CN110051653A - 一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒及冻干粉的方法 - Google Patents

一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒及冻干粉的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒及冻干粉的方法。属于医药技术领域，将荜茇酰胺原料药溶于适量有机溶剂中，作为有机相。将牛血清白蛋白溶解在纯水中，作为水相。在高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，剪切分散得到初乳。将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，适当压力下进行均质。均质完成后通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到荜茇酰胺白蛋白纳米粒，冻干，得到荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉。本发明提供的荜茇酰胺白蛋白纳米粒可以改善荜茇酰胺的水溶性，提高药物的生物利用度，且其制备工艺简单，避免了戊二醛的使用，安全性好。

Description

一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒及冻干粉的方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种荜茇酰胺白蛋白纳米粒及其冻干粉的制备方法。
背景技术
荜茇酰胺是从胡椒科植物中提取出来的天然生物碱类化合物。分子式为C17H19NO5，化学名称为5,6-二氢-1-[1-氧代-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2-丙烯基]-2(1H)吡啶酮，熔点为24℃，结构式如(I)所示：
研究表明，荜茇酰胺可以通过增加细胞内活性氧(ROS)水平发挥抗癌作用，有效抑制体内肿瘤生长。荜茇酰胺对胶质母细胞瘤、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌等恶性肿瘤都具有显著的细胞毒性作用，而对正常细胞几乎没有影响。因此，荜茇酰胺作为一种抗癌药物具有很大的发展潜力。然而，由于其水溶性差，体内半衰期短，使荜茇酰胺的生物利用度较低。因此，需要开发荜茇酰胺的新型给药系统，改善其水溶性，提高其在体内的治疗效果，以促进和推广荜茇酰胺在医药领域的应用。
白蛋白纳米粒是以白蛋白为载体材料，结合或包埋药物而形成的一种固态胶体药物释放体系。白蛋白作为一种多功能的药物靶向载体，因能被肿瘤组织优先摄取而显示出独特的靶向肿瘤特性，为抗癌药物的靶向运输提供了有效载体。因此，白蛋白纳米粒具有提高难溶性药物溶解度、控制药物释放及靶向性等独特优势，将难溶性药物制成白蛋白纳米粒可以提高体内稳定性，提高口服生物利用度。这使得那些溶解性差，口服生物利用度低的药物能够更好的发挥药效，更适合药物制剂的临床应用。
传统的白蛋白纳米粒制备技术是去溶剂化法，通过使用脱水剂除去白蛋白的水化膜，使白蛋白析出，再使用交联剂与白蛋白发生交联反应使之变性，最后纯化除去残留的交联剂和有机溶剂。其中，交联剂多采用戊二醛，但是戊二醛本身存在较大的毒性，会引起过敏性接触性皮炎、哮喘等。此外，戊二醛对环境的污染也比较严重。因此，需要开发一种更加安全、高效的白蛋白纳米粒制备技术。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种新的荜茇酰胺白蛋白纳米粒及其冻干粉的制备工艺。采用本发明的方法，不使用交联剂，而是基于白蛋白分子本身的二硫键，在高剪切力的气穴空化作用下形成新的二硫键，将难溶药物包裹在白蛋白分子中，避免了戊二醛的使用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒的方法，包括如下步骤：
1)将荜茇酰胺原料药溶于适量有机溶剂中，作为有机相；
2)取适量牛血清白蛋白溶于纯水中，并用PH调节剂调节PH至5～7，作为水相；
3)在高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，剪切分散得到初乳；
4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，适当压力下进行均质，均质完成后通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到荜茇酰胺白蛋白纳米粒。
进一步的，所述有机溶剂是无水乙醇和/或二氯甲烷。
更进一步的，所述有机溶剂是无水乙醇和二氯甲烷按体积比(1～6):1的混合。
更进一步的，所述有机溶剂是无水乙醇和二氯甲烷按体积比1:1的混合。
进一步的，所述pH调节剂为柠檬酸、盐酸或氢氧化钠。
更进一步的，所述pH调节剂为0.1mol/L的柠檬酸溶液或0.1mol/L的盐酸溶液或0.1mol/L的氢氧化钠溶液。
进一步的，用PH调节剂调节PH至6。
进一步的，所述有机相中，荜茇酰胺的质量体积百分浓度为0.3～0.4％；所述水相中，牛血清白蛋白的质量体积百分浓度为0.5％～2％。
更进一步的，牛血清白蛋白的质量体积百分浓度为1％。
进一步的，步骤3)中，按体积比，有机相:水相＝1:(4～15)。
更进一步的，步骤3)中，按体积比，有机相:水相＝1:4。
进一步的，步骤3)中，先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散10～20min，得到初乳。
更进一步的，步骤3)中，先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min。
进一步的，步骤4)中，均质压力为60～80psi，均质次数为6～12次。
更进一步的，步骤4)中，均质压力为80psi，均质次数为9次。
一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉的方法，包括如下步骤：于上述方法制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒中，加入冻干保护剂，先在-80℃冰箱中冷冻24h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥18h，即得荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉；所述冻干保护剂为甘露醇、乳糖、蔗糖中的一种或二种以上的混合。
进一步的，所述冻干保护剂为2％～5％蔗糖。
