CN110049994B

CN110049994B - 一种缀合物及其应用

Info

Publication number: CN110049994B
Application number: CN201680091448.6A
Authority: CN
Inventors: 芦颖; 韩化敏; 田雨佳
Original assignee: Biocells Beijing Biotech Co Ltd
Current assignee: Biocells Beijing Biotech Co Ltd
Priority date: 2016-12-08
Filing date: 2016-12-08
Publication date: 2023-05-02
Anticipated expiration: 2036-12-08
Also published as: WO2018103038A1; CN110049994A

Abstract

本申请提供了包含肽和可检测的标记的缀合物，其中所述肽含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体。本申请还提供了使用包含肽和可检测的标记的缀合物诊断脑部神经损伤性疾病的方法以及用于诊断脑部神经损伤性疾病的试剂盒。

Description

一种缀合物及其应用

技术领域

本申请大体涉及生物医学技术领域，更具体地，本申请涉及脑部神经损伤疾病的诊断方法和工具。

发明背景

脑部神经损伤性疾病是由脑部神经受损引起的疾病，其一般为损伤级联反应，最终导致多途径的神经细胞损伤。而在脑部神经损伤过程中下游的突触后密度95蛋白(PSD-95)通过与多种蛋白相互作用发挥重要作用。

缺血性脑卒中是常见的脑部神经损伤性疾病之一。而急性缺血性脑卒中的病灶根据神经细胞损伤是否可逆分为缺血半暗带和缺血中心区，二者是一个动态的病理生理过程，缺血半暗带的血流量是决定该区脑组织恢复正常或发展为脑梗死的关键因素。因此早期了解病灶内血流及神经细胞状态，在适当时机恢复缺血半暗带的血供，有利于该区域神经细胞的存活和脑组织功能的恢复。准确地判断缺血半暗带范围，掌握相关供血动脉情况、脑组织低灌注程度及代谢状态等信息，可以为临床的诊断和治疗提供依据。

脑部神经损伤性疾病的诊断以早期影像学检查为主，但是由于影像诊断(X线、CT、MRI、超声等)主要显示的是一些分子改变的终效应，即器官发生了器质性变化之后才能进行观察，仅能用于具有解剖学改变的疾病检测，不能及早对发生的脑损伤进行判定和诊断。例如计算机断层扫描(computer tomography，CT)可随病情的发展而出现不同表现，通常在发病后24-48h常规CT才能显示出明显病灶。常规CT检查在脑部神经损伤性疾病发病短期内的阳性预测值很低，因此造成病情确诊的延误。

而当前发展的分子影像技术能够探查疾病过程中细胞和分子水平的异常，在尚无解剖改变的疾病前检出异常，为探索疾病的发生、发展和转归，评价药物的疗效起到连接分子生物学与临床医学之间的桥梁作用，其能够在发病早期判断发病。因而开发可用于脑部神经损伤性疾病的分子影像学诊断的试剂对于脑部神经损伤性疾病的前期诊断具有重要意义。

发明概述

第一方面，本申请提供了缀合物，其包含肽和可检测的标记，所述肽含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体。

第二方面，本申请提供了诊断个体脑部神经损伤性疾病或评价个体脑部神经损伤状态的方法，所述方法包括：

向个体给予缀合物，所述缀合物包含肽和可检测的标记，所述肽含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体；和

在个体中怀疑发生脑部神经损伤的区域检测所述可检测的标记。

第三方面，本申请提供了用于诊断脑部神经损伤性疾病或评价个体脑部神经损伤状态的试剂盒，其包括缀合物，所述缀合物包含肽和可检测的标记，所述肽含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体。

第四方面，本申请提供了治疗脑部神经损伤性疾病或状态的方法，所述方法包括：

向个体给予缀合物，所述缀合物包含肽和可检测的标记，所述肽含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体；

在个体中怀疑发生脑部神经损伤的区域检测所述可检测的标记；和

如果所述个体中可检测的标记的水平高于正常个体的水平，则给予所述个体针对脑部神经损伤性疾病的治疗。

在前述任一方面的一些实施方案中，所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分发生一处或多处保守型取代后产生的变体，优选地，所述保守型取代选自D和E之间的取代，L、V和I之间的取代以及T和S之间的取代。在具体实施方案中，所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTEL、LDTEV、LDTDI、LDTDL、LDTDV、LDSEI、LDSEL、LDSEV、LDSDI、LDSDL、LDSDV、LETEI、LETEL、LETEV、LETDI、LETDL、LETDV、VDTEI、VDTEL、VDTEV、VDTDI、VDTDL、VDTDV、IDTEI、IDTEL、IDTEV、IDTDI、IDTDL、IDTDV、IETEI、IETEL、IETEV、IETDI、IETDL、IETDV。

