CN110055054A - 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用 - Google Patents

一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110055054A
CN110055054A CN201910280942.2A CN201910280942A CN110055054A CN 110055054 A CN110055054 A CN 110055054A CN 201910280942 A CN201910280942 A CN 201910280942A CN 110055054 A CN110055054 A CN 110055054A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alkyl
fluorescence probe
independently
fluorescence
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910280942.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110055054B (zh
Inventor
孙红霞
陈宏博
唐亚林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Chemistry CAS
Original Assignee
Institute of Chemistry CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Chemistry CAS filed Critical Institute of Chemistry CAS
Priority to CN201910280942.2A priority Critical patent/CN110055054B/zh
Publication of CN110055054A publication Critical patent/CN110055054A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110055054B publication Critical patent/CN110055054B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
    • C07D263/56—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/64—Benzothiazoles with only hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D293/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and selenium or nitrogen and tellurium, with or without oxygen or sulfur atoms, as the ring hetero atoms
    • C07D293/10—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and selenium or nitrogen and tellurium, with or without oxygen or sulfur atoms, as the ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D293/12—Selenazoles; Hydrogenated selenazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C09K2211/1033—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom with oxygen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C09K2211/1037—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom with sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/10—Non-macromolecular compounds
    • C09K2211/1018—Heterocyclic compounds
    • C09K2211/1025—Heterocyclic compounds characterised by ligands
    • C09K2211/1029—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom
    • C09K2211/104—Heterocyclic compounds characterised by ligands containing one nitrogen atom as the heteroatom with other heteroatoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了菁染料在检测活细胞线粒体G‑四链体的新用途。该菁染料为式(I)所示的结构化合物或其式(I)所示化合物的立体异构体，该菁染料荧光探针具体生物相容性好、细胞毒性低、分子量小、对生物样品损伤小的优点，可以实现对细胞样品的实时观测，且不受细胞内pH值的影响。

Description

一种靶向活细胞线粒体G-四链体的荧光探针及其应用
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体地，涉及荧光探针及其应用，更具体地，涉及荧光探针、荧光探针在靶向活细胞内线粒体G-四链体荧光成像中的用途和活细胞内线粒体G-四链体荧光成像的方法。
背景技术
线粒体是一种存在于大多数真核生物细胞的双膜细胞器，直径为0.5-1μm，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。此外，线粒体包含一定的遗传物质，对细胞凋亡、细胞生长和细胞分化等诸多生物学行为有一定的影响。近年来，大量研究表明线粒体功能异常与人类多种疾病的产生息息相关，而这种病理改变在细胞层面上通常表现为线粒体大小、数量和形态的变化。因此，对线粒体进行成像观察在细胞生物学、病理学以及临床医学等领域都具有重要的意义。
