CN110088097A

CN110088097A - 取代的哌啶化合物的盐

Info

Publication number: CN110088097A
Application number: CN201780078548.XA
Authority: CN
Inventors: 三谷守弘
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2016-12-22
Filing date: 2017-12-22
Publication date: 2019-08-02
Also published as: JPWO2018117267A1; US20200087282A1; MA47129A; JP6937322B2; EP3560919A4; EP3560919A1; US11028069B2; WO2018117267A1

Abstract

本发明的目的在于提供一种用作抗肿瘤剂的1‑(2,3‑二氯苯甲酰基)‑4‑((5‑氟‑6‑(5‑甲基‑1H‑吡唑‑3‑基氨基)吡啶‑2‑基)甲基)哌啶‑4‑羧酸的化合物的盐及其结晶，其溶解性、稳定性、口服吸收性优异，而且可以大量制造。本发明涉及一种1‑(2,3‑二氯苯甲酰基)‑4‑((5‑氟‑6‑(5‑甲基‑1H‑吡唑‑3‑基氨基)吡啶‑2‑基)甲基)哌啶‑4‑羧酸的盐酸盐，并且该盐酸盐是在粉末X射线衍射光谱中，在特定衍射角处具有特征峰的结晶。

Description

取代的哌啶化合物的盐

技术领域

本发明涉及溶解性和口服吸收性优异，且作为抗肿瘤剂有用的取代的哌啶化合物，尤其涉及作为结晶的其盐酸盐。此外，本发明涉及含有取代的哌啶化合物的盐酸盐的药物组合物，尤其涉及用于口服给药的药物组合物。并且，本发明也涉及取代的哌啶化合物的盐酸盐或其结晶的制造方法。

背景技术

在用于口服给药的药物组合物中，一般要求有效成分的优异的溶解性、稳定性、口服吸收性、可以大量制造的方法等。当有效成分为有机化合物时，为了改善溶解性等而要研究有效成分的盐，但难以预测最佳的盐。

另外，当化合物中存在多晶型时，多晶型表示相同分子且结晶中的原子或分子的排列不同的化合物，但通过粉末X射线衍射测定(XRD测定)得到的峰在多晶型之间不同。此外，已知在各多晶型之间溶解性、稳定性、口服吸收性等不同，在开发药物上，从各种角度出发，要求发现最佳的晶型。

目前，作为抗肿瘤剂，报告了多种极光激酶(Aurora)A抑制剂。作为具有优异的极光激酶A抑制作用，且表现出抗肿瘤活性的化合物，报告了1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸(以下也称为“化合物1”)(专利文献1、2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO 2013/129443号

专利文献2：美国专利9012475号

发明内容

发明所要解决的问题

但是，这些报告中，没有对1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸(化合物1)的盐和盐的结晶进行详细研究，也没有溶解性、稳定性和口服吸收性的相关记载。

另一方面，关于化合物1，明确了未形成盐的游离体的溶解性、口服吸收性低。作为药剂的给药剂型，口服给药是对患者负担少的给药方法，因此，提高口服吸收性对于化合物1的制剂化而言，是非常重要的课题。

因此，本发明的目的在于提供一种化合物1的盐及其结晶，该盐及其结晶作为抗肿瘤剂有用，且溶解性、稳定性和口服吸收性优异，并且可以大量制造。

解决问题的技术方案

本发明人对化合物1的各种盐的特性进行了研究，经过潜心研究，结果发现特别是盐酸盐的溶解性和口服吸收性优异，以及其结晶的溶解性、稳定性、口服吸收性优异，可以大量制造，从而完成了本发明。

即，本发明涉及以下[1]～[25]的方案。

[1]一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐。

[2]根据上述[1]所述的盐，所述盐是在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[3]根据上述[1]或[2]所述的盐，所述盐是在粉末X射线衍射光谱中，在下列的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的盐，所述盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

[5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的盐，所述盐在差热分析中，在234±5℃具有吸热峰。

[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的盐，所述盐的重量比为90％以上。

[7]一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸盐酸盐，其制造方法的特征在于，使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂，以及卤化氢水溶液。

[8]根据[7]所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，以及卤化氢水溶液。

[9]根据[7]或[8]所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：乙酸乙酯、乙醇，以及盐酸。

[10]根据[7]～[9]中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用乙酸乙酯、乙醇、盐酸的混合溶剂。

[11]根据上述[7]～[10]中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[12]根据上述[7]～[11]中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[13]根据上述[7]～[12]中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

[14]根据上述[7]～[13]中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐在差热分析中，在234±5℃具有吸热峰。

[15]一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐，其通过包括下列步骤的制造方法制造：

步骤(1)：将1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸和盐酸加入到溶剂中；以及

步骤(2)：搅拌在所述步骤(1)中得到的溶剂，使1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐析出。

[16]根据上述[15]所述的盐，所述盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[17]根据上述[15]或[16]所述的盐，所述盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在下列的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

