CN109925503A - 一种逆转金黄色葡萄球菌耐药性的中药注射剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种逆转金黄色葡萄球菌耐药性的中药注射剂。本发明提供痰热清在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)‑(a3)中的至少一种：(a1)降低耐药细菌的耐药性；(a2)治疗耐药细菌感染性疾病；(a3)抑制耐药细菌传播。痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五种中药组成，可能通过改变细菌的部分表型特征从而消除耐药质粒，恢复细菌对抗菌药物的敏感程度，可有效逆转耐药菌对不同种类抗生素的耐药性，对于治疗耐药菌感染性疾病、抑制耐药菌的传播有重大的意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种逆转金黄色葡萄球菌耐药性的中药注射剂。
背景技术
由于抗菌药物的不合理使用和滥用使得细菌长期暴露在抗菌药物的选择压力下，导致大量耐药菌的出现。目前细菌耐药已成为严重危害人类健康的重大问题,也成为全球面临的巨大挑战。研发新型抗耐药菌抗生素无疑是解决目前耐药菌感染的主要途径和方法，但回顾细菌的耐药发展史，在某种新型抗生素出现以后，很快就会出现一批耐药菌株，研究者开发一种新的抗生素从发现到确定再到大规模生产一般需要10年左右的时间，而耐药菌的产生只需要2年的时间，抗生素的研制速度远远赶不上耐药菌的繁殖速度。因此，增强现有抗菌药物作用，有效逆转细菌耐药性成为应对日趋严重的全球性细菌耐药问题的重要策略。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为临床主要致病菌，可导致人类多种部位的感染，包括皮肤软组织感染、骨髓炎、肺炎、菌血症等。青霉素出现之前，金葡菌感染的死亡率在80％左右。上世纪40年代青霉素广泛应用于临床，在金葡菌所致的感染性疾病得到有效控制的同时青霉素耐药菌株随之出现，至上世纪60年代已经有约80％的金葡菌对青霉素耐药。为了克服青霉素耐药，科学家们研发出新型抗菌药物——甲氧西林，但甲氧西林仅应用后2年即在临床分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA)。MRSA与普通金葡菌不同，这类细菌表出多重耐药的特性，对所有β-内酰胺抗菌药物、氨基糖苷类药物、大环内酯类、磺胺类、喹诺酮类等抗菌药物耐药，仅对糖肽类、利奈唑胺等少数药物保持敏感。目前MRSA感染已超过艾滋病、结核和病毒性肝炎成为患者首位致死原因，严重威胁公共卫生安全，被称作“超级病菌”。临床治疗MRSA感染主要依靠万古霉素，但在1997年日本即在发现临床分离MRSA出现对万古霉素敏感性降低的现象，2002年美国在临床分离出对万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)，一旦这种细菌流行，临床感染治疗将基本无药可用。
发明内容
本发明的目的是提供一种逆转金黄色葡萄球菌耐药性的中药注射剂。
本发明首先提供痰热清在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a3)中的至少一种：
(a1)降低耐药细菌的耐药性；
(a2)治疗耐药细菌感染性疾病；
(a3)抑制耐药细菌传播。
本发明还保护一种产品，其活性成分为痰热清；所述产品的用途为如下(a1)-(a3)中的至少一种：
(a1)降低耐药细菌的耐药性；
(a2)治疗耐药细菌感染性疾病；
(a3)抑制耐药细菌传播。
本发明还保护一种降低耐药细菌的耐药性的方法(方法甲)，包括如下步骤：使用痰热清多代处理所述耐药细菌，使所述耐药细菌的耐药性降低。
本发明还保护一种制备耐药性降低的细菌的方法(方法乙)，包括如下步骤：使用痰热清多代处理耐药细菌，得到耐药性降低的细菌。
所述方法甲或方法乙中，可使用含有痰热清的细菌培养基多代培养所述耐药细菌。所述细菌培养基可为MH培养基。
所述痰热清的使用浓度具体可为抗菌药物对所述耐药细菌最低抑菌浓度值的1/2。
所抗菌药物为糖肽类抗生素或氨基糖苷类抗生素。
所述糖肽类抗生素为万古霉素或替考拉宁。
所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素或阿米卡星。
所述多代具体可为1-5代。
本发明还保护所述方法乙制备得到的细菌。
本发明还保护一种试剂盒，包括痰热清和细菌培养基；所述试剂盒的用途为降低耐药细菌的耐药性。所述细菌培养基可为MH培养基。
本发明还保护一种用于抑制耐药细菌的试剂盒，包括痰热清和抗菌药物。
所抗菌药物为糖肽类抗生素或氨基糖苷类抗生素。
所述糖肽类抗生素为万古霉素或替考拉宁。
所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素或阿米卡星。
以上任一所述耐药细菌具体可为耐药金黄色葡萄球菌。所述耐药金黄色葡萄球菌具体可为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
以上任一所述所述耐药性为抗生素耐药性。所述抗生素为糖肽类抗生素或氨基糖苷类抗生素。所述糖肽类抗生素为万古霉素或替考拉宁。所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素或阿米卡星。
以上任一所述痰热清具体可为痰热清注射液(上海凯宝药业股份有限公司，批准文号：Z20030054，批号：1606122)。
本发明的发明人通过研究发现当临床耐药菌株经过痰热清注射液连续作用后对抗生素的敏感性发生改变；其中血液来源的1611017对糖肽类抗菌药物(万古霉素和替考拉宁)的敏感性提高，诱导前1611017菌株对万古霉素和替考拉宁的MIC值分别为2μg/ml和8μg/ml，经过痰热清连续诱导5代后其MIC值分别降低为1μg/ml和1μg/ml；痰液来源的1611099对氨基糖苷类抗生素(庆大霉素和阿米卡星)的敏感性提高，1611099菌株经过痰热清注射液连续诱导后对庆大霉素和阿米卡星的MIC值分别由256μg/ml和128μg/ml降至≤2μg/mL和8μg/mL；而1611017和1611099菌株在空白培养基中连续培养对上述抗生素的MIC值均未发生变化。
痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五种中药组成，可能通过改变细菌的部分表型特征从而消除耐药质粒，恢复细菌对抗菌药物的敏感程度，可有效逆转耐药菌对不同种类抗生素的耐药性，对于治疗耐药菌感染性疾病、抑制耐药菌的传播有重大的意义。
附图说明
图1为菌株1611017对痰热清和抗生素MIC值测定结果。
图2为菌株1611099痰热清和抗生素MIC值测定结果。
图3为痰热清注射液诱导菌株1611017各代对万古霉素MIC的变化。
图4为痰热清注射液诱导菌株1611017各代对替考拉宁MIC的变化。
图5为MH培养基空白培养菌株1611017各代对万古霉素MIC的变化
图6为MH培养基空白培养菌株1611017各代对替考拉宁MIC的变化。
图7为痰热清注射液诱导菌株1611099各代对庆大霉素MIC的变化。
图8为痰热清注射液诱导菌株1611099各代对阿米卡星MIC的变化。
图9为MH培养基空白培养菌株1611099各代对庆大霉素MIC的变化。
图10为MH培养基空白培养菌株1611099各代对阿米卡星MIC的变化。
图11为痰热清注射液诱导菌株ATCC43300各代对阿米卡星MIC的变化。
图12为痰热清注射液诱导菌株ATCC43300各代对庆大霉素MIC的变化。
图13为痰热清注射液诱导菌株ATCC43300各代对替考拉宁MIC的变化。
图14为痰热清注射液诱导菌株ATCC43300各代对万古霉素MIC的变化。
图15为MH培养基空白培养菌株ATCC43300各代对阿米卡星MIC的变化。
图16为MH培养基空白培养菌株ATCC43300各代对庆大霉素MIC的变化。
图17为MH培养基空白培养菌株ATCC43300各代对替考拉宁MIC的变化。
图18为MH培养基空白培养菌株ATCC43300各代对万古霉素MIC的变化。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
菌株161017：临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(血液来源)，由北京中医药大学东直门医院检验科提供。
菌株1611099：临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(痰液来源)，由北京中医药大学东直门医院检验科提供。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株(简称菌株ATCC43300)：美国模式菌种保藏中心，编号：ATCC 43300。
痰热清注射液(上海凯宝药业股份有限公司)：为由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五味中药提取物，国药准字Z20030054；使用时采用MH液体培养基稀释。
万古霉素：VIANEX S.A.(PLANT C)，希腊，货号：C659149。
替考拉宁：中国食品药品检定研究院，货号：130374-201002。
庆大霉素：中国食品药品检定研究院，货号：130515-201603。
阿米卡星：中国食品药品检定研究院，货号：130335-200204。
万古霉素和替考拉宁属于糖肽类抗生素。
庆大霉素和阿米卡星属于氨基糖苷类抗生素。
MH液体培养基：OXOID，货号：CM0405。
MH固体培养基：OXOID，货号：CM0337。
氯化三苯四氮唑(triphenyl tetrazoliumchloride，TTC)：美国Amresco，货号298-96-4。
0.25％TTC溶液：采用PBS溶液将TTC溶解，得到0.25％(质量百分含量)TTC溶液。
实施例1、临床分离MRSA最低抑菌浓度值的测定
待测菌株：菌株161017、菌株1611099和菌株ATCC43300。
一、细菌的活化和培养
将待测菌株单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养18-24h，收集菌液，采用MH液体培养基稀释至OD600nm＝0.02，得到待测菌液。
二、最低抑菌浓度值的测定
1、取稀释痰热清注射液，采用MH液体培养基按照不同体积比(1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024，痰热清注射液均为1体积份)进行稀释，得到痰热清检测液。
2、采用MH液体培养基将万古霉素配置为不同浓度(8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL、0.063μg/mL、0.031μg/mL、0.016μg/mL)的万古霉素检测液。
3、采用MH液体培养基将替考拉宁配置为不同浓度(8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL、0.063μg/mL、0.031μg/mL、0.016μg/mL)的替考拉宁检测液。
4、采用MH液体培养基将庆大霉素配置为不同浓度(1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL)的庆大霉素检测液。
5、采用MH液体培养基将阿米卡星配置为不同浓度(1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL)的阿米卡星检测液。
6、取无菌96孔平底微量板，分为5组进行操作：
第1组：分别加入步骤1制备的不同浓度的痰热清检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第2组：分别加入步骤2制备的不同浓度的万古霉素检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第3组：分别加入步骤3制备的不同浓度的替考拉宁检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第4组：分别加入步骤4制备的不同浓度的庆大霉素检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第5组：分别加入步骤5制备的不同浓度的阿米卡星检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
每组设置阳性对照和阴性对照；阳性对照孔加入100μLMH液体培养基和100μL步骤一制备的待测菌液；阴性对照孔加入200μLMH液体培养基。
7、将步骤6的无菌96孔平底微量板37℃静置培养24h，每孔加入0.25％TTC溶液，继续静置培养2h，培养结束后眼观察培养孔，呈现红色为有菌生长，在阴性对照孔为参照前提下，判断药物的MIC值。实验重复3次。
结果如表1、图1和图2所示。
表1临床分离两株MRSA的MIC值测定结果
两株临床分离菌株对痰热清注射液的MIC值分别为1/4原液量和1/8原液量；对万古霉素的MIC值分别为1μg/mL和2μg/mL；对替考拉宁MIC值分别为4μg/mL和8μg/mL；对庆大霉素的MIC值分别为≤2μg/mL和256μg/mL；对阿米卡星的MIC值为8μg/mL和128μg/mL。标准菌株ATCC43300对痰热清注射液的MIC值为1/8原液量；对万古霉素、替考拉宁、庆大霉素及阿米卡星的MIC值分别为1μg/mL、0.5μg/mL、256μg/mL和128μg/mL。
结果表明，两株来源不同的临床分离MRSA对抗生素敏感性不同，其中血液来源的1611017菌株对糖肽类抗生素的敏感性弱于痰液来源的1611099菌株；而痰液来源的1611099菌株对氨基糖苷类抗生素完全耐药而血液来源的1611017菌株则对氨基糖苷类抗生素敏感。标准菌株ATCC43300对万古霉素和替考拉宁敏感而对庆大霉素和阿米卡星耐药。
实施例2、痰热清注射液对临床分离耐甲氧西林金葡菌的诱导
一、痰热清注射液对菌株161017的诱导
1、取1体积份稀释痰热清注射液，采用MH液体培养基稀释至8体积份，得到含有痰热清的MH液体培养基(培养基甲)。将菌株161017接种于含有培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代。
将菌株161017接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代对照。
2、将步骤1得到的逆转1代单菌落接种于培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代。
将步骤1得到的逆转1代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代对照。
3、将步骤2得到的逆转2代单菌落接种于培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代。
将步骤2得到的逆转2代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代对照。
4、将步骤3得到的逆转3代单菌落接种于培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代。
将步骤3得到的逆转3代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代对照。
5、将步骤4得到的逆转4代单菌落接种于培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代。
将步骤4得到的逆转4代对照单菌落接种于培养基甲中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代对照。
二、痰热清注射液对菌株1611099的诱导
1、取1体积份稀释痰热清注射液，采用MH液体培养基稀释至16体积份，得到含有痰热清的MH液体培养基(培养基乙)。将菌株1611099接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代。
将菌株1611099接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代对照。
2、将步骤1得到的逆转1代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代。
将步骤1得到的逆转1代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代对照。
3、将步骤2得到的逆转2代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代。
将步骤2得到的逆转2代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代对照。
4、将步骤3得到的逆转3代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代。
将步骤3得到的逆转3代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代对照。
5、将步骤4得到的逆转4代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代。
将步骤4得到的逆转4代对照单菌落接种于含有2063μg/mL痰热清注射液的MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代对照。
三、痰热清注射液对标准菌株ATCC43300的诱导
1、将ATCC43300接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代。
将ATCC43300接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转1代对照。
2、将步骤1得到的逆转1代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代。
将步骤1得到的逆转1代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转2代对照。
3、将步骤2得到的逆转2代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代。
将步骤2得到的逆转2代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转3代对照。
4、将步骤3得到的逆转3代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代。
将步骤3得到的逆转3代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转4代对照。
5、将步骤4得到的逆转4代单菌落接种于培养基乙中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代。
将步骤4得到的逆转4代对照单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养16-18h，取0.1mL菌液均匀涂布于MH固体培养基上，37℃静置培养至菌落生长，记为逆转5代对照。
实施例3、诱导后各代菌株的最低抑菌浓度值测定
待测菌株：菌株161017(原代、逆转1代-逆转5代、逆转1代对照-逆转5代对照)、菌株1611099(原代、逆转1代-逆转5代、逆转1代对照-逆转5代对照)和菌株ATCC43300(原代、逆转1代-逆转5代、逆转1代对照-逆转5代对照)。
一、细菌的活化和培养
将待测菌株单菌落接种于MH液体培养基中，37℃、280rpm振荡培养18-24h，收集菌液，采用MH液体培养基稀释至OD600nm＝0.02，得到待测菌液。
二、最低抑菌浓度值测定
1、采用MH液体培养基将万古霉素配置为不同浓度(8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL、0.063μg/mL、0.031μg/mL、0.016μg/mL)的万古霉素检测液。
2、采用MH液体培养基将替考拉宁配置为不同浓度(8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL、0.063μg/mL、0.031μg/mL、0.016μg/mL)的替考拉宁检测液。
3、采用MH液体培养基将庆大霉素配置为不同浓度(1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL)的庆大霉素检测液。
4、采用MH液体培养基将阿米卡星配置为不同浓度(1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL)的阿米卡星检测液。
5、取无菌96孔平底微量板，分为4组进行操作：
第1组：分别加入步骤1制备的不同浓度的万古霉素检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第2组：分别加入步骤2制备的不同浓度的替考拉宁检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第3组：分别加入步骤3制备的不同浓度的庆大霉素检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
第4组：分别加入步骤4制备的不同浓度的阿米卡星检测液(每孔100μL)，再加入步骤一制备的待测菌液(每孔100μL)；
每组设置阳性对照和阴性对照；阳性对照孔加入100μLMH液体培养基和100μL步骤一制备的待测菌液；阴性对照孔加入200μLMH液体培养基。
6、将步骤5的无菌96孔平底微量板37℃静置培养24h，每孔加入0.25％TTC溶液，继续静置培养2h，培养结束后眼观察培养孔，呈现红色为有菌生长，在阴性对照孔为参照前提下，判断药物的MIC值。实验重复3次。
菌株161017(原代、逆转1代-逆转5代)的检测结果如表2、图3和图4所示。
菌株161017(原代、逆转1代对照-逆转5代对照)的检测结果如表3、图5和图6所示。
表2痰热清注射液诱导后菌株1611017对抗菌药MIC的变化
表3 MH培养基空白诱导后菌株1611017对抗菌药MIC的变化
结果表明，经过痰热清注射液联系诱导5代后，菌株161017对万古霉素MIC值由原代的2μg/mL降至1μg/mL；同时替考拉宁的MIC值由原代的8μg/mL降至1μg/mL，说明经过痰热清注射液连续诱导后耐药菌对糖肽类抗生素的敏感性有恢复。MH培养基空白培养各代对万古霉素和替考拉宁的MIC值均无变化。
菌株1611099(原代、逆转1代-逆转5代)的检测结果如表4、图7和图8所示。
菌株1611099(原代、逆转1代对照-逆转5代对照)的检测结果如表5、图9和图10所示。
表4痰热清注射液诱导后菌株1611099对抗菌药MIC的变化
表5 MH培养基空白诱导后菌株1611099对抗菌药MIC的变化
结果表明，经过痰热清注射液联系诱导5代后，菌株1611099对庆大霉素MIC值由原代的256μg/mL降至≤2μg/mL；同时阿米卡星的MIC值由原代的128μg/mL降至8μg/mL，说明经过痰热清注射液连续诱导后耐药菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性有恢复。MH培养基空白培养各代对庆大霉素和阿米卡星的MIC值均无变化。
标准菌株ATCC43300(原代、逆转1代-逆转5代)的检测结果如表6、图11-14所示。
标准菌株ATCC43300(原代、逆转1代对照-逆转5代对照)的检测结果如表7、图15-18所示。
表6痰热清注射液诱导后ATCC43300对抗菌药MIC的变化
表7 MH培养基空白诱导后ATCC43300对抗菌药MIC的变化
经过痰热清注射液联系诱导5代后，标准菌株ATCC43300对庆大霉素和阿米卡星的MIC值均有所下降，分别由原代的256μg/mL和128μg/mL降至128μg/mL和64μg/mL；由于标准菌株ATCC43300对万古霉素和替考拉宁敏感，因此经痰热清注射液诱导5代后MIC值基本无变化。结果表明，痰热清注射液与传统抗生素不同，在连续用药后不会诱导耐药细菌的出现。MH培养基空白培养各代对庆大霉素、阿米卡星、万古霉素和替考拉宁的MIC值均无变化。
Claims (10)
1.痰热清在制备产品中的应用；所述产品的用途为如下(a1)-(a3)中的至少一种：
(a1)降低耐药细菌的耐药性；
(a2)治疗耐药细菌感染性疾病；
(a3)抑制耐药细菌传播。
2.一种产品，其活性成分为痰热清；所述产品的用途为如下(a1)-(a3)中的至少一种：
(a1)降低耐药细菌的耐药性；
(a2)治疗耐药细菌感染性疾病；
(a3)抑制耐药细菌传播。
3.如权利要求1所述的应用，或，权利要求2所述的产品，其特征在于：所述耐药细菌为耐药金黄色葡萄球菌。
4.如权利要求3所述的应用或产品，其特征在于：所述耐药金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
5.一种降低耐药细菌的耐药性的方法，包括如下步骤：使用痰热清多代处理所述耐药细菌，使所述耐药菌细耐药性降低。
6.一种制备耐药性降低的细菌的方法，包括如下步骤：使用痰热清多代处理耐药细菌，得到耐药性降低的细菌。
7.权利要求6所述的方法制备得到的耐药性降低的细菌。
8.一种试剂盒，包括痰热清和细菌培养基；所述试剂盒的用途为降低耐药细菌的耐药性。
9.一种用于抑制耐药细菌的试剂盒，包括痰热清和抗菌药物。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所抗菌药物为糖肽类抗生素或氨基糖苷类抗生素。
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