荧光成像技术由于其操作简便、成本低廉以及可多重标记等优势已经被广泛应用于细胞内线粒体成像。目前，商品化的线粒体荧光成像试剂包括MitoTracker系列、Rhodanmine系列、Tetramethylrosamine、CellLight线粒体荧光蛋白和DiOC6(3)等。但是，这些染料中大多是作用于线粒体膜电位和线粒体基质蛋白的探针，在实际染色过程中可能会受到其它细胞器影响。因此，为了避免上述问题，开发一种作用于线粒体中G-四链体的荧光探针来监测线粒体具有重大意义。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种荧光探针，该荧光探针的生物相容性好、细胞毒性低、对生物样品损伤小，并具有良好的抗光漂白性能，可以实现对细胞样品较长时间有效观测，且不受细胞内pH值的影响。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种荧光探针。根据本发明的实施例，所述荧光探针为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体，
其中，
R1独立地为氢、C1-6烷基、苯基、5-12个原子组成的杂芳基、3-12个原子组成的杂环基、C3-12环烷基，其中，所述C1-6烷基、苯基、5-12个原子组成的杂芳基、3-12个原子组成的杂环基和C3-12环烷基独立地未被取代或被1、2、3或4个C1-6烷基、F、Cl、Br、I、CN、NO2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基取代；
各R2和R7独立地为氧、硫、硒或碲；
各R3和R6独立地为氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、F、Cl、Br或I；
各R4和R5独立地为氢、F、Cl、Br、I、、C1-6烷基、C1-6烷氧基或磺酸基，其中，各C1-6烷基、C1-6烷氧基和磺酸基独立地未被取代或被1、2、3、4或5个C1-6烷基、-OH、磺酸基、F、Cl、Br、I取代。
根据本发明实施例的荧光探针，膜通透性好，不需要对细胞进行固定、通透等处理，在保持细胞活性的条件下对细胞内线粒体G-四链体进行特异性标记；同时具有生物相容性好、细胞毒性低、对生物样品损伤小的优点，可以实现对细胞样品的实时监测，且不受细胞内pH值的影响。此外，根据本发明实施例的探针成分简单，检测操作简便、快捷，有望成为检测活细胞线粒体G-四链体的通用染料。
另外，根据本发明上述实施例的荧光探针还可以具有如下附加的技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，R1独立地为氢、C1-4烷基、苯基、5-6个原子组成的杂芳基、5-6个原子组成的杂环基、C5-6环烷基，其中，所述C1-6烷基、苯基、5-6个原子组成的杂芳基、5-6个原子组成的杂环基和C5-6环烷基独立地未被取代或被1、2、3或4个C1-6烷基、F、Cl、Br、I、CN、NO2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基取代；
各R2和R7独立地为氧、硫、硒或碲；
各R3和R6独立地为氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、F、Cl、Br或I；
各R4和R5独立地为氢、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C1-4烷氧基或磺酸基，其中，各C1-4烷基、C1-4烷氧基和磺酸基独立地未被取代或被1、2、3、4或5个C1-6烷基、-OH、磺酸基、F、Cl、Br、I取代。
根据本发明的实施例，R1独立地为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、甲基苯基或二甲基苯基。
根据本发明的实施例，各R3和R6独立地为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、一氟甲烷、二氟甲烷、三氟甲烷、一溴甲烷、二溴甲烷、三溴甲烷、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氟、氯、溴或碘。
根据本发明的实施例，各R4和R5独立地为H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-CH3OH、-CH2CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2CH2OH、-CH(OH)CH2CH3、-CH2CH(OH)CH3、-SO3CH3、-SO3CH2CH3、-SO3CH2CH2CH3或-SO3CH(CH3)2。
根据本发明的实施例，其包含以下其中之一的结构或其中之一结构的立体异构体：
根据本发明的又一方面，本发明提供了前述的荧光探针在靶向细胞内线粒体荧光成像中的用途。如前所述，前面所述的荧光探针膜通透性和生物相容性好、细胞毒性低、对生物样品损伤小的优点，利用前面所述的荧光探针在靶向细胞内线粒体荧光成像，不需要对细胞进行固定、通透等处理，在保持细胞活性的条件下对细胞内线粒体进行特异性标记，并且可以实现对细胞样品的实时监测，且不受细胞内pH值的影响。此外，需要说明的是，所述荧光探针具有前述荧光探针的全部技术特征和优点，在此不再一一赘述。
根据本发明的实施例，上述用途还可以包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述细胞为活细胞。
根据本发明的再一方面，本发明提供了一种细胞线粒体的荧光成像的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将前述的荧光探针与溶剂混合，以便得到荧光探针溶液；将所述荧光探针溶液与细胞进行接触培养，以便得到荧光标记的细胞；以及对所述荧光标记的细胞进行荧光成像。如前所述，前面所述的荧光探针具有膜通透性和生物相容性好、细胞毒性低、对生物样品损伤小的优点，利用所述荧光探针进行细胞线粒体的荧光成像，不需要对细胞进行固定、通透等处理，在保持细胞活性的条件下对细胞内自噬溶酶体进行特异性标记，并且可以实现对细胞样品的实时监测，且不受细胞内pH值的影响。此外，需要说明的是，所述荧光探针具有前述荧光探针的全部技术特征和优点，在此不再一一赘述。
根据本发明的实施例，上述方法还可以包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述溶剂为选自生理盐水、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液、磷酸盐的缓冲溶液、甲醇溶液、乙醇溶液、乙腈溶液、二甲亚砜溶液和二甲酰胺溶液的至少一种。其中，需要说明的是，“甲醇溶液”可以是纯的甲醇，也可以是甲醇和水以任意比例混合得到的溶液。同理，“乙醇溶液”、“乙腈溶液”、“二甲亚砜溶液”和“二甲酰胺溶液”也是如此，在此不再一一赘述。