[18]根据上述[15]～[17]中任一项所述的盐，所述盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

[19]根据上述[15]～[18]中任一项所述的盐，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，或者它们的混合溶剂。

[20]根据上述[15]～[19]中任一项所述的盐，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自乙醇、乙酸乙酯、丙酮，或者它们的混合溶剂。

[21]一种药物组合物，其含有上述[1]～[20]中任一项所述的盐或其结晶。

[22]一种用于口服给药的药物组合物，其含有上述[1]～[20]中任一项所述的盐或其结晶。

[23]一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸盐酸盐的制造方法，其特征在于，使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂以及卤化氢水溶液。

[24]一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐或其结晶的制造方法，包括下列步骤：

[25]根据上述[24]所述的方法，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，或者它们的混合溶剂。

本说明书包含了作为本申请的优先权基础的日本专利申请号2016-249767号的公开内容。

发明效果

根据本发明，化合物1的盐酸盐可以作为溶解性、口服吸收性优异，且溶解性、稳定性、口服吸收性优异，还可以大量制造的结晶而获得，因此预期其可以用作药物、尤其是用于口服给药的药物。

附图说明

图1表示化合物1的盐酸盐的粉末X射线衍射光谱(纵轴表示强度(cps)，横轴表示衍射角(2θ))。12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°和32.83°的特征峰用编号1～7表示。

图2表示化合物1的盐酸盐的差示扫描量热(DSC)曲线(纵轴表示热流(W/g)，横轴表示温度(℃))。

图3表示化合物1的甲磺酸盐的粉末X射线衍射光谱(纵轴表示强度(cps)，横轴表示衍射角(2θ))。

图4表示化合物1的甲磺酸盐的差示扫描量热(DSC)曲线(纵轴表示热流(W/g)，横轴表示温度(℃))。

图5表示化合物1的钾酸盐的粉末X射线衍射光谱(纵轴表示强度(cps)，横轴表示衍射角(2θ))。

图6表示化合物1的钾盐的差示扫描量热(DSC)曲线(纵轴表示热流(W/g)，横轴表示温度(℃))。

图7表示化合物1的钠酸盐的粉末X射线衍射光谱(纵轴表示强度(cps)，横轴表示衍射角(2θ))。

图8表示化合物1的钠盐的差示扫描量热(DSC)曲线(纵轴表示热流(W/g)，横轴表示温度(℃))。

图9表示化合物1的游离体的粉末X射线衍射光谱(纵轴表示强度(cps)，横轴表示衍射角(2θ))。

图10表示化合物1的游离体的差示扫描量热(DSC)曲线(纵轴表示热流(W/g)，横轴表示温度(℃))。

图11表示化合物1的盐酸盐的动态水蒸气吸附系统(DVS)分析(水分吸附与解吸试验)的结果(纵轴表示重量(％chg)，横轴表示样品环境的相对湿度(％))。

图12表示化合物1的钾盐的动态水蒸气吸附系统(DVS)分析(水分吸附与解吸试验)的结果(纵轴表示重量(％chg)，横轴表示样品环境的相对湿度(％))。

具体实施方式

本发明中，形成盐酸盐的化合物为1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸(化合物1)。结构如下所示。

化合物1是已知具有极光激酶A抑制活性，且表现出优异的抗肿瘤活性的取代的哌啶化合物之一。

[化1]

化合物1例如可以通过专利文献1记载的方法来制造。具体而言，在专利文献1中，用硅胶柱色谱法纯化化合物1，然后用乙醇-乙酸乙酯的混合溶液而得到白色固体。

如上所述，得到为白色固体的化合物1，其溶解性低，即使制备口服给药制剂，也无法在固体状态下穿过肠膜，因此预想难以向血液中输送药物。而且，即使考虑到制备静脉给药制剂，也会担心输液等的容量变得非常大。并且，还明确了存在口服给药时吸收性低的问题。

结晶表示原子或分子被配置为规则性重复结构的固体，与不具有重复结构的非晶质体(amorphous)的固体不同。可以通过粉末X射线衍射测定(XRD测定)、差示扫描量热测定(DSC测定)、差热-热重同时测定(TG-DTA)、红外分光法(IR)等方法，调查结晶或非晶质体的固体。

已知多晶型表示相同分子且结晶中的原子或分子的排列不同的化合物，通过XRD测定得到的峰在多晶型之间不同。此外，已知在各多晶型之间溶解性、口服吸收性、稳定性等不同，从各种角度出发，要求在开发药物上发现最佳的结晶。

本发明人经过潜心研究，结果发现化合物1与盐酸形成良好的盐，其是在溶解性和口服吸收性方面是非常优异的盐。并且，还发现化合物1的盐酸盐的结晶在溶解性、稳定性、口服吸收性以及可以大量制造的制法方面，是非常优异的结晶。

下面进行详细说明。

如上所述，本说明书中的化合物1是指1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸，而它被称为未形成盐的游离体。

