CN109928972A - 一种苦参碱衍生物及其在药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物领域，涉及一种新的苦参碱衍生物，结构通式如式(I)所示，该苦参碱衍生物通过取代吲哚及其类似物与槐果碱类化合物反应制成，显著改善了苦参碱类化合物的生物活性，在治疗组织纤维化疾病方面具有显著效果，可用作制备治疗和/或预防组织纤维化疾病的药物。
Description
技术领域
本发明属于化学医药技术领域，具体涉及一种具有抗组织纤维化功效的苦参碱衍生物及其制备方法与应用。
背景技术
纤维化(fibrosis)可发生于多种器官，主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命。在全世界范围内，组织纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因，例如肺纤维化导致了呼吸衰竭，肝纤维化导致了肝硬化，肾纤维化导致了肾功能衰竭，血管纤维化导致了动脉粥样硬化等众多疾病。除了以上被医院确诊的肺纤维化、肝纤维化患者外，还有很多发生了明显的纤维化病变而不知情的患者，如严重慢阻肺、间质性肺炎、尘肺、矽肺、煤炭肺、肺心病、肺气肿等，乙肝、丙肝、酒精肝、脂肪肝、血吸虫病等，这些疾病都伴有早期的组织纤维化，如果长期不治疗则会逐渐发展成为肝硬化等较为严重的组织纤维化疾病。
目前已有研究表明组织器官纤维化阶段的病理过程是可逆的，通过药物干预，纤维化状态能够得到有效的缓解或者彻底改善。在组织纤维化研究方面，西医主要集中在发病机制、细胞因子、相关信号通路研究及无创性诊断研究方面，去除病因是其抗组织纤维化的主要手段。γ-干扰素、前列腺素E2、肾上腺皮质激素等药物是常用的用于治疗组织纤维化的药物，然而临床仍有一部分患者，去除病因后组织纤维化继续进展，或病毒载量并不高，仍发展为较为严重组织纤维化疾病。相比于西医的治疗方式，中医中药抗组织纤维化有一定优势，能多靶点、多层次发挥作用，目前多项研究表明扶正化瘀胶囊、复方鳖甲软肝片、经方及复方能延缓肝纤维化进展，弥补了西药抗肝纤维化的不足。同时，专利申请CN102475765A公开了一种改善肾功能并抑制肾组织纤维化的中药组合物，该组合物由丹参10-50份、黄芪10-60份、仙灵脾10-30份、虫草菌丝5-30份、制大黄3-30份制备而成，临床应用能显著改善肾功能，明显降低血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)，总有效率达88.66％。
虽然中药组合物或方剂相比于西药具有毒副作用小，药物靶点多的优势，但是其中较为复杂的成分，对于药品安全造成很大的隐患，因此，开发出一种以中药或天然产物为药物活性成分的抗组织纤维药物，用于治疗或预防组织纤维化，从而减少传统西药和中药方剂的使用，最大程度的降低毒副作用，提高临床治疗安全。
中药苦参中含有多种生物碱，其中以苦参碱、氧化苦参碱为主，此外还含有槐果碱、槐定碱、N-氧化槐果碱等。氧化苦参碱能够防治肝纤维化能，其能明显抑制成纤维细胞III型前胶原mRNA及转化生长因子(TGF-β1)的表达，这可能是Oxy抑制肝纤维化的机理之一。专利申请CN102258516A公开了13-甲氨基- 18-硫代苦参碱化合物可以用于制备抗肝纤维化或其他组织器官纤维化药物，通过细胞实验证明了13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物对大鼠肝星状细胞、肾小球系膜细胞、肺成纤维细胞、心成纤维细胞增殖和胶原合成具有抑制作用；通过动物实验说明13-甲氨基-18-硫代苦参碱化合物对小鼠四氯化碳和D-氨基半乳糖造成的急性肝损伤具有保护作用。专利申请 CN107286162A公开了一种杂环苦参碱衍生物，其结构式如下：
该专利通过在13键位上引入吲哚，显著提高了苦参碱的生物活性，具有良好的抗肿瘤和杀虫活性，但是上述苦参碱及其衍生物在治疗组织纤维化方面的疗效仍然有限，治疗效果欠佳、治疗周期较长。
发明内容
基于上述现有技术的缺陷，本发明通过将苦参碱类化合物与取代吲哚及其类似物进行一系列化学反应与转换，得到一类具有更好的抗组织纤维化活性的新型苦参碱衍生物，该衍生物可制备为治疗组织纤维化疾病的药物。
本发明提供一种苦参碱衍生物，其为式(I)所示的化合物，或式(I)所示的化合物的立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，药学上可接受的盐及前药，水合物，溶剂化物，代谢产物，
其中：
各R独立的为卤素、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、羟基、卤代烷氧基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、烷硫基、亚砜基、砜基、磺胺基、芳基磺胺基、杂芳基磺胺基、环基磺胺基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、环烷基、环烷基烷基、硼酸基、硼酸酯基、羧酸基或羧酸酯基；
n为1，2，3或4时，X、Y、Z各自独立地为N或CH；
n为0时，X、Y、Z为N或CH，且X、Y、Z不同时为CH。
进一步地，所述R独立的为卤素、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、羟基、氰基、氨基。
进一步地，所述立体异构体包括式(II)所述的化合物中的一种或两种，
进一步地，所述药学上可接受的盐包括酸式无机盐、碱式无机盐、有机盐。
更进一步地，所述酸式无机盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、碳酸盐、硼酸盐、氨基磺酸盐和氢溴酸盐中的一种。
更进一步地，所述碱式盐选自钠盐、钾盐、锂盐、镁盐、钙盐或铵盐中的一种。
更进一步地，所述有机盐选自乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、黏液酸盐、葡萄糖酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、苯乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、对氨基水杨酸盐、天门冬氨酸盐，谷氨酸盐、依地酸盐、硬脂酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、月桂酸盐、泛酸盐、鞣酸盐、抗坏血酸盐、戊酸盐、烷铵盐中的一种。
更进一步地，所述有机盐选自马来酸盐或富马酸盐中的一种。
本发明还提供一种苦参碱衍生物的制备方法，由取代吲哚及其类似物与苦参碱类化合物反应制成；
其中，所述的取代吲哚及其类似物结构通式如下：
其中，R，n，X，Y，Z的定义如前所述。
进一步地，本发明所述苦参碱类化合物的制备方法，包括以下步骤：
以槐定碱为起始原料，在强碱的存在下，与取代吲哚及其类似物反应得到目标产物；