在前述任一方面的一些实施方案中，所述肽为包含氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体以及内化肽的嵌合肽，优选地所述内化肽包含氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ IDNO:2)。在具体实施方案中，所述嵌合肽包含氨基酸序列YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI(SEQ IDNO:3)。

在前述任一方面的一些实施方案中，所述可检测的标记选自放射性核素、同位素、光学标记、磁性物质及以上的任意组合。在具体实施方案中，所述放射性核素选自¹²⁴I、¹⁸F、¹¹C、^99mTc、¹²³I以及以上的任意组合。在具体实施方案中，所述光学标记选自荧光染料、荧光蛋白、化学发光染料、量子点及以上的任意组合。在一些具体实施方案中，所述磁性物质选自含钆复合物的纳米颗粒、超顺磁性氧化铁纳米颗粒及以上的任意组合。

在前述任一方面的一些实施方案中，脑部神经损伤性疾病为缺血性脑卒中。

附图简要描述

图1为显示Pull-down实验检测P5与PDZ1-2结构域的相互作用的图。M代表DNA分子量标识；泳道1为His+PDZ1-2+P5；泳道2为单独的P5；泳道3为His+P5；泳道4为His+PDZ1-2。泳道1所示的洗脱条带包含P5与PDZ1-2两者，证实P5能够结合PDZ1-2结构域。

图2为显示缀合物FP5在正常对照大鼠与MCAO模型造模后的大鼠鼠脑中的分布的图。

图3为显示正常对照大鼠与MCAO模型造模后的大鼠脑组织TTC染色结果的图。

图4A为显示缀合物FP5在不同缺血时间的大鼠鼠脑中的分布的图；图4B为显示不同缺血时间的大鼠脑组织TTC染色结果的图。

发明详细描述

除非另外指明，本申请中所有的术语均具有本领域技术人员通常所理解的含义。

本文使用的术语“缀合物”指两个或更多个具有独立功能的部分结合在一起而形成的物质。具体而言，本申请的缀合物包含肽和可检测的标记，其中肽发挥生物学功能，可检测的标记发挥指示功能。应当理解，可检测的标记可以是独立于肽的实体，也可以是肽自身的一部分。例如，可以用带可检测的同位素的氨基酸参与肽的合成，或对肽链上的一个或多个氨基酸进行同位素置换标记，从而实现“可检测”的目的。

在一些实施方案中，缀合物可用于分子影像成像。

在一些实施方案中，可检测的标记选自放射性核素、同位素、光学标记、磁性物质及以上的任意组合。

放射性核素指不稳定的原子核，其能够自发地放出射线，通过衰变形成稳定的核素。在具体实施方案中，放射性核素可检测的标记包括但不限于¹²⁴I、¹⁸F、¹¹C、^99mTc和¹²³I。

在一些实施方案中，光学标记选自荧光染料、荧光蛋白、化学发光染料、量子点及以上的任意组合。

在本申请的具体实施方案中，光学标记类缀合物包括但不限于荧光染料标记的缀合物、荧光蛋白标记的缀合物、化学发光染料标记的缀合物、量子点标记的缀合物和拉曼探针。

荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。在一些实施方案中，荧光染料包括但不限于：别藻蓝蛋白、吲哚二羰花青、吲哚三羰花青、硫杂二羰花青、荧光素、硫代罗丹明、ROX、硫代罗丹明、尼罗红、R-藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、硫杂二羰花青、异硫氰酸荧光素(FITC)、鲍光过敏素、AlexaFluor488和吲哚菁绿(ICG)。在具体实施方案中，荧光染料为FITC。

在一些实施方案中，荧光蛋白包括但不限于绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白。

化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。化学发光染料包括但不限于辣根过氧化物酶。

量子点是一种由II-VI族或III-V族元素组成的纳米颗粒，由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激发后可以发射荧光。在一些实施方案中，量子点包括但不限于贵金属纳米材料，如金、银等纳米颗粒；半导体纳米材料，如硒化镉量子点；无机非金属纳米材料，如碳量子点、石墨烯量子点等。

