例中，所述的ICAM-1抑制剂特异性抑制ICAM-1的表达或活性。
在另一优选例中，所述的ICAM-1抑制剂包括MicroRNA、siRNA、shRNA、或其组合。
在另一优选例中，所述的ICAM-1抑制剂包括抗体。
在另一优选例中，所述的ICAM-1来源于人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述组合物为药物组合物。
在另一优选例中，所述药物组合物包含(a)ICAM-1抑制剂；和(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型、注射剂、或外用药物剂型。
在本发明的第二方面，提供了一种ICAM-1或其促进剂的用途，用于制备一种制剂或组合物，所述的制剂或组合物用于抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化。
在另一优选例中，所述的制剂或组合物用于维持脂肪干细胞的未分化状态。
在另一优选例中，所述的ICAM-1促进剂特异性促进ICAM-1的表达或活性。
在本发明的第三方面，提供了一种体外非治疗性的制备脂肪细胞的方法，所述方法包括步骤：
(a)提供一ICAM-1阳性的脂肪基质细胞；
(b)在适合脂肪细胞分化的条件下，培养所述的脂肪基质细胞，从而获得包含分化的脂肪细胞的细胞群体；和
(c)分离所述细胞群体中的脂肪细胞。
在另一优选例中，所述的脂肪基质细胞为CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1+细胞。
在另一优选例中，所述的ICAM-1阳性的脂肪基质细胞为脂肪干细胞。
在另一优选例中，在步骤(b)和步骤(c)中，检测ICAM-1的表达水平，从而判断细胞群体中脂肪基质细胞向脂肪细胞的分化程度。
在另一优选例中，随着脂肪基质细胞向脂肪细胞的分化程度的增加，所述脂肪基质细胞的ICAM-1的表达水平下降。
在另一优选例中，在步骤(b)中，抑制所述脂肪基质细胞的ICAM-1表达，从而促进脂肪基质细胞向脂肪细胞的分化。
在另一优选例中，在步骤(b)中，随着培养进行，所述脂肪基质细胞的ICAM-1表达水平逐渐降低。
在另一优选例中，在步骤(b)中，当所述的细胞群体基本不表达ICAM-1时，分离所述细胞群体中的脂肪细胞。
在另一优选例中，所述的基本不表达是指表达ICAM-1的细胞数N1与细胞群体的细胞总数N2之比N1/N2小于等于5％，较佳地，小于等于1％。
在本发明的第四方面，提供了一种体外非治疗性的抑制脂肪干细胞向脂肪细胞分化的方法，所述方法包括维持所述脂肪干细胞的ICAM-1表达水平。
在另一优选例中，所述的维持ICAM-1表达水平包括向脂肪干细胞的培养体系中添加ICAM-1或其促进剂。
在本发明的第五方面，提供了一种ICAM-1或其检测试剂的用途，用于制备检测试剂盒，所述试剂盒用于(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包含FABP4或其检测试剂。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞具有成脂分化能力。
在另一优选例中，所述的脂肪干细胞可以分化为脂肪细胞，导致脂肪细胞数量增加。
在另一优选例中，所述的检测脂肪干细胞包括：
(i)检测样本中是否含有脂肪干细胞，和/或
(ii)检测样本中含有的脂肪干细胞的数量。
在另一优选例中，所述的样本为组织样本，较佳地，所述的组织样本包括脂肪组织，更佳地，所述的组织为血管周围的脂肪组织。
在另一优选例中，所述的试剂盒检测样本中的ICAM-1+细胞的比例或检测样本中细胞的ICAM-1的表达水平，从而检测脂肪干细胞。
在另一优选例中，所述的判断包括辅助判断和/或治疗前判断。
在另一优选例中，所述的判断是将来自测试对象的样本的ICAM-1+细胞比例A1与正常人群的相应ICAM-1+细胞比例A0相比较，若A1显著高于A0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
在另一优选例中，所述的判断还包括将来自测试对象的样本的FABP4+细胞比例B1与正常人群的FABP4+细胞比例B0相比较，若B1显著低于B0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
在另一优选例中，所述“显著高于”指A1/A0≥1.25，较佳地A1/A0≥1.5，更佳地A1/A0≥2.0。
在另一优选例中，所述“显著低于”指B0/B1≥1.25，较佳地B0/B1≥1.5，更佳地B0/B1≥2.0
在另一优选例中，所述的正常人群的数量为至少100人；较佳地至少300人；更佳地至少500人，最佳地至少1000人。
在另一优选例中，所述的检测试剂包括蛋白芯片、核酸芯片、或其组合。
在另一优选例中，所述的检测试剂包括ICAM-1特异性抗体。
在另一优选例中，所述的ICAM-1特异性抗体偶联有或带有可检测标记。
在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。
在另一优选例中，所述ICAM-1特异性抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。
在本发明的第六方面，提供了一种诊断试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有ICAM-1或其检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括FABP4或其检测试剂。
在另一优选例中，所述的ICAM-1和FABP用作标准品。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括检测配套的样品前处理试剂以及使用说明书。
在另一优选例中，所述的说明书记载了检测方法以及根据A1值进行判断的方法。
在另一优选例中，所述的试剂盒还包括ICAM-1基因序列、蛋白的标准品。
在本发明的第七方面，提供了一种判断测试对象发生肥胖的风险的方法，包括步骤：
(a)提供测试对象的样本；
(b)测定所述样本中ICAM-1+细胞的比例为A1；
(c)将步骤(b)与正常人群样本的ICAM-1+细胞的比例A0相比较，若A1显著高于A0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
在另一优选例中，所述方法还包括测定样本中FABP4+细胞比例B1，并将B1与正常人群的FABP4+细胞比例B0相比较，若B1显著低于B0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
在另一优选例中，所述的测试对象为人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述测试样本为组织样本，较佳地为脂肪组织样本。
在本发明的第八方面，提供了一种基质细胞的用途，所述的基质细胞是分离自脂肪组织且ICAM-1阳性的基质细胞，其中，所述的基质细胞用于制备一细胞制剂，所述细胞制剂用于脂肪组织的重塑，
较佳地，所述脂肪组织的重塑包括脸部、臀部、乳房部位的脂肪组织的重塑。
在另一优选例中，所述的重塑包括美容应用中的脂肪组织重塑、创伤修复中的脂肪组织重塑。
在另一优选例中，所述制剂中还包括：ICAM-1抑制剂。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示ICAM-1+脂肪基质细胞具有脂肪干细胞定向分化潜能。具体地，是利用流式细胞技术分选内脏脂肪组织中的CD31-CD45-脂肪基质细胞用于单细胞分析。
图1A显示利用流式分析技术分析内脏脂肪组织中CD31-CD45-脂肪基质细胞中Sca-1和PDGFR-α的表达情况。
图1B显示利用流式分析内脏脂肪组织(附睾脂肪)和皮下脂肪组织(腹股沟脂肪)中ICAM-1在CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+细胞群体中的表达水平。
图1C显示分选CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+细胞群体中的ICAM-1+和ICAM-1-细胞，通过real-time PCR检测成脂分化以及脂肪干细胞相关基因的表达水平。
图1D显示将从野生小鼠脂肪组织中的CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+细胞群体中分离ICAM-1-细胞与GFP小鼠脂肪组织中的CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+细胞群体中分离ICAM-1+细胞进行共培养，观察细胞自发成脂分化情况。
图2显示了ICAM-1+脂肪干细胞的体内成脂分化。
图2A显示将mTmG小鼠与Icam1-CreERT2敲入小鼠杂交，以他莫昔芬激活重组酶，构建ICAM-1脂肪干细胞示踪小鼠。
图2B显示以脂肪组织的整体荧光染色技术观察在新生小鼠脂肪组织发育过程ICAM-1+脂肪干细胞生成的脂肪细胞情况。
图2C显示以脂肪组织的整体荧光染色技术观察在高脂饮食诱导肥胖过程ICAM-1+脂肪干细胞生成的脂肪细胞情况。
图3显示了肥胖条件下ICAM-1+脂肪干细胞的演变特点。
图3A显示构建Fabp4-Cre；mTmG小鼠研究处于成脂分化的脂肪干细胞。
图3B显示利用流式细胞技术分析脂肪组织中处于成脂分化状态的脂肪前体细胞中ICAM-1的表达水平。
图3C显示利用流式细胞技术分析正常饮食和高脂诱导肥胖状态下内脏脂肪组织和皮下脂肪组织中ICAM-1+脂肪干细胞的FABP4(EGFP标记)的表达水平。
图3D和图3E是对图3所示实验的重复的统计学分析。
图3F显示利用流式细胞技术分选获得脂肪细胞(Adi)，ICAM-1+EGFP+(I+G+)，ICAM-1+EGFP-(I+G-)和ICAM-1-(I-)细胞，并进行转录组分析和相关性分析。
图3G显示转录组分析成熟脂肪细胞、I+G+细胞，I+G-细胞以及I-细胞的差异性表达基因，主要涉及PPAR信号，脂肪的形成和吸收，脂肪酸生物合成和脂肪酸延长。
图4显示了ICAM-1负向调节脂肪干细胞的定向分化。
图4A显示了野生型(wild-type，WT)小鼠和ICAM-1-/-小鼠在正常饮食和高脂饮食情况下的体重变化。
图4B显示了野生型(wild-type，WT)小鼠和ICAM-1-/-小鼠在正常饮食和高脂饮食情况下的脂肪组织重量变化。
图4C显示了脂肪组织中脂肪细胞的大小的荧光染色分析结果。
图4D显示了荧光染色分析脂肪组织中脂肪细胞的大小的统计结果。
图4E-4H分别显示了将WT小鼠骨髓移植至辐照后的WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠进行骨髓重建，并给予高脂饮食，在不同时间点观察小鼠体重变化(图4E)和脂肪组织重量的变化(图4F)，以及以荧光染色分析脂肪组织中脂肪细胞的大小(图4G)并进行统计分析(图4H)。
图4I显示了将ICAM-1-/-小鼠和ICAM-1+/+小鼠分别与Fabp4-Cre；mTmG小鼠进行杂交，流式细胞技术分析ICAM-1缺失条件下脂肪干细胞产生脂肪细胞情况，并做统计分析。
图4J显示了对多个小鼠进行如4I中所示流式细胞术分析的统计分析
图4K显示了以western blot分析脂肪组织基质细胞中GFP的含量，明确脂肪细胞新生情况。
图5显示了ICAM-1负向调节脂肪干细胞的成脂分化。
图5A-5D分别显示了分离WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠的脂肪干细胞并进行成脂分化，在不同时间检测成脂分化相关基因的表达，包括Pparg(图5A)、Cebpa(图5B)、Fabp4(图5C)、Plin1(图5D)。
图6显示ICAM-1通过Rho GTPase负向调控脂肪干细胞的定向分化。
图6A显示利用活性Rho GTPases pull-down实验检测WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠来源脂肪干细胞的Rho-GTP，Rho-GDP和total Rho表达水平。
图6B显示F-actin细胞骨架染色结果。
图6C显示在WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠来源脂肪干细胞体外分化时加入DMSO或10μMY-27632(ROCK抑制剂)，分别以油红染色观察脂肪干细胞成脂分化情况。
图6D显示以western blot检测在Y-27623或DMSO处理下WT以及ICAM-1-/-小鼠来源的脂肪干细胞成脂分化后的Perilipin A蛋白表达的情况。
图6E、图6F分别显示利用Real time PCR方法检测在Y-27623或DMSO处理下WT以及ICAM-1-/-小鼠来源的脂肪干细胞成脂分化后Pparg(图6E)和Fabp4(图6F)的mRNA水平。
图6G显示在WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠来源脂肪干细胞体外分化时加入RA2(Rho激动剂)，分别以油红染色观察脂肪干细胞成脂分化情况。
图6H-6K分别显示以Real time PCR方法检测Pparg(图6H)、Cebpa(图6I)、Fabp4(图6J)和Plin1(图6K)的mRNA水平。
图6L-6N分别显示给予高脂饮食诱导肥胖的WT小鼠和ICAM-1-/-小鼠的右侧皮下脂肪组织注射RA2(每2天一次，0.5μg)，进行肉眼观察(图6L)，脂肪组织观察(图6M)以及皮下脂肪组织重量变化统计分析(6N)。
图7显示ICAM-1在人脂肪干细胞识别和调控中的作用。
图7A显示流式细胞分析技术检测ICAM-1在人脂肪组织脂肪前体细胞中的表达。
图7B显示免疫荧光检测人脂肪组织中ICAM-1+脂肪干细胞的组织定位。
图7C显示以Real time PCR检测脂肪干细胞成脂分化过程中ICAM-1和FABP4的表达变化。
图7D显示利用ICAM-1siRNA敲降人脂肪干细胞的ICAM-1的表达。
图7E显示利用ICAM-1siRNA敲降人脂肪干细胞的ICAM-1的表达后，以油红染色观察细胞的成脂分化能力。
图7F-7G分别显示检测干扰ICAM-1表达的脂肪干细胞在成脂分化过程中成脂相关基因表达以及Rho GTP活性。
图7H-7J分别显示干扰ICAM-1表达后以RA2激活Rho观察脂肪干细胞中成脂分化相关基因(PPARG、CEBPA、FABP4)的表达。
图7K-7L分别显示利用人的脂肪组织标本，以体脂比BMI指数、ICAM-1的表达强度以及CD31-CD45-脂肪基质细胞中Fabp4+脂肪前体细胞的表达水平进行相关性分析。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现一种用于识别脂肪干细胞的新分子。具体地，本发明提供了一种ICAM-1及其调控剂在促进或抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化中的应用，以及一种ICAM-1或其检测试剂在(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险中的应用及相应的诊断试剂盒和方法。本发明还提供了一种体外非治疗性的制备脂肪细胞的方法。实验表明，ICAM-1+脂肪干细胞定位于脂肪组织的血管周围，具有自发性成脂分化的能力，在体外和体内实验中均可以分化为脂肪细胞，参与脂肪组织发育和重塑。此外，ICAM-1+脂肪干细胞的数量与肥胖脂肪组织增大和增多呈正比，可以用于指导肥胖的诊断。在此基础上完成本发明。
