CN109939062B - 一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用 - Google Patents

一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用,制备方法包括:将羊胚胎或羊胎盘洗净、切碎,用提取溶剂提取,并于0‑40℃搅拌匀浆3‑6h,再调pH值为4.9‑5.0,最后离心,取上清并调节上清液pH值为6.3‑6.4,然后于55‑65℃热处理8‑12min;重复匀浆,离心和热处理过程1‑2次,将处理后的物质离心,取上清,灭活,并调节pH值至7.0‑7.4,用超滤膜包处理,除菌制得。通过该方法提取的羊胚胎或羊胎盘提取物,包含多种蛋白生长因子,可促进皮下组织生长代谢,从而激活了皮肤局部微环境,使得皮肤自我生长修复加强,将其加入化妆品中具有明显的美白提亮、润颜抗衰老的作用。

Description

一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的 应用
技术领域
本发明涉及胎盘提取物技术领域,具体涉及一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用。
背景技术
胎盘为常用中药,现代医学研究表明,胎盘含有多种免疫球蛋白、活性肽等生物活性物质及氨基酸、矿物质等成分,是一种机体免疫功能的调节剂和营养、美容保健品。虽然人源胎盘提取物可用作化妆品添加剂,但人源胎盘禁止买卖,只能捐赠,来源受限。羊源胎盘来源广泛,且没有牛源的蛋白疾病传播风险,因此,从羊胎盘中提取活性成分,并将其作为化妆品添加剂使用,具有广阔的市场前景。
发明内容
针对现有技术中的上述不足,本发明提供了一种羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用,可有效解决现有技术中存在的人源胎盘来源受限,某些动物胎盘使用有风险的问题,并且本发明提供的化妆品添加剂富含各类生长因子,具有明显的美白提亮、润颜抗衰老的作用。
为实现上述目的,本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种羊胚胎或羊胎盘提取物,其制备方法包括以下步骤:
(1)将羊胚胎或羊胎盘用含抗生素的生理盐水清洗干净,切块,粉碎,然后按1g:2-3ml的比例向组织中添加提取溶剂,匀浆;
(2)于0-40℃条件下搅拌匀浆3-6h,使其成粥糜状,并调pH值为4.9-5.0,目的是在此等电点沉淀不必要的蛋白质;
(3)将步骤(2)所得物离心,取上清,并调节上清液pH值为6.3-6.4,然后于55-65℃热处理8-12min,目的是在此等电点沉淀不耐热酶和蛋白质;
(4)重复步骤(2)和步骤(3)1-2次;
(5)将热处理后的物质离心,取上清,进行灭活,并调节pH值至7.0-7.4,目的是使其接近活细胞状态,然后再用超滤膜包处理,制得羊胚胎或羊胎盘提取物。
进一步地,羊胚胎或羊胎盘来源于山羊或绵羊,优选为绵羊孕中、晚期的胚胎。
进一步地,步骤(1)中提取溶剂为水、细胞培养基、1%牛磺酸钠溶液或PBS。
进一步地,步骤(2)中调pH值为5.0;步骤(3)中于60℃热处理10min。
通过上述方法制得的羊胚胎或羊胎盘提取物可作为化妆品添加剂用于化妆品中,其添加量为0.01-1wt%。
本发明提供的羊胚胎或羊胎盘提取物、制备方法以及在化妆品中的应用,具有以下有益效果:
