CN110041186A - 愈创木薁醛二缩合体的制备与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于合成药物化学领域，具体涉及愈创木薁醛二缩合体的化学制备和应用。本课题组以愈创木薁和哌啶酸为原料对该骨架进行化学合成研究时，发现了愈创木薁醛的二缩合体trans‑1,2‑(1,4‑diazulyl)ethene derivative，经体外H1N1流感病毒测试，结果表明该化合物在25mM浓度水平，体外抗病毒活性优于阳性药利巴韦林。体内活性测试发现，本发明化合物不仅能抑制肺炎症状，还能降低肺病毒滴度，提高小鼠生存率。特别是以5mg/kg/day的剂量灌胃时能显著提高病毒感染小鼠的生存率，降低肺病毒滴度。综合看，该化合物体内活性与奥司他韦效果相当，故可用于制备抗病毒药物。本发明为深入研究和开发新的抗病毒药物开辟了新的途径。

Description

愈创木薁醛二缩合体的制备与应用
技术领域
本发明属于合成药物化学领域，具体涉及愈创木薁醛二缩合体的化学制备和应用。
背景技术
愈创木薁倍半萜生物碱Muriceidine A为本课题组从采自我国南海涠洲岛海域的高领类尖柳珊瑚Muriceides collaris中分离得到的新骨架分子，初步生物活性测试表明，该类化合物有较好的抗肿瘤、抗附着等活性。本课题组以愈创木薁和哌啶酸为原料对该骨架进行化学合成研究时，发现了薁醛的二缩合体。目前关于该化合物仅有一篇文献报道，即薁醛在高温(150～200℃)下发生自缩合，收率约为0.6％。目前未见有关该化合物的任何生物活性报道。由于该化合物具有两个独特的七并五元环大共轭体系，且两共轭片段经C＝C连接，结构新颖，因此本发明尝试利用化学方法合成此化合物后对其进行生物活性研究，以期寻求该化合物在药物化学领域的应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供愈创木薁醛二缩合体的制备和应用。
本课题组以愈创木薁和哌啶酸为原料对该骨架进行化学合成研究时，发现了愈创木薁醛的二缩合体trans-1,2-(1,4-diazulyl)ethene derivative，其结构如下：
本发明是通过如下技术方案实施的：
愈创木薁醛的二缩合体的制备工艺优化方法是按如下路线进行的：
本发明还提供了上述化合物在制备抗病毒药物中的应用。
经体外和体内抗病毒活性实验，本发明化合物对H1N1流感病毒致细胞病变的抑制活性与阳性药相当，为研制新的抗病毒药物提供了先导化合物，丰富了抗病毒活性化合物库。
附图说明
图1为发明化合物对小鼠肺病毒滴度的影响
图2为发明化合物对小鼠肺生存率的影响
图3为愈创木薁醛的1H NMR(CDCl3)
图4为愈创木薁醛二缩合体的1H NMR(CDCl3)
具体实施方式
本发明的下述实施例中列举了以愈创木薁和哌啶酸为基础物质，合成愈创木薁醛二缩合体的工艺制备的实例。
实施例1：薁醛的合成，参考文献(Takekuma S,Matsuoka H,Minematsu T etal.Tetrahedron,2010,66(16):3004-3015.)进行如下操作：
向干燥洁净的50mL三口圆底烧瓶中加入干燥的3mL DMF，冰浴条件下通过恒压滴液漏斗缓慢滴加三氯氧磷，搅拌反应35min。然后从另一侧通过滴液漏斗逐滴加入愈创木薁的DMF溶液，加毕转移至35℃水浴中。反应10h后，将反应液倒入足量冰水中，搅拌均匀。用氢氧化钾的水溶液调节反应液pH至8左右。搅拌数分钟，加热至90℃，赶出反应产生的二甲胺气体。然后以二氯甲烷萃取三次，合并萃取液，蒸干，经正相硅胶柱分离纯化，以石油醚/丙酮体系洗脱。收率达90％。
实施例2：哌啶酸乙酯的合成，参考文献(McFarlane A K,Thomas G,WhitingA.Journal of the Chemical Society,Perkin Transactions 1:Organic and Bio-Organic Chemistry,1995,(21):2803-2808.)进行如下操作：
于100mL圆底烧瓶中加入1.46g(10.0mmol)赖氨酸，加入50mL甲醇。0℃下边搅拌边滴 加二氯亚砜(1.5mL，20.6mmol)，反应3h后，取样TLC检测，发现赖氨酸原料未完全反应，此时反应体系仍为混悬液。将反应液转移至70℃油浴中，回流反应4h后，取样TLC检测，赖氨酸原料消失。结束反应，将反应液倾入50mL冰水中，以氢氧化钠溶液(10mol/L)调pH至6～7，蒸干得白色固体。将所得产物以10mL无水甲醇溶解，过滤除去不溶物，滤液蒸干，即得赖氨酸甲酯。
实施例3：P2C的合成
①现制次氯酸叔丁酯：于25mL圆底烧瓶中依次加入5mL次氯酸钠溶液(活性氯含量≥5.2％，有效氯≥8.0mmol)、1mL(52.4mmol)叔丁醇加入，置于0℃的低温恒温搅拌反应浴中，向烧瓶内滴加1mL(17.2mmol)冰醋酸，避光反应5min左右。反应完毕后将反应瓶静置2min，吸取反应瓶中上层的黄色油状液体(即次氯酸叔丁酯)，置于另一避光玻璃小瓶中备用。
②N-氯代反应：于50mL圆底烧瓶中加入500mg(2.6mmol)哌啶酸乙酯盐酸盐，加入30mL无水乙醚，超声溶解(大部分投料不溶)，之后抽去瓶内空气，迅速用橡胶塞封住瓶口。将气球与5mL的注射器针筒连接，充入氮气后，插入橡胶塞中给予瓶内以氮气保护。将该反应体系固定于温度设置为0℃的低温恒温搅拌反应浴中。(以下所有反应及操作均在避光条件下进行)用1mL注射器吸取青霉素小瓶中的次氯酸叔丁酯注入圆底烧瓶内，持续搅拌反应2～3h。监测反应至哌啶酸乙酯盐酸盐原料全部消失后停止反应。
③N-氯代哌啶酸乙酯脱氯化氢及酯水解反应(所有操作和反应均在避光处进行)
实验操作：直接向上步反应体系中加入100mg(2.5mmol，过量)氢氧化钠固体颗粒，同时加入10mL甲醇。0℃避光反应1h后，转移至50℃油浴锅中回流反应1h。取样TLC检测，以哌啶酸乙酯盐酸盐为对照，以石油醚：二氯甲烷1：1展开。紫外分析如图2所示，365nm波长下在Rf值0.9附近出现一明显的荧光点，254nm波长光照下该位置显示一清晰的紫色暗斑；茚三酮显色剂显色，该位置呈现一黄色点。
后处理：将反应液蒸干，加入石油醚溶解，有较多白色固体不溶，溶液层为亮黄色。即在回流反应结束后，将反应液静置2h，20℃下减压蒸馏，蒸出反应体系中的乙醚。剩余物即为含不饱和哌啶酸的甲醇溶液，过滤，滤饼以甲醇洗3～5次，滤液密封避光保存，直接作为下一步反应的原料。
实施例4:薁醛二缩合体和Muriceidine A的合成
实验操作：于50mL圆底烧瓶内加入930mg(17.2mmol)甲醇钠，用移液管加入1mL(17.2mmol)冰醋酸，再加入5mL甲醇于瓶中使其溶解。取上步反应的不饱和哌啶酸的甲醇溶液加入该体系，加入200mg(0.9mmol)愈创木薁醛固体，补足30mL甲醇，60℃油浴加热搅拌。反应24h。反应完毕后，蒸干反应液，将所得固体以30mL蒸馏水溶解，加入适量碳酸 氢钠中和反应体系中的醋酸，至不再有气泡放出为止。用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，再用正丁醇萃取一次。合并有机层，蒸干。正相柱层析，以石油醚：乙酸乙酯10:1进行洗脱，薁醛二缩合体成分为紫红色。合并洗脱液，蒸干称重。实施例5：体外抗病毒活性的测试
①实验材料
被测样品溶液的配制：测试样品为上述实施例5中目标物纯品。精密称取适量样品，用甲醇配制成所需浓度的溶液，供测活性。
MTT购自Sigma公司，用生理盐水溶解，配成5mg/mL的工作液，-20℃保存；二甲基亚砜(DMSO)，分析纯，为西安化学试剂厂生产。
流感病毒H1N1感染的MDCK细胞株(马丁达比狗肾传代细胞)、为中国海洋大学医药学院分子药理室自备。
②实验方法：CPE+MTT法
MTT法：MDCK细胞于37℃通入5％CO2和95％氧气的含有10％FBS的RPMI-1640细胞悬浮液中培养。将细胞密度调至5×104个/mL，按每孔200μL加到96孔细胞培养板中培养24h。每孔加入2μL，50μg/mL含药物甲醇溶液的维持液继续培养72h。然后，每孔加入20μLMTT(5mg/mL的RPMI-1640)溶液，继续培养4h。以DMSO更换溶解MTT的介质，至formazan结晶完全溶解。酶标仪测定每孔540nm处的吸光值(OD值)。获得剂量反应曲线，计算IC50。CPE法：单层MDCK细胞首先与流感病毒(A/Puerto Rico/8/34(H1N1),PR/8)于37℃培养1h。弃去病毒稀释液，将细胞于37℃保持在含有不同浓度测试药物的感染媒介中(RPMI 1640,4μg/mL胰蛋白酶)。37℃培养48h后，用100μL 4％的多聚甲醛与MDCK细胞在室温下固定20min。除去甲醛后，MDCK细胞用0.1％的结晶紫染色30min。将板洗净干燥，酶标仪(Bio-Rad,USA)在570nm处测定各孔中结晶紫染色的强度。计算IC50值，即感染后48h抑制CPE为50％时的化合物浓度。
③实验结果
表1化合物对H1N1流感病毒致细胞(MDCK)病变的抑制率
测试结果表明，在25μM浓度水平，该化合物体外抗病毒活性优于阳性药利巴韦林，于是对其进行体内活性测试。
实施例6：体内抗病毒活性的测试
本发明采用H1N1病毒鼠肺适应株A/PR/8/34滴鼻感染SPF级Kunming小鼠建立小鼠肺炎模型。取SPF级雌性KM小鼠70只，体重为14-16g。随机分为7组，每组10只，分别为：正常组、模型组(病毒组)、阳性药奥司他韦(10mg/kg/day)组、化合物(编号为295)低剂量(2.5mg/kg/day)组、295高剂量(5mg/kg/day)组。病毒感染当天2h后开始给药，共给药七天。采用灌胃给药，正常组和模型组分别给予同体积的生理盐水。
a.对于小鼠肺指数和体重的影响
连续给药4天后，每组取4支小鼠称体重后解剖并取肺称重，计算小鼠的肺指数(肺指数＝(肺重/体重)×100)和肺指数抑制率(肺指数抑制率＝(病毒组平均肺指数－实验组平均肺指数)/病毒组平均肺指数×100％)。试验结果如下表2所示，在给药剂量为2.5和5mg/kg/day的情况下，化合物能显著抑制小鼠的肺指数(P<0.05)，肺指数抑制率优于阳性药奥司他韦(30.9％)。此外，该化合物还能够显著改善小鼠体重减轻的趋势(表2)。
表2化合物对小鼠肺指数的影响
Values are means±S.D.(n＝10mice/group).##p<0.05vs.normal controlgroup；*p<0.05,**p<0.01vs.virus
control group.
a Lung index＝(lung weight(g)/mice weight(g))×100.The lung index wasdetermined on Day 4p.i.
b Inhibition rate(％)＝[(Lung index virus control-Lung index sample group)/Lung index virus control]×100.
b.对于小鼠肺病毒滴度的影响
此外，将肺组织匀浆之后，利用空斑实验和病毒NA荧光滴度实验评价样品中的病毒感染颗粒数或者病毒NA蛋白的多少进而评价肺组织中的病毒滴度。试验结果如图1所示，在给药剂量为2.5和5mg/kg/day的情况下，化合物处理组的肺病毒滴度显著降低(P<0.05)，其效果与阳性药物奥司他韦效果相当。
c.化合物对于小鼠生存率和体重的影响
本研究还利用小鼠模型评价了化合物对于小鼠生存率的影响。结果如图2所示，在给药剂量为5mg/kg/day的情况下，化合物处理组的小鼠生存率相对模型组(Placebo)显著提高(P<0.05)，死亡保护率高达40％，与阳性药物奥司他韦效果相当(40％)。且该化合物低剂量组也能显著提高小鼠生存率，死亡保护率为30％。
此外，病毒模型组的小鼠平均体重在接毒第三天开始下降，在第7天下降到初始体重的78％左右，其后再缓慢上升。化合物在给药剂量为2.5和5mg/kg/day的情况下，体重没有明显下降，一直缓慢上升，与正常组和奥司他韦组相当。
总之，本发明化合物不仅能抑制肺炎症状，还能降低肺病毒滴度，提高小鼠生存率。特别是以5mg/kg/day的剂量灌胃时能显著提高病毒感染小鼠的生存率，降低肺病毒滴度。综合看，该化合物体内活性与奥司他韦效果相当。
结论：
上述实验结构表明，本发明愈创木薁醛的二缩合体trans-1,2-(1,4-diazulyl)ethene derivative具有显著的抗病毒活性，故可用于制备抗病毒药物。本发明为深入研究和开发新的抗病毒药物开辟了新的途径。

Claims (4)

1.愈创木薁醛二缩合体trans-1,2-(1,4-diazulyl)ethene derivative，其结构如下：
2.权利要求1所述化合物的工艺制备条件，其特征是不同于文献所报道的高温(150～200℃)反应，本发明在60℃条件下在特定反应体系中即得到该化合物。
3.权利要求2所述的制备工艺，其特征在于，该化合物是从柳珊瑚来源的愈创木薁倍半萜生物碱Muriceidine A化学合成反应体系中分离得到的成分，其反应体系包括愈创木薁醛、现制△1-哌啶酸(P2C)、甲醇钠、醋酸在甲醇中60℃反应20h左右而得，收率约为1％。
4.权利要求1所述化合物在抗病毒方面的用途。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080125590A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-29 Industrial Technology Research Institute Azulene compounds
CN102260234A (zh) * 2010-05-26 2011-11-30 福建医科大学 愈创木烷型倍半萜的制备方法及应用
CN105315147A (zh) * 2014-08-03 2016-02-10 江苏康缘药业股份有限公司 一种愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080125590A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-29 Industrial Technology Research Institute Azulene compounds
CN102260234A (zh) * 2010-05-26 2011-11-30 福建医科大学 愈创木烷型倍半萜的制备方法及应用
CN105315147A (zh) * 2014-08-03 2016-02-10 江苏康缘药业股份有限公司 一种愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUROKAWA, SHINJI等: "The Thermal reaction of 3-formylguaiazulene", 《BULLETIN OF THE CHEMICAL SOCIETY OF JAPAN》 *
SATOH, KOICHI等: "Acylation of 3-alkylguaiazulenes", 《NIPPON KAGAKU KAISHI》 *

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