化合物1的游离体本身中存在结晶。化合物1的游离体的结晶通过下述比较例4所示的方法得到。

化合物1可与酸形成盐。作为药学上可接受的酸的盐，一般可举出与以下多种酸形成的盐：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、抗坏血酸、异抗坏血酸、扁桃酸、富马酸、天冬氨酸、马来酸、乳酸、苹果酸、马尿酸、戊二酸、己二酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、苦味酸、甲基磺酸(甲磺酸)、对甲苯磺酸(p-tosylacid)、谷氨酸等有机酸等。

另外，化合物1可与碱金属、碱土金属等碱形成盐。作为药学上可接受的碱的盐，一般可举出：钾盐、钠盐、钙盐、铵盐、甲基铵盐、二甲基铵盐等多种盐。

与化合物1的游离体相比，化合物1的甲磺酸盐的溶解度优异，但与其他盐相比则不能满意。

与化合物1的游离体相比，化合物1的钾盐和钠盐的吸收性优异，但在升温时晶型可能会发生变化，并且吸湿性高，在质量控制方面不能满意，不适合大量制造。

与此相对，本发明的化合物1的盐酸盐(以下有时简称为“本发明的盐酸盐”)的溶解性和口服吸收性优异，在作为该盐酸盐的结晶时，其溶解性、稳定性和口服吸收性优异，可以大量制造，因此适合作为药物开发的盐。

本发明的盐酸盐是盐酸与化合物1的摩尔比为1∶1的盐，可以通过元素分析、离子色谱法、毛细管电泳等分析方法来确定。

本发明的盐酸盐可以为单一的结晶、两种以上的多晶型的混合物、非晶质体，或它们的混合物中的任一种，优选具有重量比为50％以上的结晶的盐酸盐，更优选具有重量比为60％以上、70％以上、80以上、尤其90％以上的结晶的盐酸盐。此处，“重量比”在本发明的盐酸盐中是指特定的结晶重量的百分比。

本发明的盐酸盐的结晶也包括因晶面生长的不同而外形不同的晶体惯态。因此，虽然通过该结晶的XRD测定而得到的衍射角2θ的峰型相同，但也包括峰的相对强度不同的峰。此处所说的相对强度是指粉末X射线衍射光谱中的衍射角2θ2θ的峰中，将峰面积最大的峰设为100时的各峰面积的相对值。

另外，本发明的粉末X射线衍射光谱中的衍射角2θ的峰的误差约为±0.2°。该误差是由用于测定的设备、试样制备、数据分析的方法等产生的。因此，在对本发明的结晶进行XRD测定时，将得到的衍射角2θ的误差考虑为±0.2°。

本发明的盐酸盐的结晶在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。在优选的实施方式中，本发明的盐酸盐的结晶在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少五个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。在更优选的实施方式中，本发明的盐酸盐的结晶是在粉末X射线衍射光谱中，在下列的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。在特别优选的实施方式中，本发明的盐酸盐的结晶是粉末X射线衍射光谱记载于图1的结晶。

如实施例中所示，在游离体的化合物1和化合物1的其他盐中，完全观察不到在上述三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处的特征峰。

在差示扫描量热法(Differential Scanning Calorimetry，DSC)测定(也称为差热分析)的DSC曲线上测定的吸热峰的测定温度，因升温速度和试样的纯度等而产生误差。因此，在对本发明的结晶进行DSC测定时，将吸热峰(峰顶值)的误差考虑为±5.0℃。此时使用的术语“附近”是指±5.0℃。

在典型的实施方式中，本发明的盐酸盐在DSC曲线上，如图2所示的差热-热重同时测定的结果所述，在234℃附近(234±5℃，即229～239℃)有吸热峰。予以说明，如前所述，本说明书中的吸热峰是指峰顶值。此外，虽然明确了化合物1的钾盐和钠盐随着温度上升而变得不稳定，但对于本发明的盐酸盐，在DSC曲线上，在融点附近的峰以外观察不到峰，即使放置在高温下也较为稳定。

另外，本发明的盐酸盐的结晶优选在粉末X射线衍射光谱中，在选自12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰，并且在DSC曲线上，在234±5℃具有吸热峰(峰顶值)。本发明的盐酸盐的结晶更优选在粉末X射线衍射光谱中，在选自12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°中的至少五个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰，并且在DSC曲线上，在229～239℃具有吸热峰(峰顶值)。本发明的甲磺酸盐的结晶进一步优选在粉末X射线衍射光谱中，在12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰，并且在DSC曲线上，在229～239℃具有吸热峰(峰顶值)。

另外，本发明的盐酸盐在进行动态水蒸气吸附系统(Dynamic Vapour Sorption，DVS)分析时，在湿度5％至75％的环境下重量变化低于0.5％，吸湿性低，长期保存时的稳定性也非常优异。