其中，R，n，X，Y，Z的定义如前所述；
所述的强碱为KHMDS,NaHMDS，LiHMDS,NaH或LDA中的一种或多种。
更进一步地，所述苦参碱类化合物的制备方法，包括以下步骤：四氢呋喃和取代吲哚及其类似物，缓慢加入含强碱的四氢呋喃溶液进行反应，再加入槐果碱，继续反应，反应结束后，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品，硅胶柱层析分离，得到白色固体，即为目标产物。
更进一步地，所述制备方法包括以下步骤：-18～-20℃条件下，无水四氢呋喃和取代吲哚及其类似物中缓慢加入含强碱的四氢呋喃溶液，-18～-20℃条件下反应，再加入槐果碱后，缓慢升至室温，继续反应。反应结束后，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗一次，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品，硅胶柱层析分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇10:1，即得目标产物。
本发明进一步提供一种治疗和/或预防组织纤维化的药物组合物，包括上述苦参碱衍生物或上述制备方法制备得到的苦参碱衍生物，及药学上可以接受的载体、稀释剂、粘结剂或它们的组合。
本发明进一步提供上述苦参碱衍生物或上述制备方法制备得到的苦参碱衍生物，或上述组合物在制备治疗和/或预防组织纤维化药物中的应用。
进一步地，所述组织纤维化指人体或动物组织纤维化。
更进一步地，所述组织纤维化包括但不限于人体或动物肺纤维化、特发性肺纤维化、肺间质纤维化、肝纤维化、肾间质纤维化、肾小球硬化、心肌纤维化、皮肤纤维化、腹膜纤维化、骨骼肌纤维化、胰腺纤维化、血管纤维化、手术后粘连、硬皮病、多发性硬化症或肝硬化。
本发明的有益效果：
(1)本发明公开的式(I)所示的苦参碱衍生物是由取代吲哚及其类似物和苦参碱类化合物两种化合物反应制得的，该化合物具有较高的生物活性，能够更好地抑制组织纤维化的发生与恶化，旨在将其开发成临床一线用药。
(2)本发明式(I)所述苦参碱衍生物毒副作用小，可以长期安全使用，相比于常用广谱抗纤维化药物—吡非尼酮具有更好的疗效。
(3)本发明提供的苦参碱衍生物的制备方法简单便捷，适合大规模生产。
附图说明
图1为本发明苦参碱衍生物化合物结构通式。
图2为13-(5-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-5)对细胞外基质蛋白(COL1A1, COL3A1，Fibronectin)、成肌纤维细胞标志物(α-SMA，S100A4)以及TGFβ受体(TGFβRI)表达量的影响，
其中，图中A-F为各蛋白的免疫荧光染色结果；G-L为各蛋白的平均荧光强度。
图3 13-(5-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-5)对Smad2/3的核转位的影响荧光示意图，
其中灰色箭头代表Smad2/3主要分布于胞浆，白色箭头表明Smad2/3主要分布于细胞核
图4为13-(5-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-5)对成纤维细胞迁移能力的影响，
其中A代表各处理组细胞伤口愈合实验，B代表12h与24h各处理组细胞伤口愈合率。
具体实施方式
实施例1：13-(3-甲基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-1)及其制备
13-(3-甲基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-1),结构式如下：
具体制备方法如下：
-20℃条件下，在干燥的25mL圆底烧瓶中加入2mL无水四氢呋喃和3-甲基吲哚(0.36mmol,47.2mg)，缓慢加入2mol/L的KHMDS的四氢呋喃溶液(0.36 mmol,180μL)，加毕，-20℃条件下反应20min，再加入槐果碱(0.3mmol,73.6 mg)，缓慢升至室温，继续反应16h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用20mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗一次，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品。硅胶柱层析分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇10:1，得到白色固体39.9mg，收率35.2％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.50(d,J＝7.9Hz,1H,4’-CH),7.38(d,J＝8.4 Hz,1H,7’-CH),7.16(t,J＝8.2Hz,1H,6’-CH),7.04(t,J＝7.9Hz,1H,5’-CH),6.92(d, J＝1.1Hz,1H,2’-CH),4.90–4.86(m,1H,13-CH),4.35(dd,J＝12.7,4.8Hz,1H,17α- CH2),3.81(dt,J＝11.7,6.0Hz,1H,11-CH),3.10(t,J＝12.7Hz,1H,17β-CH2),2.94– 2.73(m,4H,14-CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.45(ddd,J＝14.1,8.1,5.5Hz,1H,12α-CH2), 2.29(d,J＝1.02Hz,3H,Ph-Me),2.28–2.19(m,1H,6-CH),2.09–1.87(m,4H,12β- CH2,2β-CH2,10β-CH2,5-CH),1.82–1.29(m,9H,7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.63(15-C),137.51(8’-C),130.20(9’-C), 122.68(2’-CH),122.38(6’-CH),120.04(5’-CH),119.91(4’-CH),112.21(3’-C),110.10 (7’-CH),65.11(6-CH),58.11(2-CH2,10-CH2),52.38(11-CH),47.24(13-CH),43.32 (17-CH2),42.75(7-CH),38.64(14-CH2),36.96(5-CH),31.56(12-CH2),28.61(4-CH2), 27.33(8-CH2),22.00(3-CH2),21.35(9-CH2),9.82(Ph-CH3)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C24H32N3O[M+H]+,378.2540；found 378.2551.