本发明的有益效果是：本发明制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒，解决了荜茇酰胺水溶性差的问题，提高了药物的溶解度，并且提高了荜茇酰胺在体内的稳定性，延长药物在体内的滞留时间，提高口服生物利用度，提高药效。荜茇酰胺白蛋白纳米粒基于白蛋白具有的可生物降解、无毒、无抗原性等特点，在降低药物的不良反应的同时，可以发挥更好的治疗效果，提高用药的安全性。本发明制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒，处方工艺简单，制备过程中不使用任何表面活性剂，安全性高，易于工业化。荜茇酰胺白蛋白纳米粒制剂的研究和开发可以拓展荜茇酰胺在医药领域的应用。
附图说明
图1为本发明实施例8制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径分布图。
图2为本发明实施例8制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的zeta电位图。
图3为本发明实施例8制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的DSC图。
图4为本发明实施例8制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的XRD图。
图5为本发明实施例8制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的体外释放曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步说明，但不是对本发明保护范围的限制。
实施例1
有机溶剂种类对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响。
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于4mL有机溶剂中，作为有机相。所述有机溶剂分别是无水乙醇、无水乙醇-二氯甲烷(v:v＝3:1)、无水乙醇-二氯甲烷(v:v＝6:1)。
(2)取0.4g牛血清白蛋白溶于40mL纯水中，并用PH调节剂调节PH为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。使用马尔文粒度仪和zeta电位分析仪测定荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径和zeta电位。结果如表1所示。
表1有机溶剂种类对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响结果
有机相 外观 粒径(nm) PDI zeta电位
无水乙醇 淡黄色透明液体 245.5±0.7 0.275±0.025 -15.2±0.1
无水乙醇-二氯甲烷(3:1) 淡黄色透明液体 222.4±5.7 0.261±0.006 -16.6±1.0
无水乙醇-二氯甲烷(6:1) 淡黄色透明液体 230.2±2.1 0.263±0.009 -15.7±0.5
表1结果表明，与单一无水乙醇相比，使用无水乙醇与二氯甲烷的混合溶剂制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的效果更好。当有机溶剂为无水乙醇与二氯甲烷按体积比3:1的混合溶剂时，制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径最小。本发明优选，有机溶剂为无水乙醇和二氯甲烷按体积比3:1的混合。
实施例2
牛血清白蛋白浓度对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于3mL无水乙醇和1mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)分别取0.2g牛血清白蛋白、0.4g牛血清白蛋白、0.8g牛血清白蛋白溶于40mL纯水中，分别得质量体积百分浓度为0.5％、1％、2％的牛血清白蛋白溶液，用PH调节剂调节PH为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。使用马尔文粒度仪和zeta电位分析仪测定荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径和zeta电位。结果如表2所示。
表2白蛋白浓度对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响结果
牛血清白蛋白浓度 外观 粒径(nm) PDI zeta电位
0.5％ 淡黄色透明液体 227.1±4.1 0.256±0.054 -13.9±0.6
1％ 淡黄色透明液体 223.2±1.7 0.254±0.095 -16.5±1.0
2％ 淡黄色透明液体 230.6±2.3 0.282±0.053 -15.7±0.9
由表2结果表明，使用不同浓度的牛血清白蛋白制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径无明显差别，粒径均分散在230nm左右。当牛血清白蛋白浓度为1％时，制备的白蛋白纳米粒的zeta电位最大，样品稳定性更好。本发明优选牛血清白蛋白的质量体积百分浓度为1％。
实施例3
有机相与水相体积比对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于3mL无水乙醇和1mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)按体积比，有机相:水相＝1:4，1:10、1:15，分别取质量体积百分浓度为1％的牛血清白蛋白溶液，用PH调节剂调节PH为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。使用马尔文粒度仪和zeta电位分析仪测定荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径和zeta电位。结果如表3示。
表3有机相与水相体积比对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响结果
V<sub>有机相</sub>：V<sub>水相</sub> 外观 粒径(nm) PDI zeta电位
1:4 淡黄色透明液体 244.2±2.7 0.337±0.057 -14.1±0.4
1:10 淡黄色透明液体 227.2±4.5 0.263±0.061 -16.5±0.5
1:15 淡黄色透明液体 215.3±1.5 0.458±0.034 -16.6±0.4
由表3结果表明，当有机相与水相体积比为1:4时，制备的白蛋白纳米粒粒径最大。随着水相比例的增大，白蛋白纳米粒的粒径逐渐减小。本发明优选有机相与水相体积比为1:15。