根据本发明的实施例，所述细胞为活细胞。
根据本发明的具体实施例，所述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液和磷酸盐的缓冲溶液的pH值均为5.8-8.2，浓度均为0-50mmol/L。由此，缓冲液的pH值与细胞内的pH值接近，与细胞的生物相容性好。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了荧光探针1的细胞毒性实验结果；
图2显示了荧光探针1受pH值影响的结果；
图3显示了荧光探针1和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图4显示了荧光探针2和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图5显示了荧光探针3和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图6显示了荧光探针4和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图7显示了荧光探针5和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图8显示了荧光探针6和线粒体染料MitoTracker Deep Red共染的效果图；
图9显示了荧光探针1的1H-NMR谱图；
图10显示了荧光探针1的质谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，本发明所述的“荧光探针”还可以作为激光染料、非线性光学材料，以及生物传感器等。
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式或化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
除非另外说明，应当应用本文所使用的下列定义。出于本发明的目的，化学元素与元素周期表CAS版，和《化学和物理手册》，第75版，1994一致。此外，有机化学一般原理可参考“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999,和“March's Advanced Organic Chemistry”by Michael B.Smith and Jerry March,JohnWiley&Sons,NewYork:2007中的描述，其全部内容通过引用并入本文。
除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。
本发明中技术特征定义前使用“在一些实施例”或“在另一些实施例”，表示此处定义的技术特征可以与其他的由“在一些实施例”或“在另一些实施例”引出的技术特征任意的组合成完整的技术方案。
“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-HillDictionary ofChemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；and Eliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry ofOrganic Compounds”，JohnWiley&Sons，Inc.，NewYork，1994。
许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。在描述光学活性化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示分子关于其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(-)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。一种具体的立体异构体是对映异构体，这种异构体的混合物称作对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时，可出现这种情况。
本发明公开化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。
所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
像本发明所描述的，本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像实施例里面特殊的例子，子类，和本发明所包含的一类化合物。应了解“任选取代的”这个术语与“取代或非取代的”这个术语可以交换使用。一般而言，术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个任选的取代基团可以在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。当取代基被描述为“独立选自”基团，则每个取代基彼此独立地选择，因此每个取代基可以彼此相同或不同。术语“未取代或被……所取代”，即所述结构是未取代的或者被一个或多个本发明所述的取代基取代，本发明所述的取代基包括，F、Cl、Br、I、烷基、烷氧基等。
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式“各……独立地为”与“……各自独立地为”和“……独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
在本说明书的各部分，本发明公开化合物的取代基按照基团种类或范围公开。特别指出，本发明包括这些基团种类和范围的各个成员的每一个独立的次级组合。例如，术语“C1-6烷基”特别指独立公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
术语“烷基”表示1-6个碳原子，或1-5个碳原子，或1-4个碳原子，或1-3个碳原子，或1-2个碳原子的饱和直链或支链的单价烃基，其中烷基可以独立且任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。烷基的实例包括，但并不限于，甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、正丙基(n-Pr，-CH2CH2CH3)、异丙基(i-Pr，-CH(CH3)2)、正丁基(n-Bu，-CH2CH2CH2CH3)、异丁基(i-Bu，-CH2CH(CH3)2)、仲丁基(s-Bu，-CH(CH3)CH2CH3)、叔丁基(t-Bu，-C(CH3)3)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)等等。术语“烷基”和其前缀“烷”在此处使用，都包含直链和支链的饱和碳链。
本发明中所使用的术语“烷氧基”，涉及烷基，如本发明所定义的，通过氧原子连接到主要的碳链上，这样的实例包括，但并不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。并且所述烷氧基可以是取代或未取代的，其中取代基可以是，但并不限于，氘、羟基、氨基、卤素、氰基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、巯基、硝基等等。
术语“卤代烷基”表示烷基可以被一个或多个卤素原子所取代的情况，这样的实例包括，但并不限于三氟甲基、二氟甲氧基等。
术语“环烷基”表示含有3-12个碳原子的，单价或多价的饱和单环，双环或三环体系。双环环烷基包含螺双环烷基、稠合双环烷基和桥双环烷基。在一实施方案中，环烷基包含3-12个碳原子；在另一实施方案中，环烷基包含3-8个碳原子；在又一实施方案中，环烷基包含3-6个碳原子。环烷基的实例包括，但不限于：C3-C6环烷基具体是指环丙基、环丁基、环戊基和环己基。所述环烷基基团可以独立地未被取代或被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂环基”和“杂环”在此处可交换使用，都是指包含3-12个环原子的，单价或多价的，饱和或部分不饱和的，非芳香性的单环、双环或三环，其中至少一个环原子选自氮、硫和氧原子。除非另外说明，杂环基可以是碳基或氮基，且-CH2-基团可以任选地被-C(＝O)-替代，环的硫原子可以任选地被氧化成S-氧化物，环的氮原子可以任选地被氧化成N-氧化合物。所述的杂环基具有一个或多个连接点与分子的其余部分相连。杂环基包含饱和的杂环基(杂环烷基)和部分不饱和的杂环基。杂环基的实例包括，但不限于：环氧乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、1,3-二氧环戊基、二硫环戊基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二噁烷基、二噻烷基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氮单杂环庚烷、氧氮杂基(如，1,4-氧氮杂基、1,2-氧氮杂基)、二氮杂基(如，1,4-二氮杂基、1,2-二氮杂基)、二氧杂基(如，1,4-二氧杂基、1,2-二氧杂基)、硫氮杂基(如1,4-硫氮杂基、1,2-硫氮杂基)、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,3-苯并二噁茂基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基、2-氮杂螺[4.4]壬烷基、1,6-二氧杂螺[4.4]壬烷基、2-氮杂螺[4.5]癸烷基、8-氮杂螺[4.5]癸烷基、7-氮杂螺[4.5]癸烷基、3-氮杂螺[5.5]十一烷基、2-氮杂螺[5.5]十一烷基、八氢-1H-异吲哚基、八氢环戊烷并[c]吡咯基、六氢呋喃并[3,2-b]呋喃基和十二氢异喹啉基，等。杂环基中-CH2-基团被-C(＝O)-替代的实例包括，但不限于，2-氧代吡咯烷基、氧代-1,3-噻唑烷基、2-哌啶酮基和3,5-二氧代哌啶基。杂环基中硫原子被氧化的实例包括，但不限于，环丁砜基、1,1-二氧代硫代吗啉基。所述的杂环基基团可以任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂芳基”表示含有5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环和三环体系，其中至少一个环是芳香族的，且至少一个芳香环包含一个或多个杂原子，其中每一个环体系包含5-7个原子组成的环，且有一个或多个连接点与分子其余部分相连。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳环”或“杂芳族化合物”交换使用。在一实施方案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-12个原子组成的杂芳基。在另一实施案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-10个原子组成的杂芳基。在另一实施方案中，杂芳基为包含1，2，3或4个独立选自O，S和N的杂原子的5-6个原子组成的杂芳基。所述杂芳基基团任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“n个原子组成的”，其中n是整数，典型地描述分子中成环原子的数目，在所述分子中成环原子的数目是n。例如，哌啶基是6个原子组成的杂环烷基，而1,2,3,4-四氢萘基是10个原子组成的碳环基基团。
说明的是，除非以其他方式明确指出，在本文中通篇采用的描述方式“各…独立地为”、“…独立地为”和“…各自独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。本发明中立体化学的定义和惯例的使用通常参考以下文献：S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；and Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistryof Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明的化合物可以包含不对称中心或手性中心，因此存在不同的立体异构体。本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但绝不限于，非对映体、对映异构体、阻转异构体和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D、L或R、S用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体、异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
