CN106727736A - 黄牛肝菌活性物质的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄牛肝菌活性物质的制备方法及其应用。本发明在醇提工艺的基础上,辅助碱处理及超声处理,从黄牛肝菌子实体中提取活性物质,能够最大程度地保持所提取的黄牛肝菌活性物质的抗氧化、抗癌、抑菌活性。本发明的制备方法操作简单、提取效率高,适用于大规模的工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种活性物质的制备方法,更具体地,涉及一种黄牛肝菌活性物质的制备方法及其应用。
背景技术
食用菌是一类营养丰富、可供食用的大型真菌。其中,黄牛肝菌是一种广泛分布的野生食用菌,其野生子实体内富含多种氨基酸、维生素、矿物质元素、蛋白质、活性多糖等营养成分,深受人们喜爱。中医学认为“药食同源,食药兼有”。黄牛肝菌不仅是良好的食用佳品,更具有很大的药用价值。目前,已发现黄牛肝菌具有清除氧自由基、防衰老、清热解毒、抑菌消毒等功效。因此,制备黄牛肝菌活性物质,将具有非常大的应用市场。
目前,可采用煎煮法和浸渍法提取黄牛肝菌活性物质。其中,煎煮法提取率往往较低,而且容易破坏活性成分,而浸渍法耗时较长,收率也并不理想。因此开发一种操作简单、提取效率高的黄牛肝菌活性物质的制备方法,非常有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一操作简单、提取效率高的黄牛肝菌活性物质的制备方法及其应用。
本发明所采取的技术方案是:
黄牛肝菌活性物质的制备方法,包括如下步骤:
(1)将黄牛肝菌子实体烘干,粉碎并筛分,制得黄牛肝菌粉;
(2)将黄牛肝菌粉添加到乙醇水溶液中,并添加氢氧化钠,混匀后恒温水浴30~60min;
(3)进行超声处理,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5~7.0;
(4)抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
优选的,步骤(1)的过筛目数为60~120目。
优选的,步骤(2)中,乙醇水溶液的乙醇体积分数为40%~60%。
优选的,步骤(2)中,黄牛肝菌粉按黄牛肝菌粉与乙醇水溶液的质量体积比为0.1g:(5~7)mL添加。
优选的,步骤(2)中,氢氧化钠的添加量以终浓度为0.05~0.1mol/L为准。
优选的,步骤(2)中,恒温水浴温度为30~70℃。
优选的,步骤(3)的超声时长为5~15min。
上述制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗氧化剂中的应用。
上述制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗癌剂中的应用。
上述制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗菌剂中的应用。
本发明的有益效果是:
本发明的黄牛肝菌活性物质的制备方法操作简单、提取效率高,适用于大规模的工业生产,能够最大程度地保持黄牛肝菌活性物质的抗氧化、抗癌、抑菌活性。
具体实施方式
实施例1
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过80目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为45.78%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液6.07mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.07mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先40℃恒温水浴40min;随后开启超声处理,500W超声频率下,处理9.94min,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例2
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过80目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为45.78%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液6.07mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.05mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先40℃恒温水浴60min;随后开启超声处理,400W超声频率下,处理15min,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例3
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过120目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为40%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液6.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.1mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先40℃恒温水浴60min;随后开启超声处理,500W超声频率下,处理10min,迅速冰浴降至室温,调节pH至7.0;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例4
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过120目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为60%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液7.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.1mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先50℃恒温水浴30min;随后开启超声处理,800W超声频率下,处理15min,迅速冰浴降至室温,调节pH至7.0;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例5
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过100目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为60%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液5.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.07mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先50℃恒温水浴30min;随后开启超声处理,400W超声频率下,处理15min,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例6
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过100目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为60%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液5.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.07mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先60℃恒温水浴50min;随后开启超声处理,500W超声频率下,处理5min,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例7
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过60目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为50%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液6.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.08mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先30℃恒温水浴50min;随后开启超声处理,700W超声频率下,处理10min,迅速冰浴降至室温,调节pH至7;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
实施例8
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过60目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为40%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液7.0mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,并添加氢氧化钠至终浓度为0.05mol/L,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;先70℃恒温水浴30min;随后开启超声处理,700W超声频率下,处理5min,迅速冰浴降至室温,调节pH至7;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
对比例1
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过80目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为45.78%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液6.07mL,加入0.1g黄牛肝菌粉,在混合管中充分混匀,固定于超声波浴装置中;500W超声频率下,40℃水浴超声处理9.94min,迅速冰浴降至室温;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
对比例2
将黄牛肝菌子实体烘干至恒重,采用药用粉碎机粉碎,过80目筛,制得黄牛肝菌粉;配制乙醇体积分数为45.78%乙醇水溶液,取所述乙醇水溶液400mL,加入2g黄牛肝菌粉,在混合管中充分混匀,采用索氏提取装置95℃回流提取4h,迅速冰浴降至室温;抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
黄牛肝菌活性物质的抗氧化效果
取实施例1~8及对比例1~2制备得到的黄牛肝菌活性物质,采用ABTS自由基清除能力测定法检测提取的黄牛肝菌活性物质的抗氧化效果。
结果如表1所示,实施例制备的黄牛肝菌活性物质均高于对比例,说明本发明的制备方法能更好的保持黄牛肝菌活性物质的抗氧化活性。
表1 黄牛肝菌活性物质的抗氧化效果
实施例 | 抗氧化值(μmol Trolox/g) |
实施例1 | 46.96±2.69 |
实施例2 | 40.78±3.11 |
实施例3 | 39.88±1.03 |
实施例4 | 38.79±2.49 |
实施例5 | 35.87±2.52 |
实施例6 | 40.16±3.15 |
实施例7 | 39.66±0.57 |
实施例8 | 41.57±3.10 |
对比例1 | 29.11±1.25 |
对比例2 | 17.66±1.07 |
黄牛肝菌活性物质的抗癌效果
取实施例1~8及对比例1~2制备得到的黄牛肝菌活性物质100mg,溶于100mLDMSO中,混匀,制得黄牛肝菌活性物质水溶液,采用MTT法分别检测黄牛肝菌活性物质对A549肺癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞、HepG2肝癌细胞和HT-29大肠癌细胞四种癌细胞生长的影响,以DMSO作为对照。
结果如表2所示,黄牛肝菌活性物质对A549肺癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞、HepG2肝癌细胞和HT-29大肠癌细胞四种癌细胞生长均有良好的抗癌效果,并且实施例显著优于对比例,说明本发明的制备方法能更好的保持黄牛肝菌活性物质的抗癌活性。
表2 黄牛肝菌活性物质的抗癌效果
黄牛肝菌活性物质的抑菌效果
检测黄牛肝菌活性物质对大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌这四种菌的抑菌效果。具体步骤为:称取100mg实施例1~8及对比例1~2制备得到的黄牛肝菌活性物质,溶于100mL水中,混匀,制得黄牛肝菌活性物质水溶液;根据微肉汤稀释法,在96微孔板中加入事先制备好的菌悬液、MH肉汤以及黄牛肝菌活性物质水溶液,使得每个孔内的菌液浓度相同,以去离子水替代黄牛肝菌活性物质水溶液作为对照。将96微孔板放在混匀器上混匀。放入酶标仪,在630nm条件下读取培养前吸光度。然后,将其放入37℃恒温箱中培养21个小时。最后,读取培养后的吸光度(630nm)。通过吸光度改变值计算抑菌率。
表3 黄牛肝菌活性物质的抗菌效果
结果如表3所示,黄牛肝菌活性物质对大肠杆菌有良好的抑菌效果,并且实施例显著优于对比例,说明本发明的制备方法能更好的保持黄牛肝菌活性物质的抗菌活性。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例,对于本领域技术人员来说,在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进,都应被视为本发明的一部分。
Claims (10)
1.黄牛肝菌活性物质的制备方法,包括如下步骤:
(1)将黄牛肝菌子实体烘干,粉碎并筛分,制得黄牛肝菌粉;
(2)将黄牛肝菌粉添加到乙醇水溶液中,并添加氢氧化钠,混匀后恒温水浴30~60min;
(3)进行超声处理,迅速冰浴降至室温,调节pH至6.5~7.0;
(4)抽滤收集滤液,干燥滤液,获得黄牛肝菌活性物质。
2.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(1)的过筛目数为60~120目。
3.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,乙醇水溶液的乙醇体积分数为40%~60%。
4.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,黄牛肝菌粉按黄牛肝菌粉与乙醇水溶液的质量体积比为0.1 g :(5~7) mL添加。
5.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,氢氧化钠的添加量以终浓度为0.05~0.1 mol/L为准。
6.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,恒温水浴温度为30~70℃。
7.根据权利要求1所述的黄牛肝菌活性物质的制备方法,其特征在于:步骤(3)的超声时长为5~15min。
8.权利要求1~7任一项所述的制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗氧化剂中的应用。
9.权利要求1~7任一项所述的制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗癌剂中的应用。
10.权利要求1~7任一项所述的制备方法得到的黄牛肝菌活性物质在制备抗菌剂中的应用。
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