本发明通过特定的工艺从羊胚胎或羊胎盘中提取有效物质,提取过程中先将羊胚胎或羊胎盘组织破碎,然后加入提取溶剂提取出有效物质,然后通过调节pH值使其偏酸性,离心去沉淀,并调节上清液pH为弱酸性,在55-65℃温度下进行热处理,因不耐热酶或蛋白质在此等电点和温度条件下能够形成沉淀,通过离心这一简单操作便可将不耐热酶或蛋白质这些杂质去除掉,然后调整上清液pH值为7.0-7.4,经过超滤去除小分子杂质,最后除菌制得羊胚胎或羊胎盘提取物,羊胚胎或羊胎盘提取物pH范围与活细胞生长状态的酸碱度保持一致,更重要的是提取液中包括各种蛋白、生长因子,小分子营养物质等,如丙种球蛋白、白蛋白、转铁蛋白等,这些有效物质能够促进细胞的生长,且该提取物安全性高,成本低,整个过程也不需要通过酶来进行酶解,避免了去除酶等复杂的工艺过程。
本发明提取条件温和,通过该方法提取的活性成分,成分中含有多种蛋白生长因子,可促进皮下组织生长代谢,从而激活了皮肤局部微环境,使得皮肤自我生长修复加强,还促进了皮肤的新陈代谢,加速排除滞留在皮下的色素等代谢废物,因此将其加入化妆品中具有明显的美白提亮、润颜抗衰老的作用。
附图说明
图1为实验例1中实验组培养的人脐带间充质干细胞的细胞形态。
图2为实验例1中对照组培养的人脐带间充质干细胞的细胞形态。
具体实施方式
本发明中的羊胚胎或羊胎盘提取液通过以下方法制备得到:
(1)取新鲜的绵羊孕中、晚期胚胎或胎盘,用含抗生素(100U/ml青链霉素或200U/ml卡那霉素或50ug/ml庆大霉素)的生理盐水将其血液冲洗干净,置于-20℃以下冷冻保存;
(2)取冷冻保存的羊胚胎或羊胎盘组,切块,将块状组织再次用生理盐水清洗干净,然后粉碎,每500g组织添加1000-1500ml 1%牛磺酸钠溶液(或等体积的注射用水、DMEM培养基、PBS缓冲液),用组织匀浆器进行匀浆,并从1-5档渐进间断推进,匀浆时间为2-5min;
(3)将步骤(2)所得物在0-40℃条件下搅拌匀浆3-6h,使其成粥糜状,并调pH值为4.9-5.0;
(4)将步骤(3)所得物于8000-10000r/min条件下离心10min,取上清,并调节上清液pH值为6.3-6.4,然后于55-65℃热处理8-12min;
(5)重复步骤(3)和步骤(4)1-2次;
(6)将热处理后的物质于8000-10000r/min条件下离心10min,取上清;
(7)向步骤(6)所得上清液中添加硫酸盐至饱和浓度,然后于60℃加热10h,进行病毒灭活;
(8)将步骤(7)所得物的pH值上调至7.0-7.4,然后用3-5KD膜包进行超滤处理,最后除菌、分装、冻干。
具体实施过程见以下实施例:
实施例1制备羊胚胎或羊胎盘提取物
(1)取新鲜的绵羊中期胚胎,用含200U/ml卡那霉素的生理盐水将其血液冲洗干净,置于-20℃冷冻保存;
(2)取冷冻保存的绵羊中期胚胎,切块,将块状组织再次用生理盐水清洗干净至肉色;
(3)将组织块粉碎,每500g组织添加1500ml 1%牛磺酸钠溶液,用组织匀浆器进行匀浆,并从1-5档渐进间断推进,匀浆时间为2min;
(4)将步骤(3)所得物在40℃条件下缓柔搅拌匀浆3h,使其成粥糜状,并调pH值为5.0;
(5)将步骤(4)所得物于8000r/min条件下离心10min,取上清,并调节上清液pH值为6.3,然后于60℃热处理10min;
(6)将热处理后的物质于8000-10000r/min条件下离心10min,取上清;
(7)向步骤(6)所得上清液中添加硫酸盐至饱和浓度,然后于60℃加热10h,进行病毒灭活;
(8)将步骤(7)所得物的pH值上调至7.0,然后用5KD膜包进行超滤处理,最后除菌、冻干,制得羊胚胎提取物。
实验例1
将实施例1制得的羊胚胎提取物用于培养细胞,观察细胞生长状态,具体过程如下:
实验组:采用市售的低糖DMEM培养基为基础培养基,添加实施例1制得的羊胚胎提取物和维生素C,羊胚胎提取物的添加量为0.45mg/ml,维生素C的添加量为15μg/ml,然后接种第2代人脐带间充质干细胞,接种量为1×105个/ml,在T75培养瓶中进行传代培养。
对照组:采用市售的低糖DMEM培养基为基础培养基,添加10%胎牛血清,该胎牛血清为市售进口胎牛血清,再添加维生素C,维生素C的添加量为15μg/ml,然后接种第2代人脐带间充质干细胞,接种量为1×105个/ml,在T75培养瓶中进行传代培养。
对实验组和对照组培养的细胞进行观察,细胞生长24h,在10倍镜下的生长状态见图1和2,其中图1为实验组,图2为对照组。
正常间充质干细胞镜下为成纤维细胞状态,有光泽,有活力,有增殖,细胞生长状态不好时会出现空泡,形态改变,成细长或片状,不会出现增殖等现象。由图1可知,实验组中的细胞状态生长良好。
实验例1
将实施例1制得的羊胚胎提取物作为化妆品添加物添加到面膜中,其添加物和面膜其余组分及重量百分数分别为:羊胚胎提取物0.5%、羟乙基脲2%、丁二醇2%、烟酰胺3%、突厥蔷薇(ROSA DAMASCENA)花水2%、甜菜碱2%、鞣花酸2%、1,2-戊二醇1.5%、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液3%、卵磷脂0.5%、乙酰谷氨酰胺0.5%、寡肽-1 0.05%、寡肽-20.05%、寡肽-3 0.05%、六肽-110.05%、芽孢杆菌/大豆发酵产物提取物3%、叶酸0.1%、辛甘醇0.2%、1,2-己二醇0.3%、PEG/PPG-17/6共聚物0.7%、透明质酸钠交联聚合物0.5%、透明质酸钠0.2%、乙酰化透明质酸钠0.1%、水解透明质酸钠0.2%、乙基己基甘油0.15%、对羟基苯乙酮0.3%、四氢甲基嘧啶羧酸0.1%、黄原胶0.5%、尿囊素0.15%、甘草酸二钾0.25%、燕麦(AVENA SATIVA)β-葡聚糖0.25%、聚丙烯酸钠0.12%,其余为纯化水,其制备过程按常规方法制得。
对上述面膜进行试用,并评估其使用效果:
随机选取60位22-50岁的使用者,分为2组,每组30人且年龄相差不大,分别使用实验例1制备得到的面膜和没有添加羊胚胎提取物面膜(对照组,与实验例1面膜相比,仅缺少羊胚胎提取物),每2-3天1次,使用方法为:温水洁肤,将面膜平敷脸后用手指轻压使其充分贴紧面部,静敷15-20分钟取下面膜,无需清洗,多余精华轻柔按摩至皮肤吸收即可。使用后进行评估。效果说明:提亮肤色、淡化细纹、柔嫩肌肤,紧实感;肤感:是否有油腻感、铺展性差等问题,其评价结果见表1和表2。
表1本发明面膜效果检测
使用次数 效果很好 效果一般 没有效果 有无过敏现象
1 23 7 0 0
2 25 5 0 0
3 27 3 0 0
4 30 0 0 0
20 30 0 0 0
表2对照组面膜效果检测
Figure BDA0002010612970000061
Figure BDA0002010612970000071
由表1和表2可知,本发明制得的面膜使用效果好,无过敏现象,安全效果好。
本发明面膜组分中甜菜碱在面膜中主要作用为保湿剂,同时协同作用为保护活性物中的生物活性(羊胎盘提取物、乳酸杆菌/豆浆发酵产物滤液、寡肽-1、寡肽-2、寡肽-3、六肽-11、鞣花酸、芽孢杆菌/大豆发酵产物提取物),同时各个成分之间协同可起到抗衰、提亮肤色、淡斑等多种功效。
乙基己基甘油,1,2-己二醇,1,2-戊二醇、对羟基苯乙酮,作为保湿剂同时成分之间协同起到防腐作用。
乙酰谷氨酰胺、透明质酸钠交联聚合物、透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠、水解透明质酸钠、作为保湿剂补充人体所需的玻尿酸同时协同羊胚胎提取物起到抗衰、润肤的作用。
实验例2
将实施例1制得的羊胚胎提取物作为化妆品添加物添加到面霜中,其添加物和面霜其余组分及重量百分数分别为:羊胎盘提取物1.0%、透明质酸钠0.05%、丙烯酸(酯)类共聚物0.6%、黄原胶0.2%、鲸蜡硬脂醇2.5%、卵磷脂1.0%、丁二醇3.0%、甘油聚醚-263.0%、甜菜碱2.0%、芦芭油2.0%、烟酰胺3.0%、泛醇0.5%、辛酸/癸酸甘油三酯5.0%、异壬酸异壬酯4.0%、山嵛醇1.2%、牛油果树果脂2.0%、鲸蜡硬脂基葡糖苷0.2%、季戊四醇四异硬脂酸酯2.0%、乙酰基六肽-8 2.0%、酵母菌溶胞物1.0%、白藜芦醇1.5%、鞣花酸3.0%、胶原2.5%、霍霍巴籽油2.0%、C10-30酸胆甾醇/羊毛甾醇混合酯0.5%、聚二甲基硅氧烷2.0%、苯氧乙醇0.5%、生育酚(维生素E)0.1%、EDTA二钠0.05%、红没药醇0.1%,余量为纯化水,其制备过程按常规方法制得。
对照组:与实验例1面膜相比,仅缺少羊胚胎提取物。
对上述面膜进行试用,并评估其使用效果:
随机选取60位22-50岁的使用者,分为2组,每组30人且年龄相差不大,分别使用实验列2制备得到的面霜和对照组面霜,每日早晚使用1次,使用方法为:使用完精华液后,取适量面霜,按肌肤纹理轻柔地涂抹于整个面部及颈部,直至完全吸收。使用30日后进行评估。效果说明:提亮肤色、淡化细纹、柔嫩肌肤,紧实感;肤感:是否有油腻感、不易推涂等问题,其结果见表3和表4。
表3本发明面霜效果检测
使用天数 效果很好 效果一般 没有效果 有无过敏现象
1 21 9 0 0
2 24 6 0 0
3 27 3 0 0
4 30 0 0 0
30 30 0 0 0
表4对照组面霜效果检测
使用天数 效果很好 效果一般 没有效果 有无过敏现象
1 0 25 5 0
2 0 25 5 0
3 0 26 4 0
4 0 27 3 0
30 0 26 4 0
由表4和表5数据可知,本发明制得的面霜使用效果好,无过敏现象,安全有效。由此可知,将羊胚胎提取物作为化妆品添加物添加到面霜,该添加剂与其他组分之间相容性好,无析出、无异常现象,各组分之间协同作用,能明显增加抗衰、提亮肤色、淡化色斑、柔嫩肌肤等多种效果。

Claims (5)

1.一种羊胚胎或羊胎盘提取物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取新鲜的绵羊中期胚胎,用含200U/ml卡那霉素的生理盐水将其血液冲洗干净,置于-20℃冷冻保存;
(2)取冷冻保存的绵羊中期胚胎,切块,将块状组织再次用生理盐水清洗干净至肉色;
(3)将组织块粉碎,每500g组织添加1500ml 1%牛磺酸钠溶液,用组织匀浆器进行匀浆,并从1-5档渐进间断推进,匀浆时间为2min;
(4)将步骤(3)所得物在40℃条件下缓柔搅拌匀浆3h,使其成粥糜状,并调pH值为5.0;
(5)将步骤(4)所得物于8000r/min条件下离心10min,取上清,并调节上清液pH值为6.3,然后于60℃热处理10min;
(6)将热处理后的物质于8000-10000r/min条件下离心10min,取上清;
(7)向步骤(6)所得上清液中添加硫酸盐至饱和浓度,然后于60℃加热10h,进行病毒灭活;
(8)将步骤(7)所得物的pH值上调至7.0,然后用5KD膜包进行超滤处理,最后除菌、冻干,制得羊胚胎提取物。
2.采用权利要求1所述的方法制备得到的羊胚胎或羊胎盘提取物。
3.如权利要求2所述的羊胚胎或羊胎盘提取物在化妆品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,羊胚胎或羊胎盘提取物在化妆品中的添加量为0.01-1wt%。
5.一种化妆品,其特征在于,包含权利要求2所述的羊胚胎或羊胎盘提取物。
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