CN109929939B - lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用，属于生物医药和分子生物学技术领域。经研究发现，NONMMUG011496(lncRNA11496)在微阵列感染的弓形虫感染的小鼠脑组织中显著下调；同时弓形虫慢性感染小鼠脑组织中lncRNA11496的表达影响神经细胞的增殖、分化及凋亡，与弓形虫感染密切相关。lncRNA11496是在弓形虫慢性感染脑组织中首次发现的一种非编码RNA。因此，lncRNA11496可以作为一种重要的生物靶标，为弓形虫脑病的诊断和基于lncRNA11496为靶向的抗弓形虫药物研发提供了依据，具有良好的实际应用之价值。

Description

lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用

技术领域

本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生虫。人类首例报告为1908年，与动物弓形虫病同时发现，全世界约有5～10亿人感染弓形虫病，人类与这种疾病的斗争已进行了一个多世纪，但至今疾病仍在全球肆虐。我国每年约有8～9万名由于弓形虫引起损害的新生儿出生，感染弓形虫的妇女其异常生产率是正常孕妇的3倍，造成畸胎，死胎。WHO和美国CDC已将弓形虫病作为艾滋病的指征性疾病。近年来，越来越多的研究发现，弓形虫隐性感染并不是无症状的带虫状态，而是以一种非常精妙的方式侵入宿主的脑神经细胞，引起宿主的脑损害，智力改变，行为异常，甚至精神疾病的发生。

目前，弓形虫病的早期诊断和治疗仍是亟待解决的重要问题，该病的诊断方法大致可分为病原学检查、免疫学方法、分子生物学技术等。使用传统的病原学检查方法诸如镜检、虫体分离法等存在费时、费力等缺陷，且特异性和敏感性不高。免疫学诊断方法，即检测弓形虫抗体，但弓形虫病患者常伴有免疫功能低下，往往会出现抗体水平的下降，难以做出正确的诊断。分子生物学诊断方法具有简便快捷，灵敏性好，特异性高等优点，发明人发现，目前使用的诊断基因标靶包括B1、ITS-1、P30基因等，但是这些诊断基因存在特异性不佳、拷贝数不高等缺陷。特别是，对于脑弓形虫病的诊断和治疗更是至今没有特异靶标。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用。本发明经研发发现，NONMMUG011496(lncRNA11496)在微阵列感染的弓形虫感染的小鼠脑组织中显著下调；同时弓形虫慢性感染小鼠脑组织中lncRNA11496的表达影响神经细胞的增殖、分化及凋亡，与弓形虫感染密切相关。lncRNA11496是在弓形虫慢性感染脑组织中首次发现的一种非编码RNA。因此，lncRNA11496可以作为一种重要的生物靶标，为弓形虫脑病的诊断和基于lncRNA11496为靶向的抗弓形虫药物研发提供了依据，具有良好的实际应用之价值。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用。

进一步的，lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用，所述分子标志物用于检测、诊断或预测弓形虫病的进展。

进一步的，所述弓形虫病为弓形虫脑病，更具体的为弓形虫慢性感染致弓形虫脑病。经试验证明，所述lncRNA11496在弓形虫慢性感染的小鼠脑组织下调表达。

本发明的第二个方面，提供一种用于检测、诊断或预测弓形虫进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测弓形虫病样品中lncRNA11496的物质；或基于免疫检测方法检测弓形虫病样品中lncRNA11496调控的靶基因的表达情况的物质。

更进一步的，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括上述用于检测、诊断或预测弓形虫病的进展的组合物。

本发明的第三个方面，提供促进lncRNA11496表达和/或活性提高的物质在筛选和/或制备弓形虫病预防或治疗药物中的应用。

经研究发现，lncRNA11496的过表达促进了BV-2小胶质细胞的增殖，而lncRNA11496的低表达抑制了BV-2小胶质细胞的增殖；而小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞，作为中枢神经系统的一种重要的防线，同时也是弓形虫主要得感染神经细胞之一，促进BV-2小胶质细胞的增殖，显然有利于弓形虫病的预防和治疗。