术语
如本文所用，术语“定向脂肪前体细胞”、“脂肪前体细胞”是指间充质干细胞在脂肪组织中开始失去多能性，成为能定向分化为脂肪细胞的前体细胞。
如本文所用，术语“基质储备细胞”是指脂肪基质细胞中分化特性不明确的一类细胞，它们可能存在一定成脂分化潜能但是该潜能低于脂肪前体细胞。
如本文所用，术语“脂肪基质细胞”是指脂肪组织中非血液细胞非内皮细胞的一类具有诸多间充质干细胞特性的细胞
如本文所用，术语“脂肪干细胞”是指能分化成为脂肪细胞的干细胞。
ICAM-1
ICAM-1(Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1，CD54)是一个广受关注的细胞表面粘附分子，它是一个I型跨膜蛋白，分子量依赖于其糖基化程度从80到114kDa不等，未糖基化的ICAM-1的分子量为60kDa(38)。ICAM-1的胞外部分包含453个氨基酸，主要为疏水氨基酸，形成五个免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)样结构域。胞外部分通过一个疏水的、包含24个氨基酸的跨膜区，连接一个很短的(包含28个氨基酸)胞质区尾巴。它的胞质区尾巴缺乏经典的信号传递模式(signaling motif)，但是有一个酪氨酸残基，可能在其信号传递中发挥重要作用。ICAM-1的基因序列包含7个外显子，外显子1编码信号肽，外显子2-6分别编码五个Ig结构域中的一个，外显子7编码跨膜区和胞质区尾巴。
ICAM-1的配体包括白细胞上的β2整合素LFA-1(CD11a/CD18)和Mac-1(CD11b/CD18)，纤维蛋白原(fibrinogen)，以及鼻病毒(rhinoviruses)。
ICAM-1在固有免疫和获得性免疫应答中都发挥重要作用。它介导白细胞穿越血管壁进入炎症部位，还调节抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APCs)和T细胞的相互作用，参与免疫突触的形成(immunological synapse formation)。ICAM-1能由外向内传递信号。ICAM-1的胞质区尾巴只有28个氨基酸长，且缺少已知的激酶活性和能够招募下游信号分子的蛋白相互作用结构域。但是它有很多带正电荷的氨基酸以及一个酪氨酸残基(Y512)。目前，在不同的细胞中发现了许多信号分子和接头蛋白和ICAM-1通路相关联特别是肌动蛋白-细胞骨架的相关分子，包括α-actinin，ERM蛋白，cortactin，和β-tubulin。在B细胞里，ICAM-1交联能激活Src家族的激酶，如p53/p56Lyn。ICAM-1的信号通路里一个非常重要的分子是小GTP酶Rho，G蛋白的Ras超家族中的一员，Rho和下游的Rho相关蛋白激酶(Rho associated kinase,ROCK)在调节细胞骨架重排，维持细胞形态中发挥重要作用。通过抗体交联(cross-linking)或同单核细胞共培养会诱导ICAM-1的聚簇，同时有ERM蛋白的共定位和张力纤维的组装。这个过程需要RhoA的激活，而且ICAM-1胞质区尾巴在这个过程中发挥重要作用：缺失胞质区尾巴的ICAM-1的聚簇不能激活Rho蛋白。Rho的激活和失活受到许多因子的严格调控，包括鸟苷酸转换因子(guanine exchange factors，GEFs)，GTP酶激活蛋白(GTPaseactivating proteins，GAPs)和鸟苷酸解离抑制因子(Guaninenucleotide dissociation Inhibitor,GDI)。ICAM-1激活Rho的具体机制尚不清楚，但是ERM蛋白以及Rho-GDI可能在其中发挥重要作用。在内皮细胞上，ICAM-1结合白细胞上的LFA-1或Mac-1，激活下游的Rho和ROCK，引起细胞骨架重排和形态改变，从而介导白细胞穿越血管，进入炎症组织。
分选获得的ICAMI-1阳性脂肪基质细胞可以用于医疗美容，比如脂肪组织的重塑。
ICAM-1抑制剂和促进剂
本发明提供了ICAM-1抑制剂在促进脂肪干细胞向脂肪细胞的分化中的应用，以及ICAM-1或其促进剂在抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化中的应用。其中，所述的ICAM-1抑制剂特异性抑制ICAM-1的表达或活性，所述的ICAM-1促进剂特异性促进ICAM-1的表达或活性。
基于上述应用，本发明还提供了一种体外非治疗性的制备脂肪细胞的方法，所述方法包括步骤：
(a)提供一ICAM-1阳性的脂肪基质细胞；
(b)在适合脂肪细胞分化的条件下，培养所述的脂肪基质细胞，从而获得包含分化的脂肪细胞的细胞群体；和
(c)分离所述细胞群体中的脂肪细胞。
RNA干扰(RNAi)
在本发明中，一类有效的ICAM-1抑制剂是干扰RNA。
如本文所用，术语“RNA干扰(RNA interference，RNAi)”是指：一些小的双链RNA可以高效、特异地阻断体内特定基因的表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，其也称为RNA干预或者RNA干涉。RNA干扰是高度特异的在mRNA水平上的基因沉默机制。
如本文所用，术语“小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)”是指一种短片段双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径(RNA interference pathway)。
在本发明中，干扰RNA包括siRNA、shRNA以及相应的构建物。
一种典型的构建物为双链，并且其正链或负链含有式I所示的结构：
Seq正向-X-Seq反向式I
式中，
Seq正向为ICAM-1基因或片段的核苷酸序列；
Seq反向为与Seq正向基本上互补的核苷酸序列；
X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补。
在本发明的一个优选例中，Seq正向、Seq反向的长度为19-30bp，较佳地为20-25bp。
在本发明中，一种典型的shRNA如式II所示，
式中，
Seq’正向为Seq正向序列对应的RNA序列或序列片段；
Seq’反向为与Seq’正向基本上互补的序列；
X’为无；或为位于Seq’正向和Seq’反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq’正向和Seq’反向不互补，
||表示在Seq正向和Seq反向之间形成的氢键。
在另一优选例中，所述的间隔序列X的长度为3-30bp，较佳地为4-20bp。
其中，Seq正向序列所针对的靶基因包括(但并不限于)：Beclin-1、LC3B、ATG5、ATG12、或其组合。
组合物和施用方法
本发明还提供了一种含有ICAM-1抑制剂或促进剂作为活性成分的用于促进或抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化的组合物。所述的组合物包括(但并不限于)：药物组合物、食品组合物、膳食补充剂、饮料组合物等。
