CN110090212B - 过渡金属螯合的叶绿素衍生物改善肠系膜微循环障碍的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，涉及过渡金属螯合的叶绿素衍生物改善肠系膜微循环障碍的用途，特别是过渡金属螯合的叶绿素衍生物在制备用于治疗和/或预防肠系膜微循环障碍的药物中的用途。本发明所述的过渡金属螯合的叶绿素衍生物，例如叶绿素提取物及蚕砂提取物等对改善肠系膜微循环障碍具有较好疗效。所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物还可通过在多个环节中的作用，综合预防和改善肠系膜微循环障碍。并且，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物的毒副作用得到改善，适用人群广泛且安全，可应用于治疗儿童、老年人、孕妇和哺乳期妇女。此外，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物的制备方法及应用于制备药物时的工艺较为简便，成本得到有效控制。

Description

过渡金属螯合的叶绿素衍生物改善肠系膜微循环障碍的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及过渡金属螯合的叶绿素衍生物改善肠系膜微循环障碍的用途。

背景技术

随着人们生活水平的提高、饮食结构的改善、生活方式的变化以及遗传基因等因素的影响，微循环障碍的发病率呈明显上升趋势，患病率高、复发率高是微循环障碍疾病的主要特点。微循环的基本功能是进行新陈代谢及物质交换，是血液循环的重要组成部分。当出现肠系膜微循环障碍时，肠吸收功能不好，发生营养障碍，面黄肌瘦、腹泻或便秘，重者发生十二指肠球部溃疡等病症。微循环对各种致病因素，如物理的、化学的以及生物的刺激都十分敏感。在致病因素作用下，可能出现局部或全身性微循环的病理变化。

在改善微循环功能方面，中西医作了很多研究，但未能显著的改善微循环障碍，开发有切实疗效的药物仍然是目前研究的方向。目前常用的改善微循环障碍药物主要是通过保护血管、抗凝血、溶栓去纤、抗血小板、扩张血管、降低血粘度和活血化瘀改善微循环障碍。

但是，目前改善肠系膜微循环障碍的药物还存在诸多问题或缺点。首先，现有药物针对特定肠系膜部位的治疗疗效有待提高。进一步地，现有药物不仅毒副作用明显，容易引起胃部不适、恶心、胃灼热、食欲下降、皮疹和引发出血等不良反应和副作用，而且使用人群受限，不适合或不建议儿童、老年人、孕妇、哺乳期妇女服用。此外，现有药物往往价格高昂。

因此，亟需开发新的可以有效预防和改善多肠系膜微循环障碍，药效得到改善，和/或可避免上述缺陷的药物。

发明内容

为了改善现有技术中的上述缺陷，本发明提供一种过渡金属螯合的叶绿素衍生物在制备用于治疗和/或预防肠系膜微循环障碍的药物的用途。

根据本发明，所述微循环障碍可以是高分子右旋糖酐导致的肠系膜微循环障碍，例如急性微循环障碍或慢性微循环障碍，特别是肠系膜急性微循环障碍。

根据本发明，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物可以商购获得或者提取自含有叶绿素和/或其衍生物的各种生物材料，包括但不限于蚕砂、竹叶、杜仲、雏菊、大麦苗、菠菜、空心菜、芹菜、莴笋、甘蓝、油菜、豆芽菜苗、西兰花叶、三叶草、雪松、绿藻、青草、仙人掌、芦荟、甘蔗叶、猕猴桃叶、桃叶、大叶黄杨、绞股蓝叶、牡丹叶、紫丁香叶、乔木叶片(女贞)、海桐叶片、石楠、冬青叶片、宁箭荷花叶片、桑叶等，优选蚕砂。

根据本发明，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物可以为叶绿素提取物，如蚕砂提取物。

根据本发明，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物可以包含过渡金属螯合的叶绿酸碱金属盐、过渡金属螯合的叶绿酸碱土金属盐中的一种或多种。其中，所述过渡金属可以选自铁、铜、锌、锰、钴、镍、铬等中的一种或多种。

作为实例，所述过渡金属螯合的叶绿酸碱金属盐可以选自铁叶绿酸钠、铜叶绿酸钠、锌叶绿酸钠、锰叶绿酸钠、钴叶绿酸钠、镍叶绿酸钠、铬叶绿酸钠、铁叶绿酸钾、铜叶绿酸钾、锌叶绿酸钾、锰叶绿酸钾、钴叶绿酸钾、镍叶绿酸钾、铬叶绿酸钾中的一种或多种。所述过渡金属螯合的叶绿酸碱土金属盐可以选自铁叶绿酸钙、铜叶绿酸钙、锌叶绿酸钙、锰叶绿酸钙、钴叶绿酸钙、镍叶绿酸钙、铬叶绿酸钙、铁叶绿酸镁、铜叶绿酸镁、锌叶绿酸镁、锰叶绿酸镁、钴叶绿酸镁、镍叶绿酸镁、铬叶绿酸镁中的一种或多种。

