CN108420814A

CN108420814A - 一种nps-2143用于抗菌的新用途

Info

Publication number: CN108420814A
Application number: CN201710079877.8A
Authority: CN
Inventors: 罗有福; 杨涛; 魏于全
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2017-02-15
Filing date: 2017-02-15
Publication date: 2018-08-21

Abstract

本发明公开了一种NPS‑2143抗菌的新用途，NPS‑2143系统名为2‑氯‑6‑[(2R)‑3‑[[1,1‑二甲基‑2‑(2‑萘基)乙基]氨基]‑2‑羟基丙氧基]苯腈。提供一种NPS‑2143抑制革兰氏阳性菌及其持留菌的用途。经过对多株革兰氏阳性菌生长抑制活性的测定结果表明，NPS‑2143对常见的革兰氏阳性菌，例如MSSA菌株（ATCC 25923）、MSSA菌株（ATCC 6538）和MRSA菌株(ATCC 33591)等具有较好的抑制活性。NPS‑2143具有抑制敏感性革兰氏阳性菌、耐药性革兰氏阳性菌及在抗持留菌方面优于环丙沙星(CPFX)的优越性，在新型抗菌药物的开发方面具有应用前景。

Description

一种NPS-2143用于抗菌的新用途

技术领域

本发明涉及NPS-2143化合物作为抗菌的新用途，属生物医药领域。

背景技术

革兰氏阳性菌是能够用革兰氏染色染成深蓝或紫色的细菌，其细胞壁较厚，肽聚糖含量丰富。革兰氏阳性菌在临床感染中占有的比例很高，金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、肺炎双球菌等是革兰氏阳性病原菌的代表，可引发局部化脓感染、肺炎、心包炎等多种疾病。

金黄色葡萄球菌是一种重要的人类和动物病原体细菌，能够引起多种类型的感染性疾病，在临床上主要通过抗生素来进行治疗。然而随着耐药性菌株，特别是甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌（MRSA）的全球性传播，使MRSA成为难以对付的ESKAPE病原菌之一。我国耐药监测研究显示，MRSA在2001年的分离率为37.4%，2002~2003年增加到41.0%，2005年就已达到51.3%。MRSA感染导致日益增加的发病率、死亡率，恶性侵染、多重耐药性和医院感染的爆发，成为威胁公众健康的主要问题之一。目前临床上用于治疗MRSA感染的药物主要有替考拉林、万古霉素、利奈唑胺、达托霉素和替加环素，而其中作为一线用药的万古霉素和利奈唑胺等都已被报道出现相应的耐药问题。除了基因突变引起的细菌耐药外，还存在难以被高浓度药物杀灭，在抗生素压力降低后有可以繁殖再生的持留菌。临床中潜在的细菌感染、慢性感染的治疗失败以及细菌生物膜的多药耐药性，都与持留菌有关。为了保证有效的治疗，寻找具有新骨架，能影响持留菌的新型抗MRSA药物已经成为一个迫切问题。

NPS-2143是一种选择性的Ca²⁺受体拮抗剂,具有潜在的治疗骨质疏松症的药理活性。NPS-2143可以刺激甲状旁腺素(PTH)的分泌，在大鼠体内，NPS-2143可使血浆PTH水平快速增加，同时可瞬间增加血浆Ca²⁺浓度。但是目前为止，该化合物还没有用于抗菌应用方面的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种NPS-2143的抗菌新用途。

本发明提供的新用途为NPS-2143抑制革兰氏阳性菌及其持留菌。

在本发明中，该新用途具体表现为：NPS-2143在制备具备用于抑制革兰氏阳性菌生长和/或治疗革兰氏阳性菌引起的相关感染功能的产品中的应用和/或NPS-2143在制备具备用于抑制持留菌，减少持留菌数量及联合治疗中作为杀灭持留菌的增效剂和/或治疗金黄色葡萄球菌持留菌引起的慢性感染。

经过MIC测定及抗持留菌活性筛选实验表明该化合物对上述金黄色葡萄球菌及该细菌的持留菌具有良好的抑制率。这一发明大大拓宽了NPS-2143的应用范围，为将该类化合物开发为新的抗菌化合物及抗菌增效剂提供了新的思路。

附图说明

图1为实施例2结果（不同浓度NPS-2143的时间-杀菌曲线）。A 为NPS-2143对MRSA菌株（ATCC 33591）的时间杀菌曲线；B为NPS-2143对MSSA菌株（ATCC 25923）的时间杀菌曲线。