在此需要说明的是，对于式(I)的化合物，其制备方法可以参考Hamer,F.M.TheChemistry of Heterocyclic Compounds.The Cyanine Dyes and RelatedCompounds.Interscience Publishers,New York-London,1964和Ficken,G.E.TheChemistry of Synthetic Dyes.Cyanine Dyes.Academic Press,1971中记载的合成路线，也可以使用本领域熟知的其他方法来制备。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
下述实施例中用于观测细胞荧光的仪器为激光共聚焦显微镜(OLYMPUS FV1000-IX81(Olympus,Japan))。
需要说明的是，MitoTracker Deep Red探针对细胞成像应用的方法是参考商品说明书上进行的，本发明具体实施例中采用的MitoTracker Deep Red探针购自ThermoFisher Scientific(中国)。
下面通过具体实施例对本发明进行进一步解释说明。
实施例1
1、化合物(1)、(2)、(6)的合成方法如下所示，其中，反应比例以及纯化方法采用本领域常规比例或常规纯化方法即可。另外，发明人通过对各化合物的氢谱、碳谱和/或质谱数据进行分析，确认上述化合物的结构无误，其中，化合物(1)的1H-NMR谱和质谱分别参考图9和图10。
2、化合物(3)、(4)的合成方法如下所示，其中，反应比例以及纯化方法采用本领域常规比例或常规纯化方法即可。另外，发明人通过对各化合物的氢谱、碳谱和/或质谱数据进行分析，确认上述化合物的结构无误。
3、化合物(5)的合成方法如下所示，其中，反应比例以及纯化方法采用本领域常规比例或常规纯化方法即可。另外，发明人通过对各化合物的氢谱、碳谱和/或质谱数据进行分析，确认上述化合物的结构无误。
实施例2
利用本发明实施例的荧光探针1进行细胞毒性实验，具体如下：
荧光探针1
(1)用少量甲醇分别溶解荧光探针1；
(2)培养好的HeLa和MCF-7细胞，加入不同浓度的探针1溶液，继续培养24h；
(3)吸干培养基后加入10％MTT溶液，继续培养4h；
(4)吸干培养基后加入DMSO溶解，利用酶标仪测定492nm处的吸光度。以492nm处的吸光度值为纵坐标，探针1的浓度值为横坐标，作图。结果如图1所示，492nm处的吸光度值在不同探针1浓度时无明显差异，表明探针1对细胞生长未有抑制效果。
实施例3
利用本发明实施例的荧光探针1进行pH干扰实验，具体如下：
荧光探针1
(1)用少量乙醇分别溶解荧光探针1；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到不同pH值的磷酸缓冲溶液中，各样品溶液中探针的浓度均为20μM；
(3)将各样品溶液置于HITACHI F-4600荧光光谱仪(Hitachi Limited,Japan)进行检测，激发波长为550nm，收集波长为560—700nm；
(4)取最大荧光强度值为纵坐标，pH为横坐标进行分析，如图2所示。各pH值下，荧光强度值相近，说明探针1的荧光不易受pH影响。
实施例4
分别利用本发明实施例的荧光探针1和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针1
(1)用少量乙醇分别溶解荧光探针1；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有4μM浓度的荧光探针1的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的宫颈癌细胞Hela的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图3所示，其中，a为荧光探针1的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针1在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针1对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
实施例5
分别利用本发明实施例的荧光探针2和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针2
(1)用少量乙醇分别溶解荧光探针2；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有8μM浓度的荧光探针2的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的乳腺癌细胞MCF-7的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图4所示，其中，a为荧光探针2的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针2在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针2对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
实施例6
分别利用本发明实施例的荧光探针3和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针3
(1)用少量乙醇分别溶解荧光探针3；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有8μM浓度的荧光探针3的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的人纤维肉瘤细胞HT1080的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图5所示，其中，a为荧光探针3的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针3在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针3对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
实施例7
分别利用本发明实施例的荧光探针4和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针4
(1)用少量丙酮分别溶解荧光探针4；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有8μM浓度的荧光探针4的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的人肺癌细胞A549的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图6所示，其中，a为荧光探针(4)的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针4在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针4对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