本发明的第四个方面，提供一种用于预防或治疗弓形虫病(优选为弓形虫脑病)的药物，其包含促进lncRNA11496表达和/或活性提高的物质。

优选的，所述药物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

进一步优选的，所述药物剂型为可注射埋植剂、乳剂、脂质体、微囊剂、微球剂、纳米粒等。

本发明有益效果：本发明首次证明了lncRNA11496在弓形虫慢性感染的小鼠脑组织中表达下调，同时也验证了体外lncRNA11496对BV-2细胞的影响。lncRNA11496可以作为一种重要的生物靶标，为弓形虫脑病的诊断和基于lncRNA11496为靶向的抗弓形虫药物研发提供了依据，具有良好的实际应用之价值。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为本发明实施例1中热图分析不同基因的表达水平图；其中，图1A为lncRNA的表达水平图；图1B为mRNA的表达水平图。

图2为本发明实施例中1散点图分析不同基因的表达水平图；其中，图2A为lncRNA的表达水平图；图2B为mRNA的表达水平图。

图3为本发明实施例1中qPCR检测lncRNA11496在弓形虫慢性感染脑组织中的表达水平图，其中*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。

图4为本发明实施例1中差异表达的lncRNA的分类饼状图。

图5为本发明实施例1中cck-8检测lncRNA11496对BV-2细胞增殖的影响图。

图6为本发明实施例1中细胞克隆形成检测lncRNA11496对BV-2细胞增殖的影响图，其中，*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。

图7为本发明实施例1中流式细胞术检测lncRNA11496对BV-2细胞周期的影响图。

图8为本发明实施例1中TUNEL检测lncRNA11496对BV-2细胞凋亡的影响图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域技术内的分子生物学的常规方法和条件，这种技术和条件在文献中有完整解释。参见例如Sambrook等人，《分子克隆：实验手册》中所述的技术和条件，或按照制造厂商所建议的条件。

如前所述，使用分子生物学诊断方法对弓形虫病进行诊断具有简便快捷，灵敏性好，特异性高等优点，但目前常用的诊断基因存在特异性不佳、拷贝数不高等缺陷。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，在很多生物过程中有着重要的作用，参与调节染色质修饰，基因转录，mRNA翻译和蛋白质功能等重要的生物学功能，而表达异常的lncRNA往往与临床疾病相关。同时，由于非编码RNA不编码蛋白质，所受的调控相对较少，灵敏度、特异性和稳定性更高，因此可以作为更有效的诊断生物学指标。

有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用。

本发明的又一具体实施方式中，提供lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用，所述分子标志物用于检测、诊断或预测弓形虫病的进展。

所述lncRNA11496的核苷酸序列与SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性；更优选的，所述lncRNA11496的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

术语“同源”主要是指序列上的同源，也就是用来说明两个或多个蛋白质或DNA序列具有相同的祖先。同源的序列一般有相似的功能。蛋白质和DNA的同源性常常通过它们序列的相似性来判定，相似性是指序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间相同DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的高低。

本发明的又一具体实施方式中，所述弓形虫病为弓形虫脑病，更具体的为弓形虫慢性感染。经试验证明，所述lncRNA11496在弓形虫慢性感染的小鼠脑组织下调表达。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于检测、诊断或预测弓形虫的进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测弓形虫病样品中lncRNA11496的物质；或基于免疫检测方法检测弓形虫病样品中lncRNA11496调控的靶基因的表达情况的物质。

本发明的又一具体实施方式中，所述组合物包括采用液相杂交、Northern杂交、lncRNA芯片、原位杂交检测弓形虫病样品中lncRNA11496的物质；采用酶联免疫吸附测定、胶体金检测、蛋白质芯片检测弓形虫病样品中lncRNA11496调控的靶基因的表达情况的物质；

本发明的又一具体实施方式中，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括上述用于检测、诊断或预测弓形虫病的进展的组合物。

本发明的又一具体实施方式中，提供促进lncRNA11496表达和/或活性提高的物质在筛选和/或制备弓形虫病预防或治疗药物中的应用。

经研究发现，lncRNA11496的过表达促进了BV-2小胶质细胞的增殖，而lncRNA11496的低表达抑制了BV-2小胶质细胞的增殖；而小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞，作为中枢神经系统的一种重要的防线，同时也是弓形虫主要得感染神经细胞之一，促进BV-2小胶质细胞的增殖，显然有利于弓形虫病的预防和治疗。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于预防或治疗弓形虫病(优选为弓形虫脑病)的药物，其包含促进lncRNA11496表达和/或活性提高的物质；

本发明的又一具体实施方式中，所述促进lncRNA11496表达和/或活性提高的物质，包括采用基于RNA的lncRNA功能性获得技术上调lncRNA11496表达和/或促进其活性的物质；优选为lncRNA11496促进剂或上调lncRNA11496表达的启动子；其中，所述lncRNA11496促进剂包括促进lncRNA11496基因过表达的质粒，所述质粒含有lncRNA11496核苷酸的序列。

本发明的又一具体实施方式中，所述药物还包含至少一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料。所用辅料可为固态或液态。

本发明的又一具体实施方式中，所述药物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

本发明的又一具体实施方式中，所述药物剂型为可注射埋植剂、乳剂、脂质体、微囊剂、微球剂、纳米粒等。

需要说明的是，本领域技术人员将认识到，本发明的实用性并不局限于对lncRNA11496的任何特定变体的基因表达进行定量。在一些实施方案中，其具有与lncRNA11496序列至少85％相同或相似的cDNA序列，诸如上述所列的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同或相似的cDNA序列。

以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。另外，实施例中未详细说明的分子生物学方法均为本领域常规的方法，具体操作可参看分子生物指南或产品说明书。

实施例1

方法

1.弓形虫慢性感染小鼠模型的建立

将慢性感染弓形虫PRU株的小鼠经脱颈椎臼法处死，取其脑用无菌PBS进行研磨成脑组织匀浆，取10ul在光学显微镜下计数，重复3次，取平均值，将脑组织匀浆液稀释成30个/100ul。将弓形虫包囊经口感染BALB/c小鼠，实验组小鼠灌胃30个/100ul脑组织匀浆液,对照组小鼠只喂生理盐水。分别分笼饲养，每笼5只，正常喂食喂水。

2.感染弓形虫BALB/c小鼠脑组织基因芯片分析

感染2个月后，取感染组和对照组各3只小鼠，分离脑组织，进行RNA的抽提、纯化与质检，采用Agilent表达谱芯片配套试剂盒对RNA进行放大和标记，并用RNeasy mini kit纯化标记后的cRNA。按照Agilent表达谱芯片配套提供的杂交标准流程进行芯片杂交，完成杂交的芯片采用Agilent Microarray Scanner进行扫描，最后采用R软件中limma包进行归一化处理，所用的算法为Quantile。

3.Microarrays基因芯片数据分析

原始数据用R软件中limma包归一化后，采用Fold-change(表达差异倍数)以及T检验(Student's t-test)统计学方法对差异基因进行筛选。对弓形虫感染组和未感染组小鼠脑组织中差异表达的lncRNA及mRNA进行热图及散点图分析。

4.荧光定量PCR检测lncRNA的变化

根据北京艾德莱生物公司EASYspin Plus组织/细胞RNA快速提取试剂盒，进行组织/细胞总RNA的提取，取适量RNA稀释于DEPC水中，根据Eppendorf RNA浓度测定仪说明进行测定。根据南京诺唯赞生物公司的

ⅡQRT SuperMix for qPCRs试剂盒进行反转录，根据南京诺唯赞生物科技有限公司ChamQTM

qPCR Master Mix试剂盒进行荧光定量PCR分析。

5.cck-8实验

在96孔板中接种100ul的BV-2细胞悬液，将96孔板放在37℃,5％CO2的培养箱中培养，待细胞长至70-80％进行shRNA干扰lncRNA11496和过表达lncRNA11496的表达，观察lncRNA11496对BV-2细胞增殖的影响。培养48小时后，弃掉原来培养基，每孔加入10ul CCK-8溶液和100ul新鲜DMEM细胞培养基，将96孔板在培养箱内孵育1-4小时后，用酶标仪测定450nm处的吸光值。

6.细胞克隆实验

在6孔板中接种BV-2细胞悬液，37℃，5％CO2的培养条件下培养细胞长至70-80％进行shRNA干扰lncRNA11496和过表达lncRNA11496的表达，培养48h以后，将每孔的细胞收集起来并计数。取300-500个细胞接种于6孔板，培养10天左右，弃掉原培养基，用PBS冲洗干净，加入4％多聚甲醛固定，用结晶紫染色，观察并计数细胞克隆形成数目。

7.流式细胞术

(1)在6孔板中接种BV-2细胞悬液，37℃，5％CO2的培养条件下培养。待细胞长至70-80％时进行shRNA干扰及过表达lncRNA11496转染，培养细胞48小时。

(2)弃去上清，加入1ml PBS清洗一次，弃上清，再加入1ml0.25％胰酶消化细胞，待细胞变圆且有部分细胞悬浮，即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞，使细胞悬浮。细胞悬液转入离心管中，1500rpm离心5分钟收集细胞。

(3)PBS洗涤细胞：加入3ml4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1500rpm离心5分钟，弃上清。沉淀震荡混匀。

(4)固定过夜：沉淀中缓慢加入-20℃预冷的75％乙醇，重悬细胞，4℃过夜。

(5)PBS洗涤细胞：加入2ml PBS混匀后，1500rpm离心5分钟收集细胞，PBS重悬，离心收集细胞。加入100ul PBS重悬细胞。

(6)去除RNA：加入2μl浓度为1mg/ml的RNaseA(去离子水配制)，37℃水浴40分钟。

(7)荧光标记：加入100μl浓度为100μg/ml的PI染色液(PBS配制)，避光染色20分钟。

(8)上机检测：流式细胞仪使用激发波长488nm，发射波长585±21nm进行检测，用Modfit软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。

8.TUNEL

(1)在6孔板中放入无菌细胞爬片，接种BV-2细胞悬液，37℃，5％CO2的培养条件下培养。待细胞长至70-80％时进行shRNA干扰及过表达lncRNA11496转染，培养细胞48小时。

(2)弃掉培养基，用无菌PBS清洗一次，加入4％多聚甲醛固定15-20分钟。加入PBS清洗一次。

(3)将爬片取出稍甩干后用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈(防止抗体流走)，加50-100ul破膜工作液，室温孵育20分钟，PBS洗3次，每次5分钟。

(4)加试剂1，2，按片子数量取tunel试剂盒内适量试剂1(TdT)和试剂2(dUTP)按1:9混合，加到圈内覆盖细胞，将培养板平放于湿盒内，37℃温箱孵育2小时，湿盒内加少量水保持湿度。

(5)DAPI复染细胞核，爬片用PBS洗涤3次，每次5分钟。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10分钟。

(6)封片，爬片用PBS洗涤3次，每次5分钟。爬片稍甩干后将有细胞的一面朝下用抗荧光淬灭封片剂将玻片封固在载玻片上封片。

(7)镜检拍照，切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光)。

结果

1.弓形虫慢性感染小鼠脑组织芯片中lncRNA和mRNA差异表达的热图分析

根据差异基因数据的数学特征进行分类，并得到样品和基因在表达模式上的关系，从而得出具有生物学意义的结论。下方文本为样本编号，右侧文本为基因(探针)编号，每一列代表一个样本，每一行表示一个基因(探针)。颜色的亮度代表基因表达水平升高或降低的程度。表达相似的基因(探针)和样本聚类在一起。通过对差异表达的lncRNA和mRNA进行热图分析，可以直观显示在慢性感染弓形虫和正常脑组织中不同基因的表达水平。如图1所示，发现共有1500个lncRNA的表达发生差异，其中662个上调，838个下调，有864个mRNA发生变化，356个上调，508个下调。

2.lncRNA和mRNA在弓形虫慢性感染脑组织中变化的散点图分析

将芯片的原始数据经过标准化处理，转化为log以2为底的对数后，在一个二维直角坐标系平面中，绘制散点图(scatter plot)(如图2所示)。芯片数据的散点图常用于评估两组数据总体分布集中趋势。散点图中每一个点代表芯片上的探针点，该点在二维平面中的位置由其X轴坐标和Y轴坐标确定。X轴：该点在对照芯片中标准化以后的信号值。Y轴：该点在样品芯片中标准化以后的信号值。

3.lncRNA11496在弓形虫慢性感染脑组织中变化的分析

经过对差异表达的lncRNA进行筛选，其中，筛选到NONMMUG011500、NONMMUG011495、NONMMUG011494、NONMMUG011496与神经细胞的存活相关，通过进一步筛选和扩大样品进一步验证，如图3所示，证实:NONMMUG011496(lncRNA11496)在弓形虫慢性感染脑组织中的表达显著下调，与芯片的结果相一致。

4.差异表达的lncRNA的分类分析

对差异表达的1500个lncRNA进行分类分析，根据其在基因组上的位置，分为五类，bidirectional、exonic-antisense、exonic-sense、intergenic、intronic，根据数据统计分析，如图4所示，五类lncRNA分别占比4％、9％、18％、39％、30％。

5.cck-8证实lncRNA11496促进细胞增殖

通过CCK-8实验证实lncRNA11496对BV-2细胞增殖的影响，通过转染shRNA和过表达质粒，干扰及过表达lncRNA11496后，转染12、24、36、48、60、72小时后测定450nm处的吸光值。结果如图5所示，与正常组相比，在干扰掉lncRNA11496以后，细胞增殖变得缓慢，而过表达lncRNA11496以后，细胞增殖明显变快。因此，初步判断，lncRNA11496能够影响BV-2细胞的增殖。

6.克隆形成实验进一步验证lncRNA11496促进细胞增殖

为了进一步验证lncRNA11496影响BV-2细胞的增殖，转染shRNA和过表达质粒48小时后，将细胞收集并定量接种于6孔板培养10天左右进行结晶紫染色，结果如图6所示，干扰组细胞形成的克隆数目少于对照组，而在过表达组中，细胞形成的克隆明显高于对照组。进一步说明了lncRNA11496能够促进细胞的增殖。

7.流式细胞术检测lncRNA11496对细胞周期的影响

为了揭示lncRNA11496如何促进细胞增殖的，通过流式细胞术检测了转染shRNA和质粒，干扰和过表达lncRNA11496后检测lncRNA11496对细胞周期的影响。结果如表1及图7所示，在正常组，细胞G1、S、G2期分别是38.64％、40.55％、20.81％，在干扰组，细胞G1、S、G2期分别是37.64％、17.96％、14.43％，在过表达组，细胞G1、S、G2期分别是45.37％、37.69％、16.94％。在干扰掉lncRNA11496以后，S期的占比明显高于正常组，而过表达lncRNA11496以后，S期的占比比正常组要少一些。因此，lncRNA11496影响BV-2细胞的增殖可能是通过影响细胞周期中S期的占比进行的。

表1

Groups	G1(％)	S(％)	G2(％)
				Control	38.64	40.55	20.81
sh-lncRNA11496	37.64	47.93	14.43
				oe-lncRNA11496	45.37	37.69	16.94

8.TUNEL检测lncRNA11496对细胞凋亡的影响

为了进一步研究lncRNA11496对神经细胞凋亡的影响，通过TUNEL检测了lncRNA11496对BV-2细胞凋亡的影响。结果如图8所示，在干扰掉lncRNA11496以后，BV-2细胞凋亡相比于正常组来说变得增多，而过表达lncRNA11496以后，细胞凋亡情况减少。说明lncRNA1496的缺失能够导致神经细胞凋亡。

综上，经研究发现，本发明确定了lncRNA11496在弓形虫慢性感染的小鼠脑组织中表达下调，同时验证了体外lncRNA11496对BV-2细胞的影响。小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞，对外界环境非常的敏感，在特殊的环境下，例如炎症的发生、损伤的出现或者一些病原微生物存在的条件下，都有可能引起小胶质细胞的激活。通过CCK-8实验检测了lncRNA11496对BV-2细胞的影响，发现，lncRNA11496的过表达促进了BV-2细胞的增殖，而lncRNA11496的低表达抑制了BV-2细胞的增殖。同样，通过克隆形成实验也进一步验证了这一现象。通过流式细胞术测定lncRNA11496对细胞周期的影响，发现lncRNA11496通过影响S期影响小胶质细胞增殖，因为S期是DNA合成期，DNA复制所需要的酶都是在这一时期合成。小胶质细胞作为中枢神经系统的一种重要的防线，同时也是弓形虫主要得感染神经细胞之一，因此通过TUNEL检测了lncRNA11496对小胶质细胞凋亡的影响。发现，lncRNA11496的缺失能够影响小胶质细胞的凋亡，因此，研究lncRNA11496对小胶质细胞的凋亡对弓形虫的感染机制的研究有一定的参考价值。lncRNA11496可以作为弓形虫脑病的诊断和基于lncRNA11496靶向抗弓形虫药物的生物靶标。

应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学

<120> lncRNA11496在诊治弓形虫病中的应用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 3033

<212> DNA

<213> lncRNA11496

<400> 1

ggaagggaag atgctcccat atactttgac ttgagattca tggattgttt ttgtttgtta 60

gtttgtttgt tttttgtggt ggagaaagcc ttcttgtctc attggggtat tacaaatgca 120

tgggaaatac aagtctgggc tgctgcttgc ttcttggcag gaacgaatgc agggatttgg 180

gaactgagct gtgcgcgtgc tgaagaagga aacgtgtttg aaggaaacag gaaagagaaa 240

gaaaaggaag gaaaaaatac ataatttcag ggacgagaga gagaagaaac acggggacta 300

tggggagaaa aaagattcag attacgagga taatggatga gcgtaacaga caggtgagtg 360

tggcacatcc cttcatatct gttccacaca tacgttcaag gcactaaaat catgctggac 420

tctgtgagct caatgtatcc agtttaactg ttgattttca tctctttggg acacagcagg 480

gaagagaact ttaactgtta gaaatatgtt ttaaagattc ctgattcctc actttccact 540

gcctcgagac ctttaagtgg aagctgtatt tgtatgacat gaatagctta ataattagga 600

gttaataagc gtagaattgc tacactgcac gcatcatcaa acaaagatag gcttacatgc 660

atgggaactg ggccttttgt ggtcatccac ttaaaagttt ataatatagc ttaaatatcc 720

tctctctgag aaggggccag ctttcttctc atcacaaagg agagtttgaa gtaaagccaa 780

acatttccag actctcctga caacagcaga acttttacat gagctagcag ttgtgtaaaa 840

catagagaga agaacttcct gttaacatgt gttttctctt attcctgaat tttataaacc 900

tggtactatc ttttcttttc tacacctcca gtgataatgt ctgtaagaca gaaccagttt 960

tgaagacttc aaatatcaaa tgttccatcc tgtgctatga acctccatta tgcattatga 1020

gttcctacag tctgagtcac tgtctttatt ctggaaagag tagtctggct atgtgagggt 1080

gactagcagg tttagacaca tctttctgtt gaatatcagg tgtcgatcct taaaaggaat 1140

cagtctacct gggtacacac agtggcatgc agacaatgga acctgttcct tggccctaag 1200

agaggacaga ctcccactct aacctattta tggtccagaa tattaaatat agctttggaa 1260

atagttcccc acactctaag tctccaaaat aaagacactc accttctatt tagtccctgc 1320

ttacccttgt gtgacatgag aatagattcc atttaaaaca caaatgcttt cacactcata 1380

aattagaatg aataggaatt gttgtttgtt tcattatgtt tactgatggc tctttacaaa 1440

aagccagtga gcttttaaga actaagattt gcctggtttt gttttttaag attatacgtt 1500

ttcagaaatg agtgtatttc acaggacttg aattgctttg agcttaattt tgagttaaag 1560

gatgaaaaat ataagattca tgagggattc cactattttc attcatgtat agctgggatc 1620

ttaaattaag actgaaatat tgaacatcac ttacattgcc tatgggggca ttgctgttgg 1680

aaacaatctt tttgggttgg ggtataaaaa tagatgaatt atcatttcta atttaatatt 1740

aatctatttt ttagcttcgt gagattcatt atatcttttt ttttacttat aaaaacagaa 1800

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ctatagagat acaagatttg tcacatcata ctcttgagag agcaagttta aaagtttgca 1920

tgtagttgtc ttgatctatg cttgtagata ctcttacctg tattaaaagg tcacaataat 1980

tttaagaagt ggagaaagta tttaaattca gcttatgttg accttttaaa aagtactaag 2040

gatcatttcc tttattatat aggatgtaga gccaatttat tatttttctc agtctgtgtg 2100

tacagtaggc tttttaattc aataccattg aagaaaatta gtaacaataa tattactgtg 2160

gttgaagcta tgcttcagtg gttgtccaag atgactattg actattttaa agagctgtca 2220

tttatgataa tgtttgtctt gcttacctct cattttctgt gcaaatggtc caaagaacca 2280

cttggataag agaatgaagt atataggtca cttctgataa tcaaaaccag cgagtgtgtg 2340

ggggagctcc taacctgggc atcctttaaa ttatgtgttc acatgttgaa aagaggaatg 2400

tcagcagctt agctctttct gaagctgccc gactggggtg gcctagtagg acctcacaca 2460

gaggctagct gccgtttctt cttggaagca gtgaacacag tttttttttt ctgcctttgc 2520

atttgtgtat ttgaccacat acagaataat gtgggcctat gacgaaaaag aaatgctaac 2580

ccaaagtaag ccccgaaata gcatagaagt tattaacaca ttgtgtttca gaaagataac 2640

tcatctgaag acagaatagt catttataca cagttctacc ttcattgtct cgtttataac 2700

aaggaaacaa tggctaaagc tccattagaa acataaagta gtgtaataca gataaaagtt 2760

tcacatattt ttactttaca ttttttcagt ttctactttt ataaagccaa ttttttagtc 2820

ttcattaagt ttaagttaat atgtacaaca aactcaggaa ttgtcatttt atcttacaga 2880

tacactcaga cagcttgttg aaagtcatta ccaactattt tccaatgatg gcatgtaaat 2940

tattccattt aatccttaaa ataggattct attttatagt tagaggttat ttatttatta 3000

aatcaacaag tattatttga ctgtaccctg ccc 3033

Claims (4)

1.lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用，所述lncRNA11496的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于，lncRNA11496在制备弓形虫病分子标志物中的应用，所述分子标志物用于检测、诊断或预测弓形虫病的进展。

3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述弓形虫病为弓形虫脑病。

4.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述弓形虫病为弓形虫慢性感染。

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