并且，本发明的盐酸盐在与游离体进行比较时，口服吸收性明显提高。因此，在以口服给药为目的的制剂中，使用本发明的盐酸盐非常有益。

本发明的盐酸盐或其结晶，可以通过将化合物1和盐酸加入到特定的溶剂中，进行搅拌使其析出来得到。因此，本发明也提供化合物1的盐酸盐或其结晶的制造方法，包括以下步骤：

(1)将1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸(化合物1)和盐酸加入到溶剂中；以及

(2)搅拌上述步骤(1)中得到的溶剂，析出化合物1的盐酸盐。

此外，本发明还提供通过上述制造方法制造的化合物1的盐酸盐或其结晶。

本发明的盐酸盐或其结晶的制造方法中使用的化合物1可以是非晶质体、结晶、其他晶型，或它们的混合物中的任一种。

此外，在本发明的盐酸盐或其结晶的制造方法中加入的盐酸量，其摩尔比为化合物1的1～30倍，优选为1～10倍，更优选为1.1倍～5倍。

本发明的盐酸盐或其结晶的制造方法中可以使用的溶剂可举出水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂等，也可以使用它们的混合溶剂。

C_1-6醇表示碳原子数为1～6的醇，可举出甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇等，优选为乙醇。

C_1-6酯表示碳原子数为1～6的酯，可举出甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯等，优选为乙酸乙酯。

C_1-6酮表示碳原子数为1～6的酮，可举出丙酮、甲乙酮、甲基异丙基酮、甲基异丁基酮、环己酮等，优选为丙酮。

C_1-6醚表示碳原子数为1～6的醚，可举出二乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷等。

C_1-6烃表示碳原子数为1～6的烃，可举出正己烷、正戊烷、正庚烷、环己烷、环戊烷、石油醚等。

非质子极性溶剂可举出：乙腈、N-甲基-2-吡咯烷酮、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜等。

本发明的盐酸盐或其结晶的制造方法中可以使用的溶剂可举出上述溶剂或它们的混合溶剂，优选为水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮或它们的混合溶剂。更优选为C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮或它们的混合溶剂，进一步优选为乙醇、乙酸乙酯、丙酮或乙醇-乙酸乙酯的混合溶液。乙醇-乙酸乙酯的混合溶液中的各溶剂的比为，0.1～10体积，优选为0.5～5体积，更优选为1～2体积的乙酸乙酯比1体积的乙醇。

本发明的盐酸盐或其结晶的制造方法中可以使用的溶剂量为化合物1的1～100(容量/重量)倍。优选为3～50(容量/重量)倍，更优选为5～30(容量/重量)倍。

本发明的盐酸盐或其结晶的析出步骤中的温度，根据使用的溶剂适当设定，在0℃至溶剂沸点之间设定。此外，析出步骤中的温度无需恒定不变，可以在0℃至溶剂沸点之间进行加热或冷却。

本发明的盐酸盐或其结晶的析出步骤中的搅拌，可以根据溶剂量或反应釜的大小，适当使用搅拌机、搅拌叶片、磁力搅拌器等进行。搅拌速度为1～600rpm，优选为10～300rpm。

另外，盐和结晶等的析出中的搅拌时间如果过短，一般无法充分进行析出，从而无法以高收率得到盐和结晶。而如果过长，则有效成分发生分解，收率下降，因此要设定适宜的时间。本发明的盐酸盐的析出步骤中的搅拌时间可举出0.5～72小时，优选为1～24小时，更优选为2～12小时。

在本发明的盐酸盐的结晶的析出步骤中，可以加入化合物1的盐酸盐的结晶作为晶种。加入的晶种为结晶化中化合物1的盐酸盐的理论收量的0.1～10重量％，优选为1～3重量％。

溶剂中析出的本发明的盐酸盐或其结晶例如可以通过过滤收集、用有机溶剂洗涤、减压干燥等公知的分离纯化方法来分离纯化。作为用于洗涤的有机溶剂，可举出与能够在上述制造中使用的溶剂相同的溶剂。

减压干燥的气压为0.1气压(atm)以下，优选为0.05气压以下。此外，减压干燥的温度为0℃～200℃，优选为25℃～100℃。

本发明还提供化合物1的盐酸盐的制造方法，其特征在于，使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂以及卤化氢水溶液。此外，本发明还提供通过上述制造方法制造的化合物1的盐酸盐或其结晶。

作为C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃以及非质子极性溶剂，可分别举出上述溶剂。

作为卤化氢水溶液，优选举出盐酸。

在一实施方式中，上述本发明的盐酸盐或其结晶可以使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂制造：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂以及卤化氢水溶液。

在更具体的实施方式中，上述本发明的盐酸盐或其结晶可以使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂制造：C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮以及卤化氢水溶液。

在更具体的实施方式中，上述本发明的盐酸盐或其结晶可以使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂制造：乙酸乙酯、乙醇以及盐酸。在特定的实施方式中，上述本发明的盐酸盐或其结晶可以使用乙酸乙酯、乙醇、盐酸的混合溶剂制造。