拉曼探针是利用拉曼光谱建立的一种缀合物，其可用于分子影像成像。在一些实施方案中，可将本申请的含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体的肽制备成拉曼探针。在一些实施方案中，可将本申请的含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体的肽偶联金纳米颗粒来制备拉曼探针。

在一些实施方案中，可检测的标记可以是磁性物质。在具体实施方案中，所述磁性物质可以是含钆复合物的纳米颗粒和/或超顺磁性氧化铁纳米颗粒。

在一些实施方案中，所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分发生一处或多处保守型取代后产生的变体。

在一些实施方案中，保守型取代选自D和E之间的取代，L、V和I之间的取代以及T和S之间的取代。

在更具体的一些实施方案中，功能性变体为SEQ ID NO:1中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTEL、LDTEV、LDTDI、LDTDL、LDTDV、LDSEI、LDSEL、LDSEV、LDSDI、LDSDL、LDSDV、LETEI、LETEL、LETEV、LETDI、LETDL、LETDV、VDTEI、VDTEL、VDTEV、VDTDI、VDTDL、VDTDV、IDTEI、IDTEL、IDTEV、IDTDI、IDTDL、IDTDV、IETEI、IETEL、IETEV、IETDI、IETDL、IETDV。

在一些实施方案中，本文所公开的功能性变体还包括与以上提到的肽具有至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、甚至更高的同一性的氨基酸序列。本领域已知，两种蛋白之间的“同一性”通过将一种蛋白的氨基酸序列和它的保守氨基酸取代的第二种蛋白的序列进行比对来确定。使用本领域技术人员公知的计算机算法和方法确定两种蛋白之间的同一性程度。两个氨基酸序列之间的同一性优选地通过利用BLASTP算法确定。

在一些实施方案中，本文所公开的功能性变体包括与以上提到的肽相比，具有1、2、3、4、5或更多处的氨基酸残基的取代、缺失、添加和/或插入的区别于上述公开的具体的肽。

如上所述，功能性变体可以通过一个或多个取代、缺失、添加和/或插入区别于上述公开的具体的肽。这些变体可以是天然存在的或者可以是合成产生的，例如，通过修饰一个或多个本文公开的上述肽序列并按照本文所述用本领域内公知的多种技术中的任何一种评估其生物活性。

在一些实施方案中，所述含有氨基酸序列YEKLLDTEI(SEQ ID NO:1)或其功能性变体的肽为包含氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体以及内化肽的嵌合肽。

内化肽为也可称为穿膜肽，在蛋白质药物领域被广泛使用，其功能是促进与其结合的活性肽被细胞摄取和吸收。作为非限制性的一个实例，内化肽可以为Tat肽，其中Tat肽的一个非限制性实例为YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO:2)。

在一些实施方案中，所述内化肽包含氨基酸序列YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO:2)。

在一些实施方案中，所述嵌合肽包含氨基酸序列YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI(SEQ IDNO:3)。

本领域技术人员应当理解，前文所述的肽能够任选地被衍生化(例如乙酰化、磷酸化和/或糖基化)以促进与靶标的亲和力，促进其跨越细胞膜被转运的能力，或者促进稳定性。

第二方面，本申请提供了诊断个体脑部神经损伤性疾病或评价个体脑部神经损伤状态(例如，脑缺血状态)的方法，所述方法包括：

本申请的肽的表达水平可以与脑部神经损伤(例如脑缺血状态)相关，通过检测可检测的标记的水平可以反映出肽的表达水平，从而指示脑部神经损伤的程度。

在一些实施方案中，所述方法还可以包括将检测到的可检测的标记的水平与正常个体的阈值水平进行对比，从而确定异常表达水平。在一些实施方案中，正常个体的阈值水平可以是预定的值、图谱等，也可以另外地获自正常个体。

在一些实施方案中，脑部神经损伤性疾病包括脑卒中或脊髓损伤、脑或脊髓的缺血性或创伤性损伤以及中枢神经系统(CNS)神经元的损伤，包括急性CNS损伤、缺血性脑卒中或脊髓损伤，以及缺氧、缺血、机械损伤和神经退行性疾病、焦虑、癫痫、脑卒中引起的损伤。

在一些实施方案中，脑部神经损伤性疾病为缺血性脑卒中。

在一些实施方案中，给予可以是口服给予。在一些实施方案中，给予可以是注射给予。

在一些实施方案中，可将该缀合物用于分子影像成像。分子影像成像需用相应的成像设备。成像设备包括但不限于用于CT、光成像、PET、常规核医学SPECT、MRI以及MRS成像的成像设备。

除非另外说明，第二方面的方法中施用的缀合物的特征可以与第一方面相同。

除非另外说明，第三方面的试剂盒中包括的缀合物的特征可以与第一方面相同。

本申请还提供了基于脑部神经损伤性疾病或状态的检测结果的治疗方法。在一些实施方案中，针对脑部神经损伤性疾病的治疗可以是系统性地给予对抗脑部神经损伤性疾病的药物。在一些实施方案中，也可以通过局部给药(例如血管介入或局部注射)将药物直接递送至损伤部位(例如，可检测的标记表达水平较高的部分)。在一些实施方案中，可以根据损伤的部位，选择靶向该部位的药物，通过全身或口服给药递送所述药物。

应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和变化。

实施例

提供以下实施例仅仅是对本申请的一些实施方案进行举例说明，没有任何限制性目的或性质。

实施例1：活性肽分子的筛选

根据已报道的研究结果，选取Tat穿膜肽YGRKKRRQRRR，并将其与不同数目的氨基酸相连接，形成肽库。将肽库中的肽分子，分别与体外表达并纯化的PDZ1-2结构域相互作用，根据相互作用力的强弱，对多肽进行初步筛选。

PDZ结构域是指约90个氨基酸的模块蛋白质结构域，其特征是对脑突触蛋白PSD-95、果蝇(Drosophila)分隔连接蛋白Discs-Large(DLG)和上皮紧密连接蛋白Z01(Z01)具有显著(例如至少60％)的序列同一性。PDZ结构域通常显示保留核心共有序列(Doyle,D.A.,1996,Cell 85：1067-76)。示例性的含PDZ结构域的蛋白质和PDZ结构域序列在美国申请No.10/714,537中公开。

固定的分子(配体)为PDZ1-2蛋白，分子量：～20kD，浓度：2mg/ml；流动相的分子(分析物)：待筛选多肽，分子量：～2kD，浓度：10mg/ml。使用Biacore 3000仪器，CM5芯片进行固定。电泳缓冲液为PBS+0.005％吐温20。使用氨基偶联方法进行固定。配体的浓度为10μg/ml。固定缓冲液为10mM醋酸钠，pH 4.0。固定量：1400RU，固定至流动细胞2。使用的流速为10μl/ml，配体进样1分钟。使用pH2.0+2.5的10mM Gly作为再生液，以30μl/分钟的流速进行再生。进样时间为30s。

使用下述条件进行动力学分析：对照通道：流动细胞1；电泳缓冲液为PBS；使用Kinetic Analysis Wizard模式，浓度梯度为6.25nM、12.5nM、25nM、50nM、100nM、200nM、400nM；进样时间为1分钟；解离时间为2min；流速为30μl/分钟。

用拟和软件BIAevaluation 4.1软件对数据进行拟合。拟和模型为1：1结合模型。解离常数KD值与作用力呈反比。

通过筛选，获得了与PDZ1-2结构域具有较强相互作用能力的嵌合肽，将其命名为P5，序列如下：

P5:YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI

以下实验中对嵌合肽P5进行进一步地测试。

实施例2：Pull-down实验检测P5与PDZ1-2结构域的相互作用

为证明P5能与PDZ1-2结构域相互作用，进行Pull-down实验。

用100μl的His珠子和1ml的MCAC-0缓冲液将柱子平衡5min。在4℃震荡。将混合物在4℃，以5000g离心1分钟，弃上清。向混合物中加入1mg PDZ1-2蛋白，并用缓冲液补齐至1ml。在4℃，将所述混合物旋转结合1小时。随后将所述混合物在4℃，以5000g离心1分钟，弃上清。用1ml的MCAC-0缓冲液清洗3次，每次5分钟(在4℃，震荡洗涤)。向混合物中加入1mgP5蛋白，并用缓冲液补齐至1ml。在4℃，将所述混合物旋转结合2小时。将所述混合物在4℃，以5000g离心1分钟，弃上清。用1ml裂解液进行清洗3次，每次5分钟(在4℃，震荡洗涤)。清洗之后加入20μl MCAC-300。离心，取洗脱液进行SDS-PAGE检测。实验结果显示于图1。