图2为实施例3结果（NPS-2143可抑制金黄色葡萄球菌持留菌的生长）。

具体实施方式

实施例1、NPS-2143可抑制金黄色葡萄球菌的生长。

挑取ATCC 33591或ATCC 25923或ATCC 6538单菌落接种于5 mL MHB培养基中，37℃，250 rpm培养过夜。将过夜培养菌液以1:100转接于含5 ml MHB培养基中，37 ℃，250rpm，3-4 h（培养至OD₆₀₀＝0.5~0.6）。用MHB培养基稀释菌液至1×10⁵ CFU/mL。

采用高通量筛选二倍稀释法,将药物比对稀释成一系列的浓度(如: 64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μg/mL)并将之与等量的细菌稀释液混合置于 96 孔板中,每一个浓度药物做 3-4 个复孔,并采用利奈唑胺做阳性对照,设定不加药物的空白对照。细菌于孵箱培养 24小时,检测各孔的OD₆₀₀值,计算抑制率,抑制率大于50 %的孔对应的浓度定义为 MIC₅₀ 值。

表1 NPS-2143可抑制金黄色葡萄球菌的生长结果。

结果发现化合物NPS-2143对MSSA菌株（ATCC 25923）和MRSA菌株（ATCC 33591、ATCC 6538）均表现出微克级别的抗菌活性。

实施例2、不同浓度NPS-2143的时间-杀菌曲线。

挑取ATCC 33591或ATCC 25923单菌落接种于5 mL MHB培养基中，37 ℃，250 rpm培养过夜。将过夜培养菌液以1:100转接于含5 mL MHB培养基中，37 ℃，250 rpm，3-4 h（培养至OD₆₀₀＝0.5~0.6）。用MHB培养基稀释菌液至1×10⁵ CFU/mL，取3 mL稀释后菌液加入试管中。每个试管中分别加入终浓度为0 MIC、1/4 MIC、1/2 MIC、1 MIC、2 MIC、4 MIC的最优化合物，培养0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、36 h、 48 h、72 h取样测定，将不同时间点取得的菌液，分别稀释10^-3、10^-6、10^-9倍，涂菌液在MHA上，置于37 ℃培养箱培养24小时，最后菌落数以log10/CFU表示.以时间为X轴，活菌数量（CFU）为Y轴，绘制不同浓度NPS2143的时间-杀菌曲线。

结果发现，NPS2143在1MIC浓度时，可以明显减少细菌数量，在药物作用24 h后，细菌数量会有轻微增长，但增长量不超过1 log (CFU/mL)。

实施例3、NPS-2143可抑制金黄色葡萄球菌持留菌的生长。

采用环丙沙星控制构建持留菌模型的时间。取保种的ATCC 33591于5 mL MHB培养基中，37 ℃，250 rpm培养过夜。将过夜培养菌液以1:1000转接于含10 mL MHB培养基中，设置加入3 μg/mL环丙沙星对照组及空白对照组，37 ℃，250 rpm，于0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8h, 10 h, 12 h, 24 h测定OD₆₀₀值，并取菌液分别稀释10^-3、10^-6、10^-9倍，涂菌液在MHA上，置于37℃培养箱培养24小时计数，以时间为横坐标，Log (CFU/mL)为纵坐标作图，确认持留菌模型构建的时间点。

取保种的ATCC 33591于5 mL MHB培养基中，37 ℃，250 rpm培养过夜。将过夜培养菌液以1:1000转接于含3 mL MHB培养基中，37 ℃，250 rpm至平台期。加入不同浓度的待测化合物，以10 μg/mL环丙沙星为对照，空白对照中不加入任何药物。于24 h, 48 h, 72 h分别取样测定OD₆₀₀值及并取菌液分别稀释10^-3、10^-6、10^-9倍，涂菌液在MHA上，置于37 ℃培养箱培养24小时计数，以时间为横坐标，Log (CFU/mL)为纵坐标作图，与空白及阳性对照比较观察化合物的抗持留菌活性。

结果发现，NPS-2143在40 μg浓度下具有减少持留菌的作用。

Claims

1.一种NPS-2143，系统名：2-氯-6-[(2R)-3-[[1,1-二甲基-2-(2-萘基)乙基]氨基]-2-羟基丙氧基]苯腈，用于抑制革兰氏阳性菌和/或持留菌的用途。

2.NPS-2143在制备具备抑制金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等革兰氏阳性菌生长功能的产品中的应用。

3.NPS-2143在制备具备治疗金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等革兰氏阳性菌相关感染功能的产品中的应用。

4.NPS-2143在制备具备抑制持留菌，减少持留菌数量，联合治疗中作为杀灭持留菌的增效剂产品中的应用。

5.NPS-2143在制备具备治疗持留菌引起的慢性感染功能的产品中的应用。

6.根据权利要求1或2或3所述的用途，其特征在于所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等。

7.根据权利要求1或3所述的用途，其特征在于所述持留菌为金黄色葡萄球菌持留菌。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于所述的金黄色葡萄球菌为敏感性金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌。