CN108653342B - 一种微生物抗菌提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种微生物抗菌提取物，源自海南黄肉牛肝菌子实体，为海南黄肉牛肝菌子实体的乙醇提取物。本发明的微生物抗菌提取物具有良好的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌等都有抑制作用，在对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌等所致病害或疾病的防治中具有广阔的发展空间，在抗菌药物方面具有很好的开发应用前景。

Description

一种微生物抗菌提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种抗菌物，尤其涉及一种源自海南黄肉牛肝菌子实体的微生物抗菌提取物及其制备方法和应用。
背景技术
海南黄肉牛肝菌(Butyriboletus hainanensis N.K.Zeng,Zhi Q.Liang&S.Jiang)在分类上隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、牛肝菌目(Boletales)、牛肝菌科(Boletaceae)，为2016年在海南鹦哥岭发现的真菌新物种。海南黄肉牛肝菌主要特征是个体大，菌盖直径成熟时可达20厘米，用手触摸菌盖下的菌孔以及菌肉，会迅速变蓝色，之后再变成红色，最后变为黑色。
抗生素和合成抗菌药物的发现、发明和应用是20世纪医药领域最伟大的成就之一。人类应用抗生素和合成抗菌药物有效地治愈了各类严重的细菌感染性疾病，卓有成效地降低了各种严重细菌感染性传染病的死亡率，进而掀起了抗菌药物的研发和广泛应用的高潮。
20世纪中叶，已上市的抗生素原料药已达500余种，其中在临床上常用的品种高达数百余种。虽然人类在抗菌药物开发和应用方面获得了巨大成就，但是人们很快发现一些原本容易治疗的细菌感染性疾病现在有了新的变化，原本有效的抗生素或合成抗菌药物已经不再能有效控制感染了；致病细菌对抗生素产生耐药的事实，很快就被证实，而且一些致病菌耐药性发生和传播非常迅速。因此，控制抗生素滥用的同时，需要不断地寻求新的抗菌物质。
大型真菌是极具开发潜力的天然资源，从大型真菌中寻找新的抗菌活性物质，是现代医药、保健行业发展的重要方向。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种源自海南黄肉牛肝菌子实体的微生物抗菌提取物及其制备方法和应用，该微生物抗菌提取物具有良好的抗菌作用。
本发明的第一个方面是提供一种微生物抗菌提取物，其为海南黄肉牛肝菌子实体的乙醇提取物。
本发明的第二个方面是提供一种本发明第一个方面所述的微生物抗菌提取物的制备方法：取海南黄肉牛肝菌，采用醇提法提取得到。
其中，醇提法使用的乙醇浓度为制药领域乙醇提取活性物质的常规浓度，可以为≥50％，例如50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或无水乙醇等。
其中，醇提法的温度为20-40℃，如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、35℃、36℃、38℃或40℃等。
优选地，醇提法为：取海南黄肉牛肝菌，加入适量浓度≥50％的乙醇，于20-40℃下进行醇提得到。
进一步优选地，醇提法操作如下：将海南黄肉牛肝菌子实体干燥，捣碎，加入适量浓度≥50％的乙醇，室温浸泡20-100min后，于20-40℃，超声波提取10-120min，趁热抽滤，浓缩滤液即得。
应当理解的，醇提法可以不进行浸泡，也可以采取超声波提取以外的方式提取，例如机械搅拌等等。
本发明的第三个方面是提供一种抗菌剂，其活性成分含有本发明第一个方面所述的微生物抗菌提取物。
本发明的第四个方面是如本发明的第一个方面所述的微生物抗菌提取物或本发明的第三个方面所述的抗菌剂在制备抑菌剂或杀菌剂中的应用。
本发明的第五个方面是如本发明的第一个方面所述的微生物抗菌提取物或本发明的第三个方面所述的抗菌剂在拮抗金黄色葡萄球菌、和/或表皮葡萄球菌、和/或枯草芽孢杆菌、和/或普通变形杆菌的应用。
本发明的第六个方面是如本发明的第一个方面所述的微生物抗菌提取物或本发明的第三个方面所述的抗菌剂在制备防治金黄色葡萄球菌、和/或表皮葡萄球菌、和/或枯草芽孢杆菌、和/或普通变形杆菌所致病害或疾病的制剂中的应用。
本发明的微生物抗菌提取物源自海南黄肉牛肝菌子实体，为其乙醇提取物，具有良好的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌等都有较明显的抑制作用，在对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌等所致病害或疾病的防治中具有广阔的发展空间，在抗菌药物方面具有很好的开发应用前景。
附图说明
图1为海南黄肉牛肝菌子实体的照片。
具体实施方式
下面参照附图，结合具体的实施方式对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。
1原材料
海南黄肉牛肝菌(Butyriboletus hainanensis N.K.Zeng,Zhi Q.Liang&S.Jiang)在分类上隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、牛肝菌目(Boletales)、牛肝菌科(Boletaceae)，为2016年在海南鹦哥岭发现的真菌新物种。海南黄肉牛肝菌主要特征是个体大，菌盖直径成熟时可达20公分，用手触摸菌盖下的菌孔以及菌肉，会迅速变蓝色，之后再变成红色，最后变为黑色。
2供试细菌
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidi)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和普通变形杆菌(Proteus vulgaris)。
3抑菌活性物质的提取制备
海南黄肉牛肝菌子实体60℃干燥，捣碎，称取50g,按1:10的比例加入80％乙醇，室温浸泡40min后，于35℃、频率40kHz超声波提取60min，趁热抽滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩得到乙醇提取物，用50mL甲醇将提取物溶解后过滤，滤液中子实体的质量浓度为1g/mL，作为醇提物供试药液。
4供试细菌菌液的制备
挑取在新鲜斜面培养基上培养2h的供试菌种，接种至营养肉汤培养基中，摇匀后于37℃培养24h，菌液浓度约为108cfu/mL，将此菌液用无菌0.9％氯化钠溶液稀释到1.5×105cfu/mL，备用。
5体外抗细菌活性测定
将100μL稀释菌液与冷却的营养琼脂培养基15mL混合后，倒入直径为9cm的平皿中静置冷凝；用无菌打孔器在琼脂平板上均匀打上3个直径为6mm的孔，相邻两孔之间距离30mm以上，挑出孔内琼脂培养基，将不同浓度的供试药液滴入孔内(每孔30μL)，阴性对照滴加生理盐水，阳性对照滴加含有卡那霉素的0.9％氯化钠溶液(100mg/mL)。所有平板置37℃培养箱内培养24h，观察、测定抑菌圈大小。每个处理3个重复，测定结果采用统计软件SPSS16.0进行数据分析。
6抑制细菌的最小浓度测定
取含海南黄肉牛肝菌子实体1g/mL的供试药液，采用二倍稀释法对供试药液进行梯度稀释，在各稀释管中加入100μL浓度为104-105cfu/mL的菌悬液，混匀，置培养箱内37℃培养24h后,每管吸取100μL涂布于营养琼脂培养基上，置培养箱内37℃培养24h，以平板中无供试菌落生成的最低药液浓度为供试药液对该菌的最小抑菌浓度。
7结果
结果见表1和表2。由表1可知，海南黄肉牛肝菌子实体乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和普通变形杆菌均具有良好的抑制作用，其抑菌圈直径与阴性对照相比，均具有显著性差异。进一步研究表明，海南黄肉牛肝菌子实体乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和普通变形杆菌的最小抑制浓度分别为0.125g/mL，0.25g/mL，0.125g/mL和0.500g/mL(表2)。
表1海南黄肉牛肝菌子实体乙醇提取物的抗细菌活性(x±s.d.,n＝3)
Figure BDA0001724582160000041
注：与阴性对照相比，*P<0.05,**P<0.01。
表2海南黄肉牛肝菌乙醇提取物抑制细菌的最小浓度测定(g/mL)
Figure BDA0001724582160000042
Figure BDA0001724582160000051
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (4)

1.一种微生物抗菌提取物，其特征在于，其为海南黄肉牛肝菌（Butyriboletus hainanensis）子实体的乙醇提取物，将海南黄肉牛肝菌子实体干燥，捣碎，加入适量浓度≥50％的乙醇，室温浸泡20-100min后，于20-40℃，超声波提取10-120min，趁热抽滤，浓缩滤液即得。
2.一种如权利要求1所述的微生物抗菌提取物的制备方法，其特征在于，取海南黄肉牛肝菌采用醇提法提取得到，醇提法操作如下：将海南黄肉牛肝菌子实体干燥，捣碎，加入适量浓度≥50％的乙醇，室温浸泡20-100min后，于20-40℃，超声波提取10-120min，趁热抽滤，浓缩滤液即得。
3.一种抗菌剂，其特征在于，其活性成分含有如权利要求1所述的微生物抗菌提取物。
4.如权利要求1所述的微生物抗菌提取物或权利要求3所述的抗菌剂在制备防治金黄色葡萄球菌、和/或表皮葡萄球菌、和/或枯草芽孢杆菌、和/或普通变形杆菌所致病害或疾病的制剂中的应用。
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Butyriboletus hainanensis（Boletaceae,Boletales）,a new species from tropical China;ZHI QUN LIANG et al;《Phytotaxa》;20160713;第267卷(第4期);256-262，尤其是摘要 *
牛肝菌化学成分及其生物活性的研究进展;王林等;《热带生物学报》;20170331;第8卷(第1期);第127-132页，尤其是第127页摘要、第1段，第129页2.3节 *

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