CN109966318A - 一种胎盘多肽注射液制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开的一种胎盘多肽注射液制备方法，方法依次包括：经过病毒检验的胎盘，用胎盘与生理盐水配合捣碎得到胎盘组织浆;进一步用胎盘组织浆配制好透析液后，进行透析3次，透析液澄清后的上清液先经过0.45μm~l.0μm孔径的滤芯过滤，再用分子量为5000~10000道尔顿的膜进行超滤；超滤后，在60℃±0.5℃下连续10小时病毒灭活的超滤液用0.22μm滤芯除菌过滤后，灌封，检漏；由于采用了低温透析工艺，提供一种既可确保胎盘多肽注射液有效成分、又可较为彻底杀死除去在胎盘多肽注射液的病原微生物的新型制备方法，制作出的胎盘多肽注射液，疗效显著，既确保制品生产和使用的安全性，又提高了产品的生产率。

Description

一种胎盘多肽注射液制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物化学药品的制备方法，具体涉及一种胎盘多肽注射液制备方法。

背景技术

当前市场上的胎盘制品，如胎盘组织注射液，主要生产工艺沿袭传统中药炮制方法，采用高温煮沸提取，減压浓缩等工艺制备，另外，也有企业使用抗体检查后的胎盘作为原料，采用低温提取工艺制备胎盘制剂，在乙型肝炎的治疗过程中辅助使用。

前者容易做到，将产品中的可能残留的病毒灭活，从而保障产品的安全，但由于是在高温下操作，因此，但出现将产品中的活性成分减少或活性降低极低的情况，后者则恰好与前者相反，由于是低温操作，虽然可以较好的保持产品的活性，以保证其效力，但却容易出现些病毒不会被去除或灭活，从而便产品的安全性受到影响的情况。在中药材制作中的胎盘叫紫河车，现介绍如下：

紫河车[异名]胞衣《梅师集验方》，混沌皮、混元丹《本草蒙签》，胎衣、混沌衣《纲目》。[基原]为健康人的胎盘。[药材]干燥的胎盘为不规则的类圆形或椭圆形碟状，直径9～16厘米，厚薄不一。紫红色或棕红色，有的为黄色。一面凹凸不平，有多数沟纹，为绒毛叶；一面为羊膜包被，较光滑，在中央或一侧附有脐带的残余，四周散布细血管，每具重50～100克。质硬脆，有腥气，以整齐、黄色或紫红色、洁净者为佳。[成分]胎盘的成分较复杂。胎盘球蛋白制品中含有多种抗体，在临床上长期以来用于被动免疫。人胎盘中还含有干扰素（interferon商品胎盘球蛋白中也多半含有），它有抑制多种病毒对人细胞的作用，以及含有能抑制流感病毒的巨球蛋白，称β—抑制因子。

胎盘含有与血液凝固有关的成分，其中有类似凝血因子ⅩⅢ的纤维蛋白稳定因子；尿激酶(Urokinase)抑制物（能抑制尿激酶活化纤维蛋白溶酶元的作用）和纤维蛋白溶酶元活化物。通常情况下纤维蛋白溶酶元活化物的作用低于抑制物。人胎盘中含有的激素有：促性腺激素A和B、催乳素，促甲状腺激素、催乳素样物质，多种甾体激素如雌酮、雌二醇、雌三醇、孕甾嗣、雄甾酮、去氧皮质甾酮、11—去氢皮质甾酮（化合物A）、可的松（化合物E）、17—羟皮质甾酮(化合物F)等。人胎盘催乳素与人垂体生长激素的化学结构上相关，有免疫交叉反应，在垂体切除大鼠与生长激素也有明显的协同作用，所以也称催乳素—生长激素；或谓胎盘催乳素有生长激素的作用。

人胎盘的酸性抽提物中还得到较多量的能松驰大鼠十二指肠和降大鼠血压的成分，其性质同前列腺素E1。

人胎盘中含有多种有应用价值的酶，如溶菌酶、激肽酶、组胺酶、催产素酶等。另含红细胞生成素、磷脂（其中卵磷脂占45.5～46.5%）、多种多糖。

［药理］①抗感染作用胎盘γ—球蛋白含有麻疹、流感等抗体以及白喉抗毒素等，可用于预防或减轻麻疹等传染病。因系蛋白质，故口服无效，必须注射。胎盘γ—球蛋白中还含干扰素，临床上可用于预防或控制病毒感染。胎盘中还含有溶菌酶，可防止小鼠（腹腔注射）由肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、弗氏痢疾杆菌的内毒素引起的死亡；对内毒素对大鼠的伤害也有一定的保护作用；但对大肠杆菌引起的内毒素血症无作用。②增强机体抵抗力给小鼠口服胎盘粉，能减轻其结核病变，而在试管中反能促进结核杆菌的生长，故认为其作用主要在于增加机体抵抗力。③激素样作用，胎盘在生理上能产生绒毛膜促性腺激素，对卵巢作用很小，但对睾丸则有兴奋作用；此外，也能产生雌激素及孕激素。胎盘中可能含有这些激素，因而具有这些激素的药理作用。绒毛膜促性腺激素是蛋白质类物质，口服无效，需要注射。④对血凝的影响胎盘中含有所谓“尿激酶抑制物”，能抑制尿激酶对纤维蛋白溶酶元的“活化”作用；此可解释妊娠时纤维蛋白溶酶元活性之降低。据测定，妊娠时子宫肌层中纤维蛋白溶酶元活化物与尿激酶抑制物的比例为1:34，而胎中二者之比例则高达1：1197。人胎盘中含有低分子的凝血因子XIII（一种糖蛋白），因此可用来治疗因XIII凝血因子缺乏的出血患者。此种凝血因子不仅能稳定纤维蛋白凝块、促进创伤愈合，在动物实验中还有抗组织胺的作用。(5)其他作用在离体试验中，胎盘提取物能促进受抑制心脏的恢复。胎盘蛋白中，含有“肾素样”的升压物质，在血液循环的调节上，其意义尚待进一步阐明。人胎盘中尚含某种糖蛋白成分，在体外试验中，能抑制淋巴细胞中DNA的合成，但不影响细胞的活力。胎盘提取物大量时能抑制去氧麻黄碱引起的发热等等多种作用。

【功用主治】补气，养血，益精。治虚损，蠃瘦，劳热骨蒸、咳喘，咯血，盗汗，遗精，阳痿，妇女血气不足，不孕或乳少。

【临床报道】①治疗支气管哮喘②治疗慢性气管炎用新鲜胎盘制成20%蒸馏液，每日肌注1次，每次2毫升，10天为一个疗程6治疗久病体弱、经过其他方法治疗不效而反复发作之患者47例，结果无效17例，显效24例，好转6例。对咳、痰、喘都有一定的疗效，患者体质也有不同程度的增强。未见副作用。③治疗皮肤溃疡；④治疗母乳缺乏症。《中医药大辞典》上海出版社,1985年版,P2363。

发明内容

本发明的目的在于提供一种既可确保有效成分、即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒等病毒的原料，改进制作方法，提供一种既可确保有效成分、又可较为彻底杀死病原微生物的胎盘多肽注射液的新型制备方法；制作出的胎盘多肽注射液，除了能作免疫调节剂外，还用在治疗下肢骨折的临床和创面愈合方面有明显疗效。

为达到上述的目的，一种胎盘多肽注射液制备方法，发明的方法依次包括以下步骤：

(1)、收集健康产妇足月分娩的胎盘，将其胎盘清洗干净，沥干；

(2)、按胎盘与生理盐水5：1的比例加入0.75～1.0%（质量百分比）生理盐水，将胎盘捣碎得到胎盘组织浆；

(3)、再按胎盘组织浆与0.75%～1%（质量百分比）生理盐水1：4比例配制好透析液后，进行透析；共透析3次，第l、2次分别为20～24小时，第3次为40～50小时；

(4)、取经过3次透析后的透析液，澄清，上清液先经过0.45μm～l.0μm孔径的滤芯过滤，再用分子量为5000～10000道尔顿的膜进行超滤；超滤后，在60℃±0.5℃下连续10小时病毒灭活；

（5）将进行病毒灭活后的超滤液用0.22μm滤芯除菌过滤后，灌封，检漏。

本方法首先进行原料胎盘病毒检验，即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒等病毒的原料胎盘。

本方法制备的产品为无色或淡黄色澄清液体。

由于本发明的操作步骤中，即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒等病毒的原料，改进制作方法，并60℃±0.5℃连续10小时病毒灭活，增加了低温透析工艺，提供一种既可确保胎盘多肽注射液有效成分、又可较为彻底杀死在胎盘多肽注射液的病原微生物的新型制备方法。制作出的胎盘多肽注射液，除了能作免疫调节剂外，还用在治疗下肢骨折的临床和创面愈合方面有明显疗效，预先除去杀死在胎盘多肽注射液的病原微生物残留物。得到的产品，既确保制品生产和使用的安全性，又提高了产品的生产率，同时最大程度的保留原有成分的活性。

下面通过具体实施方式对本发明的方法作详细的描述。

具体实施方式：

实施例1

一种胎盘多肽注射液制备方法，首先进行原料胎盘病毒检验，即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒等病毒的胎盘；

具体依次包括如下步骤：

(1)、收集健康产妇足月分娩的胎盘，将其20个胎盘清洗干净，沥干得胎盘约7000克；

(2)、按胎盘组织与生理盐水5：1的比例加入0.75%～1%（质量百分比）生理盐水，捣碎得到胎盘组织浆8400克；

(3)、按胎盘组织浆与0.75%～1%（质量百分比）生理盐水按1：4比例配制透析液，然后进行透析;共透析3次，第l、2次分别为20～24小时，第3次为40～50小时；

(4)、收集3次透析液提总量90.7L；

(5)、取3次透析后的透析液，澄清后用0.45μm孔径的滤芯过滤，再用分子量5000～10000道尔顿的膜进行超滤；超滤液在60℃±0.5℃下连续10小时病毒灭活；

（6）将进行病毒灭活后的药液温度降至5℃±1℃，用0.22μm滤芯除菌过滤后灌封，得每支装量为4ml的胎盘多肽注射液共18850支；

(7)检漏把产品均匀地摆放在机动门安瓿瓶灭菌器专用车上，将车缓缓推进安瓿灭菌器箱体内，关闭箱门；

检漏负压-80kPa、负压检漏时间300秒，

检漏正压80kPa、正压检漏时间300秒，

清洗时间600秒、压力限度130kPa。

(8)设置完成后程序开始运行，先抽真空，当真空度在-80kPa后，停止抽真空。打开色水阀，将色水吸入灭菌器中至盖过产品后关闭色水阀。打开气阀，再将色水抽回贮器罐中；

(9)打开纯化水阀门，淋洗产品外壁上的色水l；

(10)打开灭菌器门，取出产品，剔除带色的漏封产品。

实施例2

一种胎盘多肽注射液制备方法，首先进行原料胎盘病毒检验，即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒等病毒的胎盘；

具体依次包括如下步骤：

(1)、收集健康产妇足月分娩的胎盘，将其50个胎盘清洗干净，沥干后得胎盘约17500克；

(2)、按胎盘组织与生理盐水5：1的比例加入0.75%～1.0%（质量百分比）生理盐水，进行捣碎得到胎盘组织浆21000克；

(3)、按胎盘组织浆与透析液1：4比例配制透析液，进行透析;共透析3次，第l、2次分别为20～24小时，第3次分别为40～50小时；

(4)、收集3次透析总量226.8L；

(5)、取经过3次透析后的透析液，澄清后用l.0μm孔径的滤芯过滤，再用分子量5000～10000道尔顿的膜进行超滤；超滤液在60℃±0.5℃下连续10小时病毒灭活；

（6）将进行病毒灭活后的低温5℃±1℃下,用0.22μm，除菌过滤后灌封，得每支4ml的胎盘多肽注射液共46390支。

(7)检漏把产品均匀地摆放在机动门安瓿瓶灭菌器专用车上，将车缓缓推进安瓿灭菌器箱体内，关闭箱门。

检漏负压--80kpa，负压检漏时间300秒,

检漏正压80kpa，正压检漏时间300秒,

清洗时间600秒，压力限度130kpa。

(8)设置完成后程序开始运行，先抽真空，当真空度在-80Kpa后，停止抽真空。打开色水阀，将色水吸入灭菌器中至盖过产品后关闭色水阀。打开气阀，再将色水抽回贮器罐中。

(9)打开纯化水阀I，淋洗产品外壁上的色水。

(IO)打开灭菌器门，取出产品，剔除带色的漏封产品。

Claims (1)

1.一种胎盘多肽注射液制备方法，其特征是首先进行原料胎盘病毒检验，即在胎盘收集后通过检验选出无乙肝、无丙肝、无艾滋病、无梅毒病毒的胎盘；

具体依次包括如下步骤：

(1)、收集上述健康产妇足月分娩的胎盘，将其胎盘清洗干净，沥干;

(2)、按胎盘与生理盐水5：1的比例加入0.75～1.0%质量百分比的生理盐水，将胎盘捣碎得到胎盘组织浆;

(3)、再按胎盘组织浆与质量百分比0.75%～1%的生理盐水1：4比例配制好透析液后，进行透析;共透析3次，第l、2次分别为20～24小时，第3次为40～50小时;

(4)、取经过3次透析后的透析液，澄清，上清液先经过0.45μm～l.0μm孔径的滤芯过滤，再用分子量为5000～10000道尔顿的膜进行超滤；超滤后，在60℃±0.5℃下连续10小时病毒灭活；

(5)、将进行病毒灭活后的超滤液用0.22μm滤芯除菌过滤后，灌封，检漏。