CN110003086A - 一种两亲性小分子ir820-1mt及其制剂以及其制备方法和应用 - Google Patents

一种两亲性小分子ir820-1mt及其制剂以及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种两亲性小分子IR820‑1MT及其制剂以及其制备方法和应用；该两亲性小分子IR820‑1MT，其具有式(I)所示结构：本发明的两亲性小分子IR820‑1MT及其组合物或制剂，比如其纳米粒制剂可以通过光热治疗和IDO抑制剂介导的免疫治疗用于抗癌、抗肿瘤的治疗，其对肿瘤的抑制率高达70％。尤其，本发明的两亲性小分子IR820‑1MT及其组合物或制剂，比如其纳米粒制剂与aPD‑L1作为药物组合或药物联用时，其对肿瘤的抑制率可达87％。表现出特别优异的抗肿瘤效果。

Description

一种两亲性小分子IR820-1MT及其制剂以及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种两亲性小分子IR820-1MT及其制剂以及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
癌症是导致全球人类死亡的主要疾病之一。目前，传统的肿瘤治疗手段主要包括手术、化学疗法和放射疗法等。随着肿瘤研究的深入，人们发现免疫系统与抗肿瘤作用密切相关。免疫疗法，通过刺激免疫系统去识别并杀死肿瘤细胞。全身性的抗肿瘤免疫激活及免疫记忆功能将有效的抑制肿瘤的进程。例如，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法，免疫检查点封锁(ICB)疗法和癌症疫苗都为抗肿瘤治疗开辟了新的机会。吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是一种在肿瘤细胞内过表达的酶，可以催化色氨酸(Trp)降解为犬尿氨酸(Kyn)，IDO的过表达会导致色氨酸耗竭，从而抑制T细胞的增殖和功能。而且，IDO催化产生的代谢产物能够诱导调节性T细胞(Treg)的生成，这些都将引起“冷”的免疫抑制性的肿瘤微环境。IDO抑制剂1-甲基色氨酸(1MT)能够增加Trp并降低Kyn，从而调节免疫抑制性的肿瘤微环境。然而，发明人发现，在临床应用中，1MT存在效力不足，水溶性差，缺少靶向和对正常组织的各种副作用等缺陷。
光动力疗法和一些化学疗法不仅可以直接杀死原发肿瘤，还可以通过释放肿瘤相关抗原和损伤相关分子模式诱导免疫原性细胞死亡，从而激活免疫反应，进行协同化的免疫治疗。然而，发明人发现，光动力治疗依赖于癌组织的氧微环境，化学疗法可能会存在多药耐药。
发明内容
发明人发现：光热治疗引起的局部温度升高会进一步引起血流量增大及血管通透性增加，促进制剂的穿透深度和细胞内化。由于可以精确控制近红外光的使用位置，肿瘤相关抗原可以在肿瘤原位爆炸式地释放，进而增强免疫原性。因此，光热治疗和IDO抑制剂联合可以将“冷”的免疫抑制性的肿瘤微环境转变成“热”的免疫原性的肿瘤微环境，从而对抗肿瘤起到协同增效的作用。
此外，发明人发现现有的联合光热治疗和IDO抑制剂的研究均停留在采用包载的策略上，比如钱志勇课题组使用两性聚合物MPEG-PCL包载IDO抑制剂NLG919和近红外染料IR780，体内抗肿瘤研究表明NLG919/IR780胶束可以有效抑制肿瘤边缘的生长，并可以刺激T淋巴细胞的活化，发挥免疫作用；比如马桂蕾课题组利用还原石墨烯的光热效应，并负载IDO抑制剂。在激光照射下，该制剂可以直接杀死肿瘤细胞，同时引发抗肿瘤免疫反应。然而，无机材料缺乏安全性，例如生物降解性和生物相容性差、未知的载体毒性、稳定性差等。而且，载体包载策略具有较低的载药量、突释或泄漏，批次间差异导致质量难以控制，多组分的复杂性还会增加大生产的难度和成本。
因此，本发明的目的在于在临床转化中能够提供一种极简的、单组分的纳米平台，既能克服IR820本身半衰期短和1MT本身效力低及水溶性差的问题，又能解决已有研究中的不足，实现精准、安全、低毒、高载药量的纳米制剂。