在本发明中，ICAM-1抑制剂可直接用于医疗美容，例如，用于脂肪细胞的重塑。在使用本发明ICAM-1抑制剂时，还可同时使用其他组分，如与脂肪干细胞共同使用。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明ICAM-1抑制剂或促进剂以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、粉剂、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。本发明的药物组合也可以被制成粉剂用于雾化吸入。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明ICAM-1抑制剂还可与其他治疗剂一起使用。
对于本发明的药物组合物，可通过常规的方式施用于所需的对象(如人和非人哺乳动物)。代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、注射、雾化吸入等。
使用药物组合物时，是将安全有效量的ICAM-1抑制剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
检测试剂
本发明的检测试剂包括蛋白芯片、核酸芯片、或其组合。
在另一优选例中，本发明的检测试剂还包括ICAM-1特异性抗体。
蛋白芯片是一种高通量监测系统，通过靶分子和捕捉分子相互作用来监测蛋白分子之间的相互作用。捕获分子一般都预固定在芯片表面，由于抗体的高度特异性和与抗原强结合特性所以被广泛的用做捕获分子。对于研究蛋白芯片的研究在芯片表面有效固定抗体是非常关键的，特别是在固定抗体一致性方面非常关键对于增强蛋白芯片的灵敏度。G蛋白是一种抗体结合蛋白，他特意结合抗体FC片段，因此已被广泛的用于固定不同类型的抗体。本发明的检测ICAM-1的蛋白芯片可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。
核酸芯片，又名DNA芯片、基因芯片(gene chip)或基因微阵列(microarray)，指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。换言之，基因芯片是通过微加工技术，将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段(基因探针)有规律地排列固定于2cm2的硅片、玻片等支持物上，构成一个二维的DNA探针阵列，与电子计算机上的电子芯片十分相似所以被称为基因芯片。
本发明涉及对人ICAM-1具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人ICAM-1基因产物或片段。较佳地，指那些能与人ICAM-1基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人ICAM-1蛋白的分子，也包括那些并不影响人ICAM-1蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的人ICAM-1基因产物结合的抗体。
本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。
本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人ICAM-1基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人ICAM-1蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人,Nature 256；495,1975；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：511,1976；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：292,1976；Hammerling等人,In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas,Elsevier,N.Y.,1981)。本发明的抗体包括能阻断人ICAM-1蛋白功能的抗体以及不影响人ICAM-1蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人ICAM-1基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人ICAM-1基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。
检测方法和检测试剂盒
本发明提供了利用ICAM-1及其检测试剂的检测方法和检测试剂盒。
具体地，本发明提供了一试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有ICAM-1或其检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险。
本发明还提供了一种判断测试对象发生肥胖的风险的方法，包括步骤：
(a)提供测试对象的样本；
(b)测定所述样本中ICAM-1+细胞的比例为A1；
(c)将步骤(b)与正常人群样本的ICAM-1+细胞的比例A0相比较，若A1显著高于A0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
在另一优选例中，所述方法还包括测定样本中FABP4+细胞比例B1，并将B1与正常人群的FABP4+细胞比例B0相比较，若B1显著低于B0，则说明测试对象发生肥胖的风险高。
本发明的主要优点包括：
(a)本发明发现ICAM-1+脂肪干细胞具有自发性成脂分化的能力，在体外和体内实验中均可以分化为脂肪细胞，参与脂肪组织发育和重塑。
(b)本发明发现ICAM-1+脂肪干细胞的数量与肥胖脂肪组织增大和增多呈正比，可以用于指导肥胖的诊断。
(c)本发明发现ICAM-1在人脂肪前体细胞的体内成脂分化中具有负调节作用，ICAM1在人脂肪前体细胞中的表达水平随成脂分化逐渐降低。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
通用材料和方法
ICAM-1-/-小鼠(B6.129S4-Icam1tm1Jcgr/J)购自Jackson Laboratory(BarHarbor,ME,USA)。Fabp4-Cre(B6.Cg-Tg(Fabp4-cre)1Rev/JNju)小鼠，mTmG(B6.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomato,-EGFP)Luo/JNju)小鼠购自南京模式动物研究所。Icam1-CreERT2knockin小鼠由南方模式生物中心构建，采用Cas9技术将CreERT2表达序列直接插入Icam1基因的起始密码子ATG处。
Tamoxifen诱导体内细胞谱系示踪
出生后Icam-1-CreRET2；mTmG小鼠从P1到P3，连续3天腹腔注射200μg/miceTamoxifen。Tamoxifen用玉米油配制为20mg/ml的母液。待小鼠4-6周时，实施安乐死，分析脂肪组织，用于检测EGFP+的脂肪细胞。
小鼠体脂比检测
高脂诱导的肥胖小鼠用Body Composition Analyzer进行检测脂肪组织和其他“瘦”组织，每只小鼠连续测2-3次数据，取均值。
脂肪基质细胞培养
将分选得到的CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+脂肪基质细胞，以及CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1+和CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1-等组分单独或混合用添加了10％FBS的DMEM低糖培养基培养。在一些实验中，直接用添加了10％FBS的DMEM低糖培养基培养贴壁的脂肪单个核细胞，通过换液和传代去除免疫细胞和血管内皮细胞，获得单纯的脂肪基质细胞。
