CN109932508A - 一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物检测技术领域,特别涉及一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法,包括检测试纸和塑料外壳,检测试纸包括底板,底板上从左到右依次铺设有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,硝酸纤维素膜上左到右依次设置有检测带和对照带,样品垫由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成,结合垫由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成,检测带由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在硝酸纤维素膜上形成,对照带由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在硝酸纤维素膜上形成。本发明的检测卡应用便捷,结果准确,为下一步准确治疗梅毒提供了依据,适于大规模推广应用。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,特别涉及一种梅毒螺旋体抗体检测卡、试剂盒及检测方法。
背景技术
梅毒螺旋体(treponemapallidum,TP)是引起性传播性疾病梅毒的主要病原体,1905年由Schandim等首次发现,通过人类粘膜或有破损的皮肤直接接触病人感染性病灶而传播,侵入部位大多为阴部。该病原体临床表现极为复杂,几乎侵犯全身各器官,造成多器官损害。早期主要侵犯皮肤黏膜,晚期可侵犯血管、中枢神经系统及全身各器官,且可通过胎盘传给胎儿,危害极大。
梅毒在全世界流行,据WHO估计,全球每年约有1200万新发病例,主要集中在南亚、东南亚和次撒哈拉非洲。近年来梅毒在我国增长迅速,已成为报告病例数最多的性病。所报告的梅毒中,潜伏梅毒占多数,一、二期梅毒也较为常见,先天梅毒报告病例数也在增加。
现有TP检测的各种方法:检测TP和抗-TP抗体的方法有梅毒螺旋体检查和血清学检查法。梅毒螺旋体检查主要包括暗视野显微镜检查、直接免疫荧光实验(DFA)及梅毒螺旋体镀银染色检查,其中DFA的特异性较高。梅毒螺旋体检查适用于一、二期梅毒有病损者的患者,受取材及特殊显微镜限制,耗时长,难以为临床所接受。故本发明研制了一种梅毒螺旋体抗体检测卡。
发明内容
本发明的检测卡应用便捷,结果准确,为下一步准确治疗梅毒提供了依据,适于大规模推广应用。
本发明提供了一种梅毒螺旋体抗体检测卡,包括检测试纸和包裹在所述检测试纸外周的塑料外壳,所述检测试纸包括底板,所述底板上从左到右依次铺设有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,且所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸的端部之间依次固定连接,所述硝酸纤维素膜上左到右依次设置有检测带和对照带,所述塑料外壳上开设有加样口和观察窗,所述加样口与所述样品垫位置相对应,所述观察窗与所述检测带位置相对应,所述观察窗与所述对照带位置相对应;
所述样品垫由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成,所述结合垫由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成,所述检测带由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在所述硝酸纤维素膜上形成,所述对照带由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在所述硝酸纤维素膜上形成。
优选地,所述样品垫靠近所述结合垫的一端、所述结合垫的两端、所述硝酸纤维素膜的两端和所述吸水纸靠近所述硝酸纤维素膜的一端均为直角形,所述样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸的直角端依次配合固定连接。
优选地,所述样品垫处理液是由以下方法制备得到:酪蛋白钠以0.3g/100mL、表面活性剂S6以0.3mL/100mL的比例依次溶于pH8.5、0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
优选地,所述混合免疫金溶液由以下方法制备得到:
S1,胶体金中加入硼砂调节pH至7.0,然后加入1mg/ml的梅毒螺旋体重组抗原,静置30min,加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬得梅毒螺旋体重组抗原免疫金;
S2,胶体金中加入碳酸钾调节pH至7.0,然后加入1mg/ml的鸡IgY抗原,静置30min,加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬得鸡IgY抗原免疫金;
其中,S1、S2中均用重悬液重悬至离心前溶液体积的1/3;
S3,S1中梅毒螺旋体重组抗原免疫金与S2中鸡IgY抗原免疫金以体积比1:1混合,得混合免疫金。
优选地,S1中胶体金、梅毒螺旋体重组抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL;S2中胶体金、鸡IgY抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL。