实施例8
分别利用本发明实施例的荧光探针5和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针5
(1)用少量甲醇分别溶解荧光探针5；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有8μM浓度的荧光探针5的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的人喉癌细胞HEP-2的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图7所示，其中，a为荧光探针5的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针5在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针5对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
实施例9
分别利用本发明实施例的荧光探针6和MitoTracker Deep Red探针对细胞进行荧光成像，具体如下：
荧光探针6
(1)用少量DMSO分别溶解荧光探针6；
(2)将步骤(1)的荧光探针溶液加入到含10％胚胎牛血清的培养基中，配置成含有8μM浓度的荧光探针6的培养液；
(3)用移液枪分别移取1mL步骤(2)配制的培养液，分别加入到用含10％胚胎牛血清培养基培养的乳腺癌细胞MCF-7的培养皿中，并将其放入于37℃、5％CO2培养箱中培养1h；
(4)将培养后的细胞分别用PBS洗涤三次，再加入MitoTracker Deep Red(50nM)的1mL空白混合培养基进行染色，10分钟后用PBS洗涤三次后进行荧光共聚焦成像，其中探针1的激发波长为559nm，采集波长为570—630nm，MitoTracker Deep Red的激发波长为633nm，采集波长为650—750nm。结果如图8所示，其中，a为荧光探针6的荧光共聚焦成像示意图，b为MitoTracker Deep Red的荧光共聚焦成像示意图，图a的荧光信号与图b的荧光信号高度重合，表明荧光探针6在细胞内标记物质为线粒体。实验结果表明荧光探针6对细胞内线粒体具有良好的靶向性。(图中标尺为10μm)。
总结
综合实施例2-9可得出，本发明实施例的荧光探针膜通透性好，不需要对细胞进行固定、通透等处理，在保持细胞活性的条件下对细胞内线粒体进行特异性标记；同时根据本发明实施例的探针细胞毒性低，可以实现对细胞样品的实时监测，且不受细胞内pH值的影响。此外，根据本发明实施例的探针成分简单，检测操作简便、快捷，有望成为检测活细胞线粒体的通用染料。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种荧光探针，其特征在于，其为式(I)所示的化合物或式(I)所示化合物的立体异构体，
其中，
R1独立地为氢、C1-6烷基、苯基、5-12个原子组成的杂芳基、3-12个原子组成的杂环基、C3-12环烷基，其中，所述C1-6烷基、苯基、5-12个原子组成的杂芳基、3-12个原子组成的杂环基和C3-12环烷基独立地未被取代或被1、2、3或4个C1-6烷基、F、Cl、Br、I、CN、NO2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基取代；
各R2和R7独立地为氧、硫、硒或碲；
各R3和R6独立地为氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、F、Cl、Br或I；
各R4和R5独立地为氢、F、Cl、Br、I、C1-6烷基、C1-6烷氧基或磺酸基，其中，各C1-6烷基、C1-6烷氧基和磺酸基独立地未被取代或被1、2、3、4或5个C1-6烷基、-OH、磺酸基、F、Cl、Br、I取代。
2.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，R1独立地为氢、C1-4烷基、苯基、5-6个原子组成的杂芳基、5-6个原子组成的杂环基、C5-6环烷基，其中，所述C1-4烷基、苯基、5-6个原子组成的杂芳基、5-6个原子组成的杂环基、C5-6环烷基独立地未被取代或被1、2、3或4个C1-6烷基、F、Cl、Br、I、CN、NO2、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基取代；
各R2和R7独立地为氧、硫、硒或碲；
各R3和R6独立地为氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、F、Cl、Br或I；
各R4和R5独立地为氢、F、Cl、Br、I、C1-4烷基、C1-4烷氧基或磺酸基，其中，各C1-4烷基、C1-4烷氧基和磺酸基独立地未被取代或被1、2、3、4或5个C1-6烷基、-OH、磺酸基、F、Cl、Br、I取代。
3.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，R1独立地为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、甲基苯基或二甲基苯基。
4.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，各R3和R6独立地为氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、一氟甲烷、二氟甲烷、三氟甲烷、一溴甲烷、二溴甲烷、三溴甲烷、甲氧基、乙氧基、丙氧基、氟、氯、溴或碘。
5.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，各R4和R5独立地为H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、-CH3OH、-CH2CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2CH2OH、-CH(OH)CH2CH3、-CH2CH(OH)CH3、-SO3CH3、-SO3CH2CH3、-SO3CH2CH2CH3或-SO3CH(CH3)2。
6.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，其包含以下其中之一的结构或其中之一结构的立体异构体：
