CN110007034A - 一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法 - Google Patents
一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医用食品中氨基酸分析检测技术领域，特别涉及一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法，具体步骤如下：(1)试剂准备、(2)样品制备、(3)测定样品溶液，分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积，代入校正曲线计算含量；以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各氨基酸本底值，即得各样品中氨基酸含量；(4)空白试验、(5)计算、(6)检测方法灵敏度、准确度和精密度。本发明提供的技术方案带来的有益效果是：样品制备简单，一步提取，无需衍生；灵敏度高；检出范围宽；重现性好；高效快速，30分钟内完成分析。
Description
技术领域
本发明涉及医用食品中氨基酸分析检测技术领域，特别涉及一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法。
背景技术
医用食品作为一种为疾病或特殊医学状况人群提供营养支持的食品，早在20世纪80年代就被许多发达国家广泛使用，并取得了很好的临床效果。许多国家和地区都制定了相应管理措施和标准，然而，我国早期的医用食品一直采用药品审批制度，审批流程复杂、时间长、成本高，导致产品严重不足，不能满足临床需要。随着国家支持政策的不断出台，我国的医用食品市场发展飞速，其设计的种类较多、组分较多、工艺复杂，质量安全直接影响到目标人群的健康安全，须臾不得放松。
现阶段医用食品中的氨基酸检测方法如下：
1958年，Spackman等首先提出用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸，实现氨基酸分析的自动化。由于氨基酸不具有分光检测所需的生色基团，用色谱方法进行检测时需对氨基酸进行柱前或柱后衍生，但衍生化操作步骤繁琐，耗时耗力，而且对衍生化合物的稳定性难以进行直观的评判，某些氨基酸衍生反应的完全程度也难以保证。同时衍生反应还可能生成非目标衍生物，这些都会影响氨基酸的准确测定。现在广泛使用的全自动氨基酸分析仪也同样存在氨基酸衍生的问题。另外，液相色谱等方法主要通过保留时间来识别化合物，必须花费较多时间摸索适当的色谱条件以准确判定待测物，但化合物共流出的问题致使不能区分某些待测化合物和干扰物，从而影响定性和定量的准确性。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种省时、省力、省料、高效准确的基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法。
本发明所述技术方案如下：
一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法，具体步骤如下：
1、试剂准备
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水应符合GB/T 6682规定的一级水；
1.1 氨基酸标准品(纯度＞98％)；
1.2 乙醇
1.3 盐酸
1.4 EDTA
1.5 甲醇：色谱级
1.6 甲酸：色谱级
1.7 标准储备溶液(5μmol/mL)：准确称量适量的各氨基酸对照品，用纯水溶解，分别配制成5μmol/mL的标准储备溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月；
1.8 混合氨基酸标准储备溶液(100μmol/L)：分别准确量取适量的各氨基酸标准储备液，用纯水溶解，配制成混合溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月；
2 测定步骤
2.1 样品制备
称取样品500mg，加入1mL50％的乙醇水溶液(含0.1mol/L的盐酸)，匀浆，离心机12000r/min离心10min；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2.2 标准曲线的制备
精密量取适量的氨基酸混合标准工作液，制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/I、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2.3 测定
2.3.1 液相色谱条件
(1)色谱柱：Intertsil OSD-4 C18 1.7μm(3.0*250mm)；
(2)流动相：A：水，B：甲醇，C：0.5％甲酸；
(3)流速：0.3L/min；
(4)柱温：25℃；
(5)进样量：5μL
2.3.2 质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测(MRM)；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子；
2.3.3 测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积，代入校正曲线计算含量；以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各氨基酸本底值，即得各样品中氨基酸含量；样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内；
2.4 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作；
3 计算
按式(1)计算样品中各游离氨基酸的含量：
式中：
X-样品中各氨基酸组分的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c-样品浓度，单位为μmol/L；
V-试样总体积，单位为毫升(mL)；
M-氨基酸的摩尔质量，单位为克/摩尔(g/mol)；
m-试样质量，单位为克(g)；
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字；
4 检测方法灵敏度、准确度和精密度
4.1 灵敏度
4.2 准确度
4.3 精密度
本发明提供的技术方案带来的有益效果是：
(1)样品制备简单，一步提取，无需衍生；
(2)灵敏度高；
(3)检出范围宽；
(4)重现性好；
(5)高效快速，30分钟内完成分析。
(6)将极大的提高特医食品的检验效率，不仅能推动企业自身的发展，同时对监管的方便有效也有极大的促进作用。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例对本发明实施方式作进一步地详细描述。
一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法，具体如下：
1 材料与方法
1.1 仪器设备
1.1.1 高效液相色谱-串联质谱仪(配电喷雾离子源)。
1.1.2 微孔滤头：0.22μm。
1.1.3 离心机：转速12000r/min。
1.2 试剂
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水应符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 氨基酸标准品(纯度＞98％)；
4.2 乙醇
4.3 盐酸
4.4 EDTA
4.5 甲醇：色谱级
4.6 甲酸：色谱级
4.7 标准储备溶液(5μmol/mL)：准确称量适量的各氨基酸对照品，用纯水溶解，分别配制成5μmol/mL的标准储备溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月。
4.8 混合氨基酸标准储备溶液(100μmol/L)：分别准确量取适量的各氨基酸标准储备液，用纯水溶解，配制成混合溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月。
2 测定步骤
2.1 样品制备
称取样品500mg，加入1mL50％的乙醇水溶液(含0.1mol/L的盐酸)，匀浆，12 000r/min离心10min；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定。
2.2 标准曲线的制备
精密量取适量的氨基酸混合标准工作液，制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定。
2.3 测定
2.3.1 液相色谱条件
(1)色谱柱：Intertsil OSD-4 C18 1.7μm(3.0*250mm)；
(2)流动相：A：水，B：甲醇，C：0.5％甲酸，梯度淋洗见表1；
表1梯度淋洗表
| 时间/min | A/％ | B/％ | C/％ |
| 0 | 70 | 10 | 20 |
| 8 | 70 | 10 | 20 |
| 9 | 0 | 80 | 20 |
| 14 | 0 | 80 | 20 |
| 15 | 70 | 10 | 20 |
| 20 | 70 | 10 | 20 |
(3)流速：0.3L/min；
(4)柱温：25℃；
(5)进样量：5μL
2.3.2 质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测(MRM)；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子：
2.3.3 测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积，代入校正曲线计算含量。以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各氨基酸本底值，即得各样品中氨基酸含量。样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。
2.4 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
3 计算
按式(1)计算样品中各游离氨基酸的含量：
式中：
X-样品中各氨基酸组分的含量，单位为克每千克(g/kg)；
c-样品浓度，单位为μmol/L；
V-试样总体积，单位为毫升(mL)；
M-氨基酸的摩尔质量，单位为克/摩尔(g/mol)；
m-试样质量，单位为克(g)；
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
4 检测方法灵敏度、准确度和精密度
4.1 灵敏度
4.2 准确度
4.3 精密度
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中氨基酸的方法，其特征在于具体步骤如下：
一、试剂准备
1.1 氨基酸标准品；
1.2 乙醇
1.3 盐酸
1.4 EDTA
1.5 甲醇：色谱级
1.6 甲酸：色谱级
1.7 5μmol/mL标准储备溶液：准确称量适量的各氨基酸对照品，用纯水溶解，分别配制成5μmol/mL的标准储备溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月；
1.8 100μmol/L混合氨基酸标准储备溶液：分别准确量取适量的各氨基酸标准储备液，用纯水溶解，配制成混合溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月；
二、测定步骤
2.1 样品制备
称取样品500mg，加入1mL50％的乙醇水溶液(含0.1mol/L的盐酸)，匀浆，离心机12000r/min离心10min；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2.2 标准曲线的制备
精密量取适量的氨基酸混合标准工作液，制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2.3 测定
2.3.1 液相色谱条件
(1)色谱柱：Intertsil OSD-4 C18 1.7μm；
(2)流动相：A：水，B：甲醇，C：0.5％甲酸；
(3)流速：0.3L/min；
(4)柱温：25℃；
(5)进样量：5μL
2.3.2 质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测(MRM)；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子；
2.3.3 测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积，代入校正曲线计算含量；以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各氨基酸本底值，即得各样品中氨基酸含量；样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内；
2.4 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作；
三、计算
按式(1)计算样品中各游离氨基酸的含量：
式中：X-样品中各氨基酸组分的含量，单位为克每千克；c-样品浓度，单位为μmol/L；V-试样总体积，单位为毫升；M-氨基酸的摩尔质量，单位为克/摩尔；m-试样质量，单位为克；
四、检测方法灵敏度、准确度和精密度
4.1 灵敏度
4.2 准确度
4.3 精密度。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110806448A (zh) * | 2019-11-21 | 2020-02-18 | 北京市药品检验所 | 测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法 |
| CN112198259A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-01-08 | 山东农业大学 | 一种液质联用同时测定多种氨基酸的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101354385A (zh) * | 2008-04-25 | 2009-01-28 | 广东中烟工业有限责任公司 | 同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法 |
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2019
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|---|---|---|---|---|
| CN101354385A (zh) * | 2008-04-25 | 2009-01-28 | 广东中烟工业有限责任公司 | 同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ZHENG ZHONG 等: "Direct quantitative analysis of amino acids in fermented beverage of plant extract using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY》 * |
| 张战凤 等: "离子阱液质联用仪应用于植物叶片游离氨基酸快速分析方法的建立", 《西北农业学报》 * |
| 徐倩昱 等: "柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中18种氨基酸的含量", 《中国新药与临床杂志》 * |
| 蒋林蓉 等: "酱油中胱氨酸的高效液相色谱-串联质谱法测定", 《中国调味品》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110806448A (zh) * | 2019-11-21 | 2020-02-18 | 北京市药品检验所 | 测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法 |
| CN110806448B (zh) * | 2019-11-21 | 2022-03-22 | 北京市药品检验所 | 测定复方氨基酸注射液中游离氨的方法 |
| CN112198259A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-01-08 | 山东农业大学 | 一种液质联用同时测定多种氨基酸的方法 |
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