实施例2：13-(4-甲氧基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-2)及其制备
13-(4-甲氧基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-2),结构式如下：
-20℃条件下，在干燥的25mL圆底烧瓶中加入2mL无水四氢呋喃和4-甲氧基吲哚(0.36mmol,53.0mg)，缓慢加入2mol/L的NaHMDS的四氢呋喃溶液 (0.36mmol,180μL)，加毕，-20℃条件下反应20min，再加入槐果碱(0.3mmol, 73.6mg)，缓慢升至室温，继续反应16h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用20mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗一次，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品。硅胶柱层析分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇10:1，得到白色固体49.3 mg，收率41.7％
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.11–7.02(m,3H,6’-CH,7’-CH,2’-CH),6.57 –6.52(m,2H,5’-CH,3’-CH),4.34(dd,J＝12.7,4.4Hz,1H),4.84–4.80(m,1H,13- CH),4.31(dd,J＝12.6,4.4Hz,1H,17α-CH2),3.90(s,3H,Ph-OMe),3.80(dt,J＝11.3, 5.8Hz,1H,11-CH),3.09(t,J＝12.7Hz,1H,17β-CH2),2.91(dd,J＝17.3,5.4Hz,1H, 14α-CH2),2.81–2.70(m,3H,14β-CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.43–2.37(m,1H,12α- CH2),2.16(brs,1H,6-CH),2.06–2.04(m,1H,12β-CH2),1.99–1.96(m,2H,2β-CH2, 10β-CH2),1.83–1.79(m,1H,5-CH),1.74–1.26(m,9H,7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2, 9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.31(15-C),154.86(4’-C),138.57(8’-C), 123.73(2’-CH),123.12(6’-CH),120.49(9’-C),103.82(5’-CH),100.59(3’-CH),100.47 (7’-CH),65.06(6-CH),58.21(2-CH2),58.11(10-CH2),55.64(Ph-OMe),52.39(11-CH), 47.74(13-CH),43.42(17-CH2),42.65(7-CH),38.66(14-CH2),37.01(5-CH),31.39(12- CH2),28.67(4-CH2),27.41(8-CH2),22.05(3-CH2),21.37(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C24H32N3O2[M+H]+,394.2489；found 394.2481.
实施例3：13-(4-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-3)及其制备
13-(4-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-3),结构式如下：
-20℃条件下，在干燥的25mL圆底烧瓶中加入2mL无水四氢呋喃和4-硝基吲哚(0.36mmol,68.3mg)，缓慢加入2mol/L的LiHMDS的四氢呋喃溶液(0.36 mmol,180μL)，加毕，-20℃条件下反应20min，再加入槐果碱(0.3mmol,73.6 mg)，缓慢升至室温，继续反应16h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用20mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗一次，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品。硅胶柱层析分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇10:1，得到黄色固体83.8mg，收率68.3％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.09(d,J＝8.0Hz,1H,5’-CH),7.96(d,J＝8.2 Hz,1H,7’-CH),7.56(d,J＝3.3Hz,1H,2’-CH),7.33(t,J＝8.1Hz,1H,6’-CH),7.19 (d,J＝3.2Hz,1H,3’-CH),5.09(ddd,J＝9.2,8.6,4.2Hz,1H,13-CH),4.34(dd,J＝ 12.7,4.4Hz,1H,17α-CH2),3.94–3.90(m,1H,11-CH),3.14(t,J＝12.7Hz,1H,17β- CH2),3.00(dd,J＝17.3,5.5Hz,1H,14α-CH2),2.87(dd,J＝17.2,7.7Hz,1H,14β-CH2), 2.78–2.74(m,2H,10α-CH2,2α-CH2),2.56–2.51(m,1H,12α-CH2),2.24–2.19(m, 2H,6-CH,12β-CH2),2.01–1.95(m,2H,2β-CH2,10β-CH2),1.91–1.87(m,2H,5-CH, 7-CH),1.79–1.32(m,8H,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.88(15-C),141.48(4’-C),139.40(8’-C), 130.01(2’-CH),123.78(9’-C),121.74(6’-CH),118.50(5’-CH),117.79(7’-CH),103.53 (3’-CH),65.17(6-CH),58.16(2-CH2,10-CH2),52.51(11-CH),48.27(13-CH),43.57 (17-CH2),42.55(7-CH),38.79(14-CH2),37.13(5-CH),31.26(12-CH2),28.67(4-CH2), 27.45(8-CH2),22.05(3-CH2),21.40(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29N4O[M+H]+,409.2234；found 409.2222.