优选地,重悬液由以下方法制备得到:海藻糖以2g/100mL、表面活性剂S7以0.3mL/100mL、蔗糖以2g/100mL、曲拉通-100以0.2mL/100mL、PVA以0.2g/100mL的比例依次溶于pH8.5的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
优选地,所述包被液由以下方法制备得到:海藻糖、甲醇溶和pH7-8的0.01mol/L磷酸盐缓冲液以用量比1g:3mL:50mL混合。
优选地,包被液中梅毒螺旋体重组抗原浓度为1.5mg/mL;包被液中抗鸡IgY抗体浓度为1.0mg/mL。
一种包含上述梅毒螺旋体抗体检测卡的试剂盒。
一种利用上述梅毒螺旋体抗体检测卡的检测方法,包括如下步骤:
C1,准备检测样品,所述检测样品为血清、血浆中的一种;
C2,将C1中检测样品20μL滴加在所述样品垫上,再滴加60-70μL的PBS缓冲液,静置15min,观察所述检测带和所述对照带显色情况;
C3,若所述检测带和所述对照带均显色,则检测样品中含有梅毒螺旋体抗体;若所述检测带不显色而所述对照带显色,则检测样品中不含有梅毒螺旋体抗体;若所述对照带不显色,结果无效。
与现有技术相比,本发明的有益效果:
本发明的检测卡应用便捷,结果准确,为下一步准确治疗梅毒提供了依据,适于大规模推广应用;由于经过处理的样品垫在检测过程中减少异嗜性抗体干扰的效果,使消除假阳的同时不漏检,检测结果得到进一步精确,特异性好;检测卡基于免疫侧向流层析技术,不需任何仪器设备,不用稀释样本,简便快速,能够通过手工操作、肉眼读取判断血液样本中是否含有梅毒螺旋体抗体,不会对受检者身体造成伤害,实用性强。
附图说明
图1为本发明检测卡剖面图。
附图标记说明:
1-塑料外壳,11-加样口,12-观察窗,2-底板,3-样品垫,4-结合垫,5-硝酸纤维素膜,6-吸水纸,7-检测带,8-对照带。
具体实施方式
下面结合附图1,对本发明的几个具体实施方式进行详细描述,但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1
一种梅毒螺旋体抗体检测卡,包括检测试纸和紧密包裹在检测试纸外周的塑料外壳1,检测试纸包括底板2,底板2上从左到右依次铺设有样品垫3、结合垫4、硝酸纤维素膜5和吸水纸6,样品垫3靠近结合垫4的一端、结合垫4的两端、硝酸纤维素膜5的两端和吸水纸6靠近硝酸纤维素膜5的一端均为直角形,样品垫3、结合垫4、硝酸纤维素膜5和吸水纸6的直角端依次配合固定连接,直角形端长度均为1-2mm,硝酸纤维素膜5上左到右依次设置有检测带7和对照带8,塑料外壳1上开设有加样口11和观察窗12,加样口11与样品垫3位置相对应,观察窗12与检测带7位置相对应,观察窗12与对照带8位置相对应;
样品垫3由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成,结合垫4由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成,检测带7由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在硝酸纤维素膜5上形成,对照带8由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在硝酸纤维素膜5上形成。
需要说明的是,检测卡是检测试纸在塑料外壳1内经压卡机压紧形成,各部件之间不存在相对位移情况。
上述样品垫处理液是由以下方法制备得到:酪蛋白钠以0.3g/100mL、表面活性剂S6以0.3mL/100mL的比例依次溶于pH8.5、0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
上述混合免疫金溶液由以下方法制备得到:
S1,胶体金中加入硼砂调节pH至7.0,搅拌条件下缓慢加入1mg/ml的梅毒螺旋体重组抗原,混匀、静置30min,缓慢加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬,转入离心管中,测540nm的OD值或4℃保存,得梅毒螺旋体重组抗原免疫金;
胶体金、梅毒螺旋体重组抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL;
S2,胶体金中加入碳酸钾调节pH至7.0,搅拌条件下缓慢加入1mg/ml的鸡IgY抗原,混匀、静置30min,缓慢加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬,转入离心管中,测540nm的OD值或4℃保存,得鸡IgY抗原免疫金;
胶体金、鸡IgY抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL;
其中,S1、S2中均用重悬液重悬至离心前溶液体积的1/3;
S3,S1中梅毒螺旋体重组抗原免疫金与S2中鸡IgY抗原免疫金以体积比1:1混合,得混合免疫金。
上述重悬液由以下方法制备得到:海藻糖以2g/100mL、表面活性剂S7以0.3mL/100mL、蔗糖以2g/100mL、曲拉通-100以0.2mL/100mL、PVA以0.2g/100mL的比例依次溶于pH8.5的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
上述包被液由以下方法制备得到:海藻糖、甲醇溶和pH7-8的0.01mol/L磷酸盐缓冲液以用量比1g:3mL:50mL混合。
上述包被液中梅毒螺旋体重组抗原浓度为1.5mg/mL;包被液中抗鸡IgY抗体浓度为1.0mg/mL。
实施例2
一种包含实施例1中梅毒螺旋体抗体检测卡的试剂盒,试剂盒中包括检测卡、铝箔袋、吸管、装有缓冲液PBS的滴瓶、使用说明书。
一种利用实施例1的梅毒螺旋体抗体检测卡的检测方法,包括如下步骤:
C1,准备检测样品,检测样品为血清、血浆中的一种;
C2,将C1中检测样品20μL滴加在样品垫3上,再滴加60-70μL的PBS缓冲液(0.01mol/L、pH7.4),静置15min,观察检测带7和对照带8显色情况;
C3,若检测带7和对照带8均显色,则检测样品中含有梅毒螺旋体抗体;若检测带7不显色而对照带8显色,则检测样品中不含有梅毒螺旋体抗体;若所述对照带8不显色,结果无效。
本发明描述了优选的实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对实施例做出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,包括检测试纸和包裹在所述检测试纸外周的塑料外壳(1),所述检测试纸包括底板(2),所述底板(2)上从左到右依次铺设有样品垫(3)、结合垫(4)、硝酸纤维素膜(5)和吸水纸(6),且所述样品垫(3)、所述结合垫(4)、所述硝酸纤维素膜(5)和所述吸水纸(6)的端部之间依次固定连接,所述硝酸纤维素膜(5)上左到右依次设置有检测带(7)和对照带(8),所述塑料外壳(1)上开设有加样口(11)和观察窗(12),所述加样口(11)与所述样品垫(3)位置相对应,所述观察窗(12)与所述检测带(7)位置相对应,所述观察窗(12)与所述对照带(8)位置相对应;
所述样品垫(3)由样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜并干燥形成,所述结合垫(4)由混合免疫金溶液喷射在玻璃纤维膜上形成,所述检测带(7)由包被液稀释的梅毒螺旋体重组抗原喷射在所述硝酸纤维素膜(5)上形成,所述对照带(8)由包被液稀释的抗鸡IgY抗体喷射在所述硝酸纤维素膜(5)上形成。
2.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,所述样品垫(3)靠近所述结合垫(4)的一端、所述结合垫(4)的两端、所述硝酸纤维素膜(5)的两端和所述吸水纸(6)靠近所述硝酸纤维素膜(5)的一端均为直角形,所述样品垫(3)、所述结合垫(4)、所述硝酸纤维素膜(5)和所述吸水纸(6)的直角端依次配合固定连接。
3.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,所述样品垫处理液是由以下方法制备得到:酪蛋白钠以0.3g/100mL、表面活性剂S6以0.3mL/100mL的比例依次溶于pH8.5、0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
4.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,所述混合免疫金溶液由以下方法制备得到:
S1,胶体金中加入硼砂调节pH至7.0,然后加入1mg/ml的梅毒螺旋体重组抗原,静置30min,加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬得梅毒螺旋体重组抗原免疫金;
S2,胶体金中加入碳酸钾调节pH至7.0,然后加入1mg/ml的鸡IgY抗原,静置30min,加入体积分数10%牛血清白蛋白溶液,混匀静置30min,8000g、4℃下离心并保留沉淀,沉淀用重悬液重悬得鸡IgY抗原免疫金;
其中,S1、S2中均用重悬液重悬至离心前溶液体积的1/3;
S3,S1中梅毒螺旋体重组抗原免疫金与S2中鸡IgY抗原免疫金以体积比1:1混合,得混合免疫金。
5.如权利要求4所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,S1中胶体金、梅毒螺旋体重组抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL;S2中胶体金、鸡IgY抗原、体积分数10%牛血清白蛋白溶液的用量比为100mL:1mL:10mL。
6.如权利要求4所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,重悬液由以下方法制备得到:海藻糖以2g/100mL、表面活性剂S7以0.3mL/100mL、蔗糖以2g/100mL、曲拉通-100以0.2mL/100mL、PVA以0.2g/100mL的比例依次溶于pH8.5的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中。
7.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,所述包被液由以下方法制备得到:海藻糖、甲醇溶和pH7-8的0.01mol/L磷酸盐缓冲液以用量比1g:3mL:50mL混合。
8.如权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡,其特征在于,包被液中梅毒螺旋体重组抗原浓度为1.5mg/mL;包被液中抗鸡IgY抗体浓度为1.0mg/mL。
9.一种包含权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡的试剂盒。
10.一种利用权利要求1所述的梅毒螺旋体抗体检测卡的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
C1,准备检测样品,所述检测样品为血清、血浆中的一种;
C2,将C1中检测样品20μL滴加在所述样品垫(3)上,再滴加60-70μL的PBS缓冲液,静置15min,观察所述检测带(7)和所述对照带(8)显色情况;
C3,若所述检测带(7)和所述对照带(8)均显色,则检测样品中含有梅毒螺旋体抗体;若所述检测带(7)不显色而所述对照带(8)显色,则检测样品中不含有梅毒螺旋体抗体;若所述对照带(8)不显色,结果无效。
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