CN109991053A - 一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法，解决了现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题。本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。本发明以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及保护剂的筛选，制备出了成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的神经元特异性烯醇化酶校准品。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。
背景技术
神经元特异性烯醇化酶(NSE)是烯醇化酶中的一种，是一种酸性蛋白酶，分子量为78KD。烯醇化酶同工酶由α、β、γ亚基以二聚体的形式组合而成，共存在αα、αβ、ββ、αγ、γγ五种形式。其中二聚体αγ、γγ被称为NSE，NSE在神经元的生长、分化、存活和死亡过程中起着重要的调节作用。正常情况下，血清及脑脊液中含有微量的NSE，NSE异常增高时常伴有脑损伤或其它神经系统疾病和肿瘤相关疾病，如脑出血、脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默病、神经母细胞瘤、神经内分泌疾病和小细胞肺癌等。临床上，NSE主要应用于小细胞肺癌(SCLC)的诊断，它是SCLC最敏感、最特异的肿瘤标志物，NSE在SCLC患者血清中的水平明显高于非小细胞肺癌的患者(肺腺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等)，也可用于鉴别诊断。此外NSE也用于神经母瘤的诊断，它与S-100蛋白联合检测也被用于黑色素瘤的诊断。因此NSE体外诊断试剂对上述疾病的早期诊断和预后观察起着十分重要的意义。而作为试剂盒核心组件的校准品，它的性能稳定性则为确保试剂检测结果的恒定提供了充足的保障。
目前市售的校准品大多采用血清基质真空冷冻干燥所得，但血清基质存在较多弊端，主要是其成份复杂、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂蛋白类等物质尚未充分认识，对实验会产生一定的影响；其次血清都是批量生产，各批量之间会存在一定差异，而且血清保存期也需要被考虑，容易引起细菌等污染，导致保质期缩短，因此，要保证每批血清的一致性较为困难，从而使实验的标准化受到一定的限制；而且进口血清的价格相对较高，因此选择血清作为基质成分，需要考虑的因素非常多，对实际应用产生了很大的限制。另一方面血清容易被细菌污染，因此会为校准品的效期稳定性带来一定的风险，高品质的血清价格也相对较高，会增加最终校准品的成本。因此急需一种成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的校准品在体外诊断试剂中发挥作用。
发明内容
为了解决现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题，本发明提供一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：
(a)配制缓冲液；
(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；
(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。
作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种。
作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris的一种或两种。
作为优选的实施方式，所述缓冲液的pH为7.0～7.5。
作为优选的实施方式，所述缓冲液的浓度为10～30mM。
作为优选的实施方式，所述保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；
所述蛋白类为卵清蛋白、浓度0.3～0.5％人血清白蛋白中的一种或两种；
所述糖类为葡聚糖、浓度2～4％海藻糖中的一种或两种；
所述抗氧化剂为浓度1～2％硫代硫酸钠；
所述抑菌剂为硫柳汞、浓度0.05％叠氮钠中的一种或两种。
本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品，所述校准品为冻干粉。
本发明的有益效果是：本发明以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及保护剂的筛选，制备出了成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的NSE校准品。与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明制备的NSE校准品成本低廉，仅是常规市售产品的20％。
2、本发明制备的NSE校准品批间差异可控，避免了不同批次动物血源性成分中的不明物质对校准品性能的影响。
3、本发明制备的NSE校准品降低了对实验操作者的生物危害，且易于实现标准化生产。
4、依照本发明制备的NSE校准品有效期长，冻干品在常温条件下可稳定保持30个月，复溶后的液体产品在2～8度条件下可保存2个月，明显优于市售的同类型产品。
附图说明
图1为实施例2中神经元特异性烯醇化酶(NSE)校准品剂量反应曲线。
具体实施方式
本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，具体包括以下步骤：
(a)配制缓冲液；
(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；
(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。
优选的，缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种；更优选的，缓冲液为MOPSO或Tris或MOPSO与Tris的混合物。
优选的，缓冲液的pH为7.0～7.5；更优选的，缓冲液的pH为7.2～7.4。
优选的，缓冲液的浓度为10～30mM；更优选的，缓冲液的浓度为10～20mM。
优选的，保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；其中，蛋白类优选为卵清蛋白或人血清白蛋白或卵清蛋白与人血清白蛋白的混合物；更优选的，蛋白类为浓度0.3～0.5％的人血清白蛋白。
优选的，糖类为葡聚糖或海藻糖或葡聚糖与海藻糖的混合物；更优选的，糖类为浓度2～4％的海藻糖。
优选的，抗氧化剂为硫代硫酸钠；更优选的，抗氧化剂为浓度1～2％的硫代硫酸钠。
优选的，抑菌剂为硫柳汞或叠氮钠或硫柳汞与叠氮钠的混合物；更优选的，抑菌剂为浓度0.05％的叠氮钠。
本发明的一种神经元特异性烯醇化酶校准品为冻干粉。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1神经元特异性烯醇化酶校准品的制备
配制pH7.0、浓度为10mM的MOPSO缓冲液100mL，向其中加入0.5g人血清白蛋白、4g海藻糖、1g硫代硫酸钠和0.05g叠氮钠，0.22μm滤膜过滤；向上述制备好的校准品基质中加入NSE；将制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品称重1g±0.005g/瓶，放入冷冻干燥机，冻干；向制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品冻干粉中加入1g±0.005g纯化水，室温复溶15min，进行测试，根据NSE浓度与所对应光量值，绘制剂量反应曲线。
实施例2神经元特异性烯醇化酶校准品的制备
