CN104031156B - 夏枯草多糖锌螯合物及其制备方法与在抗癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了夏枯草多糖锌螯合物及其制备方法与在抗癌药物中的应用。该方法包括将夏枯草果穗粉碎，乙醇脱色，加入蒸馏水，回流提取，提取液脱蛋白，超滤，截留液冷冻干燥得多糖；配制10～40mg/mL多糖溶液，加热至40～60℃，用氢氧化钠调节pH，将锌盐溶液缓慢加入到多糖溶液中，反应6～24h，同时用高剪切均质机进行不连续均质处理，用盐酸调节pH，离心得上清液，置于透析袋进行透析，收集透析袋内的溶液，冷冻干燥得夏枯草多糖锌螯合物。本发明产品制备方法简单易行，对人体癌细胞有显著的抗增殖作用，且对人体正常细胞基本无细胞毒性，是一种理想的抗癌症药物或保健品；而且具有补锌功效。

Description

夏枯草多糖锌螯合物及其制备方法与在抗癌药物中的应用

技术领域

本发明涉及夏枯草多糖，生物制药工程和保健食品领域，具体涉及一种夏枯草多糖锌螯合物及其制备方法与在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

夏枯草(PrunellavulgarisL.)，欧洲地区称“self‐heal”，俗名羊肠菜、灯笼头、铁色草、棒柱头花、大头花等，为唇形科夏枯草属植物夏枯草的干燥果穗。夏枯草属植物是一种多年生植物，广泛分布于欧洲和中国，中国主要分布于江苏、浙江、安徽及湖北等地，产4种及3变种，其中1种为引种栽培。其性寒，辛、苦、入肝、胆经，具有清肝火、消肿止痛、清热解毒等功效。夏枯草是一种药食同源的草本，在中国民间，夏枯草作为食疗滋补品被广泛用于治疗咽喉痛、减少发热和促进伤口的愈合等；作为中药用于治疗黄疸、肝炎、糖尿病及肺结核等疾病；在华南地区作为凉茶配方和营养靓汤的成分之一。研究表明夏枯草富含许多重要的生物活性物质，主要包括多糖、三萜及其苷类、甾醇及其苷类、黄酮类、香豆素、有机酸及挥发油等，其主要药理作用表现在降血压、降血脂、抗病毒、抗菌、抗氧化、免疫刺激作用和抗肿瘤等方面。天然植物多糖作为一类具有生物活性的大分子物质，近年来得到广泛的研究，研究证实多糖具有抗氧化、抗病毒、抗辐射、抗衰老、免疫调节及抗肿瘤等多种生物活性。

锌是一种与生命攸关的微量元素之一，在人体所含有的金属微量元素中含量仅次于铁，在生命活动过程中起着转换物质和交流能量的“生命齿轮”作用。锌是参与酶的重要成分，迄今为止，与人体有关的含锌酶大约100余种，研究表明许多种类含锌的调节蛋白对DNA合成、基因表达、诱导细胞凋亡及细胞分化与繁殖等生命过程方面起着非常重要的作用。

同时，由于中国居民的膳食结构以素食为主，我国居民的锌摄入量普遍偏低。目前市场上常见的补锌产品多为无机金属盐，其锌源吸收形式为离子锌，锌离子在人体消化道内往往容易与其它阴离子发生反应，产生沉淀，水溶性差，生物利用率低，副作用大等缺点。而糖金属螯合物具有无毒，具有较好的生物兼容性，易于人体吸收。目前国内外未有关于夏枯草多糖锌螯合物的制备及抗癌药物中应用的报道。

发明内容

针对上述情况，本发明所解决的技术问题在于提供一种具有抗癌作用的夏枯草多糖锌螯合物及其制备方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

1、夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过筛，加入乙醇加热回流，夏枯草粉与乙醇的质量比为1:3～1:6，温度60～90℃，回流时间为2～6h，离心分离得残留物，残留物重复上述操作2～4次，在45～55℃的鼓风干燥箱中干燥24～36h，即得夏枯草粉；

(2)多糖提取：夏枯草粉加入蒸馏水进行热水浸提，夏枯草粉与蒸馏水的质量比为1:20～1:40，提取温度为65～100℃，时间为2～6h，离心分离得提取液，回流提取2～5次，合并提取液，在50～60℃下减压浓缩到原体积的1/4～1/10，得多糖浓缩液；在所述多糖浓缩液中加入Sevag试剂，多糖浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1～6:1，振荡20～60min，离心处理分离除去蛋白质，重复脱蛋白10～20次；然后加入3～5倍多糖浓缩液体积的蒸馏水进行稀释，进行超滤，截留分子量大小5～10KDa，回收截留液，冷冻干燥得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为10～40mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至40～60℃，用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，持续搅拌下，逐滴加入锌盐溶液，其多糖溶液中固形物质量和锌盐的质量比为1:1～1:4，继续在40～60℃下搅拌6～24h，反应期间每隔1～2小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速8000～20000r/min，每次均质1～2min，得夏枯草多糖锌螯合物混合液；所述锌盐为氯化锌、高氯酸锌和醋酸锌中的一种；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物混合液，用盐酸调节pH至4～5，离心取上清液，置于透析袋中进行透析，将透析袋中的溶液冻干，即得夏枯草多糖锌螯合物。

为进一步实现本发明目的，优选地，所述乙醇的体积百分比为95％；所述过筛为过30～60目筛。

所述的Sevag试剂为氯仿与正丁醇的混合溶液，其体积比3:1～6:1。

所述步骤(1)和(2)离心分离的离心力为4000～10000g，离心时间为10～15min；步骤(5)中离心力为4000～10000g，离心时间为2～5min。

所述冷冻干燥是在‐60±5℃，0.08～0.1MPa真空度下干燥36～48h，干燥后的样品中水分的质量百分含量低于4％。

所述锌盐溶液的浓度为30～100mg/mL，将锌盐加入蒸馏水中，用盐酸溶液调节锌盐溶液pH值为2～3制成。

所述氢氧化钠和盐酸溶液的质量浓度均为3～5％。

所述透析的时间为2～4d，透析袋截留的分子量为1～5KDa。

一种夏枯草多糖锌螯合物，其由上述制备方法制得。

所述夏枯草多糖锌螯合物在制备抗癌药物和保健品中的应用。

本发明的夏枯草多糖锌螯合物主要以口服形式使用，可制成口服溶液、颗粒剂、片剂、丸剂等药物和保健品。

以上操作步骤如无特别说明，均按本领域常规操作。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

(1)本发明采用截留分子量5～10KDa超滤膜对提取液进行超滤，得到具有良好与锌螯合的多糖，分子量在10～2000KDa范围内，经测定发现，夏枯草多糖锌螯合物中锌含量可超过10mg/g。

(2)采用高剪切均质机对反应体系进行不连续均质处理，提高了反应效率，产品锌含量提高15～25％。

(3)本发明首次合成了夏枯草多糖锌螯合物，并且发现具有显著的抗癌效果，而且对人体正常细胞基本无毒性，是一种理想的具有抗癌作用的药物或保健品，可用于恶性肿瘤的辅助治疗，同时具有补锌作用。

(4)本发明的夏枯草多糖锌螯合物作为有机锌盐，溶解性好，在pH4～10范围内具有较高的稳定性，也就是人体肠胃具有较高的稳定性，适合用作人体补锌制剂；

(5)本发明制备方法简单，生产效率高，产品质量好的特点。

附图说明

图1为实施例1夏枯草多糖的红外光谱图。

图2为实施例1夏枯草多糖锌螯合物的红外光谱图。

图3为实施例5夏枯草多糖锌螯合物对癌细胞抑制作用效果图；其中图3A为空白对照，图3B为细胞抑制率50％的细胞形态，图3C为细胞抑制率达90％以上的细胞形态。

具体实施方式

结合实施例对本发明做进一步说明，本发明的实施方式及形式不限于此。

实施例1

(1)夏枯草原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过30目筛，加入95％(v/v)的乙醇，夏枯草粉与95％乙醇的质量比为1:3，温度60℃，回流时间为2h，离心分离得残留物，残留物重复上述操作2次，在45℃下干燥24h，即得夏枯草样品；