7.权利要求1-6任一项所述的荧光探针在靶向细胞内线粒体G-四链体荧光成像中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述细胞为活细胞。
9.一种细胞内线粒体G-四链体的荧光成像的方法，其特征在于，包括：
将权利要求1-6任一项所述的荧光探针与溶剂混合，以便得到荧光探针溶液；
将所述荧光探针溶液与细胞进行接触培养，以便得到荧光标记的细胞；以及
对所述荧光标记的细胞进行荧光成像。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述溶剂为选自生理盐水、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液、磷酸盐的缓冲溶液、甲醇溶液、乙醇溶液、乙腈溶液、二甲亚砜溶液和二甲酰胺溶液的至少一种；
任选地，所述细胞为活细胞。
CN201910280942.2A 2019-04-09 2019-04-09 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用 Active CN110055054B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910280942.2A CN110055054B (zh) 2019-04-09 2019-04-09 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910280942.2A CN110055054B (zh) 2019-04-09 2019-04-09 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110055054A true CN110055054A (zh) 2019-07-26
CN110055054B CN110055054B (zh) 2021-04-06

Family

ID=67318775

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910280942.2A Active CN110055054B (zh) 2019-04-09 2019-04-09 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110055054B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110776458A (zh) * 2019-11-01 2020-02-11 济南大学 一种检测线粒体膜电位的荧光探针及其制备方法和应用
CN111440143A (zh) * 2020-02-25 2020-07-24 苏州大学 基于含氮杂环的中性线粒体荧光标记物及其制备方法与应用
CN111961042A (zh) * 2020-07-23 2020-11-20 中国科学院化学研究所 用于检测脊sca36基因ggcctg重复序列异常扩增的化合物及检测方法
CN112898228A (zh) * 2021-01-18 2021-06-04 中国科学院化学研究所 基于混合组装的混合聚集体fret探针及其在检测线粒体自噬中的用途
WO2021135137A1 (zh) * 2019-12-31 2021-07-08 中山大学 一种靶向线粒体g-四链体dna的荧光探针及其制备方法和应用
CN113636988A (zh) * 2020-04-26 2021-11-12 中国科学院理化技术研究所 一种硒代吲哚菁绿衍生物及其制备方法和应用
CN114437057A (zh) * 2020-10-30 2022-05-06 深圳市瑞图生物技术有限公司 一种荧光染料及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102706788A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 用于检测乳腺癌的系统
CN102706787A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 菁染料的新用途
CN102703569A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 菁染料的新用途
CN103611929A (zh) * 2013-12-05 2014-03-05 中国科学院化学研究所 一种荧光标记金纳米颗粒的方法
CN108794425A (zh) * 2018-05-21 2018-11-13 中国科学院化学研究所 荧光探针及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102706788A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 用于检测乳腺癌的系统
CN102706787A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 菁染料的新用途
CN102703569A (zh) * 2012-05-24 2012-10-03 中国科学院化学研究所 菁染料的新用途
CN103611929A (zh) * 2013-12-05 2014-03-05 中国科学院化学研究所 一种荧光标记金纳米颗粒的方法
CN108794425A (zh) * 2018-05-21 2018-11-13 中国科学院化学研究所 荧光探针及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HONGBO CHEN等: "Monitoring autophagy in live cells with a fluorescent light-up probe for G-quadruplex structures", 《CHEM. COMMUN.》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110776458A (zh) * 2019-11-01 2020-02-11 济南大学 一种检测线粒体膜电位的荧光探针及其制备方法和应用
CN110776458B (zh) * 2019-11-01 2021-10-26 济南大学 一种检测线粒体膜电位的荧光探针及其制备方法和应用
WO2021135137A1 (zh) * 2019-12-31 2021-07-08 中山大学 一种靶向线粒体g-四链体dna的荧光探针及其制备方法和应用
CN111440143A (zh) * 2020-02-25 2020-07-24 苏州大学 基于含氮杂环的中性线粒体荧光标记物及其制备方法与应用
CN111440143B (zh) * 2020-02-25 2021-04-27 苏州大学 基于含氮杂环的中性线粒体荧光标记物及其制备方法与应用
CN113636988A (zh) * 2020-04-26 2021-11-12 中国科学院理化技术研究所 一种硒代吲哚菁绿衍生物及其制备方法和应用
CN113636988B (zh) * 2020-04-26 2023-07-07 中国科学院理化技术研究所 一种硒代吲哚菁绿衍生物及其制备方法和应用
CN111961042A (zh) * 2020-07-23 2020-11-20 中国科学院化学研究所 用于检测脊sca36基因ggcctg重复序列异常扩增的化合物及检测方法
CN111961042B (zh) * 2020-07-23 2022-08-12 中国科学院化学研究所 用于检测脊sca36基因ggcctg重复序列异常扩增的化合物及检测方法
CN114437057A (zh) * 2020-10-30 2022-05-06 深圳市瑞图生物技术有限公司 一种荧光染料及其制备方法和应用
CN112898228A (zh) * 2021-01-18 2021-06-04 中国科学院化学研究所 基于混合组装的混合聚集体fret探针及其在检测线粒体自噬中的用途
CN112898228B (zh) * 2021-01-18 2022-08-02 中国科学院化学研究所 基于混合组装的混合聚集体fret探针及其在检测线粒体自噬中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN110055054B (zh) 2021-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110055054A (zh) 一种靶向活细胞线粒体g-四链体的荧光探针及其应用
Song et al. Low molecular weight fluorescent probes with good photostability for imaging RNA-rich nucleolus and RNA in cytoplasm in living cells
US10495632B2 (en) Azetidine-substituted fluorescent compounds
Liu et al. A sensitive and selective fluorescent probe for the detection of hydrogen peroxide with a red emission and a large Stokes shift
Ren et al. Fluorescent probe for simultaneous discrimination of Cys/Hcy and GSH in pure aqueous media with a fast response under a single-wavelength excitation
Liu et al. Constructing a fluorescent probe for specific detection of cysteine over homocysteine and glutathione based on a novel cysteine-binding group but-3-yn-2-one
CN107407672A (zh) 用于准确和灵敏检测s‑期dna合成和细胞增殖的光稳定aie荧光团
Densil et al. Aggregation‐induced emission enhancement of anthracene‐derived Schiff base compounds and their application as a sensor for bovine serum albumin and optical cell imaging
Kleks et al. Orthoscuticellines A–E, β-carboline alkaloids from the bryozoan Orthoscuticella ventricosa collected in Australia
CN112225711B (zh) 一种能双色同时成像细胞核和线粒体的pH敏感型荧光探针
CN108329302A (zh) 一种硫化物特异性响应的半花菁类近红外荧光探针化合物及其制备方法和应用
Yang et al. An instantaneous near-infrared trimethyl lock based fluorescent probe for biothiols with a large Stokes shift
CN108794425A (zh) 荧光探针及其应用
Li et al. A two-photon fluorescent probe based on link-anthocyanin for detecting cysteine in nucleoli and lysosomes
Nandhikonda et al. Highly water-soluble, OFF–ON, dual fluorescent probes for sodium and potassium ions
CN110272731B (zh) 一种荧光探针dcco及其制备方法和应用
WO2014088512A1 (en) Ratiometric fluorescent dye for the detection of glutathione in cell and tissue
Perfilov et al. Environment-sensitive fluorogens based on a GFP chromophore structural motif
Krzemien et al. Tuning Photodynamic Properties of BODIPY Dyes, Porphyrins’ Little Sisters
CN108586448A (zh) 一种喹啉鎓盐型化合物及其应用
Yin et al. Preparation, regulation and biological application of a Schiff base fluorescence probe
CN111039897B (zh) 荧光探针及其在检测自噬溶酶体中的用途
JP2016193897A (ja) ｐＨ依存性蛍光化合物
JP7045046B2 (ja) シアニン化合物及びそれを用いた蛍光色素
CN111100627A (zh) 荧光探针及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant