CN110037987B - 一种枸橼酸他莫昔芬脂质体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。本发明通过将枸橼酸他莫昔芬包裹于磷脂和胆固醇介质中制成枸橼酸他莫昔芬脂质体，可以显著降低药物毒性，提高药物的溶解性及生物利用度，延长药物作用时间；同时通过采用梯度真空蒸发溶剂制得脂质薄膜的方法而获得的枸橼酸他莫昔芬脂质体成膜性更好、粒径适中(150～200nm)且均一、包封率更高(80％以上)、稳定性更好。

Description

一种枸橼酸他莫昔芬脂质体及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种枸橼酸他莫昔芬脂质体及其制备方法。
背景技术
枸橼酸他莫昔芬是一种非固醇类抗雌激素药物，其结构与雌激素相似，存在Z型和E型两个异构体。其中Z型异构体进入乳腺癌细胞内，可与雌激素受体(ER)竞争结合，形成受体复合物，阻止雌激素作用的发挥，从而抑制乳腺癌细胞的增殖，因此被广泛用于治疗各类乳腺癌,尤其适用于雌激素受体和孕酮受体阳性以及前列腺特异性抗原水平较低的绝经后乳腺癌妇女患者。
枸橼酸他莫昔芬为脂溶性药物，几乎在水中不溶，故其生物利用度低。枸橼酸他莫昔芬有一定的毒副作用，可引起食欲不振、恶心、呕吐、腹泻、月经失调、闭经、阴道出血、外阴瘙痒、子宫内膜增生、内膜息肉和内膜癌、颜面潮红、皮疹、脱发、精神错乱、肺栓塞、血栓形成、无力、嗜睡等。目前，枸橼酸他莫昔芬的现有剂型难以较好解决其溶出度和生物利用度的问题，也未能降低其毒副作用。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种枸橼酸他莫昔芬脂质，其溶出度及生物利用度高。
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：
将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：
-0.01～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.04～-0.05Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；
将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。
优选的，所述蒸发温度为39℃～41℃，旋转的转速为85～90r/min。
优选的，所述梯度真空蒸发具体为：
在温度为39～40℃，转速为85～90r/min条件下，-0.01Mpa旋转蒸发30～35min；-0.04Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06Mpa旋转蒸发18～20min，-0.1Mpa旋转蒸发3～3.5min。
优选的，所述磷脂为大豆卵磷脂；所述磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬质量比为(10～15):(2.5～3):1。
优选的，所述枸橼酸他莫昔芬脂质体的粒径为150～200nm。
优选的，所述溶剂为体积比为(1.8～3):1的氯仿和/或二氯甲烷与甲醇混合物。
优选的，所述水化具体为：
将超纯水预热至65～70℃后，洗脱脂质薄膜，温度为63～67℃，转速50～70r/min，水化15～30min。
优选的，所述水化后为超声均化；所述超声均化具体为：在25～32℃温度下，超声均化15～30min。
优选的，所述过滤具体为：先用0.45微米无菌滤膜过滤，再用0.22微米无菌滤膜过滤。
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体，由上述技术方案所述的制备方法制备得到。
与现有技术相比，本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：-0.01～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.04～-0.05Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。本发明通过将枸橼酸他莫昔芬包裹于磷脂和胆固醇介质中制成枸橼酸他莫昔芬脂质体，可以显著降低药物毒性，提高药物的溶解性及生物利用度，延长药物作用时间；同时通过采用梯度真空蒸发溶剂制得脂质薄膜的方法而获得的枸橼酸他莫昔芬脂质体成膜性更好、粒径适中(150～200nm)且均一、包封率更高(80％以上)、稳定性更好。
附图说明
图1为本发明实施例7的各组小鼠胸腺指数柱形图；
图2为本发明实施例7的各组小鼠脾脏指数柱形图；
图3为本发明实施例7的各组小鼠肿瘤抑制率柱形图。
具体实施方式
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：
将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：
-0.01～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.04～-0.05Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；
将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。
本发明提供的枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法首先将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中。
按照本发明，所述磷脂优选为大豆卵磷脂。
本发明对于枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇来源不进行限定，市售即可。
其中，所述磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬质量比优选为(10～15):(2.5～3):1；更优选为(10～13):(2.5～2.8):1；最优选为10:2.5:1。
所述溶剂优选为体积比为(1.8～3):1的氯仿和/或二氯甲烷与甲醇混合物；更优选为(1.8～2.5):1的氯仿和/或二氯甲烷与甲醇混合物；最优选为2:1的氯仿和/或二氯甲烷与甲醇混合物。
按照本发明，所述磷脂的质量mg与所述溶剂的体积mL的比为8：(6～10)。
本发明对于所述溶于溶剂中的具体方式不进行限定，优选为超声溶解。
本发明创造性地将枸橼酸他莫昔芬包裹于磷脂和胆固醇介质中制成脂质体，可以显著降低药物毒性，提高药物的溶解性及生物利用度，延长药物作用时间。
本发明通过合理配比磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬质的比例，使所得的枸橼酸他莫昔芬脂质体在溶解性及生物利用度方面表现更佳，包封率与稳定性也更好。
溶解后，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：
-0.01～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.04～-0.05Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；
其中，所述蒸发温度为39℃～41℃，所述旋转的转速为85～90r/min。
本发明其中一个梯度真空蒸发的技术方案具体为：
-0.01～-0.015Mpa旋转蒸发20～30min；-0.04～-0.045Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；
本发明其中一个梯度真空蒸发的技术方案具体为：
-0.015～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.045～-0.05Mpa旋转蒸发20～25min；-0.065～-0.07Mpa旋转蒸发10～15min，-0.08～-0.09Mpa旋转蒸发4～5min；
本发明其中一个梯度真空蒸发的技术方案具体为：
在温度为39～40℃，转速为85～90r/min条件下，-0.01Mpa旋转蒸发30～35min；-0.04Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06Mpa旋转蒸发18～20min，-0.1Mpa旋转蒸发3～3.5min。
本发明其中一个梯度真空蒸发的技术方案具体为：
在温度为39～40℃，转速为86～89r/min条件下，-0.01Mpa旋转蒸发30～34min；-0.04Mpa旋转蒸发22～28min；-0.06Mpa旋转蒸发18～20min，-0.1Mpa旋转蒸发3.1～3.4min。
本发明人创造性的尝试采用梯度真空蒸发溶剂制备脂质薄膜而制备枸橼酸他莫昔芬脂质体，所制成的脂质薄膜成膜更加均匀、更容易被洗脱，进而使所制得的枸橼酸他莫昔芬脂质体更加均一、Zeta电位绝对值更大，即更稳定。
得到脂质体薄膜后，优选为吹氮气5～10min去除残留有机溶剂。
将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。
制得脂质薄膜后，加入超纯水水化脂质薄膜，制得脂质体悬液。
其中，所述超纯水的体积mL与所述大豆软磷脂的质量mg的比为1：4～8。
在本发明中，所述水化优选具体为：
将超纯水预热至65～70℃后，洗脱脂质薄膜，温度为63～67℃，转速50～70r/min，水化15～30min。
本发明对于所述水化的具体选择没有特别限制，以本领域技术人员熟知的水化方式即可，本领域技术人员可以根据实际应用情况、原材料情况以及产品的要求进行选择和调整，优选的，所述水化温度优选为63～67℃，更优选为64～66℃，最优选为65℃。所述水化转速优选60～70r/min，更优选60～65r/min，最优选60～63r/min。所述水化时间优选为15～30min，更优选为20～25min，最优选为23～25min。
获得脂质体悬液后，优选进行超声均化。
本发明对于所述超声均化的具体选择没有特别限制，以本领域技术人员熟知的超声均化的方式即可，本领域技术人员可以根据实际应用情况、原材料情况以及产品的要求进行选择和调整，本发明所述均化优选在超声仪中进行。
按照本发明，所述水化后为超声均化；所述超声均化优选具体为：在25～32℃温度下，超声均化15～30min；更优选为：在26～30℃温度下，超声均化18～28min。
脂质体悬液超声均化后，过滤，获得枸橼酸他莫昔芬脂质体。
所述过滤优选具体为先用0.45微米无菌滤膜过滤一次，再用0.22微米无菌滤膜一次，获得枸橼酸他莫昔芬脂质体。
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：-0.01～-0.02Mpa旋转蒸发20～40min；-0.04～-0.05Mpa旋转蒸发20～30min；-0.06～-0.07Mpa旋转蒸发10～20min，-0.08～-0.1Mpa旋转蒸发3～5min；将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。本发明通过将枸橼酸他莫昔芬包裹于磷脂和胆固醇介质中制成枸橼酸他莫昔芬脂质体，可以显著降低药物毒性，提高药物的溶解性及生物利用度，延长药物作用时间；同时通过采用梯度真空蒸发溶剂制得脂质薄膜的方法而获得的枸橼酸他莫昔芬脂质体成膜性更好、粒径适中(150～200nm)且均一、包封率更高(80％以上)、稳定性更好。
本发明提供了一种枸橼酸他莫昔芬脂质体，由上述技术方案所述的制备方法制备得到。
在本发明中，所述枸橼酸他莫昔芬脂质体的粒径为150～200nm。
粒径100～200nm的枸橼酸他莫昔芬脂质体不易被网状内皮系统捕获，且由于EPR效应药物更容易富集并进入肿瘤组织，而不易进入正常的组织间，更有利于枸橼酸他莫昔芬脂质体被动靶向乳腺肿瘤组织。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法进行详细描述。
本发明实施例所述的配方如表1所示。
表1
Figure BDA0001547580630000061
实施例1
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用1号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为2:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：6ml，超声溶解后，进行梯度真空蒸发去除有机溶剂。梯度真空蒸发过程如下：-0.01Mpa持续30min；-0.04Mpa持续30min；-0.06Mpa持续20min；-0.1Mpa持续3min。蒸发过程温度为39℃，转速为85/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：4mg的超纯水至68℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度65℃、转速60r/min，洗脱脂质薄膜，水化25min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声20min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
实施例2
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用2号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为1.8:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：8ml，超声溶解后，进行梯度真空蒸发去除有机溶剂。梯度真空蒸发过程如下：-0.02Mpa持续40min；-0.05Mpa持续25min；-0.065Mpa持续15min；-0.09Mpa持续4min。蒸发过程温度为40℃，转速为88r/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：6mg的超纯水至65℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度63℃、转速65r/min，洗脱脂质薄膜，水化15min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声15min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
实施例3
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用3号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为3:1的氯仿甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的氯仿甲醇混合液的比为8mg：10ml超声溶解后，进行梯度真空蒸发去除有机溶剂。梯度真空蒸发过程如下：-0.015Mpa持续20min；-0.045Mpa持续20min；-0.07Mpa持续10min；-0.08Mpa持续5min。蒸发过程温度为41℃，转速为90/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：8mg的超纯水至70℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度67℃、转速70r/min，洗脱脂质薄膜，水化30min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声30min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
对比例1
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用1号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为2:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：6ml，超声溶解后，进行真空蒸发去除有机溶剂。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：4mg的超纯水至68℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度65℃、转速60r/min，洗脱脂质薄膜，水化25min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声20min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
对比例2
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用1号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为2:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：8ml超声溶解后，进行真空蒸发去除有机溶剂。
梯度真空蒸发过程如下：-0.03Mpa持续30min；-0.02Mpa持续30min；-0.06Mpa持续20min；-0.08Mpa持续3min。蒸发过程温度为45℃，转速为95r/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：4mg的超纯水至68℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度65℃、转速60r/min，洗脱脂质薄膜，水化25min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声20min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
对比例3
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用1号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为2:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：6ml超声溶解后，进行真空蒸发去除有机溶剂。
梯度真空蒸发过程如下：-0.04Mpa持续50min；-0.02Mpa持续15min；-0.05Mpa持续35min；-0.09Mpa持续1.5min。蒸发过程温度为45℃，转速为95r/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：4mg的超纯水至68℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度65℃、转速60r/min，洗脱脂质薄膜，水化25min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声20min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
对比例4
一种枸橼酸他莫昔芬脂质体。
配方：采用4号配方。
制备方法：
(1)按配方用量称取大豆卵磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬加入茄型瓶中，加入体积比为2:1的二氯甲烷甲醇混合液，大豆卵磷脂与所加的二氯甲烷甲醇混合液的比为8mg：10ml超声溶解后，进行梯度真空蒸发去除有机溶剂。梯度真空蒸发过程如下：-0.01Mpa持续30min；-0.04Mpa持续30min；-0.06Mpa持续20min；-0.1Mpa持续3min。蒸发过程温度为39℃，转速为85/min。蒸发完毕，吹氮气约5～10min去除残留有机溶剂。获得脂质薄膜。
(2)将与大豆卵磷脂的比为1ml：4mg的超纯水至68℃，缓慢加入脂质薄膜容器，保持温度65℃、转速60r/min，洗脱脂质薄膜，水化25min。制得脂质体悬液。
(3)取适量温水置于超声仪，超声20min，至枸橼酸他莫昔芬脂质体悬液变通透。过0.45微米无菌滤膜一次，再过0.22微米无菌滤膜一次。得枸橼酸他莫昔芬脂质体，4℃保存。
对比例5
配方：采用5号配方
制备方法：
1.按照下述方法制备枸橼酸他莫昔芬包合物：
(1)在水介质中，按配方表所示的比例，将枸橼酸他莫昔芬与α-环糊精反应，将所得溶液经微孔无菌滤膜过滤至澄清，从混合物中分离出包合物。
2.将枸橼酸他莫昔芬包合物粉碎过100目筛，将其余辅料粉碎过80目筛；将枸橼酸他莫昔芬包合物与其余辅料混合均匀，加适量水将混合物调成膏状在制粒机上制粒，18目筛整粒，60℃干燥，即得缓释颗粒。
实施例4
实施例1～3及对比例1～2中枸橼酸他莫昔芬脂质体粒度分布测定。
测定方法：加样枪吸取适量脂质体样品溶液,注入到纳米粒度和Zeta电位分析仪的石英测量池和毛细管小池中，测定样品的平均粒径、多分散性指数(PDI)和Zeta电位。
测定结果：
Figure BDA0001547580630000111
实施例5
实施例1～3及对比例1～2中枸橼酸他莫昔芬脂质体包封率测定。
测定方法：枸橼酸他莫昔芬脂质体经11000r/min超滤1h后，收集下清液，采用高效液相
色谱法分别测定其中的枸橼酸他莫昔芬含量，记为W游离，将脂质体组合物经无水乙醇完全破膜后，高效液相色谱法分别测定其中的枸橼酸他莫昔芬含量，利用公式W总，包封率＝(W总-W游离)/W总×100％计算枸橼酸他莫昔芬脂质体包封率。
测定结果：
Figure BDA0001547580630000112
实施例6
实施例1～3及对比例1～2中枸橼酸他莫昔芬脂质体稳定性测定。
测定方法：取枸橼酸他莫昔芬脂质体，充氮绝氧熔封后，置25℃存放，3个月后测定药物包封率，考察脂质体的长期稳定性。
测定结果：
Figure BDA0001547580630000121
实施例7
实施例1及对比例1、对比例5中枸橼酸他莫昔芬制剂生物利用度测定。
测定方法：将荷人乳腺癌细胞MCF-7小鼠随机分为四组，各8只，分别口服给药1mL生理盐水(阴性对照组)，1mL按照实施例1方法制备的枸橼酸他莫昔芬脂质体，1mL对比例1方法制备的枸橼酸他莫昔芬脂质体，1mL缓释颗粒溶液(将按照对比例5制得的缓释颗粒溶解，使其含枸橼酸他莫昔芬浓度与枸橼酸他莫昔芬脂质体中药物浓度相同)；给药15天，脱颈处死小鼠，解刨动物，完整的取出小鼠组织，并用生理盐水清洗组织，再滤纸吸干后观察其病变情况，称取肿瘤，胸腺，脾脏的质量。分别计算：
胸腺指数＝(胸腺重量÷小鼠重量)×10
脾脏指数＝(脾脏重量÷小鼠重量)×10
肿瘤抑制率＝[(阴性对照组瘤重-试验组瘤重)/阴性对照组瘤重]×100％
胸腺和脾脏作为体内的重要免疫器官,胸腺指数和脾脏指数可粗略反映机体免疫功能的强弱。由实验结果可知：实施例1相较于对比例1与对比例5，对胸腺与脾脏生长抑制明显降低(见图1和图2，图1为本发明实施例7的各组小鼠胸腺指数柱形图，图2为本发明实施例7的各组小鼠脾脏指数柱形图)，说明按照实施例1制备的枸橼酸他莫昔芬脂质体降低了枸橼酸他莫昔芬的毒副作用；实施例1的肿瘤抑制率明显高于对比例1与对比例5(见图3，图3为本发明实施例7的各组小鼠肿瘤抑制率柱形图)，说明按照实施例1制备的枸橼酸他莫昔芬脂质体提高了枸橼酸他莫昔芬的生物利用度。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种枸橼酸他莫昔芬脂质体的制备方法，包括：
将枸橼酸他莫昔芬、磷脂和胆固醇溶于溶剂中，采用梯度真空蒸发的方法制备得到脂质体薄膜；所述梯度真空蒸发具体为：
在温度为39~40℃，转速为85~90r/min条件下，-0.01Mpa旋转蒸发30~35min；-0.04 Mpa旋转蒸发20~30min；-0.06 Mpa旋转蒸发18~20min，-0.1 Mpa旋转蒸发3~3.5min;
所述磷脂、胆固醇与枸橼酸他莫昔芬质量比为10: 2.5:1;
将所述脂质体薄膜水化、过滤，得到枸橼酸他莫昔芬脂质体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂为大豆卵磷脂。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述枸橼酸他莫昔芬脂质体的粒径为150~200nm。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为体积比为（1.8~3）:1的氯仿和/或二氯甲烷与甲醇混合物。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水化具体为：
将超纯水预热至65~70℃后，洗脱脂质薄膜，温度为63~67℃，转速50~70 r/min，水化15~30min。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述水化后为超声均化；所述超声均化具体为：在25~32℃温度下，超声均化15~30min。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述过滤具体为：先用0.45微米无菌滤膜过滤，再用0.22微米无菌滤膜过滤。
8.一种枸橼酸他莫昔芬脂质体，其特征在于，由权利要求1~7任意一项所述的制备方法制备得到。
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