如图1所证实，多肽P5的洗脱条带中同时包含P5和PDZ1-2结构域两者，由此证实多肽P5能够结合PDZ1-2结构域。

实施例3：FP5缀合物对大鼠MACO模型的诊断效果

大鼠MCAO制作方法及评分标准

根据longa提出的可逆性大脑中动脉闭塞(MCAO)线栓法，并根据大鼠脑解剖结构图，改进性制备局灶性脑缺血再灌注模型。首先用10％水合氯醛0.3ml/kg腹腔麻醉，颈正中切口以暴露颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和翼腭动脉。将0.26mm单丝尼龙鱼线头端0.5cm用石蜡包被，并于20mm长处标记。全部大鼠均通过右侧CCA切口处插入，其中短暂夹闭翼腭动脉以防误插。栓线长度自CCA分叉处约18～20mm，根据动物体重而定。栓塞右侧大脑中动脉，然后缝合皮肤，并将栓线尾端部分固定于皮肤上。缺血达到2h后小心抽出栓线，即形成再灌注。在缺血期间及再灌注后2h保持体温在(37±0.5)℃。模型成功的标志为大鼠手术麻醉清醒后出现左侧肢体瘫痪，站立不稳，提尾时向一侧转圈。

神经功能缺失体征评分参考Longa及Bederson的5分制法，在动物麻醉清醒后24h进行评分。0分：无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：向对侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自发行走，意识丧失。分值越高，说明动物行为障碍越严重。

实验用动物及仪器材料

动物：选用成年SD大鼠(维通利华)，SPF级，体重220-250g，雄性。

器械和药品：线剪1把、眼外科剪2把、弯镊4把、4#，5#手术缝线、6×17三角形缝针、0.26mm直径的栓线、持针钳1把。

水合氯醛、速尿(20mg/支)、硫酸庆大霉素(80mg/支)，棉签，医用托盘等。

用FITC标记P5多肽制备缀合物(下文简称FP5)，制备和标记由金斯瑞生物科技公司完成，缀合物结构为FITC-YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI(P5，SEQ ID NO:3)。

仪器：大鼠体温维持仪ZS-T，小动物活体成像仪SI-Image AMIX。

实验分组

实验分正常对照组和缺血不同时间点的模型组。将FP5(10mg/kg)

经尾静脉注射给予各组大鼠。

大鼠脑部的FP5检测及TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色

将正常对照大鼠与MCAO模型造模后，分别经尾静脉注射溶于生理盐水的荧光标记的FP5，10mg/kg。在不同缺血时间点处死大鼠，迅速取出脑组织，放置在小动物活体成像系统装置中，进行荧光检测。荧光检测完毕后，将脑组织放入TTC染液(购自索莱宝生物科技有限公司)中进行染色，判断缺血区域与FP5分布的相关性。将取出的脑组织置于5ml含2％TTC的溶液中，37℃恒温、避光孵育30min，期间每隔5min将脑翻动一次。经TTC染色后，正常组织呈玫瑰红色，梗死组织未被染色而呈白色。

实验结果

FP5在大鼠脑部缺血组织中的分布

将正常对照大鼠与MCAO模型造模后1h，分别经尾静脉注射溶于生理盐水的荧光标记的FP5，10mg/kg，在给药后12h小时处死大鼠，迅速取出脑组织，放置在小动物活体成像系统装置中，进行荧光检测。结果如图2和图3所示，正常鼠脑可完全被TTC染色，其中并无荧光标记的多肽分布，而缺血鼠脑的缺血部位不能被TTC染色，且荧光标记的多肽分布在以中动脉区域为核心缺血区的缺血部位，提示FP5能够靶向分布于缺血部位，发挥指示作用，根据荧光强度标尺指示，在缺血的核心区域其分布量较多，在半暗带区域相对较少，分布量与缺血程度具有相关性。

FP5在不同缺血时间的大鼠脑部缺血组织中的分布

将大鼠MCAO模型造模后分别缺血5min、10min、20min、30min，经尾静脉注射溶于生理盐水的FP5，10mg/kg。在多肽注射后30min处死大鼠。迅速取出脑组织，放置在小动物活体成像系统装置中，进行荧光检测。结果如图4B所示，随着缺血时间的延长，大鼠脑部缺血的区域逐渐增加，缺血30min时就可造成半侧脑组织全部缺血。如图4A所示，FP5能够及时指示鼠脑短时间内的缺血所造成的脑组织损伤部位，并能区分缺血的核心区及半暗区，且其分布量与缺血程度相关。这对缺血区域的诊断具有及时有效的指示作用。

在不偏离本申请公开的实质和范围的情况下，可对本申请公开的各实施方案进行多种改变和用等同物替换。除非上下文中另有说明，否则本公开的实施方案的任何特征、步骤或实施方案都可以与任何其他特征、步骤或实施方案组合使用。

序列表

<110> 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司

芦颖

韩化敏

田雨佳

徐义

童威

<120> 一种缀合物及其应用

<130> 16C51418CN

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 1

Tyr Glu Lys Leu Leu Asp Thr Glu Ile

1 5

<210> 2

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 2

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 3

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Tyr Glu Lys Leu Leu

1 5 10 15

Asp Thr Glu Ile

20

Claims

1.缀合物在制备用于诊断缺血性脑部神经损伤性疾病或评价个体缺血性脑部神经损伤状态的试剂盒中的用途，所述缀合物包含肽和可检测的标记，所述肽由氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体组成，其中所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTDI、LDSEI或LDSDI。

2.缀合物在制备用于诊断缺血性脑部神经损伤性疾病或评价个体缺血性脑部神经损伤状态的试剂盒中的用途，所述缀合物包含肽和可检测的标记，其中所述肽为由氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体以及内化肽组成的嵌合肽，其中所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTDI、LDSEI或LDSDI。

3.如权利要求2所述的用途，其中所述内化肽的氨基酸序列为YGRKKRRQRRR。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述嵌合肽的氨基酸序列为YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI。

5.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述可检测的标记选自放射性核素、光学标记、磁性物质及以上的任意组合。

6.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述可检测的标记为同位素。

7.如权利要求5所述的用途，其中所述放射性核素选自¹²⁴I、¹⁸F、¹¹C、^99mTc、¹²³I及以上的任意组合。

8.如权利要求5所述的用途，其中所述光学标记选自荧光染料、荧光蛋白、化学发光染料、量子点及以上的任意组合。

9.如权利要求5所述的用途，其中所述磁性物质选自含钆复合物的纳米颗粒、超顺磁性氧化铁纳米颗粒及以上的任意组合。

10.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述缺血性脑部神经损伤性疾病为缺血性脑卒中。

11.用于诊断缺血性脑部神经损伤性疾病或评价个体缺血性脑部神经损伤状态的试剂盒，其包括缀合物，所述缀合物包含肽和可检测的标记，所述肽由氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体组成，其中所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTDI、LDSEI或LDSDI。

12.用于诊断缺血性脑部神经损伤性疾病或评价个体缺血性脑部神经损伤状态的试剂盒，其包括缀合物，所述缀合物包含肽和可检测的标记，其中所述肽为由氨基酸序列YEKLLDTEI或其功能性变体以及内化肽组成的嵌合肽，其中所述功能性变体为YEKLLDTEI中的LDTEI部分被替换为下述任一序列后产生的变体：LDTDI、LDSEI或LDSDI。

13.如权利要求12所述的试剂盒，所述内化肽的氨基酸序列为YGRKKRRQRRR。

14.如权利要求12所述的试剂盒，其中所述嵌合肽的氨基酸序列为YGRKKRRQRRRYEKLLDTEI。

15.如权利要求11-14中任一项所述的试剂盒，其中所述可检测的标记选自放射性核素、光学标记、磁性物质及以上的任意组合。

16.如权利要求11-14中任一项所述的试剂盒，其中所述可检测的标记为同位素。

17.如权利要求15所述的试剂盒，其中所述放射性核素选自¹²⁴I、¹⁸F、¹¹C、^99mTc、¹²³I及以上的任意组合。

18.如权利要求15所述的试剂盒，其中所述光学标记选自荧光染料、荧光蛋白、化学发光染料、量子点及以上的任意组合。

19.如权利要求15所述的试剂盒，其中所述磁性物质选自含钆复合物的纳米颗粒、超顺磁性氧化铁纳米颗粒及以上的任意组合。

20.如权利要求11-14中任一项所述的试剂盒，其中所述缺血性脑部神经损伤性疾病为缺血性脑卒中。