具体地，本发明的目的在于提供一种两亲性小分子IR820-1MT及其制备方法，以及包含该两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂，尤其一种两亲性小分子IR820-1MT纳米粒制剂及其制备方法，以及该两亲性小分子IR820-1MT或其组合物或制剂在制备抗癌、抗肿瘤的药物中的应用，或者该两亲性小分子IR820-1MT或其组合物或制剂与aPD-L1(即程序性死亡-配体1的抗体，一种经美国FDA批准的免疫检查点阻断剂，可通过常规购买途径获得)作为药物组合或药物联用用于癌症或肿瘤的治疗。
尤其，本发明的两亲性小分子IR820-1MT及其组合物或制剂，比如其纳米粒制剂可以通过光热治疗和IDO抑制剂介导的免疫治疗用于抗癌、抗肿瘤的治疗，其对肿瘤的抑制率高达70％，其本发明的两亲性小分子IR820-1MT及其组合物或制剂，比如其纳米粒制剂与aPD-L1作为药物组合或药物联用时，其对肿瘤的抑制率可达87％。表现出特别优异的抗肿瘤效果。
具体地，本发明通过如下技术方案实现：
在本发明的第一方面，本发明提供了一种两亲性小分子IR820-1MT，其具有式(I)所示结构：
在本发明的第二方面，本发明提供了上述第一方面所述的两亲性小分子IR820-1MT的制备方法，其以1MT(即1-甲基-色氨酸，CAS：26988-72-7)和IR820(即新吲哚菁绿，CAS:172616-80-7)为起始原料，其中，1MT经修饰得到Boc-1MT-OH，IR820经修饰得到IR820-COOH，Boc-1MT-OH与IR820-COOH以酯键结合，脱Boc保护即得IR820-1MT。
其中，1MT的结构为：
Boc-1MT-OH的结构为：
IR820的结构为：
IR820-COOH的结构为：
在本发明的一些实施方式中，Boc-1MT-OH的制备包括：1MT经叔丁氧羰基(Boc)将氨基保护后，与1,3-丙二醇通过酯化反应得Boc-1MT-OH；
优选地，IR820-COOH通过IR820与6-氨基己酸接枝得到。
在本发明的一些实施方式中，两亲性小分子IR820-1MT制备方法包括：Boc-1MT-OH在二环己基碳二亚胺(DCC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)的催化下，与IR820-COOH反应后，脱去Boc保护基，得到IR820-1MT。
在本发明更为具体的一些实施方式中，所述两亲性小分子IR820-1MT制备方法包括：
1MT与碳酸氢钠、Boc溶于水和四氢呋喃的混合溶液中，冰浴后，室温反应，收集并纯化得Boc-1MT；纯化所得的Boc-1MT溶于无水DMF中，加入DCC、NHS，在惰性气体保护、冰浴条件下反应，过滤得滤液；1,3-丙二醇溶于无水DMF中，与该滤液混合，加入DMAP，在惰性气体保护、室温反应，纯化获得Boc-1MT-OH；
IR820与6-氨基己酸溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入三乙胺，惰性气体保护、油浴条件下反应，收集产物纯化得IR820-COOH；纯化所得的IR820-COOH溶于无水DMF，加入DCC、NHS，惰性气体保护、冰浴条件下反应，过滤得滤液；纯化所得的Boc-1MT-OH溶于无水DMF中，与该滤液混合，加入DMAP，惰性气体保护、室温反应后获得IR820-1MT-Boc；
优选地，IR820-1MT-Boc可进行纯化；纯化方法包括：减压旋蒸除去反应溶剂无水DMF，真空干燥，得到粗产物；将粗产物溶于甲醇中，硅胶柱色谱提纯，二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，洗脱梯度为10:1-5:1，收集产物并浓缩干燥，得到IR820-1MT-Boc纯品为蓝色固体；
得到的IR820-1MT-Boc溶于无水二氯甲烷，加入叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(TBSOTf)和吡啶，室温反应，收集固体即两亲性小分子IR820-1MT。