诱导基质细胞成脂分化
配制分化培养基，在10％FBS的DMEM高糖培养基中添加0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)，50μM吲哚美辛(indomethacin)，10μg/ml胰岛素和0.5μM地塞米松(dexamethasone)。当脂肪基质细胞生长至100％汇合后，更换分化培养基，每两天换液，直至分化完成，约需5天左右。
实施例1
表达ICAM-1的脂肪基质细胞是潜在的脂肪干细胞
通过分析富含脂肪干细胞的脂肪组织中的非内皮细胞和非白细胞(CD31-CD45-细胞)的细胞特征，发现CD31-CD45-的基质细胞大部分为CD34+和CD29+，同时也是PDGFR-α+Sca-1+(图1A)，后者是间充质基质细胞(mesenchymal stromal cells，MSCs)的两个特征性表面分子。
进而通过流式细胞术分析脂肪基质细胞，发现CD45-CD31-的基质细胞大部分为Sca-1+PDGFR-α+，这种细胞群都可以分为ICAM-1+和ICAM-1-两群，我们发现这群CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+细胞在腹股沟脂肪组织(皮下脂肪组织)中有50％左右为ICAM-1阳性，在附睾脂肪组织(内脏脂肪组织)中有80％左右为ICAM-1阳性(图1B)。
通过流式细胞术分选，获得了CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1+以及CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1-两群基质细胞并进行基因分析，发现脂肪前体细胞的特征分子Pdgfrb、Zfp423及成脂分化的相关分子Pparg、Cebpa和Fabp4在ICAM-1+细胞中高表达(图1C)。该结果指出脂肪前体细胞主要存在于ICAM-1阳性的基质细胞中，ICAM-1+脂肪基质细胞(CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+)富含脂肪干细胞和脂肪前体细胞。
为了进一步检验ICAM-1+脂肪干细胞是否具有自发性成脂分化的潜能，分选ICAM-1+脂肪基质细胞(CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+)和ICAM-1-脂肪基质细胞(CD31-CD45-Sca-1+PDGFR-α+)，分析其自发成脂分化能力。考虑到自发成脂分化可能是不同细胞群通过旁分泌等作用相互影响的结果，将野生型的ICAM-1-基质细胞和EGFP小鼠的ICAM-1+基质细胞混合培养，这样既可以追踪不同细胞群而又不影响其相互作用。
结果显示，在细胞最初贴壁生长时期，两种来源的细胞均呈现成纤维细胞形态；在后期培养阶段(第8天)，自发成脂分化发生，部分细胞内有脂滴累积，有趣的是，绝大多数自发成脂分化的细胞为EGFP+，说明ICAM-1+脂肪基质细胞可能是脂肪干细胞(图1D)。
与此同时，我们也进行了反向的混合培养——将野生型的ICAM-1+细胞和EGFP的ICAM-1-细胞混合培养，发现自发成脂分化的细胞均为ICAM-1+细胞。此外，将ICAM-1-脂肪基质细胞和ICAM-1+脂肪基质细胞分别单独培养，研究发现只有ICAM-1+细胞能够自发成脂分化。这些结果表明ICAM-1+脂肪基质细胞是具有定向成脂分化能力的脂肪干细胞。
实施例2
ICAM-1+脂肪干细胞的体内成脂分化
为了充分验证ICAM-1+脂肪基质细胞是否为脂肪干细胞，即是否能够在体内生成成熟的脂肪细胞，制作了Icam1-CreERT2knock-in小鼠：采用CRISPR/Cas9技术，通过同源重组的方式，在ICAM-1基因ATG位点定点敲入CreERT2表达框。在这种Icam1-CreERT2knock-in小鼠中，表达ICAM-1的细胞都会表达CreERT2，CreERT2本身不具有重组酶活性，需要结合他莫昔芬(Tamoxifen)后才能激活其重组酶活性。mTmG示踪报告小鼠在Cre重组酶不存在的情况下，全身的细胞和组织都表达细胞膜定位的红色荧光蛋白——tdTomato；当Cre重组酶存在时，通过重组删除tdTomato表达序列，开始表达下游的细胞膜定位的EGFP，其后代的细胞也会只会表达细胞膜定位的EGFP。因此，我们将Icam1-CreERT2knock-in小鼠与示踪报告小鼠mTmG进行杂交，并用Tamoxifen处理新生小鼠，以激活重组酶的活性。ICAM-1+细胞里激活的CreERT2重组酶将Rosa26基因座上两个loxP位点间的tdTomato表达序列剪切掉，起始后面序列上EGFP的表达，这样ICAM-1+细胞及其衍生的后代细胞都会表达EGFP(图2A)。
结果显示，当用Tamoxifen处理新生小鼠后，可以在其成年后的皮下脂肪组织和内脏脂肪组织中检测到EGFP脂肪细胞(图2B)。更重要的是，给高脂饲料诱导肥胖的小鼠在早期进行Tamoxifen处理，在肥胖后期也可以观测到EGFP的脂肪细胞(Fig.2C)。由于脂肪细胞不表达ICAM-1，上述结果说明ICAM-1+脂肪干细胞通过分化为成熟脂肪细胞参与脂肪发育以及肥胖过程。
实施例3
肥胖情况下ICAM-1+脂肪干细胞的成脂分化
接下来探讨这群ICAM-1+脂肪前体细胞与肥胖的相关性，为此，引入了另外一个谱系示踪系统。FABP4是脂肪干细胞转变为脂肪细胞时表达的一个特征分子，我们将Fabp4-Cre小鼠与mTmG示踪小鼠进行杂交，获得的子代小鼠中，当脂肪前体细胞的成脂分化进行到Fabp4表达的早期脂肪细胞阶段，就会表达EGFP(Fig.3A)。我们将Fabp4-Cre；mTmG小鼠分别用普通饲料和高脂饲料饲喂，用流式细胞术分析腹股沟和附睾脂肪组织的基质细胞(CD45-CD31-Sca-1+)中表达EGFP+的早期分化脂肪细胞。
研究发现在普通饲料饲养情况下，与同窝的Fabp4-Cre小鼠相比，Fabp4-Cre；mTmG成年小鼠的脂肪组织中仅有少量的EGFP+脂肪前体细胞，且主要为CD31-CD45-Sca-1+ICAM-1+(图3B)，说明其来自ICAM-1+脂肪干细胞，仍保持脂肪干细胞的表面分子表型，ICAM-1+脂肪干细胞参与脂肪细胞的正常更替。重要的是，当用高脂饲料对这些小鼠进行肥胖诱导时，在两种脂肪组织中均有大量的表达EGFP的早期脂肪细胞，且仍保持ICAM-1+脂肪干细胞的表面分子特征(CD31-CD45-Sca-1+ICAM-1+)(图3C-D)，这说明肥胖诱导脂肪细胞的新生，这些新分化来的脂肪细胞主要来自ICAM-1+脂肪干细胞。同时我们利用免疫荧光技术分析，在肥胖的脂肪组织中发现了这些EGFP+ICAM-1+的早期脂肪细胞，它们都位于血管周围，与ICAM-1+脂肪干细胞有相同的定位(图3E)。
为了进一步鉴定这些ICAM-1+EGFP+细胞，我们从肥胖小鼠中分选了成熟脂肪细胞、ICAM-1+EGFP+、ICAM-1+EGFP-和ICAM-1-细胞亚群进行RNA-seq分析。我们发现ICAM-1+EGFP+亚群的基因表达谱和ICAM-1+EGFP-亚群非常类似，相关系数为0.98(图3F)。同其他亚群相比，ICAM-1+EGFP+细胞拥有同脂肪细胞相似的基因表达模式(图3F)，特别是关注于脂肪细胞特征信号通路的基因时(图3G)。在这些脂肪细胞特征基因表达上，脂肪细胞与ICAM-1+EGFP+的相关性最高，其次是ICAM-1+EGFP-细胞，与ICAM-1-的相关性最低。这些结果指出ICAM-1+EGFP+细胞是成脂分化的中间产物，来自ICAM-1+EGFP-脂肪干细胞。