通过上述方法得到的本发明的盐酸盐以相对于盐酸盐的总重量的50％以上、60％以上、70％以上、80％以上或90％以上的重量比，含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

优选地，本发明的盐酸盐以相对于盐酸盐的总重量的50％以上、60％以上、70％以上、80％以上或90％以上的重量比，含有在粉末X射线衍射光谱中，在12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶。

通过上述方法得到的本发明的盐酸盐或其结晶，可以由图1所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。此外，通过上述方法得到的本发明的盐酸盐或其结晶，在差热分析中，可以在234±5℃具有吸热峰。

本发明也涉及含有本发明的盐酸盐的药物组合物。其中，由于化合物1具有优异的极光激酶A抑制活性，因此本发明的盐酸盐作为抗肿瘤剂而有用。作为对象的癌症没有特别限制，可举出：头颈癌、消化道癌(食道癌、胃癌、胃肠道间质瘤、十二指肠癌、肝癌、胆道癌(胆囊和胆管癌等)、胰腺癌、小肠癌、大肠癌(结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌等)等)、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌(宫颈癌、宫体癌等)、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、尿路上皮癌、骨与软组织肉瘤、血癌(B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、外周T细胞淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病等)、多发性骨髓瘤、皮肤癌、间皮瘤等。

含有本发明的盐酸盐的药物组合物可以根据需要混合药学载体，根据预防或治疗目的采用各种给药剂型。作为该剂型，例如为口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、膏药剂等任一种，优选为口服剂。即，本发明的药物组合物优选为用于口服给药的药物组合物。予以说明，这些各种给药剂型可由各本领域技术人员通过公知的常规制剂方法来制造。用于口服给药的药物组合物例如可以作为粉末剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂等剂型。

作为药学载体，使用常规的各种有机或无机载体物质作为制剂材料，作为固形制剂中的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、液状制剂中的溶剂、助溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、无痛剂等混合。此外，根据需要也可使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、稳定剂等制剂添加物。

上述各给药单位剂型中应混合的本发明的盐酸盐的量因应用的患者症状，或因其剂型等而异，在给药单位剂型中，口服剂一般优选0.05～1000mg，注射剂一般优选0.01～500mg，栓剂一般优选1～1000mg。

另外，具有上述给药剂型的药剂每天的给药量因患者的症状、体重、年龄、性别等而异，无法一概而论，作为本发明的盐酸盐，普通成年人(体重50kg)每天0.05～5000mg，优选0.1～1000mg即可，优选将其分成1天1次或2～3次左右给药。

[实施例]

下面举出实施例，对本发明进行更加具体的说明，但本发明不受这些实施例的任何限制。虽然通过实施例对本发明进行充分说明，但应当理解，本领域技术人员可以进行各种变更和修饰。因此，只要这些变更和修饰不脱离本发明的范围，则包含在本发明中。

关于实施例中所使用的各种试剂，如无特别记载，则使用市售品。

<质子核磁共振(¹H-NMR)测定>

¹H-NMR测定使用AL400(400MHz；日本电子(JEOL))、Mercury400(400MHz；安捷伦科技有限公司)型分光光度计，或者安装有400M NMR探针(Protasis)的Inova400(400MHz；安捷伦科技有限公司)型分光光度计，氘代溶剂中含有四甲基硅烷时使用四甲基硅烷作为内标，除此以外的情况则使用NMR溶剂作为内标进行测定。得到的¹H-NMR图用ppm表示全部δ值。

简写符号的含义如下所示。

s：单峰

d：双峰

t：三重峰

q：四重峰

dd：双二重峰

dt：双三重峰

td：三重双峰

tt：三三重峰

ddd：双双二重峰

ddt：双双三重峰

dtd：双三重双峰

tdd：三双二重峰

m：多重峰

br：宽峰

brs：宽单峰

<粉末X射线衍射测定(XRD测定)>

关于粉末X射线衍射，在根据需要将适量的试验物质在玛瑙制研钵中轻轻粉碎，然后按照以下试验条件进行测定。

装置：Rigaku RINT-ULTIMA+2100(株式会社理学生产)

目标：CuKA

扫描范围：5.0～40.0°

步长：0.02°

扫描速度：0.2°/秒

包括数据处理在内的装置操作均按照各装置指示的方法和步骤进行。

<差热-热重同时测定(DSC测定)>

DSC测定按照以下试验条件进行测定。

装置：TA仪器Q1000(TA Instruments Q1000)

试样：约5mg

升温速度：10℃/分钟

测定温度：室温～300℃

<液相色谱法(HPLC)测定>

液相色谱法测定按照以下试验条件进行测定。

装置：安捷伦科技有限公司1200系列二元液相色谱系统

流动相A：10mM Na₂HPO₄水溶液(pH6.5)

