CN110004170B - 含有人smim25基因的重组质粒、基因工程菌、重组蛋白、多抗及制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种含有人SMIM25基因的重组质粒、基因工程菌、重组蛋白、多抗及制备方法和应用，涉及生物工程技术领域。本发明提供了一种重组质粒，该重组质粒含有人SMIM25基因片段。该质粒生产成本低，可以在大肠杆菌中经过诱导产生重组融合蛋白，以该蛋白作为抗原可制备SMIM25多抗，以快速、准确地检测SMIM25蛋白，从而对胃癌进行辅助诊断。本发明提供的SMIM25重组融合蛋白可以作为抗原进行相关免疫学实验。将该SMIM25重组融合蛋白作为免疫原与佐剂混合后注射家兔，经蛋白纯化后得到的多抗能够结合原核表达蛋白和人源细胞中的SMIM25蛋白，因此可以用于进一步研究SMIM25基因的具体功能。

Description

含有人SMIM25基因的重组质粒、基因工程菌、重组蛋白、多抗 及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，尤其是涉及一种含有人SMIM25基因的重组质粒、基因工程菌、重组蛋白、多抗及制备方法和应用。
背景技术
恶性肿瘤一直是全球国家都面临的重大疾病之一，胃癌是其中的一种，也是我们中国国内死亡率最高的恶性肿瘤之一。目前用于疾病早期诊断的标志物不多、特异性不足，导致部分患者在胃癌确诊时已处于疾病的中晚期。另外，由于肿瘤的复发和转移，晚期胃癌患者的5年生存率不足30％。因此，进一步探索胃癌增殖和转移的分子机制、寻找特异性的诊断标记或干预靶标，将有助于建立更精准的，危害较小的胃癌诊治策略。
人SMIM25基因是NCBI数据库收录的一个假定基因，生物信息学分析表明该基因编码一个跨膜蛋白，属于SMIM蛋白家族，但尚无相关多肽、也没有其本身生物学功能相关的实验数据。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种含有人SMIM25基因的重组质粒，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
本发明的第二个目的在于提供上述重组质粒的制备方法，该方法工艺简单，操作方便，普适性强。
本发明的第三个目的在于提供一种基因工程菌。
本发明的第四个目的在于提供上述基因工程菌在SMIM25重组融合蛋白制备中的应用。
本发明的第五个目的在于提供一种SMIM25重组融合蛋白。
本发明的第六个目的在于提供上述SMIM25重组融合蛋白的制备方法。
本发明的第七个目的在于提供一种SMIM25多抗。
本发明的第八个目的在于提供上述多抗在制备用于诊断胃癌的试剂盒中的应用。
本发明提供了一种含有人SMIM25基因的重组质粒，所述重组质粒含有人SMIM25基因片段，其中，所述SMIM25基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了上述的重组质粒的制备方法，在基础质粒上引入人SMIM25基因片段，构建得到所述重组质粒；
优选地，所述基础质粒为pGEX-4T-1。
本发明还提供了一种基因工程菌，所述基因工程菌包括上述的含有人SMIM25基因的重组质粒或采用上述的制备方法制备得到的含有人SMIM25基因的重组质粒。
进一步的，所述基因工程菌为大肠杆菌；
优选地，所述大肠杆菌为DH5α或BL21(DE3)。
本发明还提供了上述的基因工程菌在SMIM25重组融合蛋白制备中的应用。
本发明还提供了一种SMIM25重组融合蛋白，所述SMIM25重组融合蛋白是如下(a)或(b)：
(a)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加由其衍生的蛋白质。
进一步的，所述SMIM25重组融合蛋白还包括蛋白标签；
优选地，所述蛋白标签选自MyC标签、His标签、GST标签或HA标签中的一种或多种。
本发明还提供了上述的SMIM25重组融合蛋白的制备方法，将上述的基因工程菌经过活化培养和发酵培养后，加入诱导剂进行诱导表达，获得所述SMIM25重组融合蛋白。
本发明还提供了一种SMIM25多抗，将上述的SMIM25重组融合蛋白与佐剂混合，免疫动物后，得到所述SMIM25多抗。
另外，本发明还提供了上述的SMIM25多抗在制备用于辅助诊断胃癌的试剂盒中的应用。
本发明提供了一种含有人SMIM25基因的重组质粒，该重组质粒含有如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列的人SMIM25基因片段。该质粒生产成本低，可以在较低浓度下作为抗原制备SMIM25多抗，以快速、准确地检测SMIM25蛋白，从而对胃癌进行快速准确的诊断。
本发明提供的上述重组质粒的制备方法，包括在基础质粒上引入人SMIM25基因片段。该方法工艺简单，操作方便，对技术人员要求较低，普适性强，且制备目的重组质粒的成功率较高，适于实际生产。
本发明提供的基因工程菌，包括上述含有人SMIM25基因的重组质粒，该基因工程菌能够有效表达SMIM25重组融合蛋白，且表达量较高。
本发明提供的SMIM25重组融合蛋白，具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，该SMIM25重组融合蛋白可以作为抗原进行相关免疫学实验。将该SMIM25重组融合蛋白作为免疫原与佐剂混合后注射家兔，经蛋白纯化后得到的多抗能够结合原核表达蛋白和人源细胞中的SMIM25蛋白，因此可以用于进一步研究SMIM25基因的具体功能。
此外，SMIM25在胃癌组织中的表达较癌旁组织显著增高，因此，通过本发明提供的SMIM25多抗检测人体组织SMIM25蛋白水平，可以通过判断待测样本与对照样本中SMIM25蛋白表达水平差异筛选患有胃癌的风险。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1A为本发明实施例1提供的SMIM25重组质粒pGEX-4T-1-SMIM25的测序结果；
图1B为本发明实施例1提供的SMIM25重组质粒pGEX-4T-1-SMIM25的测序图谱；
图1C为本发明实施例1提供的SMIM25重组质粒pGEX-4T-1-SMIM25的测序图谱；
图1D为本发明实施例1提供的SMIM25重组质粒pGEX-4T-1-SMIM25的测序图谱；
图2为本发明实施例2提供的GST-SMIM25融合蛋白的SDS-PAGE鉴定结果图；
图3为本发明实施例4提供的兔源anti-SMIM25抗体的ELISA鉴定结果图；
图4为本发明实施例5提供的SMIM25多抗对人源细胞SMIM25蛋白的western blot鉴定结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是：
本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方法可以相互组合形成新的技术方案。
本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。
本发明中，除非另有说明，各个反应或操作步骤可以顺序进行，也可以按照顺序进行。优选地，本文中的反应方法是顺序进行的。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
本发明提供了一种含有人SMIM25基因的重组质粒，所述重组质粒含有人SMIM25基因片段，其中，所述SMIM25基因片段的核苷酸序列如下所示：
5′-ATGAAGCTACTTGCCAAGGTCACGCAGCACAGTCACATCCTACTGAACATCATCCTGTTCTCTGGGTGGAATGTCACCATCGCCCAGGTGGGGATTTTTGTGTGTTTTGTTCACTGCTGTACACCCAGCCCCCAGCACAGCGCCTGTCCAGGACAAGTGCCCAGTAAACACTTGGGAAGCAATGCAAGCGTCCTCCCAGCAGCTCCTGCAAACAGACCCCCGACCCAAGCCCTTCCTTCTGCCTCCACTGCCACCACTGCTGCTCATCTCTGCTGGCACAGAAGTCTCTTCCCTGGTCTTCCAGAAATCCCCTCTCCACACTCAGCCAGAGGGAGCTATTAA-3′(SEQ ID NO.1)。
本发明提供了一种含有人SMIM25基因的重组质粒，生产成本低，可以在较低浓度下作为抗原制备SMIM25多抗，以快速、准确地检测SMIM25蛋白。
本发明还提供了上述的重组质粒的制备方法，在基础质粒上引入人SMIM25基因片段，构建得到所述重组质粒。
本发明提供的上述重组质粒的制备方法，工艺简单，操作方便，对技术人员要求较低，普适性强，且制备目的重组质粒的成功率较高，适于实际生产。
优选地，所述基础质粒为pGEX-4T-1。
该表达载体含有tac启动子，可实现化学诱导的高水平表达；同时，其带有GST标签，该融合蛋白可以增加目的蛋白的溶解度；获得的目的蛋白的融合蛋白便于在较温和的条件下进一步过柱纯化；使用anti-GST标签的抗体可以方便地检测。
本发明还提供了一种基因工程菌，所述基因工程菌包括上述的含有人SMIM25基因的重组质粒或采用上述的制备方法制备得到的含有人SMIM25基因的重组质粒。
该基因工程菌能够有效表达SMIM25重组融合蛋白，且表达量较高。
在一些优选的实施方式中，所述基因工程菌为大肠杆菌；
优选地，所述大肠杆菌为DH5α或BL21(DE3)。
本发明还提供了上述的基因工程菌在SMIM25重组融合蛋白制备中的应用。
本发明还提供了一种SMIM25重组融合蛋白，所述SMIM25重组融合蛋白是如下(a)或(b)：
(a)MKLLAKVTQHSHILLNIILFSGWNVTIAQVGIFVCFVHCCTPSPQHSACPGQVPSKHLGSNASVLPAAPANRPPTQALPSASTATTAAHLCWHRSLFPGLPEIPSPHSARGSY(SEQ ID NO.2)；
(b)将SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加由其衍生的蛋白质。
该SMIM25重组融合蛋白可以作为抗原进行相关免疫学实验。将该SMIM25重组融合蛋白作为免疫原与佐剂混合后注射家兔，经蛋白纯化后得到的多抗能够结合原核表达蛋白和人源细胞中的SMIM25蛋白，因此可以用于进一步研究SMIM25基因的具体功能。
在一些优选的实施方式中，所述SMIM25重组融合蛋白还包括蛋白标签；
优选地，所述蛋白标签选自MyC标签、His标签、GST标签或HA标签中的一种或多种，优选为GST标签。GST标签可以增加目的蛋白的溶解度，获得的目的融合蛋白能够在较温和的条件下进一步过柱纯化，并且使用anti-GST标签的抗体可以方便地检测相应的融合蛋白。
本发明还提供了上述的SMIM25重组融合蛋白的制备方法，将上述的基因工程菌经过活化培养和发酵培养后，加入诱导剂进行诱导表达，获得所述SMIM25重组融合蛋白。
在一个具体的实施方式中，将上述工程菌接种至含有氨苄青霉素(Amp)抗性的LB液体培养基中进行活化培养，然后转接到含有氨苄青霉素抗性LB液体培养基中进行发酵培养，再加入诱导剂IPTG进行诱导表达，获得SMIM25重组融合蛋白。
优选地，所述的诱导表达的条件优选为：37℃诱导5h。
优选地，所述的IPTG的工作浓度为1mM/L。
在一些优选的实施方式中，还包括将获得的SMIM25重组融合蛋白进行纯化的步骤：将SMIM25重组融合蛋白先经过GST-resin分离纯化，然后再通过15％SDS-PAGE对纯化后的SMIM25重组融合蛋白进行检测。
其中，GST融合标签蛋白约为26kD左右，SMIM蛋白约为11～12kD，故融合蛋白在37～38kD。
本发明还提供了一种SMIM25多抗，将上述的SMIM25重组融合蛋白与佐剂混合，免疫动物后，得到所述SMIM25多抗。
对动物的种类不做限定，只要免疫的动物具有产生抗体的功能即可。
SMIM25多抗能够结合SMIM25蛋白。
在一个优选地实施方式中，所述SMIM25多抗通过如下方法制备得到：将纯化的SMIM25重组融合蛋白与弗氏完全佐剂(CFA)或不完全佐剂(IFA)乳化后按流程免疫家兔，最后分离血清，并经蛋白A柱子分离纯化。
另外，本发明还提供了上述的SMIM25多抗在制备用于诊断胃癌的试剂盒中的应用。
SMIM25蛋白水平在胃癌组织中的表达较癌旁组织显著增高，因此，通过本发明提供的SMIM25多抗检测人体SMIM25蛋白水平，可以通过判断待测样本与对照样本中SMIM25蛋白表达水平差异筛选患有胃癌的风险。
为了有助于更清楚的理解本发明的内容，现结合具体的实施例详细介绍如下。
以下实施例中采用的细胞系为胃粘膜上皮细胞系GES-1，胃癌细胞系AGS、MGC803、BGC823。
除非特别指明，以下实施例中所用的试验方法均为本领域中所用的常规方法。
除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均为分析纯级试剂，且可从正规渠道商购获得。
除非另有说明，否则本发明以下各实施例中涉及的各种实验方法和操作，包括细胞培养，PCR扩增,载体构建，免疫印迹等，均可参见以下文献：Wang JX,Zhang XJ,Li Q,etal.,MicroRNA-103/107 Regulate Programmed Necrosis and Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury Through Targeting FADD.Circ Res.2015 Jul 31；117(4):352-363。
实施例1原核表达载体构建及测序鉴定
1.1按GenBank中收录的人SMIM25 cDNA序列，进行全基因合成，，并在起始密码子前和终止密码子后分别引入BamHI、XhoI酶切位点。
1.2克隆载体的构建和鉴定
以BamHI、XhoI对pGEX-4T-1和合成的SMIM25全基因片段进行双酶切，回收目的片段。T4DNA连接酶16℃连接过夜，连接产物转化大肠杆菌DH5H5α感受态细胞。氨苄青霉素(100μg/ml)筛选阳性克隆，碱裂解法小剂量抽提质粒，送上海金斯瑞公司测序鉴定。测序结果如图1A和1B-1D所示，结果说明本实施例提供的重组质粒测序正确。
实施例2重组蛋白的诱导表达及鉴定
测序正确的重组pGEX-4T-1-SMIM25转化表达菌株BL21(DE3)的感受态细胞，进行融合蛋白的诱导表达：接种转化有重组质粒(pGEX-4T-1-SMIM25)的单菌落于5m1 LB(Amp+)液体培养基中，37℃，160rpm，振荡培养过夜。次日以1：100的比例转种于新鲜的LB(Amp+)液体培养基中，于37℃，220rpm培养3h至OD 600约为0.6后，加入IPTG至终浓度为1mM，继续培养5h，诱导表达SMIM25重组融合蛋白。收集培养产物，分离培养基和菌体，菌体超声破碎后分离上清和沉淀，分别经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析有无目的蛋白的融合表达及蛋白的分布情况。结果如图2所示，其中，泳道1为Protein Marker，泳道2为GST-SMIM25。从图2中可以看出本实施例提供的GST-SMIM25蛋白大小与理论相符，说明制备得到的确为GST-SMIM25蛋白。
实施例3兔源多抗的制备
免疫方法为兔背部皮下多点注射。方法：第1、2次抗原0.5mg/ml与CFA 1:1乳化，1ml/只兔，间隔2周；第3、4次抗原0.3mg/ml与IFA 1:1乳化，1ml/只兔，分别间隔2周和1周；第5、6次抗原0.3mg/ml与IFA 1:1乳化，1ml/只兔，分别间隔1周；此时间可以每只兔采血1ml检测抗体产生情况；第7、8次抗原0.3mg/ml与IFA 1:1乳化，1ml/只兔，分别间隔1周；采血分离血清，按如下步骤纯化：从4℃冰箱取出经保存液平衡过的蛋白A纯化柱子；用75ml TE平衡柱床；柱床平衡完毕，将需纯化抗体按1-2ml/min的速度上样于相应的层析柱，使能与蛋白A发生结合的抗体吸附在柱脂上；上样完毕，用75ml TE平衡柱床；用0.1M glycine ph2.5以1-2ml/min的速度洗脱结合在柱脂上的抗体；收集洗脱抗体；洗脱的抗体透析，4℃，48h。
实施例4兔源多抗的ELISA鉴定
以原核表达蛋白为抗原进行包被，采用间接ELISA的方法检测抗体特异性及滴度：
4.1包被：将上述重组蛋白以包被液稀释到2μg/ml，按100μl/well加到酶标孔中，4℃孵育过夜。
4.2封闭：弃掉包被液，200μl/well PBST洗板三次，0.3％BSA-PBS 200μl/well 37℃封闭1h。
4.3一抗孵育：将实施例3中制备获得的多抗进行倍比稀释，滴度为1:8000,1:16000(16K),1:32K,1:64K,1:128K，分别加到酶标孔中。并加入等体积免疫前的家兔血清，1:1000稀释作为对照。设不加抗体的孔，加入等体积洗涤液，作为阴性对照。200μl/well，4℃孵育过夜。
4.4二抗孵育：弃掉上一步骤中的孵育液，200μl/well PBST洗板三次，加入抗兔IgG-HRP，室温孵育1h。
4.5检测：弃掉上一步骤中的孵育液，200μl/well PBST洗板四次，加入TMB底物溶液100μl，观察到颜色变化后50μl/well终止液(2N H2SO4)终止显色，在酶标仪中读取450nm吸光度值。结果如表1和图3所示，图中RB10611和RB10612为经前述免疫的两只家兔血清中纯化得到的两株多抗。从图表中可以看出，这两株多抗抗体的效价在1:8000稀释度的基础上经倍比稀释后，在1:8000到1:128000的范围内，450nm处吸光度值与稀释倍数呈现较好的线性关系，且在1:128000稀释度时，吸光度值分别达到0.721和0.958，说明抗体的有效滴度较高。
表1兔源anti-SMIM25抗体的ELISA鉴定结果
Figure BDA0002023304170000111
(-)：Negative serum 1:1000 OD＜2
实施例5 SMIM25多抗对人源细胞表达的内源性SMIM25蛋白识别的western blot鉴定
在本实施例中，采用的正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS，BGC-823和MGC-803等均来自实验室在常规正常培养条件下培养和冻存。
6.1蛋白样品的制备
(1)分别培养不同胃癌细胞，待其达到80％汇合度时，弃掉培养液上清，用1×PBS(4℃预冷)清洗细胞2次，洗去残留培养液。
(2)lysis buffer为RIPA(含蛋白酶抑制剂)按130μl/Sample，冰上裂解20min。
(3)1.5ml EP管预冷，用以收集细胞刮刮下的细胞，以转速12000r/min，4℃离心15min。
(4)吸取上清至新的离心管，该上清便为所提取的蛋白质。
(5)另存10μl蛋白提取液为定量使用。
(6)样品加上样缓冲液，沸10min，存于-20℃。
6.2蛋白浓度的测定
本实验采用BCA蛋白定量试剂盒对所提取蛋白质进行定量。
(1)将BCA和Cu按50/1的比例配成BCA工作液，充分混匀，现用现配。
(2)BSA standard用PBS稀释为0.5mg/mL。将标准品按照说明梯度稀释，加入PBS至20μl。
(3)将蛋白样品分别作梯度稀释，加同样体积至96孔板中。
(4)BCA working solution加200μl，37℃或者室温稳定静置15～20min。测定562nm的OD值，作标准曲线，计算蛋白浓度。
6.3蛋白凝胶电泳
(1)配制15％分离胶和5％浓缩胶。
(2)组装好电泳装置。
(3)取目的蛋白质样品，向加样孔中加入蛋白Marker及蛋白样品。条件为80V跑至溴酚兰条带出浓缩胶。之后将电压调至100V，直到溴酚蓝跑至胶底部。
6.4转膜
(1)裁剪胶块大小的PVDF膜(需用甲醇浸泡激活)、三层滤纸(需要电转缓冲液浸泡)备用。
(2)按顺序从黑色一面开始放海绵、滤纸、凝胶、PVDF膜、滤纸、海绵在缓冲液里面。
(3)组装转膜装置，并将电转盒置于一个加满冰块的泡沫盒中，在于周围加满碎冰。接通电源，100mA转膜0.5h。
6.5抗原抗体杂交
(1)将膜转入平皿中并加入5％脱脂牛奶，于摇床上室温振荡1-2h。
(2)将膜从封闭缓冲液中取出按目的蛋白表达的分子量剪开，将其封在装有对应一抗稀释液(1:1000)的封口袋中，使膜完全接触，4℃孵育过夜。
(3)膜置于装有TBST的容器中，放于摇床上，洗3次，每次10min。
(4)二抗适度稀释液(1:3000)，封口，室温孵育1h。
(5)TBST洗膜3次，每次10min，待发光检测。
6.7发光检测
在膜上滴加ImmobilonTM Western发光检测液，孵育2min，使用蛋白成像系统进行发光检测。结果如图4所示，从图4中可以看出，SMIM25蛋白在胃癌细胞系中高表达，说明通过本发明制备的特异性抗体能够对人源SMIM25蛋白进行有效检测，通过与对照样本中该蛋白含量的比对，可发挥对胃癌的辅助诊断作用。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 潍坊医学院
<120> 含有人SMIM25基因的重组质粒、基因工程菌、重组蛋白、多抗及制备方法和
应用
<130> 2019
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 342
<212> DNA
<213> 智人种（Homo sapiens）
<400> 1
atgaagctac ttgccaaggt cacgcagcac agtcacatcc tactgaacat catcctgttc 60
tctgggtgga atgtcaccat cgcccaggtg gggatttttg tgtgttttgt tcactgctgt 120
acacccagcc cccagcacag cgcctgtcca ggacaagtgc ccagtaaaca cttgggaagc 180
aatgcaagcg tcctcccagc agctcctgca aacagacccc cgacccaagc ccttccttct 240
gcctccactg ccaccactgc tgctcatctc tgctggcaca gaagtctctt ccctggtctt 300
ccagaaatcc cctctccaca ctcagccaga gggagctatt aa 342
<210> 2
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人种（Homo sapiens）
<400> 2
Met Lys Leu Leu Ala Lys Val Thr Gln His Ser His Ile Leu Leu Asn
1 5 10 15
Ile Ile Leu Phe Ser Gly Trp Asn Val Thr Ile Ala Gln Val Gly Ile
20 25 30
Phe Val Cys Phe Val His Cys Cys Thr Pro Ser Pro Gln His Ser Ala
35 40 45
Cys Pro Gly Gln Val Pro Ser Lys His Leu Gly Ser Asn Ala Ser Val
50 55 60
Leu Pro Ala Ala Pro Ala Asn Arg Pro Pro Thr Gln Ala Leu Pro Ser
65 70 75 80
Ala Ser Thr Ala Thr Thr Ala Ala His Leu Cys Trp His Arg Ser Leu
85 90 95
Phe Pro Gly Leu Pro Glu Ile Pro Ser Pro His Ser Ala Arg Gly Ser
100 105 110
Tyr

Claims (3)

1.SMIM25多抗在制备用于辅助诊断胃癌的试剂盒中的应用，所述SMIM25多抗由SMIM25重组融合蛋白与佐剂混合，免疫动物后得到；其中，SMIM25编码蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SMIM25重组融合蛋白包括蛋白标签。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白标签选自MyC标签、His标签、GST标签或HA标签中的一种或多种。
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Homo sapiens small integral membrane protein 25 (SMIM25), mRNA;NCBI Reference Sequence: NM_001278655.1;《Genbank》;20180729;全文 *
Long noncoding RNA gastric cancer-related lncRNA1 mediates gastric malignancy through miRNA-885-3p and cyclin-dependent kinase 4;Zhijuan Lin 等;《Cell Death and Disease》;20180630;第9卷(第6期);1-16 *
NCBI Reference Sequence: NM_001278655.1.Homo sapiens small integral membrane protein 25 (SMIM25), mRNA.《Genbank》.2018,全文. *

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