(2)多糖提取：加入蒸馏水进行热水浸提，夏枯草样品与蒸馏水的质量比为1:20，温度为65℃，时间为2h，离心分离提取液，回流提取2次，合并提取液，在50℃下减压浓缩到原体积的1/4，得多糖浓缩液；在上述浓缩液中加入Sevag试剂，浓缩液与Sevag试剂(氯仿:正丁醇＝3:1)的体积比为3:1，振荡20min，离心除去变性的蛋白质，重复脱蛋白10次；加入3倍体积的蒸馏水进行稀释，采用截留量5KDa的膜片进行超滤，截留液冷冻干燥36h，得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为10mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至40℃，用氢氧化钠溶液调节pH至8，在搅拌下，缓慢逐滴加入氯化锌溶液(氯化锌浓度30mg/mL，用盐酸溶液调节氯化锌溶液pH值为2制成)，其多糖和氯化锌的质量比为1:1，继续在40℃下搅拌6h，反应期间每隔1小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速8000r/min，每次均质1min，得多糖锌螯合物溶液；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物溶液，用盐酸调节pH至4，离心得上清液，置于截留分子量1KDa的透析袋中透析2d，把透析袋中的溶液冷冻干燥36h，得夏枯草多糖锌螯合物。

夏枯草锌螯合物的鉴定及理化性质：(1)称取样品于锥形瓶中，加入混合酸10mL(硝酸:高氯酸＝4:1)，加盖消化过夜，在电热板上消解，再加混合酸直至冒白烟，消化液呈无色透明，将消化液无损失地转移到25mL的容量瓶中，用蒸馏水定容，使用Z‐5000系列原子吸收分光光度计(AAS)，采用锌标准溶液绘制标准曲线，测得样品中的锌含量为10.7mg/g。

(2)样品的红外图谱用Nicolet510红外光谱仪获得，取夏枯草多糖和样品各3mg，分别与干燥KBr混匀，置于红外干燥箱中充分干燥，研磨后压片，光谱在400‐4000cm^‐1范围内扫描，扫描分辩率为2cm^‐1，其红外吸收图谱如附图1、2，图1是夏枯草多糖的红外光谱图，图2是本发明制备的样品的红外光谱图。通过对比，夏枯草多糖与多糖锌螯合物的红外谱图很相似，表明它们具有相同的基本骨架。夏枯草多糖在3412cm^‐1和2935cm^‐1处吸收峰为O‐H和C‐H的伸缩振动吸收峰，在1147cm^‐1和1046cm^‐1处特征吸收峰为C‐O伸缩振动吸收峰，1634cm^‐1处吸收峰峰是δ(OH)弯曲振动吸收峰。但是，与夏枯草多糖相比，多糖锌螯合物的某些吸收峰有所减弱，在3421cm^‐1处吸收宽峰减弱变窄，说明O‐H键减少，同时该吸收峰向高波段移动，说明O‐H基团与锌发生了配位反应，而在1047cm^‐1处C‐O伸缩振动吸收峰也显著减弱，因此可推断夏枯草多糖与锌螯合为C‐O‐Zn。

(3)理化性质：称取3mg样品溶解在蒸馏水中，不断调节溶液的pH值从4到10，观察样品的溶解性和稳定性变化，并干燥后测量其锌含量的变化。结果表明溶液pH值在4到10范围内，溶液无沉淀发生，干燥后测得样品的锌含量基本不变，因此本发明的夏枯草多糖锌螯合物具有较好的溶解性和稳定性。

实施例2

(1)夏枯草原料预处理：夏枯草原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过60目筛，加入95％(v/v)的乙醇，夏枯草粉与95％乙醇的质量比为1:4，温度90℃，回流时间为6h，离心分离得残留物，残留物重复上述操作4次，在60℃下干燥36h，即得夏枯草样品；

(2)多糖提取：加入蒸馏水热水浸提，夏枯草样品与蒸馏水的质量比为1:40，温度为100℃，时间为6h，离心分离提取液，回流提取5次，合并提取液，在60℃减压下浓缩到原体积的1/6，得多糖浓缩液；在上述浓缩液中加入Sevag试剂，浓缩液与Sevag试剂(氯仿:正丁醇＝6:1)的体积比为5:1，振荡40min，离心除去变性的蛋白质，重复脱蛋白15次；加入5倍体积的蒸馏水进行稀释，采用截留量10KDa的膜片进行超滤，截留液冷冻干燥48h，得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为40mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至60℃，用氢氧化钠溶液调节pH至9，在搅拌下，缓慢逐滴加入高氯酸锌溶液(高氯酸锌溶液浓度100mg/mL，用盐酸溶液调节高氯酸锌溶液pH值为3制成)，其多糖和氯化锌的质量比为1:4，继续在60℃内搅拌24h，反应期间每隔2小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速20000r/min，每次均质2min，得多糖锌螯合物溶液；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物溶液，用盐酸调节pH至5，离心取上清液，置于截留分子量5KDa的透析袋中透析4d，把透析袋中的溶液冷冻干燥48h，得夏枯草多糖锌螯合物，经测定锌含量为14.5mg/g，其它检测步骤和结果基本同实施例1。

实施例3

(1)夏枯草原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过50目筛，加入95％(v/v)的乙醇，夏枯草粉与95％乙醇的质量比为1:5，温度75℃，回流时间为6h，离心得残留物，残留物重复上述操作4次，在50℃下干燥30h，即得夏枯草样品；

(2)多糖提取：加入蒸馏水进行热水浸提，夏枯草样品与蒸馏水的质量比为1:30，温度为85℃，时间为4h，离心分离提取液，回流提取3次，合并提取液，在60℃减压下浓缩到原体积的1/8，得多糖浓缩液；在上述浓缩液中加入Sevag试剂，浓缩液与Sevag试剂(氯仿:正丁醇＝4:1)的体积比为6:1，振荡60min，离心除去变性的蛋白质，重复脱蛋白12次；加入4倍体积的蒸馏水进行稀释，采用截留量8KDa的膜片进行超滤，截留液冷冻干燥48h，得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为25mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至50℃，用氢氧化钠溶液调节pH至8.5，在搅拌下，缓慢逐滴加入氯化锌溶液(醋酸锌溶液浓度60mg/mL，用盐酸溶液调节醋酸锌溶液pH值为2.5制成)，其多糖和氯化锌的质量比为1:3，继续在50下内搅拌18h，反应期间每隔1小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速10000r/min，每次均质1min，得多糖锌螯合物溶液；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物溶液，用盐酸调节pH至4.5，离心得上清液，置于截留分子量3.5KDa的透析袋中透析3d，把透析袋中的溶液冷冻干燥48h，得夏枯草多糖锌螯合物，经测定锌含量为13.2mg/g，其它检测步骤和结果基本同实施例1。

实施例4

(1)夏枯草原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过30目筛，加入95％(v/v)的乙醇，夏枯草粉与95％乙醇的质量比为1:10，温度75℃，回流时间为5h，离心分离得残留物，残留物重复上述操作3次，在45℃下干燥24h，即得夏枯草样品；

(2)多糖提取：加入蒸馏水进行热水浸提，夏枯草样品与蒸馏水的质量比为1:25，温度为95℃，时间为3h，离心分离提取液，回流提取5次，合并提取液，在50℃减压下浓缩到原体积的1/4，得多糖浓缩液；在上述浓缩液中加入Sevag试剂，浓缩液与Sevag试剂(氯仿:正丁醇＝5:1)的体积比为4:1，振荡45min，离心除去变性的蛋白质，重复脱蛋白14次；加入4倍体积的蒸馏水进行稀释，采用截留量10KDa的膜片进行超滤，截留液冷冻干燥36h，得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为35mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至55℃，用氢氧化钠溶液调节pH至9.5，在搅拌下，缓慢逐滴加入氯化锌溶液(氯化锌浓度80mg/mL，用盐酸溶液调节氯化锌溶液pH值为2制成)，其多糖和氯化锌的质量比为1:2，继续在55℃下搅拌10h，反应期间每隔1小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速15000r/min，每次均质1.5min，得多糖锌螯合物溶液；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物溶液，用盐酸调节pH值至4.0，离心得上清液，置于截留分子量1KDa的透析袋中透析4d，把透析袋中的溶液冷冻干燥48h，得夏枯草多糖锌螯合物，经测定锌含量为11.5mg/g，其它检测步骤和结果基本同实施例1。