流动相B：乙腈

梯度：记于表1

色谱柱：Ascentis Express C18，150mm×4.6mm i.d.，2.7μm

测定波长：210nm

[表1]

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	95	5
7	10	90
			9	10	90
9.1	95	5
			11	95	5

<动态水蒸气吸附系统(DVS)分析>

动态水蒸气吸附系统(DVS)分析按照以下条件进行。

装置：TA仪器VTI SGA-100(TA Instruments VTI SGA-100)

试样：约10mg

测定温度：25℃

RH steps：5-95-1％RH by 5％RH

<实施例1化合物1的盐酸盐(无晶种)>

将通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(250mg)悬浮在乙醇(2.0mL)中，依次加入4M盐酸-乙酸乙酯溶液(0.18mL)、乙酸乙酯(2.8mL)，在85℃下搅拌6小时。将得到的悬浮液冷却至室温，然后过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤。在100℃下对得到的固体进行减压干燥，得到为结晶的化合物1的盐酸盐(190mg)。

将得到的化合物1的盐酸盐的结晶的粉末X射线衍射光谱示于图1。即，在衍射角(2θ)12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°和32.83°出观察到了特征峰。图1中的这些峰的2θ的值和相对强度(概数)的数值如下表所示。

[表2]

将化合物1的盐酸盐的结晶的DSC测定的DSC曲线示于图2。DSC曲线在约234℃表现为吸热峰(峰顶值)。

另外，得到的化合物的¹H-NMR谱如下所示。

¹H-NMR(400MHz、DMSO-d6)：δppm 10.34(2/2H，brs)，7.70-7.59(4/2H，m)，7.46-7.37(3/2H，m)，7.32-7.29(1/2H，m)，6.78-6.73(2/2H，m)，6.32(1/2H、s)、6.30(1/2H，s)，4.24-4.20(2/2H，m)，3.25-3.21(2/2H，m)，3.09-2.97(8/2H，m)，2.31(3/2H、s)、2.29(3/2H，s)，2.05-2.00(2/2H，m)，1.91-1.81(2/2H，m)，1.68-1.52(4/2H，m)。

本实施例中，在使用丙酮代替乙醇时，也会得到同样的化合物1的盐酸盐。

<实施例2化合物1的盐酸盐(有晶种)>

将通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(8.46g)悬浮在乙醇(34mL)中，依次加入4M盐酸-乙酸乙酯溶液(6.1mL)、乙酸乙酯(45mL)，升温到80℃。然后，加入在实施例1中得到的化合物1的盐酸盐的结晶(50mg左右)，搅拌6小时。将得到的悬浮液冷却至5℃，然后过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤。在100℃下对得到的固体进行减压干燥，得到为白色固体的化合物1的盐酸盐(8.16g)。

得到的化合物1的盐酸盐的分析数据与实施例1相同。

<比较例1化合物1的甲磺酸盐>

将通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(1.00g)悬浮在四氢呋喃(10mL)中，加入甲磺酸(甲磺酸：0.135mL)使其溶解。在室温下搅拌过夜，过滤收集析出的固体，用乙酸乙酯洗涤。在85℃下对得到的固体进行减压干燥，得到甲磺酸盐非晶质体(1.11g)。

在得到的非晶质体(300mg)中加入乙酸乙酯(10mL)，在80℃下加热悬浮64小时。将悬浮液冷却至室温，然后过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤。在85℃下对得到的固体进行减压干燥，得到为结晶的化合物1的甲磺酸盐(224mg)。

将得到的化合物1的甲磺酸盐的结晶的粉末X射线衍射光谱示于图3。即，在衍射角(2θ)8.62°、14.47°、15.46°、19.05°、19.56°、20.35°、20.69°、24.16°和26.79°处出现特征峰。此外，将DSC测定的DSC曲线示于图4。

另外，得到的化合物的1H-NMR谱如下所示。

¹H-NMR(400MHz、DMSO-d6)：δppm 10.1(1H，brs)，7.72-7.66(1H，m)，7.62-7.53(1H，m)，7.46-7.28(2H，m)，6.75-6.67(1H，m)，6.31-6.28(1H，m)，4.26-4.16(1H，m)，3.28-3.18(1H，m)，3.12-2.94(4H，m)，2.35-2.23(6H，m)，2.07-2.00(1H，m)，1.95-1.80(1H，m)，1.68-1.48(2H，m)。

<比较例2化合物1的钾盐>

在通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(414mg)、乙醇(20mL)、水(5.0mL)的混合物中，加入5M氢氧化钾水溶液(164μL)，进行加热回流，使其溶解。将混合物冷却至室温后，进行减压浓缩。向得到的残余物加入甲乙酮/水＝10/1的混合溶剂(6mL)，进行加热回流。在40℃下将得到的溶液搅拌11小时，在室温下将生成的悬浮液搅拌过夜。过滤收集固体，用甲乙酮/水＝20/1的混合溶剂洗涤。在100℃下对得到的固体进行减压干燥，得到为结晶的化合物1的钾盐(325mg)。

将得到的化合物1的钾盐的结晶的粉末X射线衍射光谱示于图5。即，在衍射角(2θ)10.66°、10.62°、18.61°、19.34°、20.60°和21.54°处出现特征峰。此外，将DSC测定的DSC曲线示于图6。

另外，得到的化合物的¹H-NMR谱如下所示。

¹H-NMR(400MHz、DMSO-d6)：δppm 9.13(1H，brs)，7.66-7.62(1H，m)，7.41-7.37(1H，m)，7.31-7.24(2H，m)，6.52-6.51(1H，m)，5.96(1H，brs)，4.17-4.14(1H，m)，3.25-3.15(1H，m)，3.11-2.99(2H，m)，2.78-2.63(2H，m)，2.13-2.11(3H，m)，2.02-1.98(1H，m)，1.82-1.79(1H，m)，1.29-1.15(2H，m)。

<比较例3化合物1的钠盐>

在通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(250mg)中，加入2M氢氧化钠水溶液(0.25mL)、甲乙酮(10mL)，在70℃下搅拌14小时。冷却至室温，然后过滤固体，用甲乙酮洗涤后，进行减压干燥，得到为无色结晶的化合物1的钠盐(207mg)。

将得到的化合物1的钠盐的结晶的粉末X射线衍射光谱示于图7。即，在衍射角(2θ)10.28°、11.19°、15.52°、19.55°和26.48°处出现特征峰。此外，将DSC测定的DSC曲线示于图8。

另外，得到的化合物的¹H-NMR谱如下所示。

¹H-NMR(400MHz、DMSO-d6)：δppm 7.65(1H、dd、J＝6.5、8.3Hz)、7.47-7.18(3H、m)、6.65-6.47(1H、m)、4.28-4.07(1H、d、J＝9.0Hz)、3.30-2.94(4H、m)、2.91-2.59(2H、m)、2.12(3H、s)、2.05-1.69(2H、m)、1.39-1.04(2H、m)。

<比较例4化合物1(游离体)的结晶>

在100℃下将通过专利文献1记载的方法得到的化合物1(3.04g)、乙酸(6.0mL)、5M盐酸(6.0mL)的混合物搅拌1小时使其溶解，然后在室温下加入25mL水、6.1mL的5M氢氧化钠水溶液。在100℃下搅拌得到的悬浮液，加入乙醇(35mL)，搅拌30分钟。将悬浮液冷却至室温，然后过滤收集固体，用水、乙醇洗涤。在50℃下对得到的固体进行减压干燥，得到为白色固体的化合物1的游离体(2.83g)。

将得到的化合物1的结晶I的粉末X射线衍射光谱示于图9。即，在衍射角(2θ)12.97°、14.10°、16.14°、16.81°、17.56°、18.90°、19.19°、20.68°、24.79°、25.07°和30.98°处出现特征峰。此外，将DSC测定的DSC曲线示于图10。

<试验例1-1稳定性试验(纯度)>

将实施例1和比较例1～4中得到的化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、钾盐、钠盐以及游离体的结晶，分别在40℃(开放系统)或60℃(开放系统)、光照下(120万Lux·hr)的条件下放置1个月。然后，用液相色谱法测定纯度，结果在任何条件下，试验前后的纯度变化均为0.2％以下。表3表示盐酸盐和钾盐的结果。

[表3]

表中的值表示样品中的纯度(％)。

根据以上结果，可以判断出化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、钾盐、钠盐以及游离体的结晶均为作为固体的稳定性优异的结晶。

<试验例1-2稳定性试验(固体的变化)>

对实施例1的化合物1的盐酸盐，以及比较例1～4的甲磺酸盐、钾盐、钠盐和游离体的结晶进行DSC测定，结果钾盐和钠盐即使在较低的温度下也得到了提示吸热和放热的图表(图6、8)；而盐酸盐、甲磺酸盐和游离体没有得到这样的图表(图2、4、10)。

根据以上结果，可以判断出化合物1的钾盐和钠盐的结晶是随温度上升晶型发生变化风险高的结晶。

<试验例2溶解度测定>

使用化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、钾盐、钠盐以及化合物1的游离体，进行溶解度测定。具体而言，按照日本药局方溶解性测定法，将实施例1中制作的化合物1的盐酸盐的结晶、比较例1中制作的化合物1的甲磺酸盐的结晶、比较例2中制作的化合物1的钾盐的结晶、比较例3中制作的化合物1的钠盐的结晶，以及化合物1的游离体的结晶作为试样，测定其相对于以日本药局方为基准的洗脱试验第一液和第二液的溶解度。结果示于表4。由该结果可知，与化合物1的甲磺酸盐、游离体相比，化合物1的盐酸盐、钾盐和钠盐的溶解性优异。

[表4]