作为选择，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物也可以选自所述过渡金属螯合的叶绿酸碱金属盐、过渡金属螯合的叶绿酸碱土金属盐中的一种或多种。

优选地，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中，铜叶绿酸钠的重量百分比含量为5％以上，例如10％以上，如15％以上、17％以上、19％以上、23％以上、28％以上、30％以上、35％以上或37％以上。此时，作为实例，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中还可以包含其他叶绿素衍生物，其中所述其他叶绿素衍生物包含但不限于上述除铜叶绿酸钠之外的过渡金属螯合的叶绿酸碱金属盐，以及任选存在的额外的叶绿素衍生物。所述其他叶绿素衍生物的总重量百分比含量，以铜叶绿酸二钠(C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂)计，为15％以上，例如30％以上，如50％以上、55％以上、58％以上、60％以上、63％以上、65％以上或70％以上。

根据本发明的实施方案，所述额外的叶绿素衍生物可以包括但不限于选自下列的衍生物：叶绿酸钠、脱镁叶绿素酸a、焦脱镁叶绿酸a、二氢卟吩e6、二氢卟吩e4、二氢卟吩p6、二氢卟吩f、紫红素-18、叶绿卟啉等。

本发明还提供一种用于治疗和/或预防肠系膜微循环障碍的药物组合物，包含所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物。

对于本发明的过渡金属螯合的叶绿素衍生物，例如叶绿素提取物及蚕砂提取物的制备方法均没有特别限制。本领域技术人员可以理解，可以通过本领域已知的制备方法(例如提取、分离等)得到本发明的过渡金属螯合的叶绿素衍生物。

例如，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物，例如叶绿素提取物的制备方法包括提取、皂化、铜化和碱化。作为实例，所述制备方法可包括如下步骤：

(1)提取叶绿素；优选地，进一步对提取得到的提取物进行精制；

(2)皂化；优选地，进一步用有机溶剂洗涤皂化液；

(3)铜化；优选将步骤(2)得到的溶液pH值调至2.5-4，加入铜盐，加热，得铜代产物；

(4)碱化。优选取铜代产物用去离子水洗至无游离铜离子，加入有机溶剂使其溶解，再加入碱进行碱化。

在上述步骤(1)中，优选取含有叶绿素和/或其衍生物的各种生物材料(优选蚕砂)，用有机溶剂或有机溶剂与水的混合物提取，回收有机溶剂后得叶绿素。

优选地，有机溶剂可以为丙酮、乙醇、石油醚、正己烷、汽油(如120号汽油)、甲苯或其中两种或多种的混合物；进一步优选地，有机溶剂为丙酮、乙醇或其混合物；提取方法为回流、萃取、渗滤、微波或使用超微震动磨等。

在优选的实施方案中，通过用去离子水洗涤或者通过用大孔吸附树脂吸附进行精制；优选地，进行精制以用于去除非叶绿素类物质。

在上述步骤(2)中，优选将叶绿素用有机溶剂溶解，加入碱溶液使其皂化；其中，有机溶剂优选为汽油、丙酮或其混合物，汽油优选为120号汽油；碱溶液优选为NaOH水溶液或KOH水溶液，进一步优选地，调体系pH值为10-12，加热，分离，得到叶绿酸盐溶液。

优选地，加热使溶液保持微沸；皂化是为了去除类胡萝卜素。

在上述步骤(3)中，优选地，铜盐可以为硫酸铜、氯化铜或其混合物；

优选地，加热至65-75℃，恒温搅拌例如0.5-1.5h。

根据本发明，进行铜化以获得铜叶绿酸。

在上述步骤(4)中，优选地，有机溶剂可以为丙酮、乙醇或其混合物；

作为实例，所述碱可以是碱的水溶液或醇溶液，例如NaOH水溶液或NaOH乙醇溶液；优选地，所述碱化进行至不再有沉淀产生为止。

优选地，碱的水溶液或醇溶液中，碱的质量百分比浓度可以为25-35％。

根据本发明，优选地，进行碱化以获得铜叶绿酸钠。

根据本发明的实施方案，所述铜叶绿酸钠可通过申请号为201310571845.1的中国发明专利申请说明书第[0011]-[0146]段公开的方法制备。

本发明还提供所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物用于治疗和/或预防肠系膜微循环障碍的用途。

有益效果

申请人意外地发现，本发明所述的过渡金属螯合的叶绿素衍生物，例如叶绿素提取物及蚕砂提取物等对改善肠系膜微循环障碍具有较好疗效。并且，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物的毒副作用得到改善，适用人群广泛且安全，可应用于治疗儿童、老年人、孕妇和哺乳期妇女。此外，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物的制备方法及应用于制备药物时的工艺较为简便，成本得到有效控制。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的通式化合物及其制备方法和应用做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

1.试验材料

1.1药品与试剂

根据申请号为201310571845.1的中国发明专利申请说明书实施例1公开的方法，制备得到含铜叶绿酸钠的蚕砂提取物。该蚕砂提取物用纯水配制成浓度为16mg/ml(高剂量)、8mg/ml(中剂量)的溶液，每日新鲜配制。

右旋糖酐T250(分子量为25万)：规格：D-T250。购于汉邦环宇多糖生物科技(河源)有限公司。批号：D-15021。

氨基甲酸乙酯(乌来糖)：AR级，购于成都科龙化工试剂厂，批号：20160811。试验时用纯水配制成浓度为20％的溶液。

1.2试验动物与饲养

1.2.1试验动物新西兰兔，雌雄兼用，体重1.8～2.0kg，购置于成都达硕实验动物有限公司。生产许可证号：SCXK(川)2014-028。于恒温环境中进行适应性饲养，保持环境清洁，饮水进食不限，持续1周。

1.2.2饲料

名称：实验兔配合饲料(8011)；来源：成都达硕实验动物有限公司；执行标准：GB14924.3—2010；生产批号：20160821；营养成分符合实兔的配合饲料要求，营养成分和污染物质符合GB14924.1-2001和《实验动物饲养管理规程》要求。具体值(以每千克饲料计)为：粗蛋白，≥140g；粗纤维，100～150g；粗脂肪，≥30g；粗灰分，≤90g；水分，≤110g；钙︰磷，1.0～1.8︰0.6～1.2；赖氨酸，≥7g；蛋氨酸+胱氨酸，≥5g。

给予方法：将饲料放置于兔笼前面的饲养槽内，自由摄食。

1.2.3饮用水

名称：生活用自来水；质量要求符合《生活饮用水卫生标准》。

给水方式：饮用水瓶放置于兔笼前面专用位置，自由饮水。

1.3试验仪器

电子天平：BP221S型，由德国SARTORIUS生产。

激光多普勒PeriFlux 5000系统，由瑞典PERIMED生产。

2.实验模型和方法

2.1试验分组及给药

取雌雄各半新西兰兔18只随机分为3组，每组6只。分别为：阴性对照组、铜叶绿酸钠高剂量组(80mg/kg/d)和铜叶绿酸钠中剂量组(40mg/kg/d)。于造模前20d开始给铜叶绿酸钠高、中剂量组灌胃给药，给药体积为5ml/kg，每日一次，连续20d。

2.2急性微循环障碍模型建立

经兔耳缘静脉注射浓度为10％的右旋糖酐T250(分子量为25万单位)1ml/kg建立急性微循环障碍模型。具体操作为：耳缘静脉注射20％氨基甲酸乙酯5ml/kg进行麻醉，先用激光多普勒血流仪测量肠系膜的微循环灌注量(PU)、血细胞聚集程度(CMBC)以及运动血细胞的速率(V)，然后耳缘静脉注射右旋糖酐T250，给药30min后再用激光多普勒血流仪测量肠系膜的PU、CMBC、V。

2.3观察指标

将阴性对照组、铜叶绿酸钠高、中剂量组连续给药20d后，于最后一次给药后2h，分别于造模前和造模30min后测量肠系膜微循环变化情况(PU、CMBC、V)。计算造模前后微循环变化率(激光多普勒血流仪的PF5010-LDPM单元为测量局部组织微循环，且不同组织的不同部位微循环差异较为明显，为保证每次测量数据的客观性，我们用变化率来计算微循环的变化情况)。

2.4统计学方法

分析实验中计量资料的数据一般以“平均值±标准差

”表示。组间差异的显著性检验运用Prism5windows软件提供的非参数检验或单因素方差分析方法；首先对各组数据进行正态检验，符合正态分布时采用单因素方差分析(ONE-WAY ANOVA)，不符合时采用非参数检验(Nonparametric Tests)。

计数数据一般采用非参数检验(如卡方检验)进行组间的差异性比较。“*”、“#”(P<0.05)为均数间的差异有显著的统计学意义，“**”、“##”(P<0.01)为均数间的差异有非常明显地统计学意义。

实施例1铜叶绿酸钠对肠系膜急性微循环障碍的保护作用

根据上述方法，取铜叶绿酸钠的含量为约37.0％、其他叶绿素衍生物以铜叶绿酸二钠计为60.0％以上的蚕砂提取物，就其对兔肠系膜急性微循环障碍的作用进行测试，结果如下。

表1铜叶绿酸钠对兔肠系膜微循环变化率影响(

n＝6)

注：与阴性对照组比：*：P<0.05，**：P<0.01

表1显示，与阴性对照组相比，铜叶绿酸钠高剂量组血流灌注量(PU)、血细胞聚集程度(CMBC)和运动血细胞速率(V)变化率均显著降低(P<0.01)，铜叶绿酸钠中剂量组各考核指标呈现下降趋势，说明铜叶绿酸钠能改善肠系膜微循环障碍。

实施例2蚕砂提取物对急性微循环障碍的保护作用

重复实施例1的实验，所不同的是取铜叶绿酸钠重量百分比含量为约29.5％、其他叶绿素衍生物以铜叶绿酸二钠计为60.0％以上的蚕砂提取物进行实验。结果表明，高、中剂量组血流灌注量(PU)、血细胞聚集程度(CMBC)、运动血细胞速率(V)变化率均出现下降，可知受试兔的肠系膜微循环障碍得到改善。

由以上实施例可知，本发明所述的过渡金属螯合的叶绿酸衍生物，特别是铜叶绿酸钠可有效改善或调节血流灌注量、运动血细胞浓度以及运动血细胞速率，从而改善肠系膜的急性微循环障碍，继而改善整体微循环障碍。

实施例3铜叶绿酸钠长期毒性实验

Beagle犬按1000、500和250mg上述含铜叶绿酸钠的蚕砂提取物/kg口服给药，相当于该品临床成人重度患者最大用量的100、50和25倍，每天1次，每周休息1天，连续给药180天，然后停药恢复30天。观察Beagle犬给药期间和停药期间出现的毒性反应症状，预测上述蚕砂提取物可能引起的临床不良反应，结果表明：在一般情况观察、摄食量、体重、心电图、体温、血压、眼科、尿液、粪便、血液、肝功能、肾功能、骨髓、系统尸解、脏器指数、病理组织学等方面均未见明显差异或属正常生理值波动，安全性良好。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (17)

1.过渡金属螯合的叶绿素衍生物在制备用于治疗和/或预防肠系膜微循环障碍的药物的用途；

其中，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中：

铜叶绿酸钠的重量百分比含量为29.5％以上；所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物为蚕砂提取物；

其他叶绿素衍生物的总重量百分比含量，以铜叶绿酸二钠C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂计为60％以上。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肠系膜微循环障碍选自高分子右旋糖酐导致的肠系膜微循环障碍。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肠系膜微循环障碍选自急性微循环障碍或慢性微循环障碍。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中，铜叶绿酸钠的重量百分比含量为30％以上。

5.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中，铜叶绿酸钠的重量百分比含量为35％以上。

6.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物中，铜叶绿酸钠的重量百分比含量为37％以上。

7.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述其他叶绿素衍生物包含除铜叶绿酸钠之外的过渡金属螯合的叶绿酸碱金属盐，以及任选存在的额外的叶绿素衍生物。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述额外的叶绿素衍生物选自下列衍生物：叶绿酸钠、脱镁叶绿素酸a、焦脱镁叶绿酸a、二氢卟吩e6、二氢卟吩e4、二氢卟吩p6、二氢卟吩f、紫红素-18、叶绿卟啉。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述其他叶绿素衍生物的总重量百分比含量，以铜叶绿酸二钠C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂计为63％以上。

10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述其他叶绿素衍生物的总重量百分比含量，以铜叶绿酸二钠C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂计为65％以上。

11.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述其他叶绿素衍生物的总重量百分比含量，以铜叶绿酸二钠C₃₄H₃₀O₅N₄CuNa₂计为70％以上。

12.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述过渡金属螯合的叶绿素衍生物的制备方法包括提取、皂化、铜化和碱化。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)提取叶绿素，进一步对提取得到的提取物进行精制；

(2)皂化，进一步用有机溶剂洗涤皂化液；

(3)将步骤(2)得到的溶液pH值调至2.5-4，加入铜盐，加热，得铜代产物；

(4)取铜代产物用去离子水洗至无游离铜离子，加入有机溶剂使其溶解，再加入碱进行碱化。

14.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，在步骤(1)中，取蚕砂，用有机溶剂或有机溶剂与水的混合物提取，回收有机溶剂后得叶绿素；

有机溶剂为丙酮、乙醇或其混合物；提取方法为回流、萃取、渗滤、微波或使用超微震动磨；

通过用去离子水洗涤或者通过用大孔吸附树脂吸附进行精制。

15.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，在步骤(2)中，将叶绿素用有机溶剂溶解，加入碱溶液使其皂化；

其中，有机溶剂为汽油、丙酮或其混合物；碱溶液为NaOH水溶液或KOH水溶液，调体系pH值为10～12，加热，分离，得到叶绿酸盐溶液。

16.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，在步骤(3)中，铜盐为硫酸铜、氯化铜或其混合物。

17.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，在步骤(4)中，有机溶剂为丙酮、乙醇或其混合物；

所述碱选自NaOH水溶液或NaOH乙醇溶液。