配制pH7.4、浓度为20mM的Tris缓冲液100mL，向其中加入0.5g卵清蛋白、4g海藻糖、1g硫代硫酸钠和0.05g叠氮钠，0.22μm滤膜过滤；向制备好的上述制备好的校准品基质中加入NSE；将制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品称重1g±0.005g/瓶，放入冷冻干燥机，冻干；向制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品冻干粉中加入1g±0.005g纯化水，室温复溶15min，进行测试，根据NSE浓度与所对应光量值，绘制剂量反应曲线，如图1所示。
上述实施例中所用的pH值的缓冲液、蛋白类、糖类、抗氧化剂及防腐剂还可以替换成前述限定的任意一种或多种的组合，制备得到的神经元特异性烯醇化酶校准品均能够达到本发明所述的技术效果，这里不再一一列举。
实施例3神经元特异性烯醇化酶校准品的性能试验
1、准确度验证
对制备好的NSE校准品进行赋值，对其进行检测。检测方法具体如下：每个浓度NSE校准品重复测试3次，分别取测定结果的均值，计算测定结果均值与标示值的偏差。0浓度NSE校准品的检测值与标示值的绝对偏差不超过0.05ng/mL，其他浓度NSE校准品的检测值与标示值的相对偏差不超过±5％，检测结果如表1所示，经计算可知，NSE校准品准确度满足要求。计算公式如下：
其中，B为相对偏差，T为理论浓度，M为检测浓度。
表1
2、瓶内均匀性验证
取NSE校准品每点各1瓶，每瓶重复测量10次，10次测量结果按照公式(2)、(3)、(4)计算测量结果的平均值标准差(SD)及变异系数(CV)，应满足CV≤5％，检测结果如表2所示，由检测结果可见，NSE校准品瓶内均匀性满足检测要求。
其中，为平均值；SD为标准差；CV为变异系数；n为测量次数；xi为指定参数第i次测量值。
表2
3、瓶间均匀性验证
取同批号的10瓶NSE校准品，每瓶校准品测试1次，按照公式(2)、(3)计算各参数10个测量结果的平均值和标准差SD1；另用上述10瓶NSE校准品中的1瓶连续测试10次，按照公式(2)、(3)计算各参数10个测量结果的平均值和标准差SD2；按照公式(5)、(6)计算各参数的瓶间均匀性CV％，，应满足CV≤5％，检测结果如表3所示。由检测结果可知，NSE校准品瓶间均匀性满足检测要求。
当SD1＜SD2时，令CV瓶间＝0；式中：为平均值；SD为标准差；CV为变异系数；n为测量次数；xi为指定参数第i次测量值。
表3
4、37℃加速稳定性验证
制备好的NSE校准品，放入37℃恒温培养箱，7天、14、28天进行一次检测，按照公式(1)计算检测结果与标示值的相对偏差，计算衰减率应不大于5％，检测结果如表4所示。由检测结果可知，NSE校准品37度加速28天，稳定性满足要求。
表4
5、2-8℃复溶稳定性验证
取待检的NSE校准品，复溶后混合均匀，置于2-8℃条件下保存，分别保存7天、14天、28天、45天、60天，计算衰减率应不大于5％，检测结果如表5所示。由检测结果可知，NSE校准品复溶后2-8度可稳定60天，稳定性满足要求。
表5
6、效期稳定性验证
制备好的NSE校准品每间隔3个月进行一次检测，按照公式(1)计算检测结果与标示值的相对偏差应不大于5％，检测结果如表6所示。由检测结果可知，NSE校准品放置30个月后，稳定性满足要求。
表6
本发明公开了一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
Claims (8)
1.一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)配制缓冲液；
(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；
(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。
2.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为MOPSO、Tris的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液的pH为7.0～7.5。
5.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液的浓度为10～30mM。
6.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；
所述蛋白类为卵清蛋白、浓度0.3～0.5％人血清白蛋白中的一种或两种；
所述糖类为葡聚糖、浓度2～4％海藻糖中的一种或两种；
所述抗氧化剂为浓度1～2％硫代硫酸钠；
所述抑菌剂为硫柳汞、浓度0.05％叠氮钠中的一种或两种。
7.采用权利要求1至6中任意一项所述的制备方法制备的一种神经元特异性烯醇化酶校准品。
8.根据权利要求7所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品，其特征在于，所述校准品为冻干粉。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111041021A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法 |
| CN113088508A (zh) * | 2021-04-09 | 2021-07-09 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106568976A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-04-19 | 江苏福隆生物技术有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶稳定剂及其制备方法 |
| CN108107224A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种ProGRP含量测定用液态校准品 |
| CN109239344A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶含量测定用液态校准品 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106568976A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-04-19 | 江苏福隆生物技术有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶稳定剂及其制备方法 |
| CN108107224A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种ProGRP含量测定用液态校准品 |
| CN109239344A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-18 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶含量测定用液态校准品 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111041021A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-21 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种血管紧张素转换酶校准品的制备方法 |
| CN113088508A (zh) * | 2021-04-09 | 2021-07-09 | 北京美联泰科生物技术有限公司 | 一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法 |
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