<试验例3动态水蒸气吸附系统(DVS)分析>

用动态水蒸气吸附系统(DVS)分析，来确认实施例1中得到的化合物1的盐酸盐和比较例2中得到的钾盐的吸湿性。以5％RH的间隔，在相对湿度(RH)5％～95％的范围内收集吸附与解吸数据。予以说明，在测定前，在氮气吹扫下，以1℃/分钟升温至25℃，最大干燥6小时，直到5分钟的重量变化低于0.0100％。测定时，最大平衡2小时，直到5分钟的重量变化低于0.0100％。

化合物1的盐酸盐的结果示于图11，钾盐的结果示于图12。根据该结果可以确认，化合物1的盐酸盐在湿度从5％上升到75％的过程中，重量变化低于0.5％，而钾盐的重量变化超过了14％。此外，同样确认了化合物1的钠盐的重量变化为40％以上(未示出数据)。因此可知，周围的湿度对化合物1的盐酸盐的影响极小，而钾盐和钠盐则容易受到周围湿度的影响。容易受到湿度影响，可能会导致稳定性下降，且质量难以控制，因此判断为不适合大量制造。

<试验例4吸收性试验>

将化合物1的盐酸盐悬浮在0.5％HPMC中，以使化合物1的给药量为50mg/kg，向BALB/cA小鼠口服给药。口服给药后，在0.5、1、2、4、6小时后进行眼底采血，得到血浆。利用LC/MS(安捷伦科技有限公司Agilent 1200、SCIEX公司AB Sciex API400)测定得到的血浆中的化合物浓度，评价口服吸收性。

其结果如表5所示，化合物1的盐酸盐观察到充足的血浆中浓度，表现出良好的口服吸收性。另一方面，化合物1的游离体未表现出充分的口服吸收性，难以作为有效成分含有在口服给药制剂中，无法期待其在口服给药中的临床效果。

[表5]

工业实用性

本发明的化合物1是具有极光激酶A抑制活性，且表现出优异的抗肿瘤活性的化合物；其盐酸盐的溶解性和口服吸收性优异；此外，该盐的结晶的溶解性、稳定性、口服吸收性优异，且可以大量制造。因此，化合物1的盐酸盐或该盐的结晶可期待用作药物，特别是用于口服给药的药物，尤其是用于口服给药的抗肿瘤剂。

本说明书所引用的全部出版物、专利以及专利申请均通过直接引用而并入本说明书。

Claims

1.一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐。

2.根据权利要求1所述的盐，所述盐是在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

3.根据权利要求1或2所述的盐，所述盐是在粉末X射线衍射光谱中，在下列的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的盐，所述盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的盐，所述盐在差热分析中，在234±5℃具有吸热峰。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的盐，所述盐的重量比为90％以上。

7.一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸盐酸盐，其制造方法的特征在于，使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂，以及卤化氢水溶液。

8.根据权利要求7所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，以及卤化氢水溶液。

9.根据权利要求7或8所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：乙酸乙酯、乙醇，以及盐酸。

10.根据权利要求7～9中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐的制造方法的特征在于，使用乙酸乙酯、乙醇、盐酸的混合溶剂。

11.根据权利要求7～10中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

12.根据权利要求7～11中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

13.根据权利要求7～12中任一项所述的盐酸盐，所述盐酸盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

14.根据权利要求7～13中任一项所述的盐酸盐，其在差热分析中，在234±5℃具有吸热峰。

15.一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐，其通过包括下列步骤的制造方法制造：

16.根据权利要求15所述的盐，所述盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在选自下列中的至少三个以上的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

17.根据权利要求15或16所述的盐，所述盐含有在粉末X射线衍射光谱中，在下列的衍射角(2θ±0.2°)处具有特征峰的结晶：12.83°、13.54°、16.20°、18.27°、23.80°、29.10°、32.83°。

18.根据权利要求15～17中任一项所述的盐，所述盐由下图所示的粉末X射线衍射光谱进行表征。

19.根据权利要求15～18中任一项所述的盐，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，或者它们的混合溶剂。

20.根据权利要求15～19中任一项所述的盐，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自乙醇、乙酸乙酯、丙酮，或者它们的混合溶剂。

21.一种药物组合物，其含有权利要求1～20中任一项所述的盐或其结晶。

22.一种用于口服给药的药物组合物，其含有权利要求1～20中任一项所述的盐或其结晶。

23.一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸盐酸盐的制造方法，其特征在于，使用含有选自于下列溶剂组中的一种或两种以上的溶剂：水、C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮、C_1-6醚、C_1-6烃、非质子极性溶剂以及卤化氢水溶液。

24.一种1-(2，3-二氯苯甲酰基)-4-((5-氟-6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)吡啶-2-基)甲基)哌啶-4-羧酸的盐酸盐或其结晶的制造方法，包括下列步骤：

25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述步骤(1)中的溶剂选自C_1-6醇、C_1-6酯、C_1-6酮，或者它们的混合溶剂。