实施例4：13-(5-甲氧基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-4)及其制备
13-(5-甲氧基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-4),结构式如下：
-20℃条件下，在干燥的25mL圆底烧瓶中加入2mL无水四氢呋喃和5-甲氧基吲哚(0.36mmol,53.0mg)，缓慢加入2mol/L的LDA的四氢呋喃溶液(0.36 mmol,180μL)，加毕，-20℃条件下反应20min，再加入槐果碱(0.3mmol,73.6 mg)，缓慢升至室温，继续反应16h。反应结束后，加入20mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用20mL二氯甲烷萃取3次，合并有机相，依次用饱和食盐水和纯净水洗一次，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸除溶剂得到淡黄色膏状粗品。硅胶柱层析分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇10:1，得到白色固体49.3mg，收率55.1％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.31(d,J＝8.8Hz,1H,7’-CH),7.11(s,1H,2’- CH),7.06(s,1H,4’-CH),6.82(d,J＝7.5Hz,1H,6’-CH),6.41(s,1H,3’-CH),4.85– 4.81(m,1H,13-CH),4.32(d,J＝13.2Hz,1H,17α-CH2),3.82–3.80(m,1H,11-CH), 3.79(s,3H,Ph-OMe),3.10(t,J＝12.9Hz,1H,17β-CH2),2.94–2.90(m,1H,14α-CH2), 2.81–2.72(m,3H,14β-CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.46–2.41(m,1H,12α-CH2),2.19 (brs,1H,6-CH),2.08(d,J＝13.3Hz,1H,12β-CH2),1.98–1.93(m,2H,2β-CH2,10β- CH2),1.85(d,J＝13.8Hz,1H,5-CH),1.78–1.28(m,9H,7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2, 9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.44(15-C),155.61(5’-C),132.47(9’-C), 130.61(8’-C),125.35(2’-CH),112.89(6’-CH),111.03(4’-CH),103.70(7’-CH),102.86 (3’-CH),65.12(6-CH),58.18(2-CH2,10-CH2),56.19(Ph-OMe),52.41(11-CH),47.70 (13-CH),43.44(17-CH2),42.79(7-CH),38.71(14-CH2),37.07(5-CH),31.54(12-CH2), 28.73(4-CH2),27.46(8-CH2),22.09(3-CH2),21.43(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C24H32N3O2[M+H]+,394.2489；found 394.2483.
实施例5：13-(5-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-5)及其制备
13-(5-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-5),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和5-氯吲哚(0.36mmol,54.6mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到92.2mg白色固体，收率77.2％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.54(d,J＝1.9Hz,1H,4’-CH),7.43(d,J＝8.8 Hz,1H,7’-CH),7.24(d,J＝3.3Hz,1H,2’-CH),7.13(d,J＝8.8,2.0Hz,1H,6’-CH), 6.48(d,J＝3.0Hz,1H,3’-CH),4.94–4.90(m,1H,13-CH),4.33(dd,J＝12.6,4.4Hz, 1H,17α-CH2),3.85(dt,J＝11.3,5.8Hz,1H,11-CH),3.12(t,J＝12.7Hz,1H,17β-CH2), 2.95(dd,J＝16.9,5.1Hz,1H,14α-CH2),2.82(dd,J＝17.3,7.3Hz,1H,14β-CH2),2.77 –2.73(m,2H,10α-CH2,2α-CH2),2.48(ddd,J＝14.3,8.9,5.8Hz,1H,12α-CH2),2.22 (brs,1H,6-CH),2.13(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,12β-CH2),2.00–1.82(m,4H,2β-CH2, 10β-CH2,5-CH,7-CH),1.77–1.30(m,8H,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.20(15-C),135.57(8’-C),131.16(9’-C), 126.53(2’-CH),126.39(5’-C),122.78(6’-CH),121.18(4’-CH),111.65(7’-CH),102.89 (3-CH),65.12(6-CH),58.16(2-CH2,10-CH2),52.42(11-CH),47.88(13-CH),43.46(17- CH2),42.72(7-CH),38.66(14-CH2),37.08(5-CH),31.37(12-CH2),28.69(4-CH2), 27.44(8-CH2),22.07(3-CH2),21.41(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29ClN3O[M+H]+,398.1994；found 398.1999.
实施例6：13-(5-溴-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-6)及其制备
13-(5-溴-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-6),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和5-溴吲哚(0.36mmol,70.6mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到82.4mg白色固体，收率62.1％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.70(d,J＝1.9Hz,1H,4’-CH),7.39(d,J＝8.9 Hz,1H,7’-CH),7.25(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H,6’-CH),7.22(d,J＝3.3Hz,1H,2’-CH), 6.48(d,J＝3.3Hz,1H,3’-CH),4.94–4.90(m,1H,13-CH),4.32(dd,J＝12.6,4.4Hz, 1H,17α-CH2),3.84(dt,J＝11.3,5.7Hz,1H,11-CH),3.11(t,J＝12.7Hz,1H,17β-CH2), 2.94(dd,J＝17.3,5.5Hz,1H,14α-CH2),2.84–2.72(m,3H,14β-CH2,10α-CH2,2α- CH2),2.46(ddd,J＝15.1,10.0,6.1Hz,1H,12α-CH2),2.20(brs,1H,6-CH),2.14–2.10 (m,1H,12β-CH2),2.04–1.93(m,2H,2β-CH2,10β-CH2),1.85(d,J＝14.4Hz,1H,5- CH),1.82–1.29(m,9H,7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.17(15-C),135.84(8’-C),131.84(9’-C), 126.42(2’-CH),125.41(6’-CH),124.37(4’-CH),113.85(5’-C),112.12(7’-CH),102.85 (3’-CH),65.13(6-CH),58.17(2-CH2,10-CH2),52.43(11-CH),47.88(13-CH),43.49 (17-CH2),42.72(7-CH),38.67(14-CH2),37.10(5-CH),31.36(12-CH2),28.71(4-CH2), 27.47(8-CH2),22.11(3-CH2),21.44(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29BrN3O[M+H]+,442.1489；found 442.1474.
