CN110038034A - 一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用 - Google Patents

一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用，其包括以下步骤：将桑黄粉碎并过筛得桑黄粉，向容器中依次加入小分子水、酶及桑黄粉，均质搅拌混合，得混合液；将混合液放置于超临界水反应釜中，将反应产物引入冷凝器中冷凝，将收集器中的反应产物进行压滤，得滤液和滤渣；将滤渣与小分子水混合，然后采用双频率超声波提取，提取后的共混液采用离心法过滤得滤液和滤渣；将滤渣与小分子水混合，索式提取后固液分离，固液分离后得滤渣和滤液；将分离出的滤液混合，将混合滤液、浓缩真空干燥得到桑黄复合提取物，本发明桑黄复合提取物出膏率高，提取物中有效成分纯度高，有效提高桑黄利用率。

Description

一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用
技术领域
本发明属于植物提取领域，尤其涉及一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用。
背景技术
桑黄是一种多年生大型珍稀药用真菌，古代医学记载桑黄药性“微苦、寒、无毒”，具有“利五脏、软坚排毒、和胃止泻、止血活血”等诸多功效。桑黄主要活性成分有多糖、黄酮、总酚、麦角甾醇等物质，可作为茶、保健品、药品等原料。
桑黄种植难度大、生长周期长，高品质桑黄的生长过程中需投入大量人力、物力、财力。因此使用方法提高桑黄的活性成分利用率是目前研究的热点，目前桑黄提取方法有热水浸提法、减压提取法、超声提取法，通过实验对比发现，这些方法桑黄复合提取物的出膏率均较低，且提取物中有效成分含量均较低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于：桑黄复合提取物的出膏率及有效成分含量较低，提供了一种小分子水制备桑黄提取物的方法及应用。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的，本发明的一种桑黄提取方法，包括以下步骤：
(1)将桑黄粉碎并过筛得桑黄粉，向容器中依次加入小分子水、C1酶、Cx酶、β葡糖苷酶及桑黄粉，均质搅拌混合，15～25℃下浸泡30～45h，得混合液；
加入pH缓冲剂调节所述的小分子水的pH为7.0～7.5；
所述的桑黄粉、C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶与小分子水的质量比为1∶0.1～1.0∶0.1～1.0∶0.1～1.0∶10～20；
(2)将步骤(1)的混合液放置于超临界水反应釜中，反应釜加热至250～300℃，压力为25～30MPa，反应10～20min后停止加热加压，将反应产物引入冷凝器中冷凝，降至常温常压后将产物引入收集器中，将收集器中的反应产物进行压滤，得滤液和滤渣；
(3)将步骤(2)的滤渣与小分子水按照质量比为0.5～5∶10～15混合，然后采用双频率超声波提取，提取条件为：超声波功率为150～1500W，双频超声频率为25KHz、45KHz，超声频率为25KHz时，提取温度为45℃，超声频率为45KHz时，提取温度为65℃，循环转速为20～30r/s，工作/间歇比为5s/5s，提取时间为50min，提取后的共混液采用离心法过滤得滤液和滤渣；
(4)将步骤(3)的滤渣与小分子水混合，索式提取后固液分离，滤渣与小分子水的质量比为0.5～5：15～20，所述的索式提取的时间为5～15h，固液分离后得滤渣和滤液；
(5)将步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)分离出的滤液混合，将混合滤液经过有机系微孔滤膜过滤后减压浓缩，最后真空干燥得到桑黄复合提取物。
所述步骤(1)中，用50～55目筛对桑黄粉进行过筛。
所述步骤(1)中，pH缓冲剂为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠。
所述步骤(1)中，用均质器均质搅拌混合，所述均质器的转速为10000r/min，所述搅拌时间为30min。
所述步骤(2)中，过滤压力为1～5Pa。
所述步骤(3)中，在离心机上进行离心，所述离心机的转速为4000r/min，离心时间为20min。
所述步骤(4)中，索式提取的温度为90～100℃。
所述步骤(5)中，减压浓缩在40～60℃下进行，真空干燥的温度为60℃，桑黄复合提取物的出膏率为10.0～10.5％，桑黄复合提取物中多糖类物质含量为34～34.5％。
一种使用桑黄提取方法提取得到的桑黄复合提取物。
一种桑黄复合提取物在制备抗癌药物上的应用。
本发明公开的桑黄提取方法首先采用高速均质搅拌及酶解，酶使桑黄壁中的纤维素成分发生水解反应，高速均质搅拌促进水解反应进行，在两者的协同作用下，促进桑黄壁的破解，使桑黄细胞的破壁率达到90％以上，桑黄壁破裂使桑黄有效成分更易溶出。
小分子水在超临界状态下具有较好的萃取作用，提高桑黄有效成分的析出。桑黄复合提取物包括多糖类、酚类、黄酮类、有机酸类、吡喃酮类、萜类，显弱酸性，小分子水pH在7.0～7.5，该pH环境不仅有助于酶解反应进行促进桑黄破壁，更加显著提高桑黄复合提取物的溶解，从而促进桑黄复合提取物出膏率的提高，与煎煮法提取桑黄的出膏率相比，其出膏率高于煎煮法的1倍以上；小分子作为提取溶剂保证提取物无污染，无有机溶剂残留，纯度高，有效成分含量高。
两种频率的超声波所引发的空化效应协同作用，且不同频率对应特定提取温度，相互协同作用，强化溶解效果，提高桑黄出膏率。
因此本专利能够在提高其出膏率的同时，提高桑黄复合提取物中有效成分含量及纯度，有效提高桑黄利用率。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明桑黄复合提取物出膏率高，提取物中有效成分含量及纯度高，无污染，有效提高桑黄利用率，对开发桑黄相关产品具有重要意义。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例提供一种桑黄提取方法，具体步骤如下：
(1)挑选三年生品质好的桑黄作为原料；
(2)用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠调节小分子水的pH为7.5，其中磷酸二氢钠溶液的浓度为50mmol/l，磷酸氢二钠溶液的浓度为50mmol/l，磷酸二氢钠溶液39ml，磷酸氢二钠溶液61ml，将桑黄粗粉粉碎过50目筛，在容器中依次加入pH为7.5的小分子水、C1酶、Cx酶、β葡糖苷酶及桑黄粉，桑黄粉、C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶与小分子水的质量比为1∶0.1∶0.1∶0.1∶10，混合后用均质器均质搅拌混合，均质器的转速为10000r/min，搅拌时间为30min，然后15℃下浸泡30h，得混合液；
(3)将步骤(2)的混合液放置于超临界水反应釜中，反应釜加热至250℃，压力为25MPa，反应10min后停止加热加压，将反应产物引入冷凝器中冷凝，降至常温常压后将产物引入收集器中，将收集器中的反应产物进行压滤，过滤压力为1Pa，得滤液和滤渣；
(4)将步骤(3)的滤渣与小分子水按照质量比为0.5∶10混合，然后采用双频率超声波提取，超声波功率为150W，双频超声频率为25KHz、45KHz，工作/间歇比为5s/5s，超声频率为25KHz时，提取温度为45℃，超声频率为45KHz时，提取温度为65℃，循环转速为20r/s，提取时间为50min，提取后的共混液采用离心法过滤得滤液和滤渣，在离心机上进行离心，离心机的转速为4000r/min，离心时间为20min；
(5)将步骤(4)的滤渣与小分子水混合进行索式提取，滤渣与小分子水的质量比为0.5∶15，温度为90℃，提取时间为5h，固液分离后得滤渣和滤液；
(6)将步骤(3)、步骤(4)和步骤(5)分离出的滤液混合，将混合滤液经过有机系微孔滤膜过滤后在40℃下减压浓缩，最后60℃下真空干燥得到桑黄复合提取物。
所得桑黄复合提取物的出膏率为10.4％，桑黄复合提取物中多糖类物质含量为34％。
实施例2
本实施例提供一种桑黄提取方法，具体步骤如下：
(1)挑选三年生品质好的桑黄作为原料；
(2)用磷酸二氢钠磷酸氢二钠调节小分子水的pH为7.0，其中磷酸二氢钠溶液的浓度为50mmol/l，磷酸氢二钠溶液的浓度为50mmol/l，磷酸二氢钠溶液42ml，磷酸氢二钠溶液59ml，将桑黄粗粉粉碎过55目筛，在容器中依次加入pH为7.0的小分子水、C1酶、Cx酶、β葡糖苷酶及桑黄粉，桑黄粉、C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶与小分子水的质量比为1∶1.0∶1.0∶1.0∶20，混合后用均质器均质搅拌混合，均质器的转速为10000r/min，搅拌时间为30min，然后25℃下浸泡45h，得混合液；
(3)将步骤(2)的混合液放置于超临界水反应釜中，反应釜加热至300℃，压力为30MPa，反应20min后停止加热加压，将反应产物引入冷凝器中冷凝，降至常温常压后将产物引入收集器中，将收集器中的反应产物进行压滤，过滤压力为5Pa，得滤液和滤渣；
(4)将步骤(3)的滤渣与小分子水按照质量比为5∶15混合，然后采用双频率超声波提取，超声波功率为1500W，双频超声频率为25KHz、45KHz，工作/间歇比为5s/5s，超声频率为25KHz时，提取温度为45℃，超声频率为45KHz时，提取温度为65℃，循环转速为30r/s，提取时间为50min，提取后的共混液采用离心法过滤得滤液和滤渣，在离心机上进行离心，离心机的转速为4000r/min，离心时间为20min；
(5)将步骤(4)的滤渣与小分子水混合进行索式提取，滤渣与小分子水的质量比为5∶20，温度为95℃，提取时间为15h，固液分离后得滤渣和滤液；
(6)将步骤(3)、步骤(4)和步骤(5)分离出的滤液混合，将混合滤液经过有机系微孔滤膜过滤后在50℃下减压浓缩，最后60℃下真空干燥得到桑黄复合提取物。
所得桑黄复合提取物的出膏率为10.2％，桑黄复合提取物中多糖类物质含量为34.5％。
对比例1
本对比例的提取溶剂为纯化水，其他实施方式同实施例1。
对比例2
热浸法：方法参照《药典》2015版四部，通则2201《浸出物测定法中水溶性浸出物测定法》。
对比例3
煎煮法：取桑黄粗粉50g，加水500ml，浸泡15min后，武火煮沸，文火微沸30min，提取第一次；然后过滤再武火煮沸，文火微沸30min，提取第二次，合并两次滤液；浓缩干燥，计算出膏率。
对比例4
减压提取法：称取桑黄粉末250g于圆底烧瓶中，加水5000ml浸泡30min后，60℃减压水提3次，每次2h，过滤合并滤液于60℃减压浓缩，干燥，测出膏率。
对比例5
醇提加水提法：
(1)醇提：称取250g桑黄粗粉置于10L圆底烧瓶中，加入95％乙醇2.5L，80℃减压提取3次，每次1h，提取物冷却至室温，过滤，合并三次滤液，滤液60℃减压浓缩、干燥。
(2)水提：将醇提后桑黄粉末置于10L圆底烧瓶中，加入水5L，80℃减压提取3次，每次1h，提取物冷却至室温，过滤，滤液80℃减压浓缩，60℃下真空干燥；
(3)合并醇提和水提桑黄复合提取物，并计算出膏率。
计算实施例1、2及对比例1～5桑黄复合提取物出膏率，结果见表1。
桑黄出膏率＝桑黄复合提取物质量/桑黄原料质量。
采用硫酸蒽酮法对实施例1、2，对比例1～5提取的桑黄复合提取物中多糖类物质含量进行测定，结果见表2，具体步骤为：
(1)对照品溶液的制备：取于105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含无水葡萄糖0.1mg，即得。
(2)标准曲线的绘制：精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，分别置10ml具塞试管中，各加水至2ml，精密加入硫酸蒽酮溶液6mL，置水浴中加热15分钟，取出，放入水浴中冷却15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版四部通则0401)，测定625nm波长处吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(3)测定法取提取物粉末约0.03g，精密称定，置250ml圆底烧瓶中，加水100mL，加热回流提取2小时，放冷，滤过，作为供试品溶液。取供试品溶液，精密量取2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至2ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中葡萄糖的重量，计算，即得。
表1实施例1、2及对比例1～5的桑黄复合提取物的出膏率
方法 出膏率(％)
实施例1 10.4
实施例2 10.2
对比例1 7.8
对比例2 1.9
对比例3 4.5
对比例4 4.2
对比例5 8.2
由表1可知，实施例1、2桑黄复合提取物的出膏率明显高于热浸法、煎煮法、减压提取法、醇提加水提法，因为醇对提出物有污染，影响提取物的纯度，因此实施例1、2提取物中有效成分比对比例5的纯度高，提取物无污染，说明该发明采用小分子水均质提取桑黄复合提取物效率高，提取物中有效成分含量高，纯度高，可以应用到工业化生产中。
表2实施例1、2及对比例1～5的桑黄复合提取物中多糖类物质含量
方法 多糖类物质含量(％)
实施例1 34.3
实施例2 34.2
对比例1 33.0
对比例2 23.6
对比例3 12.8
对比例4 26.4
对比例5 12.7
由表2可知，实施例1、2桑黄复合提取物中多糖含量明显高于热浸法、煎煮法、减压提取法、醇提加水提法，说明该发明采用小分子水均质提取桑黄复合提取物效率高，提取物中有效成分含量高，纯度高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种桑黄提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将桑黄粉碎并过筛得桑黄粉，向容器中依次加入小分子水、C1酶、Cx酶、β葡糖苷酶及桑黄粉，均质搅拌混合，15～25℃下浸泡30～45h，得混合液；
加入pH缓冲剂调节所述的小分子水的pH为7.0～7.5；
所述的桑黄粉、C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶与小分子水的质量比为1∶0.1～1.0∶0.1～1.0∶0.1～1.0∶10～20；
(2)将步骤(1)的混合液放置于超临界水反应釜中，反应釜加热至250～300℃，压力为25～30MPa，反应10～20min后停止加热加压，将反应产物引入冷凝器中冷凝，降至常温常压后将产物引入收集器中，将收集器中的反应产物进行压滤，得滤液和滤渣；
(3)将步骤(2)的滤渣与小分子水按照质量比为0.5～5∶10～15混合，然后采用双频率超声波提取，提取条件为：超声波功率为150～1500W，双频超声频率为25KHz、45KHz，超声频率为25KHz时，提取温度为45℃，超声频率为45KHz时，提取温度为65℃，循环转速为20～30r/s，工作/间歇比为5s/5s，提取时间为50min，提取后的共混液采用离心法过滤得滤液和滤渣；
(4)将步骤(3)的滤渣与小分子水混合，索式提取后固液分离，滤渣与小分子水的质量比为0.5～5：15～20，所述的索式提取的时间为5～15h，固液分离后得滤渣和滤液；
(5)将步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)分离出的滤液混合，将混合滤液经过有机系微孔滤膜过滤后减压浓缩，最后真空干燥得到桑黄复合提取物。
2.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，用50～55目筛对桑黄粉进行过筛。
3.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，pH缓冲剂为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠。
4.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，用均质器均质搅拌混合，所述均质器的转速为10000r/min，所述搅拌时间为30min。
5.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，过滤压力为1～5Pa。
6.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中，在离心机上进行离心，所述离心机的转速为4000r/min，离心时间为20min。
7.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，索式提取的温度为90～100℃。
8.根据权利要求1所述的一种桑黄提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中，减压浓缩在40～60℃下进行，真空干燥的温度为60℃，桑黄复合提取物的出膏率为10.0～10.5％，桑黄复合提取物中多糖类物质含量为34～34.5％。
9.一种使用如权利要求1～8所述的桑黄提取方法提取得到的桑黄复合提取物。
10.一种如权利要求9所述的桑黄复合提取物在制备抗癌药物上的应用。
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