实施例5

实施例1夏枯草多糖锌螯合物的抗癌活性实验

实验细胞：人肝癌细胞HepG2，人乳腺癌细胞MCF‐7，人肺癌细胞A549。

细胞培养：将实验的癌细胞株分散于新鲜培养基中，并接种于培养瓶，置于37℃，5％CO₂浓度的培养箱中静置培养。新鲜培养基为含有10％(以质量百分比计)胎牛血清，100μg/mL链霉素，100单位/mL青霉素的DMEM培养基。

(1)取对数生长期的人肝癌细胞HepG2，人乳腺癌细胞MCF‐7，人肺癌细胞A549，吹打制备成单细胞悬液，用血球计数板计数后，将细胞浓度调整约5×10⁴个/mL，接种于96孔细胞培养板(100μL/孔)，置于37℃、5％二氧化碳培养箱中培养。实验设调零组、实验组和对照组。调零组为不含100μL细胞悬液的空白孔；实验组为含有100μL细胞悬液的孔，实验时添加含不同样品浓度的培养基；空白对照组为含100μL细胞悬液的孔，实验时只添加新鲜培养基。平板最外层边缘加入无菌的PBS溶液，每孔200μL。

(2)24h后，待细胞贴壁后，弃去培养基，往调零组和对照组加入100μL上述新鲜培养液；实验组分别加入100μL不同浓度的样品(夏枯草多糖和夏枯草多糖锌螯合物)，所有样品均由上述新鲜培养基配制；调零组和空白对照组分别加100μL新鲜培养基，每个不同组分样品设平行的5个孔。其中夏枯草多糖为实施例1中步骤(2)中的未与锌螯合的夏枯草多糖。

(3)继续置于37℃、5％二氧化碳培养箱中培养48h，每孔均加入10μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4h，然后弃去培养基，每孔加100μL的DMSO，振荡器上振荡10min，在酶标仪OD570nm处测量吸光值A，并计算细胞存活率，计算公式如下：

细胞存活率％＝(As‐Ao)/(Ac‐Ao)×100

其中As为实验组的吸光值，Ac是空白对照组的吸光值，Ao是调零组的吸光值。

实验结果如表1，与夏枯草多糖相比，夏枯草多糖锌螯合物对人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF‐7和人肺癌细胞A549具有显著的抑制作用，并且呈剂量依赖型，当夏枯草多糖锌螯合物浓度为250μg/mL时，人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MCF‐7和人肺癌细胞A549的存活率分别为1.55％，1.69％，42.35％，而夏枯草多糖作用的癌细胞的存活率分别为73.32％，93.48％，92.35％，通过附图3也可以进一步看出夏枯草多糖锌螯合物对癌细胞增殖的抑制效果，流式细胞术和荧光等方法研究表明夏枯草多糖锌螯合物能够诱导细胞凋亡，通过阻滞细胞周期和DNA的复制，诱导细胞线粒体结构的破坏，跨膜电位失调，引发了细胞凋亡级联反应，从而实现抑制肿瘤细胞的增殖。其它实施例中的产品的抗癌作用与实施例1样品相似。夏枯草多糖指实施例1中的制备的夏枯草多糖；夏枯草多糖锌螯合物指夏枯草多糖与锌螯合反应后的产物。细胞存活率的计算公式如上，调零组和空白对照组是存活率计算的基数，分别为公式中的Ac和Ao，所以只有实验组的结果。

表1

实施例6夏枯草多糖锌螯合物口服液

取夏枯草多糖锌螯合物溶于无菌超纯水，配成浓度为0.5mg/mL的溶液，以夏枯草多糖锌螯合物质量百分比计，加入0.2％的苯甲酸钠、5.0％的蔗糖、0.05％的枸橼酸及0.5％的山楂香精，罐装于棕色玻璃瓶中，每支5mL，灭菌，即制得。口服，一次5mL，一日3次。功能与主治：用于恶性肿瘤的辅助治疗，同时具有补锌作用，适用于任何人群。

实施例7夏枯草多糖锌螯合物颗粒剂、片剂、丸剂

取夏枯草多糖锌螯合物溶于蒸馏水中，配制浓度为1.0mg/mL的溶液，以雾滴的形式与1000倍其质量的辅料，以夏枯草多糖锌螯合物质量百分比计，辅料含5.0％的蔗糖、85％淀粉、0.5％的枸橼酸、8.0％的滑石粉及1.5％的香精，进行充分混匀，使样品中夏枯草多糖锌螯合物的含量为1.0mg/g，然后通过不同的工艺制备成颗粒剂、片剂或丸剂，45℃的真空条件下干燥，水分含量不超过4％，包装。颗粒剂每袋3～4g，开水冲服，一次1袋，一日2次；片剂或丸剂，每片或丸重0.5g，口服，一次3片或丸，一日3次。功能与主治：用于恶性肿瘤的辅助治疗，同时具有补锌作用，适用于任何人群。

Claims (10)

1.夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)原料预处理：将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过筛，加入乙醇加热回流，夏枯草粉与乙醇的质量比为1:3～1:6，温度60～90℃，回流时间2～6h，离心分离得残留物，残留物重复上述操作2～4次，在45～55℃的鼓风干燥箱中干燥24～36h，即得夏枯草粉；

(2)多糖提取：夏枯草粉加入蒸馏水进行热水浸提，夏枯草粉与蒸馏水的质量比为1:20～1:40，提取温度65～100℃，时间2～6h，离心分离得提取液，回流提取2～5次，合并提取液，在50～60℃下减压浓缩到原体积的1/4～1/10，得多糖浓缩液；在所述多糖浓缩液中加入Sevag试剂，多糖浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1～6:1，振荡20～60min，离心处理分离除去蛋白质，重复脱蛋白10～20次；然后加入3～5倍多糖浓缩液体积的蒸馏水进行稀释，进行超滤，截留分子量大小5～10KDa，回收截留液，冷冻干燥得夏枯草多糖；

(3)将夏枯草多糖溶于蒸馏水中，配制浓度为10～40mg/mL多糖溶液；

(4)将步骤(3)所得多糖溶液加热至40～60℃，用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，持续搅拌下，逐滴加入锌盐溶液，其多糖溶液中固形物质量和锌盐的质量比为1:1～1:4，继续在40～60℃下搅拌6～24h，反应期间每隔1～2小时用高剪切均质机进行处理一次，均质转速8000～20000r/min，每次均质1～2min，得夏枯草多糖锌螯合物混合液；所述锌盐为氯化锌、高氯酸锌和醋酸锌中的一种；

(5)把步骤(4)制得的夏枯草多糖锌螯合物混合液，用盐酸调节pH至4～5，离心取上清液，置于透析袋中进行透析，将透析袋中的溶液冻干，即得夏枯草多糖锌螯合物。

2.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述乙醇的体积百分比为95％；所述过筛为过30～60目筛。

3.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述的Sevag试剂为氯仿与正丁醇的混合溶液，其体积比3:1～6:1。

4.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和(2)离心分离的离心力为4000～10000g，离心时间为10～15min；步骤(5)中离心力为4000～10000g，离心时间为2～5min。

5.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥是在‐60±5℃，0.08～0.1MPa真空度下干燥36～48h，干燥后的样品中水分的质量百分含量低于4％。

6.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述锌盐溶液的浓度为30～100mg/mL，将锌盐加入蒸馏水中，用盐酸溶液调节锌盐溶液pH值为2～3制成。

7.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述氢氧化钠和盐酸溶液的质量浓度均为3～5％。

8.根据权利要求1所述的夏枯草多糖锌螯合物的制备方法，其特征在于，所述透析的时间为2～4d，透析袋截留的分子量为1～5KDa。

9.一种夏枯草多糖锌螯合物，其特征在于其由权利要求1～8任一项所述制备方法制得。

10.权利要求9所述夏枯草多糖锌螯合物在制备抗癌药物和保健品中的应用。