实施例4
pH对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于3mL无水乙醇和1mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)分别取0.6g牛血清白蛋白溶于60mL纯水中，分别得质量体积百分浓度为1％的牛血清白蛋白水溶液，用PH调节剂调节PH分别为5、6、7，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。使用马尔文粒度仪和zeta电位分析仪测定荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径和zeta电位。结果如表4示。
表4 pH对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响结果
pH 外观 粒径(nm) PDI zeta电位
5 淡黄色透明液体 265.9±2.3 0.544±0.034 -10.2±0.2
6 淡黄色透明液体 219.8±1.7 0.452±0.096 -16.9±1.5
7 淡黄色透明液体 244.8±4.2 0.482±0.051 -17.2±0.8
由表4结果表明，PH值的大小会对荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径产生影响，当pH为6时，制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径最小。本发明优选pH为6。
实施例5
均质压力及均质次数对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于3mL无水乙醇和1mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)取0.6g牛血清白蛋白溶于60mL纯水中，得质量体积百分浓度为1％的牛血清白蛋白水溶液，用PH调节剂调节PH分别为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，分别在60psi下均质6次、9次、12次。70psi下均质6次、9次、12次。80psi下均质6次、9次、12次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。使用马尔文粒度仪和zeta电位分析仪测定荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径和zeta电位。结果如表5所示。
表5均质压力及均质次数对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径和zeta电位的影响结果
由表5结果表明，随着均质压力和均质次数的增加，制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径逐渐减小。由于均质次数过多在制备过程中会产生大量热，不利于溶液稳定，因此，本发明优选均质压力为80psi，均质次数为9次。
实施例6
正交设计试验
通过单因素实验确定了有机相种类(A)、V有机相：V水相(B)、均质压力(C)、均质次数(D)为影响荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径的主要因素，从这四个因素入手，每个因素选取3个水平，进行正交试验。正交试验设计方案如表6所示。正交试验结果如表7所示。
表6正交试验因素表
表7正交试验结果
由表7实验结果表明，四种因素对荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径影响大小依次为C>D>A>B，最优组合为A1B1C3D2。最终确定制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒的最佳工艺为：荜茇酰胺原料的质量体积百分浓度为0.3～0.4％，牛血清白蛋白的质量体积百分浓度为1％；有机溶剂为无水乙醇和二氯甲烷按体积比1:1的混合；V有机相：V水相＝1:4；pH＝6；均质压力为80psi；均质次数为9次。
实施例7
冻干保护剂用量对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径的影响
制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于5mL无水乙醇和5mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)取牛血清白蛋白0.4g溶于40mL纯水中，用0.1mol/L HCl调节pH为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。
(5)于步骤(4)所得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液中分别加入2％蔗糖、3％蔗糖、5％蔗糖作为冻干保护剂，先在-80℃冰箱中冷冻24h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥18h，即得荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉。
取适量荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉于超纯水中，考察复溶所需时间，测定粒径及PDI，并与冻干前比较。结果如表8所示。
表8冻干保护剂用量对荜茇酰胺白蛋白纳米粒粒径的影响结果
蔗糖浓度 复溶效果 复溶前粒径(nm) 复溶后粒径(nm) PDI
2％ 淡黄色透明液体 205.7±1.6 222.9±2.3 0.473±0.034
3％ 淡黄色透明液体 208.9±2.1 312.4±1.7 0.447±0.096
5％ 淡黄色透明液体 210.4±1.3 349.8±4.2 0.506±0.051
由表8结果表明，蔗糖作为冻干保护剂时，具有较好的赋形作用，冻干粉较容易复溶，复溶后荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径较冻干前均有所增加。其中2％蔗糖作为冻干保护剂时，冻干粉复溶后粒径变化最小，再分散效果好。本发明优选2％蔗糖作为冻干保护剂。
实施例8
一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉的方法
(一)制备方法如下：
(1)取14.7mg荜茇酰胺原料药溶于5mL无水乙醇和5mL二氯甲烷中，作为有机相。
(2)取牛血清白蛋白0.4g溶于40mL纯水中，用0.1mol/L HCl调节pH为6，作为水相。