在本发明的一些实施方式中，制备IR820-1MT的反应中，合适的IR820-COOH：Boc-1MT-OH：DCC：NHS：DMAP摩尔比可根据本发明的方案进行筛选，通常情况下，IR820-COOH：Boc-1MT-OH：DCC：NHS：DMAP摩尔比在1～3:3～9:2～6:2～6:2～6的范围内可以实现，但是不同摩尔比反应最终的产率及产品品质会有差异；在本发明的一些实施方式中，IR820-COOH：Boc-1MT-OH：DCC：NHS：DMAP摩尔比为1:3:2:2:2时，产率较为适中，反应稳定性较好。
在本发明一个较为具体的实施方式中，所述两亲性小分子IR820-1MT的制备包括如下步骤：
分别制备IR820-COOH和Boc-1MT：
(1)IR820与6-氨基己酸溶于无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入三乙胺，惰性气体保护、85℃油浴条件下反应4h后，收集产物纯化得IR820-COOH。
(2)1MT与碳酸氢钠、Boc溶于水和四氢呋喃的混合溶液中，冰浴10min后，室温反应24h，收集并纯化得Boc-1MT；步骤(2)也可以在步骤(1)之前实施，或者多人操作时，两步骤可同时进行。
(3)将步骤(2)纯化所得的Boc-1MT溶于无水DMF中，加入DCC、NHS，在惰性气体保护、冰浴条件下反应20min，过滤得滤液1；将1,3-丙二醇溶于无水DMF中，与该滤液1混合，加入DMAP，惰性气体保护、室温反应48h后，纯化获得Boc-1MT-OH。
(4)将步骤(1)纯化所得的IR820-COOH溶于无水DMF，加入DCC、NHS，惰性气体保护、冰浴条件下反应20min，过滤得滤液2。将步骤(3)纯化所得的Boc-1MT-OH溶于无水DMF中，与该滤液2混合，加入DMAP，惰性气体保护、室温反应48h后获得IR820-1MT-Boc。
(5)将步骤(4)所得的IR820-1MT-Boc溶于无水二氯甲烷，加入叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(TBSOTf)和吡啶，室温反应1h，收集固体即获得上述两亲性小分子(IR820-1MT)。
其中，IR820-COOH：Boc-1MT-OH：DCC：NHS：DMAP摩尔比为1:3:2:2:2。
在本发明的第三方面，本发明提供了包含上述第一方面中所述的两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂；优选地，所述制剂为纳米粒。
在本发明的第四方面，本发明提供了一种制备两亲性小分子IIR820-1MT纳米粒制剂的方法，其包括：将IR820-1MT溶于二甲基亚砜(DMSO)中，全部溶解后，缓慢滴加去离子水，再将此溶液全部转移至透析袋中，室温下于蒸馏水中透析(比如24小时)即得到蓝色IIR820-1MT纳米粒制剂。优选地，所述透析袋的截留分子量1KD。
在本发明的第五方面，本发明提供了上述第一方面中所述的两亲性小分子IIR820-1MT或上述第三方面中所述的包含两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂或上述第四方面中所述的两亲性小分子IIR820-1MT纳米粒制剂在制备抗癌、抗肿瘤的药物中的应用；优选地，所述肿瘤为黑色素瘤或结肠癌。
以及，在本发明的第六方面，本发明提供了一种用于抗肿瘤的药物组合，其包含本发明上述第一方面中所述的两亲性小分子IIR820-1MT或上述第三方面中所述的包含两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂或上述第四方面中所述的两亲性小分子IIR820-1MT纳米粒制剂和aPD-L1。
在本发明的一些实施方式中，本发明所述的两亲性小分子IR820-1MT及其组合物或制剂，比如纳米粒制剂可以通过光热治疗和IDO抑制剂介导的免疫治疗用于抗癌、抗肿瘤的治疗，所述癌症或肿瘤包括但不限于黑色素瘤、结肠癌等，在本发明一个具体的实施方式中，对肿瘤的抑制率达70％。以及，在又一些实施方式中，本发明两亲性小分子IIR820-1MT纳米粒制剂与aPD-L1作为药物组合(或者联合用药)共同用于癌症或肿瘤的治疗具有更优异的效果，对肿瘤的抑制率高达87％。
这些实施方式中的一种，所述光热治疗选择660nm的激光进行照射；以及，在与aPD-L1作为用药组合或联合用药时，两者的组合方式比如可以为激光照射4h后静脉注射aPD-L1。
本发明取得了以下有益效果：
(1)本发明提供了一种新颖的两亲性小分子IR820-1MT，该小分子不仅解决了IR820半衰期短靶向性差的缺点，同时解决了1MT效力低、水溶性差的问题，两亲性小分子IR820-1MT在水中自组装形成结构均一的纳米粒聚集体，以聚集体使用时具有被动靶向肿瘤组织等诸多优点。
(2)本发明可以通过简便快速的方法将IR820-1MT制备成纳米粒制剂，不仅经济实用，还为工业生产提供可能。精准的极简结构使纳米粒具有极高的载药量，载药量最高可高达近90％，更能满足大生产及临床转化的需求。
(3)IR820-1MT纳米粒制剂静脉注射后可以被动靶向到肿瘤部位，单独使用或与aPD-L1作为药物组合或联用均可表现出良好的抗肿瘤效果，对肿瘤的抑制率高于70％，最高可达近90％。
(4)IR820-1MT纳米粒制剂可以通过光热治疗和IDO抑制剂介导的免疫治疗用于抗癌、抗肿瘤的治疗，IR820-1MT纳米粒制剂在杀伤肿瘤的同时激活全身性的抗肿瘤免疫应答及免疫记忆功能，将“冷”的免疫抑制性的肿瘤微环境转变成“热”的免疫原性的肿瘤微环境，从而对抗肿瘤起到协同增效的作用。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为实施例1制备的两亲性小分子IR820-1MT的核磁图谱。
图2为实施例1制备的两亲性小分子IR820-1MT的质谱。
图3为实施例5中两亲性小分子IR820-1MT纳米粒形态TEM图。
图4为实施例6中两亲性小分子IR820-1MT纳米粒粒径分布图。
图5为实施例7中两亲性小分子IR820-1MT纳米粒制剂体内抗肿瘤效果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 两亲性小分子IR820-1MT的合成
分析天平精密称取一定量的IR820于圆底烧瓶中，加入无水DMF使溶解，精密称取6-氨基己酸于无水DMF超声混匀后加入圆底烧瓶中，向混合溶液中加入三乙胺，在氮气保护下，85℃油浴反应4h，反应完全后，减压抽滤除去滤液中的无水DMF，得粗产物于真空干燥箱中干燥过夜。干燥产物用甲醇复溶，硅胶拌样，蒸干后固体经硅胶柱分离，乙酸乙酯和甲醇梯度洗脱，收集产物干燥得IR820-COOH。分析天平精密称取一定量的1MT于圆底烧瓶中，加入四氢呋喃超声助溶，精密称取分析天平碳酸氢钠及Boc溶于水后，加入至圆底烧瓶，在氮气保护下，冰浴10min，后室温反应24h。反应完成后，减压旋蒸除去母液中的四氢呋喃，向水溶液中滴加1M HCl，调节pH至1。所得溶液用乙酸乙酯萃取，收集有机层，重复3次。将乙酸乙酯减压旋蒸除去，产物于真空干燥箱中干燥过夜。分析天平精密称取一定量的Boc-1MT于圆底烧瓶中，加入无水DMF使溶解，精密称取NHS，DCC分别溶于无水DMF，搅拌加入，在氮气保护下，冰浴反应20min。取所得溶液，经0.8μm滤头过滤除去副产物DCU。精密称取DMAP，1,3-丙二醇于圆底烧瓶中，溶于无水DMF，向烧瓶中缓慢滴入滤液溶液，搅拌，在氮气保护下，室温反应48h后，减压抽滤除去滤液中的无水DMF，得粗产物于真空干燥箱中干燥过夜。干燥产物用二氯甲烷复溶，室温搅拌1h,抽滤除去固体杂质。将液体减压抽滤的固体粗品，干燥后溶于水，室温搅拌1h,弃去液体，固体干燥得Boc-1MT-OH。分析天平精密称取一定量的IR820-COOH于圆底烧瓶中，加入无水DMF使溶解，精密称取NHS，DCC分别溶于无水DMF，搅拌加入，在氮气保护下，冰浴反应20min。将溶液经0.8μm滤头过滤除去副产物，转移至圆底烧瓶中，精密称取DMAP溶于无水DMF，搅拌加入使成混合溶液。精密称取Boc-1MT-OH溶于无水DMF，缓慢滴入混合溶液，在氮气保护下，室温反应48h，期间不断搅拌。其中，IR820-COOH：Boc-1MT-OH：DCC：NHS：DMAP摩尔比为1:3:2:2:2。反应完全后，减压抽滤除去滤液中的无水DMF，得粗产物于真空干燥箱中干燥过夜。干燥产物用甲醇复溶，硅胶拌样，蒸干后固体经硅胶柱分离，乙酸乙酯和甲醇梯度洗脱(10:1-5:1)，收集产物干燥，得到IR820-1MT-Boc纯品为蓝色固体。精密称取IR820-1MT-BOC于圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷使溶解，滴加TBSOTf后，缓慢滴加吡啶，室温反应1h，收集固体得IR820-1MT为蓝色，产率约为35％。
实施例2 核磁共振氢谱(1H-NMR)鉴定IR820-1MT化学结构
称取IR820-1MT(按实施例1方法制备)约3mg，氘代二甲亚砜(DMSO-d6)溶解并置于核磁管内，采用400MHz核磁共振氢谱测定其核磁共振氢谱图，以四甲基硅烷为内标物，记录化合物的化学位移值(ppm)。结果如图1所示，核磁结果可以证实，新合成的纯化分子中IR820和1MT的峰均可归属。通过1H-NMR谱图可以证实IR820-1MT的成功合成。
实施例3 质谱(MS)鉴定IR820-1MT化学结构
称取IR820-1MT(按实施例1方法制备)约1mg，甲醇溶解，进行质谱分析。结果如图2所示，质谱结果可见，分子离子峰[M-Na+H]+(1180.6)及[M+NH4]+(1220.7)的出现，证明IR820-1MT小分子合成成功。
实施例4 IR820-1MT小分子聚集体制剂(纳米粒制剂)的制备
精密称取3mg IR820-1MT(按实施例1方法制备)，溶于200μL DMSO中，全部溶解后，缓慢滴加2mL去离子水，再将此溶液全部转移至透析袋中(截留分子量1KD)，室温下于蒸馏水中透析24h，即得到蓝色纳米粒制剂。计算其载药量为88.8％。
实施例5 IR820-1MT小分子聚集体制剂(纳米粒制剂)观察
取一滴IR820-1MT小分子聚集体制剂(按实施例4方法制备)滴于碳膜铜网上，滤纸吸去多余液体，干燥后置于透射电镜下观察IR820-1MT小分子聚集体形态。电镜照片如图3，结果显示IR820-1MT可在水中聚集成大小均匀的纳米粒，分散性良好。
实施例6 IR820-1MT纳米粒制剂粒径分布观察
取上述所制IR820-1MT纳米粒制剂(按实施例4方法制备)，用BIC-Brook-Haven动态光散射纳米粒径分析仪室温条件下测量纳米粒制剂溶液中的粒子大小。结果如图4，IR820-1MT纳米粒平均粒径大小约为100nm，形态均匀，静脉注射后可通过EPR效应被动靶向到肿瘤组织。
实施例7 IR820-1MT纳米粒制剂体内抗肿瘤效果观察
取健康雌性C57BL6小鼠60只，6-8周龄，在其右前肢腋下接种1×106个B16F10细胞悬液，每天观察小鼠腋下肿瘤的生长情况。当肿瘤体积(V＝1/2×长×宽2)达到约100mm3后，随机分为6组，每组10只，开始进行实验。各组每3天分别尾静脉注射：组1，生理盐水(NS)；组2，1MT；组3，aPD-L1；组4，IR820；组5，IR820-1MT纳米粒制剂；组6，先IR820-1MT纳米粒制剂&后注射aPD-L1，并对组4进行近红外光照射(808nm激光)，对组5、6进行近红外光照射(660nm激光)，其中组6在激光照射4小时后静脉注射aPD-L1。每两天测量体重和瘤体积，共进行15天。之后处死小鼠，剖取肿瘤称重并拍照。同法处理另一批小鼠，观察40天，计算生存曲线。结果如图5所示，IR820-1MT组肿瘤体积较小，IR820-1MT纳米粒制剂&后注射aPD-L1组肿瘤体积最小，相应的，剖取的肿瘤也最小。计算各组的抑制率分别为0％、14％、37％、50％、70％、87％，生存率分别为0％、0％、0％、11％、44％、78％。以上结果均表明，IR820-1MT纳米粒制剂单独使用或与aPD-L1联合使用均表现出有效的抗肿瘤效果。
总结：本发明首次合成了联合光热治疗和IDO抑制剂的两亲性小分子IR820-1MT，该分子可以自组装形成结构均一的纳米粒聚集体，解决了IR820半衰期短靶向性差的缺点，同时解决了1MT效力低，水溶性差的问题。基于分子工程的极简策略使IR820-1MT纳米粒不仅经济实用，还可批量生产，为临床转化提供可能。IR820-1MT纳米粒制剂静脉注射后可以靶向到肿瘤部位，单独使用或与aPD-L1联合使用均具有良好的抗肿瘤效果。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种两亲性小分子IR820-1MT，其具有式(I)所示结构：
2.权利要求1中所述的两亲性小分子IR820-1MT的制备方法，其以1MT和IR820为起始原料，其中，1MT经修饰得到Boc-1MT-OH，IR820经修饰得到IR820-COOH，Boc-1MT-OH与IR820-COOH以酯键结合，脱Boc保护即得IR820-1MT；
其中，Boc-1MT-OH的结构为：
IR820-COOH的结构为：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，Boc-1MT-OH的制备包括：1MT经Boc对氨基保护后，与1,3-丙二醇通过酯化反应得Boc-1MT-OH。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，IR820-COOH通过IR820与6-氨基己酸接枝得到。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述IR820-1MT制备方法包括：Boc-1MT-OH在二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶的催化下，与IR820-COOH反应后，脱去Boc保护基，得到IR820-1MT。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述IR820-1MT制备包括：
IR820与6-氨基己酸溶于无水N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺，惰性气体保护、油浴条件下反应，收集产物纯化得IR820-COOH；
1MT与碳酸氢钠、Boc溶于水和四氢呋喃的混合溶液中，冰浴后，室温反应，收集并纯化得Boc-1MT；
纯化所得的Boc-1MT溶于无水DMF中，加入DCC、NHS，惰性气体保护、冰浴条件下反应，过滤得滤液1；1,3-丙二醇溶于无水DMF中，与该滤液1混合，加入DMAP，惰性气体保护、室温反应，纯化获得Boc-1MT-OH；
纯化所得的IR820-COOH溶于无水DMF，加入DCC、NHS，惰性气体保护、冰浴条件下反应，过滤得滤液2；纯化所得的Boc-1MT-OH溶于无水DMF中，与该滤液2混合，加入DMAP，惰性气体保护、室温反应后获得IR820-1MT-Boc；优选地，IR820-1MT-Boc可进行纯化；纯化方法包括：减压旋蒸除去反应溶剂无水DMF，真空干燥，得到粗产物；将粗产物溶于甲醇中，硅胶柱色谱提纯，二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，洗脱梯度为10:1-5:1，收集产物并浓缩干燥，得到IR820-1MT-Boc纯品为蓝色固体；
得到的IR820-1MT-Boc溶于无水二氯甲烷，加入叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯和吡啶，室温反应，收集固体即两亲性小分子IR820-1MT。
7.包含权利要求1中所述的两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂；优选地，所述制剂为纳米粒。
8.一种制备两亲性小分子IIR820-1MT纳米粒制剂的方法，其包括：将IR820-1MT溶于二甲基亚砜中，全部溶解后，缓慢滴加去离子水，再将此溶液全部转移至透析袋中，室温下于蒸馏水中透析即得到蓝色IIR820-1MT纳米粒制剂；优选地，所述透析袋的截留分子量1KD。
9.权利要求1所述的两亲性小分子IIR820-1MT或权利要求7所述的包含两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用；优选地，所述肿瘤为黑色素瘤或结肠癌。
10.用于抗肿瘤的药物组合，其包含权利要求1所述的两亲性小分子IIR820-1MT或权利要求7所述的包含两亲性小分子IR820-1MT的组合物或制剂和aPD-L1。
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