实施例4
ICAM-1负向调节脂肪前体细胞的终末分化
基于上述研究，已经证明ICAM-1表达在脂肪干细胞及脂肪前体细胞上，在肥胖发生时进行成脂分化，然而成熟脂肪细胞不表达ICAM-1，并且ICAM-1的表达在成脂分化中呈逐渐下降。这一表达特征与脂肪前体细胞的特征基因Pref-1、GATA2/GATA3很类似，这些基因具有抵抗成脂分化，维持脂肪前体细胞未分化状态的功能，据此，我们推测ICAM-1可以发挥同样的调节作用。研究发现，与野生型小鼠相比较，ICAM-1-/-小鼠无论在正常饮食还是高脂饮食条件下体重和脂肪组织重量均显著增加，并且脂肪组织的增加不依赖于脂肪细胞体积的增大(Fig.4A-D)。由于ICAM-1表达在免疫细胞上，为了排除免疫细胞ICAM-1缺失对肥胖的影响，我们进行了骨髓置换实验，发现即使将ICAM-1-/-小鼠的免疫细胞替换为野生型小鼠免疫细胞，它们仍更易发生肥胖(图4E-F)。由于脂肪的增生包括细胞增大和增加两种模式，我们通过分析发现ICAM-1-/-小鼠的脂肪细胞大小并未显著增加(图4G-H)，表明脂肪细胞数量增加在其肥胖中发挥了重要作用，这是脂肪干细胞过度分化的一个结果。
为了确定脂肪细胞数量增加对肥胖发生的贡献，我们将ICAM-1-/-小鼠和Fabp4-Cre；mTmG小鼠进行杂交，发现与ICAM-1+/+；Fabp4-Cre；mTmG同窝小鼠相比，ICAM-1-/-；Fabp4-Cre；mTmG小鼠的EGFP+的成脂分化中间态细胞显著增加(图4I-K)，说明ICAM-1缺失能促进体内的脂肪干细胞的成脂分化过程。同野生型脂肪干细胞相比，ICAM-1-/-的原代脂肪前干细胞分化更快(图4H)，成脂分化基因(包括Pparg、Cebpa、Fabp4和Plin1)显著升高(图5A-D)。因此，ICAM-1负向调节脂肪干细胞的终末分化。
实施例5
ICAM-1通过Rho和ROCK维持脂肪干细胞的未分化状态
接着我们深入探讨ICAM-1控制成脂分化的分子机制，ICAM-1的下游信号中非常重要的一个组分是小GTP酶Rho。我们发现ICAM-1-/-脂肪前体细胞的激活形式的Rho(Rho-GTP)要明显少于野生型前体细胞，无活性的Rho-GDP要高于野生型前体细胞(图6A)。激活的Rho能通过ROCK调节细胞内张力纤维的形成。通过对F-actin进行荧光免疫分析，我们发现在野生型前体细胞有大量的结构紧密的张力纤维的存在，并且F-actin的纤维集束和ICAM-1聚簇存在共定位；而在ICAM-1-/-的前体细胞中，张力纤维的密度要比野生型基质细胞显著降低，且结构松散，纤维聚束很少(图6B)。这说明ICAM-1能够在脂肪前体细胞中激活Rho和ROCK，在其张力纤维的组装和细胞骨架的构建中发挥重要作用。
Rho和ROCK能够通过细胞骨架依赖或胰岛素信号依赖的方式负向调节成脂分化，同时我们的RNA-seq数据也支持Rho GTPase在脂肪分化中的作用。为了检验Rho和ROCK是否参与了ICAM-1对脂肪干细胞成脂分化的抑制作用，我们用ROCK的抑制剂Y-27632来分别处理脂肪干细胞。我们发现与DMSO处理组相比，Y-27623能够显著加速野生型脂肪干细胞的成脂分化，而对ICAM-1-/-脂肪干细胞的成脂分化作用不明显(图6C)。同时我们分析了成熟脂肪细胞特征蛋白Perilipin A的表达水平，发现Y-27632能够在野生型脂肪干细胞中显著增加该蛋白的表达水平，在ICAM-1-/-脂肪干细胞中作用不明显(图6C)。并且，抑制ROCK能显著增加野生型小鼠脂肪干细胞中成脂分化相关蛋白和基因的表达，包括Perilipin A、Pparg和Fabp4，而在ICAM-1-/-小鼠来源脂肪干细胞中的作用不明显(图6D-F)，所以，ICAM-1通过Rho-ROCK通路抑制脂肪干细胞的成脂分化。
为了验证Rho GTPase活性能否逆转ICAM-1缺失所导致的过度成脂分化，我们采用了Rho激动剂Rho activator II(RA2)，它能组成性激活RhoGTPase。我们发现，RA2显著抑制ICAM-1-/-脂肪干细胞的成脂分化能力，而对野生型脂肪干细胞作用不明显(图6G)。于此相符的是，在ICAM-1-/-前体细胞中激活Rho GTPase导致成脂分化基因的广泛降低，包括Pparg,Cebpa,Fabp4,以及Plin1，而在野生型细胞中只有Pparg和Fabp4显著因Rho GTPase激活而改变(图6H-K)。重要的是野生型和ICAM-1-/-细胞的成脂分化基因的表达差异被RhoGTPase激活所消除(图6H-K)。这些结果证实了ICAM-1通过Rho GTPase来调节成脂分化。
为了检验ICAM-1是否在体内通过Rho GTPase来调节成脂分化，我们把RA2局部注射到小鼠的右侧腹股沟脂肪垫上，通过与左侧脂肪垫对比来展示Rho GTPase局部激活的效果。通过对高脂饲料饲喂小鼠进行10周的RA处理，我们发现ICAM-1-/-小鼠的过度成脂分化减弱了，两侧腹股沟脂肪垫呈现不对称(图6L)。这一不对称在RA2处理的WT小鼠以及PBS处理的小鼠中观察不到(图6L)。我们收集这些脂肪组织进行称重，发现RA2能显著在ICAM-1-/-而不是WT小鼠中减轻脂肪重量(图6M-N)。
实施例6
ICAM-1负向调节人的脂肪前体细胞分化
首先分析了ICAM-1在人脂肪组织中的表达含量。目前，尚未有公认的人脂肪前体细胞的特征分子。我们发现ICAM-1在人的CD31-CD45-的脂肪基质细胞中广泛表达(图7A)。这些ICAM-1+细胞也和小鼠脂肪组织一样，主要位于血管周围(图7B)。为了检验ICAM-1对人脂肪干细胞的调节作用，我们分离了人的原代脂肪基质细胞进行成脂分化诱导。我们发现与小鼠一致，ICAM1在人脂肪前体细胞的表达水平随成脂分化逐渐降低(图7C)。当用siRNA敲降ICAM1的表达时(图7D)，人脂肪前体细胞成脂分化显著增强(图7E)，包括PPARG、CEBPA和FABP4在内的成脂基因表达显著升高(图7F)，表明ICAM-1对人脂肪干细胞的成脂分化具有负调控作用。值得注意的是，ICAM-1的敲降导致人脂肪干细胞的Rho GTPase活性降低(图7G)。当分化过程中用RA2处理人脂肪干细胞，ICAM-1敲降细胞的成脂分化增强被消除(图7H-J)。因此，ICAM-1同样具有负调节人的脂肪干细胞终末分化的能力。
为了检验ICAM-1在人脂肪前体细胞上的生理作用，我们从进行整形手术的患者采集了人脂肪组织样本，采用流式细胞术分析ICAM-1和FABP4在CD31-CD45-脂肪基质细胞上的表达水平。ICAM-1的表达水平与受试者的体脂比(BMI)显著相关(图7K)，这一结果与小鼠的观察结果类似。我们利用线性回归分析来检验ICAM-1表达水平与FABP4+脂肪前体细胞比例的相关性。鉴于BMI和ICAM-1的表达强相关，我们引入BMI和ICAM-1MFI的交互作用项得到修正的线性模型。在此基础上，我们发现FABP4+脂肪前体细胞的比例与ICAM-1表达水平显著负相关(图7K-L)，表明ICAM-1在人脂肪前体细胞的体内成脂分化中具有负调节作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (11)

1.一种ICAM-1抑制剂的用途，其特征在于，用于制备一种制剂或组合物，所述的制剂或组合物用于促进脂肪干细胞向脂肪细胞的分化；