实施例7：13-(5-氰基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-7)及其制备
13-(5-溴-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-7),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和5-氰基吲哚(0.36mmol,51.2mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到84.6mg白色固体，收率68.9％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.55(d,J＝2.2Hz,1H,4’-CH),8.09(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H,6’-CH),7.64(d,J＝9.1Hz,1H,7’-CH),7.47(d,J＝3.4Hz,1H,2’-CH), 6.78(d,J＝3.3Hz,1H,3’-CH),5.07(tdd,J＝8.6,5.4,3.0Hz,1H,13-CH),4.34(dd,J ＝12.7,4.4Hz,1H,17α-CH2),3.94(dt,J＝11.1,5.6Hz,1H,11-CH),3.15(t,J＝12.6 Hz,1H,17β-CH2),2.98(dd,J＝17.4,5.4Hz,1H,14α-CH2),2.89–2.77(m,3H,14β- CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.54(ddd,J＝14.5,9.3,5.7Hz,1H,12α-CH2),2.26–2.21(m, 2H,6-CH,12β-CH2),2.05–1.89(m,3H,2β-CH2,10β-CH2,5-CH),1.81–1.33(m,9H, 7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.91(15-C),143.07(8’-C),139.97(9’-C), 129.31(5’-C),128.79(2’-CH),118.89(6’-CH),118.04(4’-CH),110.77(7’-CH),105.91 (3’-CH),65.22(6-CH),58.22(2-CH2,10-CH2),52.57(11-CH),48.41(13-CH),43.62 (17-CH2),42.63(7-CH),38.71(14-CH2),37.19(5-CH),31.23(12-CH2),28.73(4-CH2), 27.51(8-CH2),22.11(3-CH2),21.46(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29N4O[M+H]+,409.2234；found 409.2221.
实施例8：13-(5-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-8)及其制备
13-(5-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-8),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和5-硝基吲哚(0.36mmol,58.4mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到83.5mg黄色固体，收率68.0％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.55(d,J＝2.2Hz,1H,4’-CH),8.09(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H,6’-CH),7.64(d,J＝9.1Hz,1H,7’-CH),7.47(d,J＝3.4Hz,1H,2’-CH), 6.78(d,J＝3.3Hz,1H,3’-CH),5.07(tdd,J＝8.6,5.4,3.0Hz,1H,13-CH),4.34(dd,J ＝12.7,4.4Hz,1H,17α-CH2),3.94(dt,J＝11.1,5.6Hz,1H,11-CH),3.15(t,J＝12.6 Hz,1H,17β-CH2),2.98(dd,J＝17.4,5.4Hz,1H,14α-CH2),2.89–2.77(m,3H,14β- CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.54(ddd,J＝14.5,9.3,5.7Hz,1H,12α-CH2),2.26–2.21(m, 2H,6-CH,12β-CH2),2.05–1.89(m,3H,2β-CH2,10β-CH2,5-CH),1.81–1.33(m,9H, 7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.91(15-C),143.07(8’-C),139.97(9’-C), 129.31(5’-C),128.79(2’-CH),118.89(6’-CH),118.04(4’-CH),110.77(7’-CH),105.91 (3’-CH),65.22(6-CH),58.22(2-CH2,10-CH2),52.57(11-CH),48.41(13-CH),43.62 (17-CH2),42.63(7-CH),38.71(14-CH2),37.19(5-CH),31.23(12-CH2),28.73(4-CH2), 27.51(8-CH2),22.11(3-CH2),21.46(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29N4O[M+H]+,409.2234；found 409.2221.
实施例9：13-(5-氮杂-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-9)及其制备
13-(5-氮杂-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-9),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和5-氮杂吲哚(0.36mmol,42.5mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到41.2mg白色固体，收率37.6％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.80(s,1H,4’-CH),8.20(d,J＝6.0Hz,1H,6’- CH),7.58(d,J＝6.0Hz,1H,7’-CH),7.40(d,J＝3.3Hz,1H,2’-CH),6.74(d,J＝3.1 Hz,1H,3’-CH),5.06–5.01(m,1H,11-CH),4.34(dd,J＝12.6,4.1Hz,1H,17α-CH2), 3.94(dt,J＝10.9,5.4Hz,1H,11-CH),3.15(t,J＝12.6Hz,1H,17β-CH2),2.97(dd,J＝ 17.3,5.4Hz,1H,14α-CH2),2.88(dd,J＝17.3,7.7Hz,1H,14β-CH2),2.77(d,J＝11.3 Hz,2H,10α-CH2,2α-CH2),2.54(tt,J＝9.2,5.6Hz,1H,12α-CH2),2.25(brs,1H,6-CH), 2.21(d,J＝15.0Hz,1H,12β-CH2),2.00–1.97(m,2H,2β-CH2,10β-CH2),1.92–1.88 (m,2H,5-CH,7-CH),1.80–1.33(m,8H,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.85(15-C),144.09(4’-CH),140.98(8’-C),140.52(6’-CH),127.37(2’-CH),127.01(9’-C),106.61(7’-CH),103.23(3’-CH),65.17(6-CH),58.18(2-CH2,10-CH2),52.52(11-CH),48.14(13-CH),43.58(17-CH2),42.59 (7-CH),38.63(14-CH2),37.16(5-CH),31.18(12-CH2),28.70(4-CH2),27.47(8-CH2), 22.08(3-CH2),21.43(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C24H29N4O[M+H]+,365.2336；found 365.2330.