(3)先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散15min，得到初乳。
(4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，80psi均质9次。均质完成后50℃旋转蒸发除去有机溶剂，得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液。
(5)于步骤(4)所得荜茇酰胺白蛋白纳米粒的水溶液中加入2％蔗糖作为冻干保护剂，先在-80℃冰箱中冷冻24h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥18h，即得荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉。
(二)制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径及zeta电位测定
采用马尔文Nano-ZS 90纳米粒度及zeta电位分析仪测定本实施例制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的粒径及其zeta电位。粒径分布情况如图1所示，zeta电位值如图2所示。
由图1可见，制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的平均粒径为202.3nm。由图2可见，zeta电位值为-16.5mV。
(三)制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的DSC表征
通过差示扫描量热法(DSC)分别测定了荜茇酰胺，牛血清白蛋白，荜茇酰胺白蛋白纳米粒在25-400℃范围内的热量变化。结果如图3所示。
由图3结果表明，荜茇酰胺在128℃时具有显著的吸热峰，与荜茇酰胺相比，本实施例制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒没有荜茇酰胺的特征峰，说明荜茇酰胺晶型发生改变，变为无定型状态，药物被成功包裹在白蛋白中。
(四)制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的X射线衍射(XRD)表征
为了检测本发明制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒中荜茇酰胺的固体形态，使用XRD来进行表征。分别测定荜茇酰胺，牛血清白蛋白，荜茇酰胺白蛋白纳米粒在5°到50°的衍射情况。结果如图4所示。
由图4结果表明，荜茇酰胺在11.1°和12.5°具有尖锐的衍射峰，牛血清白蛋白由于其无定型性质，没有衍射峰出现。在荜茇酰胺白蛋白纳米粒中，荜茇酰胺的特征峰消失，说明荜茇酰胺的晶型发生改变，以无定型或无序状态存在于荜茇酰胺白蛋白纳米粒中，药物被包裹在白蛋白中。
(五)制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒的体外释放情况
将本实施例制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉用2mL纯水溶解后移入活化好的透析袋中，置于盛有20mL含有0.5％吐温80(w/v)的PBS缓冲溶液(pH7.4)的离心管中，于37℃下进行释放实验，于0.5，1，2，3，4，6，8，12、24、36、48和72h取出1mL样品溶液，同时补加相同体积的释放介质，测定样品含量，将时间和累积释放率拟合得体外释放曲线。结果如图5示。
由图5结果表明，荜茇酰胺白蛋白纳米粒呈现双相释放效果，前4个小时药物释放较快，累积释放量为31.25±1.8％，可能是吸附在白蛋白纳米粒表面的荜茇酰胺释放到释放介质中，4小时之后药物释放平缓，在24小时左右达到释放平衡，累积释放量为67.24±2.2％，具有缓释效果。

Claims (10)

1.一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将荜茇酰胺原料药溶于适量有机溶剂中，作为有机相；
2)取适量牛血清白蛋白溶于纯水中，并用PH调节剂调节PH至5～7，作为水相；
3)在高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，剪切分散得到初乳；
4)将所得初乳转移到高压微射流纳米分散仪中，适当压力下进行均质，均质完成后通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到荜茇酰胺白蛋白纳米粒。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂是无水乙醇和/或二氯甲烷。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂是无水乙醇和二氯甲烷按体积比(1～6):1的混合。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述pH调节剂为柠檬酸、盐酸或氢氧化钠。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机相中，荜茇酰胺的质量体积百分浓度为0.3～0.4％；所述水相中，牛血清白蛋白的质量体积百分浓度为0.5％～2％。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)中，按体积比，有机相:水相＝1:(4～15)。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，先在7000r/min高速剪切作用下将有机相缓慢滴加到水相中，然后再在10000r/min下剪切分散10～20min，得到初乳。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，均质压力为60～80psi，均质次数为6～12次。
9.一种制备荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉的方法，其特征在于，包括如下步骤：于权利要求1-8任一项所述的方法制备的荜茇酰胺白蛋白纳米粒中，加入冻干保护剂，先在-80℃冰箱中冷冻24h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥18h，即得荜茇酰胺白蛋白纳米粒冻干粉；所述冻干保护剂为甘露醇、乳糖和蔗糖中的一种或二种以上的混合。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述冻干保护剂为2％～5％蔗糖。
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