CN109971705A - 一种cho dg44细胞培养基添加物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种CHO DG44细胞培养基添加物及其制备方法，该细胞培养基添加物包括以下组分及重量份数：棉花水解物10‑15份、大豆水解物20‑30份、酵母水解物20‑30份。本发明的良外观聚烯烃复合材料，能使3D打印产品具有很好的外观效果。本发明CHO DG44细胞培养基添加物，能有效提升DG44细胞的生长以及悬浮培养条件下蛋白质的表达。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种CHO DG44细胞培养基添加物及其制备方法。
背景技术
动物细胞表达的单克隆抗体药物销售额迅速增长，作为商业化生产单抗的核心技术之一的大规模动物细胞悬浮培养成为抗体药物发展的新瓶颈。其中之一主要技术限制就是国内没有自己的高效能商业化动物悬浮培养基，而SIGMA、Invitrogen、Hyclone和Lonza等国际知名培养基，每升高达上千元，且配方保密，不利于后续的培养工艺优化。故研制出自主品牌且低成本的无血清无动物来源培养基，对工艺优化与反应器放大，以满足大量表达单克隆抗体的需求，对于抗体药物的产业化的意义是非常重大的。
市场上抗体药物70％以上都是由CHO DG44宿主细胞表达，是二氢叶酸还原酶缺陷型(DHFR-)中国仓鼠卵巢细胞。目前没有专门设计用于DG44细胞的生长和悬浮培养条件下蛋白质表达的细胞培养基添加物。
因此，如何设计一种能有效提升DG44细胞的生长和蛋白质表达的培养基添加物是本领域技术人员致力于研究的方向之一。
发明内容
本发明的目的，就是为了解决上述问题而提供了一种CHO DG44细胞培养基添加物及其制备方法，能有效提升DG44细胞的生长以及悬浮培养条件下蛋白质的表达。
本发明的目的是这样实现的：
本发明的一种CHO DG44细胞培养基添加物，包括以下组分及重量份数：
棉花水解物 10-15份；
大豆水解物 20-30份；
酵母水解物 20-30份。
其中，所述大豆水解物、棉花水解物和酵母水解物的重量比为1:2:2。
本发明还提供了一种CHO DG44细胞培养基添加物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按以下组分及重量份数准备原料：
棉花水解物 10-15份；
大豆水解物 20-30份；
酵母水解物 20-30份；
(2)将上述原料组分投入混合机中混合均匀，混合时间为3～5分钟，速度400～600转/分钟，温度15～30℃，即得到本发明培养基添加物。
本发明CHO DG44细胞培养基添加物，能有效提升DG44细胞的生长以及悬浮培养条件下蛋白质的表达。
附图说明
图1是实施例4中培养12天的实验组和对照组的细胞密度趋势图；
图2是实施例4中培养到第12天的实验组和对照组的细胞蛋白产量图。
具体实施方式
下面将结合实施例，对本发明作进一步说明。
实施例1
将10重量份的棉花水解物、20重量份的大豆水解物和20重量份酵母水解物混合机中混合均匀，混合时间为3～5分钟，速度400～600转/分钟，温度15～30℃。
其中，棉花水解物、大豆水解物和酵母水解物均为市售产品。
对比例1
将10重量份的豌豆水解物、20重量份的酵母水解物和20重量份大豆水解物混合机中混合均匀，混合时间为3～5分钟，速度400～600转/分钟，温度15～30℃。
其中，豌豆水解物为市售产品。
对比例2
将10重量份的棉花水解物、10重量份的酵母水解物和10重量份大豆水解物混合机中混合均匀，混合时间为3～5分钟，速度400～600转/分钟，温度15～30℃。
实施例4
实验组：采用本发明实施例1、对比例1和对比例2制备的培养基添加物；
对照组：设置对照组1至6和空白组，对照组1至6依次选用棉花水解物、酵母水解物、大豆水解物、小麦水解物、玉米水解物和豌豆水解物作为培养基添加物。
用上述实验组和对照组的培养基添加物培养CHO DG44细胞，实验方法如下：
用M199培养基(Invitrogen公司，USA)和RPMI 1640培养基(Invitrogen公司，USA)悬浮CHO DG44细胞并用Cedex AS-20细胞密度和活力自动分析仪计数细胞密度，用ELISA法检测细胞蛋白产量。按0.2×106cells/mL的细胞密度接种125mL的细胞培养瓶，培养体积为30mL，向各细胞培养瓶分别按培养体积的1％(v/v)加入实施例1、对比例1、对比例2、对照组1至6的培养基添加物，而空白组是不添加任何添加物。
37℃、5％CO2条件下，置于转速为120r/min的摇床悬浮培养。每天取样，用CedexAS-20细胞密度和活力自动分析仪计数细胞密度，实验数据如图1所示；在培养的最后一天即第12天，用ELISA法检测细胞蛋白产量，实验数据如图2所示。
从图1可见，培养至第6天，本发明实施例1的细胞密度达到了7×106cells/mL，并且保持高速增长的趋势，并于第8天细胞密度达到了峰值，高达14×106cells/mL，远远高于其他实验组和对照组。
从图2可见，本发明实施例1的最终细胞蛋白产量达到了9克/升，远远高于其他实验组和对照组。
由此可见，本发明CHO DG44细胞培养基添加物，能有效提升DG44细胞的生长以及悬浮培养条件下蛋白质的表达。
以上实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以作出各种变换或变型，因此所有等同的技术方案也应该属于本发明的范畴，应由各权利要求所限定。
Claims (3)
1.一种CHO DG44细胞培养基添加物，其特征在于，包括以下组分及重量份数：
棉花水解物 10-15份；
大豆水解物 20-30份；
酵母水解物 20-30份。
2.如权利要求1所述的一种CHO DG44细胞培养基添加物，其特征在于，所述大豆水解物、棉花水解物和酵母水解物的重量比为1:2:2。
3.如权利要求1所述的一种CHO DG44细胞培养基添加物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按以下组分及重量份数准备原料：
棉花水解物 10-15份；
大豆水解物 20-30份；
酵母水解物 20-30份；
(2)将上述原料组分投入混合机中混合均匀，混合时间为3～5分钟，速度400～600转/分钟，温度15～30℃，即得到本发明培养基添加物。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6406909B1 (en) * | 1998-07-10 | 2002-06-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Serum-free medium for culturing animal cells |
| CN103421736A (zh) * | 2012-05-21 | 2013-12-04 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | Cho细胞培养中替代动物血清的培养基添加剂及其配制方法 |
| CN103773732A (zh) * | 2013-06-08 | 2014-05-07 | 李锋 | 一种化学成分确定的培养基、其应用及大规模培养哺乳动物细胞的生产工艺 |
| WO2014160790A1 (en) * | 2013-03-26 | 2014-10-02 | Coherus Biosciences, Inc. | Protein production method |
| US20150017717A1 (en) * | 2012-03-08 | 2015-01-15 | Friesland Brands B.V. | Culture medium for eukaryotic cells |
-
2019
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6406909B1 (en) * | 1998-07-10 | 2002-06-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Serum-free medium for culturing animal cells |
| US20150017717A1 (en) * | 2012-03-08 | 2015-01-15 | Friesland Brands B.V. | Culture medium for eukaryotic cells |
| CN103421736A (zh) * | 2012-05-21 | 2013-12-04 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | Cho细胞培养中替代动物血清的培养基添加剂及其配制方法 |
| WO2014160790A1 (en) * | 2013-03-26 | 2014-10-02 | Coherus Biosciences, Inc. | Protein production method |
| CN103773732A (zh) * | 2013-06-08 | 2014-05-07 | 李锋 | 一种化学成分确定的培养基、其应用及大规模培养哺乳动物细胞的生产工艺 |
Non-Patent Citations (6)
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