实施例10：13-(6-氟-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-10)及其制备
13-(6-氟-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-10),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和6-氟吲哚(0.36mmol,48.7mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到79.2mg白色固体，收率69.1％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.50(dd,J＝8.8,5.4Hz,1H,4’-CH),7.22(dd,J ＝10.3,2.1Hz,1H,5’-CH),7.17(d,J＝3.4Hz,1H,2’-CH),6.84(td,J＝8.7,2.2Hz,1H, 7’-CH),6.50(t,J＝3.1Hz,1H,3’-CH),4.88–4.84(m,1H,13-CH),4.33(dd,J＝14.1, 3.3Hz,1H,17α-CH2),3.85(dt,J＝11.3,5.8Hz,1H,11-CH),3.12(t,J＝12.7Hz,1H, 17β-CH2),2.94(dd,J＝18.3,5.4Hz,1H,14α-CH2),2.86–2.73(m,3H,14β-CH2,10α- CH2,2α-CH2),2.51–2.44(m,1H,12α-CH2),2.20(brs,1H,6-CH),2.12–1.91(m,3H, 12β-CH2,2β-CH2,10β-CH2),1.88–1.30(m,10H,5-CH,7-CH,3-CH2,4-CH2,8-CH2, 9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.26(15-C),161.24(d,J＝236.2Hz,6’-C), 137.16(d,J＝12.1Hz,8’-C),126.59(2’-CH),125.53(d,J＝3.7Hz,9’-C),122.76(d,J ＝10.1Hz,4’-CH),109.14(d,J＝24.7Hz,7’-CH),103.48(3’-CH),96.78(d,J＝27.0 Hz,5’-CH),65.13(6-CH),58.19(10-CH2),58.17(10-CH2),52.43(11-CH),47.81(13- CH),43.47(17-CH2),42.72(7-CH),38.63(14-CH2),37.07(5-CH),31.28(12-CH2), 28.73(4-CH2),27.44(8-CH2),22.10(3-CH2),21.43(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29N3FO[M+H]+,382.2289；found 382.2276.
实施例11：13-(6-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-11)及其制备
13-(6-氯-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-11),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和6-氯吲哚(0.36mmol,54.6mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到76.7mg白色固体，收率64.2％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ7.54–7.49(m,2H,4’-CH,5’-CH),7.21(d,J＝ 3.3Hz,1H,2’-CH),7.03(d,J＝9.1Hz,1H,7’-CH),6.51(d,J＝6.5Hz,1H,3’-CH), 4.94–4.91(m,1H,13-CH),4.34(dd,J＝12.8,4.4Hz,1H,17α-CH2),3.86(dt,J＝11.3, 5.6Hz,1H,11-CH),3.12(t,J＝12.7Hz,1H,17β-CH2),2.94(dd,J＝17.3,5.4Hz,1H, 14α-CH2),2.87–2.76(m,3H,14β-CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.49–2.44(m,1H,12α- CH2),2.24(brs,1H,6-CH),2.15–2.12(m,1H,12β-CH2),2.01–1.96(m,2H2β-CH2, 10β-CH2),1.90–1.83(m,2H,5-CH,7-CH),1.79–1.33(m,8H,3-CH2,4-CH2,8-CH2, 9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ169.24(15-C),137.58(8’-C),128.72(6’-C), 128.68(9’-C),125.87(2’-CH),122.94(4’-CH),121.24(5’-CH),110.50(7’-CH),103.48 (3’-CH),65.13(6-CH),58.16(2-CH2,10-CH2),52.45(11-CH),47.72(13-CH),43.47 (17-CH2),42.68(7-CH),38.65(14-CH2),37.04(5-CH),31.32(12-CH2),28.68(4-CH2), 27.42(8-CH2),22.06(3-CH2),21.42(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29ClN3O[M+H]+,398.1994；found 398.1993.
实施例12：13-(6-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-12)及其制备
13-(6-硝基-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-8),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和6-硝基吲哚(0.36mmol,58.4mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到75.3mg黄色固体，收率61.3％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.52(s,1H,7’-CH),7.93(d,J＝8.8Hz,1H,4’- CH),7.67(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H,5’-CH),7.60(t,J＝3.1Hz,1H,2’-CH),6.78(t,J＝ 3.0Hz,1H,3’-CH),5.13–5.10(m,1H,13-CH),4.33(dd,J＝9.4,6.4Hz,1H,17α-CH2), 3.94–3.90(m,1H,11-CH),3.12(t,J＝12.5Hz,1H,17β-CH2),2.99(dd,J＝17.4,5.3 Hz,1H,14α-CH2),2.86–2.73(m,3H,14β-CH2,10α-CH2,2α-CH2),2.51–2.46(m,1H, 12α-CH2),2.25–2.23(m,2H,6-CH,12β-CH2),1.98–1.90(m,4H,2β-CH2,10β-CH2, 5-CH,7-CH),1.77–1.31(m,8H,3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.77(15-C),144.27(6’-C),135.68(8’-C), 134.79(9’-C),131.37(2’-CH),121.96(4’-CH),115.92(5’-CH),107.49(7’-CH),104.31 (3’-CH),65.17(6-CH),58.15(2-CH2,10-CH2),52.59(11-CH),48.15(13-CH),43.57 (17-CH2),42.39(7-CH),38.85(14-CH2),37.09(5-CH),31.28(12-CH2),28.65(4-CH2), 27.44(8-CH2),22.05(3-CH2),21.41(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C23H29N4O[M+H]+,409.2234；found 409.2225.
实施例13：13-(6-氮杂-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-13)及其制备
13-(6-氮杂-1H-吲哚-基)苦参碱(MG-13),结构式如下：
以槐果碱(0.3mmol,73.6mg)和6-氮杂吲哚(0.36mmol,42.5mg)为原料，具体操作同实施例1所述合成方法，得到36.6mg白色固体，收率33.4％。
核磁结果如下：
1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ8.29(d,J＝5.9Hz,1H,7’-CH),7.98(d,J＝8.9 Hz,1H,4’-CH),7.56(d,J＝3.4Hz,1H,2’-CH),7.19(t,J＝5.4Hz,1H,5’-CH),6.64 (d,J＝3.2Hz,1H,3’-CH),5.00(ddd,J＝9.2,8.6,4.3Hz,1H,11-CH),4.31(dd,J＝12.6, 4.5Hz,1H,17α-CH2),3.89(dt,J＝11.3,5.6Hz,1H,11-CH),3.11(t,J＝11.8Hz,1H, 17β-CH2),2.94(dd,J＝17.3,5.5Hz,1H,14α-CH2),2.88–2.72(m,3H,14β-CH2,10α- CH2,2α-CH2),2.53–2.49(m,1H,12α-CH2),2.23–2.17(m,2H,6-CH,12β-CH2),2.03 –1.94(m,2H,2β-CH2,10β-CH2),1.89–1.84(m,2H,5-CH,7-CH),1.76–1.30(m,8H, 3-CH2,4-CH2,8-CH2,9-CH2)；
13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ168.97(15-C),147.24(5’-CH),143.47(7’-CH),130.56(8’-C),129.61(2’-CH),119.17(4’-CH),117.71(9’-C),103.06(3’-CH),65.19(6-CH),58.18(2-CH2,10-CH2),52.54(11-CH),48.15(13-CH),43.57(17-CH2),42.58(7- CH),38.66(14-CH2),37.16(5-CH),31.21(12-CH2),28.69(4-CH2),27.47(8-CH2), 22.08(3-CH2),21.42(9-CH2)；
ESI-HRMS m/z Calcd for C24H29N4O[M+H]+,365.2336；found 365.2331.
实施例14：苦参碱衍生物的抗纤维化活性测定
胶原蛋白是细胞外基质中含量最高的蛋白，胶原蛋白的过量表达是组织纤维化疾病发生和发展的重要因素。通过天狼星红染色法可以考察胶原蛋白含量变化，进而评价化合物的抗纤维化活性，具体操作方法如下：
取对数生长期的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)，以1×105细胞每毫升的密度接种于96孔板中，培养基为含10％FBS的MEM培养基。24h后吸弃上清，每孔加入含有不同浓度化合物的培养基，浓度梯度设置为160μM,80μM，40μM, 20μM,10μM,5μM,1h后加入TGF-β1使其终浓度为10ng/mL(其中空白样品孔中不加入TGF-β1)，继续培养48h后吸弃上清，PBS润洗后每孔加入100μL 甲醇固定10min，PBS润洗后加入200μL天狼星红染色液，室温染色30min后吸弃上清液，每孔用100μL 1％冰醋酸水溶液洗2次，避光晾干后每孔加入200 μL 1％氢氧化钾水溶液，并在振荡器上低速振摇1h后在酶标仪上读取550nm吸光度值(参比波长为685nm)。
抑制率计算公式为：
其中，ATGFβ代表加入TGF-β1诱导，但不加入待测样品组别的吸光度；
Acompound代表加入TGF-β1诱导，同时也加入待测样品组别的吸光度；
Ablank代表空白组(不加入TGF-β1诱导，也不加入待测样品)的吸光度；
求得每个化合物不同浓度的抑制率后，在Graphpad Prism中使用非线性拟合方法计算IC50。
表1.部分苦参碱衍生物抗纤维化活性数据
实施例15：苦参碱衍生物MG-5对细胞外基质，成肌纤维细胞标志蛋白的调节作用
细胞外基质的过度沉积是导致组织纤维化的直接原因，下调细胞外基质蛋白的表达可以改善纤维化疾病。成肌纤维细胞(myofibroblast)是分泌细胞外基质的主要效应细胞，由成纤维细胞(fibroblast)在促纤维化因子如TGF-β1的作用下分化而来，α-肌动蛋白(α-SMA)和S100A4是成肌纤维细胞的标志物。TGFβ受体是TGFβ信号通路最上游的靶蛋白，其表达量的变化对于TGFβ的生物学功能具有重要的调控作用，进而影响细胞外基质的分泌量。本实施例通过免疫荧光方法考察苦参碱衍生物MG-5对细胞外基质蛋白(COL1A1,COL3A1,Fibronectin) 和成肌纤维细胞标志物(α-SMA，S100A4)表达量的影响以及TGFβ受体(TGFβRI) 表达量的影响。
本实施例操作方法如下：
将MRC-5细胞接种于0.2％明胶包被的玻片上，在含有10％FBS的MEM- NEAA培养基中培养24h。之后，空白组将培养基更换为含有0.2％BSA的空白培养基；TGF组将培养基更换为含有10ng/mL TGF-β1和0.2％BSA的空白培养基；加药组将培养基更换为含有10μM MG-5,10ng/mL TGF-β1和0.2％BSA的空白培养基。各组继续培养48h后，弃上清，用PBS清洗一次后使用新鲜配制的4％多聚甲醛溶液固定10min。然后用吸弃上清，用PBS清洗三次，使用0.25％ Triton X-100破膜10min，吸弃上清，用PBS清洗三次，使用含有1％BSA和 22.5mg/mL甘氨酸的PBS溶液室温封闭30min。封闭结束后，加入一抗4℃孵育过夜，PBS清洗三次后加入AlexaFluor 488偶联二抗，室温孵育1h后使用PBS 清洗，滴加Prolong antifadediamond封片液封片，待封片液固化后在荧光显微镜下观察并拍照记录。蛋白表达量变化通过计算平均荧光强度(Mean Fluorescence Intensity，MFI)获得。
实验结果如附图2所示，在10μM MG-5的作用下，细胞外基质蛋白COL1A1, COL3A1,Fn的表达量分别下降了72.1％，48.0％，127.5％；成肌纤维细胞标志物α-SMA，S100A4的表达量分别下降了51.8％，21.0％；TGFβ受体TGFβRI的表达量下降了46.7％。上述结果表明MG-5能够显著降低细胞外基质沉积，抑制成纤维细胞向成肌纤维细胞的分化，并下调TGFβ受体的表达，具有较强的抗纤维化活性。
实施例16：苦参碱衍生物MG-5对Smad2/3核转位的影响
Smad2/3对于TGF-β的信号传导具有重要作用。当TGF-β1与TGFβ受体结合会导致Smad2/3复合物的磷酸化，进而从胞浆转移至细胞核内，与DNA转录因子结合以增强DNA的转录活性。抑制Smad2/3的核转位能够抑制下游蛋白 (如细胞外基质蛋白等)的转录，进而发挥抗纤维化活性。本实施例通过免疫荧光染色，具体实验过程同实施例15，发现苦参碱衍生物MG-5能够显著抑制 Smad2/3的核转位，实验结果如附图3所示，实施步骤同实施例16。
实施例17：苦参碱衍生物MG-5对成纤维细胞迁移能力的影响
在纤维化疾病中，成纤维细胞大量迁移并穿越基底膜到达纤维化病灶 (fibroticfoci)，同时过量沉积细胞外基质。抑制成纤维细胞的迁移能力是治疗纤维化疾病的重要靶点。本实施例通过划痕实验考察了苦参碱衍生物MG-5对成纤维细胞迁移能力的影响。实施步骤如下所述：
将MRC-5细胞接种于6孔板上，培养48h使其达到融合。使用1mL枪头在细胞单层上笔直的划一条线，然后用PBS清洗两次以去除脱落的细胞。空白组将培养基更换为含有0.2％BSA的空白培养基；TGF组将培养基更换为含有10 ng/mL TGF-β1和0.2％BSA的空白培养基；加药组将培养基更换为含有10μM MG-5,10ng/mL TGF-β1和0.2％BSA的空白培养基；苦参碱处理组将培养基更换为含有1000μM苦参碱,10ng/mL TGF-β1和0.2％BSA的空白培养基。各组继续培养24h，并在0h，12h，24h对划痕处拍照记录。
由于细胞的迁移，划痕处的空白面积会不断减小，空白面积的变化量反映了细胞的迁移能力，迁移能力越强，空白面积保留量越小，反之亦然。实验结果如附图4所示，MRC-5细胞在正常条件下迁移能力较弱，在24h划痕愈合率为 65.2％，而TGF-β1处理显著增强了MRC-5细胞的迁移能力，24h划痕愈合率为 85.0％。MG-5处理显著抑制了MRC-5细胞的迁移能力，24h划痕愈合率仅为 27.7％，且10μM MG-5的抑制活性强于1000μM的苦参碱(苦参碱组24h划痕愈合率为56.6％)。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种苦参碱衍生物，其为式(I)所示的化合物，或式(I)所示的化合物的立体异构体，几何异构体，互变异构体，氮氧化物，药学上可接受的盐及前药，水合物，溶剂化物，代谢产物，
其中：
R独立的为卤素、硝基、烷基、卤代烷基、烷氧基、羟基、卤代烷氧基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、烷硫基、亚砜基、砜基、磺胺基、芳基磺胺基、杂芳基磺胺基、环基磺胺基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、环烷基、环烷基烷基、硼酸基、硼酸酯基、羧酸基或羧酸酯基；
n为1，2，3或4时，X、Y、Z各自独立地为N或CH；
n为0时，X、Y、Z为N或CH，且X、Y、Z不同时为CH。
2.根据权利要求1所述的苦参碱衍生物，其特征在于，所述药学上可接受的盐包括酸式无机盐、碱式无机盐、有机盐。
3.根据权利要求2所述的苦参碱衍生物，其特征在于，所述酸式无机盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、碳酸盐、硼酸盐、氨基磺酸盐和氢溴酸盐中的一种；
所述碱式盐选自钠盐、钾盐、锂盐、镁盐、钙盐或铵盐中的一种；
所述有机盐选自乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、黏液酸盐、葡萄糖酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、苯乙酸盐、甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、对氨基水杨酸盐、天门冬氨酸盐，谷氨酸盐、依地酸盐、硬脂酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、月桂酸盐、泛酸盐、鞣酸盐、抗坏血酸盐、戊酸盐、烷铵盐中的一种。
4.一种权利要求1-3任一项所述的苦参碱衍生物的制备方法，其特征在于，所述的化合物是由取代吲哚及其类似物与槐定碱反应制成；
其中，所述的取代吲哚及其类似物结构通式如下：
其中，R，n，X，Y，Z的定义如前所述。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，取代吲哚及其类似物选自3-甲基吲哚，4-甲氧基吲哚，4-硝基吲哚，5-氯吲哚，5-溴吲哚，5-氰基吲哚，5-甲氧基吲哚，5-硝基吲哚，5-氮杂吲哚，6-氟吲哚，6-氯吲哚，6-硝基吲哚，6-氮杂吲哚中的一种。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以槐定碱为起始原料，在强碱的存在下，与取代吲哚及其类似物反应得到目标产物；
其中，R，n，X，Y，Z的定义如前所述；
所述的强碱为KHMDS,NaHMDS，LiHMDS,NaH或LDA中的一种或多种。
7.一种治疗和/或预防组织纤维化的药物组合物，包括权利要求1-3任一项所述的苦参碱衍生物或权利要求4-6任一项所述制备方法制备得到的苦参碱衍生物，及药学上可以接受的载体、稀释剂、粘结剂或它们的组合。
8.权利要求1-3任一项所述的苦参碱衍生物，或权利要求4-6任一项所述制备方法制备得到的苦参碱衍生物，或权利要求7所述的组合物在制备治疗和/或预防组织纤维化药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述组织纤维化指人体或动物组织纤维化。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述组织纤维化包括但不限于人体或动物肺纤维化、特发性肺纤维化、肺间质纤维化、肝纤维化、肾间质纤维化、肾小球硬化、心肌纤维化、皮肤纤维化、腹膜纤维化、骨骼肌纤维化、胰腺纤维化、血管纤维化、手术后粘连、硬皮病、多发性硬化症或肝硬化。
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