较佳地，所述的脂肪干细胞为ICAM-1阳性的脂肪基质细胞。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的脂肪干细胞表达成脂分化的调控基因，其中，所述的调控基因选自下组：Pparg、Cebpa、Cebpb、Cebpg、Gata2、Gata3、Irs1、Pparg、Cebpa和Fabp4、或其组合。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的制剂或组合物还用于脂肪组织的重塑。
4.一种ICAM-1或其促进剂的用途，其特征在于，用于制备一种制剂或组合物，所述的制剂或组合物用于抑制脂肪干细胞向脂肪细胞的分化。
5.一种体外非治疗性的制备脂肪细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(a)提供一ICAM-1阳性的脂肪基质细胞；
(b)在适合脂肪细胞分化的条件下，培养所述的脂肪基质细胞，从而获得包含分化的脂肪细胞的细胞群体；和
(c)分离所述细胞群体中的脂肪细胞。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的脂肪基质细胞为CD45-CD31-Sca-1+PDGFR-α+ICAM-1+细胞。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(b)和步骤(c)中，检测ICAM-1的表达水平，从而判断细胞群体中脂肪基质细胞向脂肪细胞的分化程度。
8.一种体外非治疗性的抑制脂肪干细胞向脂肪细胞分化的方法，其特征在于，所述方法包括维持所述脂肪干细胞的ICAM-1表达水平。
9.一种ICAM-1或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备检测试剂盒，所述试剂盒用于(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险。
10.一种诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有ICAM-1或其检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于(a)检测脂肪干细胞，和/或(b)判断测试对象发生肥胖的风险。
11.一种基质细胞的用途，其特征在于，所述的基质细胞是分离自脂肪组织且ICAM-1阳性的基质细胞，其中，所述的基质细胞用于制备一细胞制剂，所述细胞制剂用于脂肪组织的重塑。
CN201810085799.7A 2018-01-29 2018-01-29 Icam-1标记及其应用 Pending CN110093311A (zh)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810085799.7A CN110093311A (zh) 2018-01-29 2018-01-29 Icam-1标记及其应用
KR1020207024785A KR20200121316A (ko) 2018-01-29 2019-01-29 Icam-1 마커 및 이의 응용
US16/965,955 US20210038688A1 (en) 2018-01-29 2019-01-29 Icam-1 marker and application thereof
JP2020562822A JP2021511837A (ja) 2018-01-29 2019-01-29 Ｉｃａｍ−１マーカーおよびその応用
PCT/CN2019/073725 WO2019144971A1 (zh) 2018-01-29 2019-01-29 Icam-1标记及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810085799.7A CN110093311A (zh) 2018-01-29 2018-01-29 Icam-1标记及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110093311A true CN110093311A (zh) 2019-08-06

Family

ID=67394843

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810085799.7A Pending CN110093311A (zh) 2018-01-29 2018-01-29 Icam-1标记及其应用

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20210038688A1 (zh)
JP (1) JP2021511837A (zh)
KR (1) KR20200121316A (zh)
CN (1) CN110093311A (zh)
WO (1) WO2019144971A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL307711A (en) * 2021-04-28 2023-12-01 Upside Foods Inc Creating cell-based products for human consumption

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060040392A1 (en) * 2004-04-23 2006-02-23 Collins Daniel P Multi-lineage progenitor cells
CN101871942A (zh) * 2010-06-02 2010-10-27 成都创宜生物科技有限公司 以icam-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法
CN103103213A (zh) * 2013-01-29 2013-05-15 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种抑制间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法
CN103313726A (zh) * 2010-09-03 2013-09-18 斯坦申特雷克斯公司 细胞亚群的鉴定和富集
CN106978396A (zh) * 2017-05-26 2017-07-25 黎洪棉 一种脂肪间充质干细胞克隆的扩增培养方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107254435A (zh) * 2017-06-08 2017-10-17 黎洪棉 一种血管化组织工程脂肪瓣的体内构建方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060040392A1 (en) * 2004-04-23 2006-02-23 Collins Daniel P Multi-lineage progenitor cells
CN101871942A (zh) * 2010-06-02 2010-10-27 成都创宜生物科技有限公司 以icam-1为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法
CN103313726A (zh) * 2010-09-03 2013-09-18 斯坦申特雷克斯公司 细胞亚群的鉴定和富集
CN103103213A (zh) * 2013-01-29 2013-05-15 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 一种抑制间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法
CN106978396A (zh) * 2017-05-26 2017-07-25 黎洪棉 一种脂肪间充质干细胞克隆的扩增培养方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DE-QUAN LI ET AL.: ""CD54+ rabbit adipose-derived stem cells overexpressing HIF-1α facilitate vascularized fat flap regeneration"", 《ONCOTARGET》 *
ELENA R. ANDREEVA ET AL.: ""IFN-gamma priming of adipose-derived stromal cells at "physiological" hypoxia"", 《JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY》 *
吴国豪: "《临床营养治疗理论与实践》", 31 July 2015, 上海科学技术出版社 *
李德全 等: ""CD54+和CD54-脂肪干细胞的成脂分化能力"", 《中国组织工程研究》 *
杨广礼: "《动物脂肪性状的分子调控机制》", 30 September 2017, 中国环境出版社 *
章静波 等: "《干细胞》", 28 February 2003, 中国协和医科大学出版社 *
罗荣城 等: "《肿瘤综合诊疗新进展》", 31 August 2008, 人民军医出版社 *
陈继德 等: ""细胞间黏附分子1通过活化MAPK通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化"", 《中国实验血液学杂志》 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20200121316A (ko) 2020-10-23
WO2019144971A1 (zh) 2019-08-01
US20210038688A1 (en) 2021-02-11
JP2021511837A (ja) 2021-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gwack et al. Hair loss and defective T-and B-cell function in mice lacking ORAI1
US8071377B2 (en) Methods for immortalizing cells
Pelegri et al. A mutation in the zebrafish maternal-effect gene nebel affects furrow formation and vasa RNA localization
US20060234271A1 (en) Methods for the diagnosis and treatment of metastatic prostate tumors
CN1671742A (zh) Hmgb1在治疗组织损伤和/或促进组织修复中的用途
JP5652809B2 (ja) 癌組織由来細胞塊およびその調製法
Nowak et al. Ubc9 regulates mitosis and cell survival during zebrafish development
JPH09509574A (ja) 脊索によって発現されるヘッジホッグ、Ｖｈｈ−１、の脊椎動物相同体をコードするＤＮＡ、及びこれらの使用
JP5774496B2 (ja) 癌組織由来細胞塊または癌細胞凝集塊の培養方法、評価方法および保存方法
CN109468380A (zh) Il1r2在乳腺癌预后评估与靶向治疗中的应用
CN110093311A (zh) Icam-1标记及其应用
Good et al. TagA, a putative serine protease/ABC transporter of Dictyostelium that is required for cell fate determination at the onset of development
CN110430899A (zh) 光感受灵敏度的抑制或减弱剂
CN110237257A (zh) Ube3a泛素化PP2A激活因子PTPA在治疗天使综合症和孤独症中的应用
JP2006525784A (ja) 膜貫通型タンパク質ａｍｉｇｏおよびその用途
CN101835799A (zh) 超敏反应调节剂
US20050120392A1 (en) Transgenic zebrafish models for thrombosis
Anderson et al. Cytopenia induction by 5-fluorouracil identifies thrombopoietic mutants in sensitized ENU mutagenesis screens
CN101396564A (zh) 调节精子获能的蛋白及其用途
EP1553414A1 (en) Methods for the diagnosis and treatment of metastatic prostate tumors
Chan et al. Correction of aberrant axon growth in the developing mouse olfactory bulb
Linehan et al. Follow that cell: Leukocyte migration in L‐plastin mutant zebrafish
JP2007505825A (ja) 増殖性疾患の診断および治療における、細胞周期制御または細胞周期進行に影響を与える真核生物遺伝子の利用
JP2002523044A (ja) 血液を形成する造血幹細胞を調節する遺伝子およびその使用
Barraco A SMO inhibitor drug reduces the progenitor cell's maintenance in the Drosophila hematopoietic organ: a novel model to study Chronic Myelogenous Leukemia relapse

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
CB02 Change of applicant information

Address after: 200031 Yueyang Road, Shanghai, No. 319, No.

Applicant after: Shanghai Institute of nutrition and health, Chinese Academy of Sciences

Address before: 200031 Yueyang Road, Shanghai, No. 319, No.

Applicant before: SHANGHAI INSTITUTES FOR BIOLOGICAL SCIENCES, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

CB02 Change of applicant information
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination